Помощь в учёбе, очень быстро...
Работаем вместе до победы

Поиск способов стабилизации ферментов с целью повышения эффективности технологических биоорганических катализаторов (на примере дрожжевой бета-галактозидазы)

Диссертация: Поиск способов стабилизации ферментов с целью повышения эффективности технологических биоорганических катализаторов (на примере дрожжевой бета-галактозидазы)
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Актуальность. Избирательный гидролиз лактозы в побочных продуктах молочной промышленности с помощью убгалактозидазы позволяет целесообразно использовать питательные вещества обезжиренного молока и молочной сыворотки и вырабатывать новые виды продуктов детского и диетического питания. Однако до настоящего времени остались недостаточно изученными механизмы инактивации и причины термоинактивации… Читать ещё >

Содержание

  • 1. ВВЕДЕНИЕ
    • 1. 1. Постановка задачи
    • 1. 2. Аннотация работы
  • 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 2. 1. Конформационная стабильность глобулярных ферментов
    • 2. 2. Термоинактивация ферментов с четвертичной структурой
    • 2. 3. Методы стабилизации ферментов
    • 2. 4. Физико-химические свойства р -галактозидазы
    • 2. 5. Применение Р -галактозидазы
  • 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
    • 3. 1. Использованные реактивы и препараты
    • 3. 2. Использованная аппаратура
    • 3. 3. Методы проведения экспериментов
      • 3. 3. 1. Определение активности р -галактози-дазы
      • 3. 3. 2. Определение термоинактивации р -галак-тозидазы
      • 3. 3. 3. Микрокалориметрическое определение изменения энтальпии
      • 3. 3. 4. Иммобилизация р -галактозидазы на органических носителях
      • 3. 3. 5. Иммобилизация р -галактозидазы включением в полиакриламидный гель
      • 3. 3. 6. Определение концентрации белка
      • 3. 3. 7. Математическая обработка экспериментальных данных
  • 4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ
    • 4. 1. Характеристика дрожжевой р -галактозидазы
      • 4. 1. 1. Изучение зависимости активности дрожжевой р -галактозидазы от температуры и
      • 4. 1. 2. Зависимость удельной активности р -галактозидазы от концентрации белка при разных температурах
      • 4. 1. 3. Ингибирование дрожжевой р -галактозидазы галактозой
    • 4. 2. Диссоциативная термоинактивация дрожжевой
  • -галактозидазы
    • 4. 2. 1. Изучение термоинактивации дрожжевой р -галактозидазы при различных концентрациях белка
    • 4. 2. 2. Влияние Сахаров на термостабильность дрожжевой р -галактозидазы
    • 4. 2. 3. Влияние модификации дрожжевой у<3-галактозидазы глиоксалем на диссоциативную термоинактивацию
    • 4. 2. 4. Термоинактивация Р -галактозидазы в присутствии р -меркаптоэтанола
    • 4. 3. Разработка методов иммобилизации дрожжевой р-галактозидазы
    • 4. 3. 1. Разработка методов иммобилизации дрожжевой Р -галактозидазы на органических носителях
    • 4. 3. 2. Разработка методов иммобилизации дрожжевой уЗ -галактозидазы включением белка в полиакриламидный гель
    • 4. 3. 3. Характеристика иммобилизованных препаратов дрожжевой уЗ -галактозидазы
  • 5. ВЫВОДЫ

Поиск способов стабилизации ферментов с целью повышения эффективности технологических биоорганических катализаторов (на примере дрожжевой бета-галактозидазы) (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

1.1, Постановка задачи.

Расширение и углубление научных исследований в области биотехнологии является одной из важнейших задач советской науки. Одним из наиболее перспективных направлений биотехнологии следует считать инженерную энзимологию — технологический катализ с помощью иммобилизованных ферментов. Практическое применение ферментов, однако, до сих пор ограничивается сравнительно низкой стабильностью ферментных препаратов. Поэтому изучение механизмов инактивации ферментов составляет научную основу стабилизации ферментов и является одной из важнейших задач инженерной энзимологии. Особый интерес представляет изучение термостабильности ферментов с четвертичной структурой, так как процессы диссоциации-ассоциации влияют на стабильность изучаемых препаратов и их кинетические свойства в процессе термической инактивации.

Использованию ферментов в пищевой промышленности отводится важное место при реализации решений Продовольственной программы СССР. В связи с задачами, вытекающими из Постановления ЦК КПСС и Совета Министров СССР о мерах по улучшению использования обезжиренного молока, пахты и молочной сыворотки, актуальное значение приобретает изучение ферментагалактозидазы, катализирующей реакцию гидролиза узгалактозидов, в том числе и молочного сахара — лактозы.

В настоящее время в молочной промышленности поставлена задача резкого увеличения производства обезжиренного молока, пахты и молочной сыворотки. В Советском Союзе промышленность ежегодно получает 32−35 млн. т обезжиренного молока и пахты и 10 млн. т молочной сыворотки. К началу одиннадцатой пятилетки промышленная переработка сыворотки достигла 3,4 млн. т, т. е. перерабатывается только 30−40% ценного молочного сырья.

