Генетическая трансформация животных клеток

Внедрение вирусов в животные клетки является ярким примером генетической трансформации последних в природных условиях. Что касается искусственного введения чужеродных генов в клетки животных, то впервые это было выполнено в 1976 г. в США, когда Р. Ениш встроил в геном мыши чужеродные гены, передававшиеся по наследству. Схема проведения генно-инженерных процедур подобна таковым для микробных и растительных клеток, однако в связи со сложностью структур животных клеток имеются некоторые особенности. Для клонирования генов животных используют векторы на основе вирусной ДНК, чаще всего вируса SV-40. Часть генома этого вируса удаляется, а вместо него встраиваются гены, которые необходимо ввести в животную клетку. Отбор трансформированных клеток проводят с помощью точечного мутагенеза и селективных сред. Например, используют животные клетки с мутацией по тимилинкиназе (ТК). аленозинфосфорибозилтрансферазе (АФРТ) и гипоксантингуанинфосфорибозилтрансферазе (ГГФРТ). Если клетки с мутациями по данным ферментам поместить на среду, содержащую гипоксантин, аминоптсрин и тимидин (ГАТ-среду), то они на ней расти не будут, в отличие от клеток, содержащих вектор с этими генами.

Трансформацию животных клеток можно проводить не только за счет введения в них векторов, несущих чужеродный генетический материал, но и в результате микроинъекций целевых генов непосредственно в ядро животной клетки. Этот метод получил широкое распространение в последние годы. При помощи микрокапиллярной пипетки под микроскопом в ядро клетки вводится Ю"¹⁰— 10″ ¹²л раствора трансформирующей ДНК (несколько тысяч копий генов).

Трансгенные животные.

Методы генетической трансформации животных клеток позволяют получить животных с видоизмененным геномом.

Введение

клонированных генов в клетки животных — достаточно трудоемкая процедура. Основные ее этапы заключаются в следующем (рис. 31.6).

• • Из яйцевода оплодотворенных самок извлекают яйцеклетки, находящиеся на стадии двух пронуклсусов.
• • В мужской пронуклеус вводят 10″¹² л раствора чужеродной ДНК (плазмиды или целевые гены с дополнительными последовательностями, необходимыми для экспрессии).
• • Трансформированные яйцеклетки имплантируют в матку ложно беременной самки-реципиента, предварительно спаренной со стерильным самцом. Это необходимо для того, чтобы матка самки была гормонально подготовлена для приема оплодотворенного яйца.
• • Анализ потомства для выявления трансгенных живртных.