В зависимости от целей исследования условия культивирования и состав питательной среды подбирают так, чтобы в суспензии преобладала определенная фракция клеток. Обычно в суспензии различают 4 основные фракции: одиночные клетки, мелкие агрегаты, средние агрегаты, крупные агрегаты. Агрегаты не должны содержать более 10—12 клеток. Степень агрегированности определяют, подсчитывая клетки в нескольких полях зрения на временных препаратах под малым увеличением микроскопа (не менее 1000 клеток).
При работе с суспензиями необходимо учитывать и ее жизнеспособность. О жизнеспособности клеток можно судить по движению цитоплазмы, по степени проницаемости клеточной стенки для красителей, по активности ферментов. Прижизненные красители, такие как метиленовый синий, не убивают клетки и не проникают через мембраны живых клеток в цитоплазму. Суспензия считается жизнеспособной, если более 70% клеток не окрашиваются в синий цвет; агрегат жизнеспособен, если более 50% его клеток не окрасились.
Цель работы: определить степень агрегированности и жизнеспособность суспензионной культуры.
Оборудование и материалы: микроскоп, 0,1% раствор метиленового синего, предметные и покровные стекла, фильтровальная бумага, дистиллированная вода, марлевые салфетки, пипетки.
Ход работы: приготовить препарат суспензии: встряхнуть суспензию в колбе, пипеткой отобрать небольшое количество суспензии, поместить каплю суспензии на предметное стекло, добавить каплю красителя, накрыть покровным стеклом, излишки жидкости убрать фильтровальной бумагой. Поместить препарат на столик микроскопа под малое увеличение объектива и подсчитать клетки и агрегаты в 3-х полях зрения (просмотреть не менее трех препаратов).
Задание: результаты записать в виде таблицы. Один препарат зарисовать, описать морфологию клеток суспензии (форму, величину, окраску). Сделать вывод о степени агрегированности суспензий (какие фракции преобладают, %) и жизнеспособности суспензии (неокрашенных клеток, %).