В текущей пятилетке предусмотрено резко увеличить производство сухой и сгущенной сыворотки, к которым проявляют большой интерес со стороны предприятий пищевой промышленности. Однако сгущенные концентраты из сыворотки имеют специфический недостаток — слишком высокое содержание лактозы. Кристаллизуясь, она выпадает при хранении в осадок, что снижает товарные качества продукта. Не сбраживаясь пекарскими дрожжами, лактоза может только ограниченно вноситься в хлебобулочные и кондитерские изделия и в корма для сельскохозяйственных животных.

Устранить отмеченные недостатки молочных концентратов можно цутем полного или частичного гидролиза лактозы до моносахаридов — глюкозы и галактозы. Это повышает сладость продукта, его стойкость к кристаллизации и улучшает питательные свойства.

Концентраты гидролизованной сыворотки можно с успехом применять в хлебопечении для улучшения качества хлеба и экономии муки и сахарав кондитерской промышленностипри производстве напитковв мясной промышленностив заменителях цельного молока для сельскохозяйственных животных и в производстве кормовых продуктов.

Применение У3 -галактозидазы имеет особое значение для лечения людей с лактозной недостаточностью и при получении продуктов детского и диетического питания с более усваиваемым углеводным составом.

Для гидролиза лактозы на практике используют грибную, бактериальную и дрожжевую УЗгалактозидазу. С практической точки зрения наиболее изученной является грибная уЗгалактозидаза, пригодная по своим энзиматическим свойствам для обработки лактозы в сыворотке молока, в частности, в творожной сыворотке. Учитывая значения рН-оптимума фермента для гидролиза лактозы в цельномолочных продуктах и обезжиренном молоке, а также в под-сырной сыворотке, более целесообразно применять ргалактози-дазу дрожжевого происхождения. Однако технологическое применение дрожжевой увгалактозидазы до сих пор затруднено ее низкой стабильностью.

В связи с вышеуказанным, проблем изучения механизмов инактивации и термоинактивации дрожжевойгалактозидазы следует считать весьма актуальной. Решение этого вопроса имеет большое практическое значение.

Целью настоящей работы явилось исследование кинетики термоинактивации уЗгалактозидазы из дрожжей Миууеготусяв ^ГЗ^Шв, выяснение механизма и причин инактивации фермента, изучение на этой основе возможностей стабилизации его активной четвертичной структуры и разработка методов получения стабильных препаратов дрожжевойгалактозидазы.

Постановка настоящей работы связана с выполнением целевой комплексной программы 0.74.05, задания 05: «Исследование возможностей целенаправленного изменения каталитических свойств ферментов путем их химической модификации, включая иммобилиза цию их разными методами» .

Автор выражает глубокую благодарность проф. О. М. Полтораку и д.х.н. Е. С. Чухрай из Московского государственного университета за ценные советы при теоретическом анализе экспериментальных данных.

1.2. Аннотация.

Актуальность. Избирательный гидролиз лактозы в побочных продуктах молочной промышленности с помощью убгалактозидазы позволяет целесообразно использовать питательные вещества обезжиренного молока и молочной сыворотки и вырабатывать новые виды продуктов детского и диетического питания. Однако до настоящего времени остались недостаточно изученными механизмы инактивации и причины термоинактивации дрожжевой рЬгалактозидазы, не выяснены возможности иммобилизации этого технологически важного фермента. Поэтому изучение механизма термоинактивации и стабилизации дрожжевой ргалактозидазы относится к актуальным проблемам современной инженерной энзимологии.

Цель работы. Целью настоящей работы явилось исследование этого процесса и использование полученных данных для поиска путей стабилизации активной четвертичной структуры р «галактозидазы и разработки методов получения стабильных иммобилизованных препаратов дрожжевойувгалактозидазы.

Научная новизна работы. На основании полученных в работе данных установлена двухстадийная кинетическая схема диссоциативной термоинактивации уЗгалактозидазы в растворе, выяснен механизм ее термоинактивации и определены все кинетические константы этого процесса.

Найдено и охарактеризовано стабилизирующее действие на фермент галактозы, глюкозы и лактозы, а также рмеркаптоэтанола. Показано, что их стабилизирующее действие связано с подавлением первой стадии диссоциативной термоинактивации дрожжевой уЗгакинетики термоинактивации ргалактозидазы из дрожжей Yeromyces fragt Iis, выяснение кинетического механизма лактозидазы.

Установлено, что инактивация ргалактозидазы в растворе связана с окислением -5Нгрупп, ответственных за формирование активной четвертичной структуры фермента.

Практическое значение работы. Предложен способ иммобилизации дрожжевой увгалактозидазы на органоминеральных носителях и показана пригодность полученных нерастворимых препаратов для гидролиза лактозы при нейтральных значениях рН, наиболее подходящих для переработки продуктов из цельного молока.

Определены характерные значения кинетических параметров процесса термоинактивации дрожжевой ргалактозидазы по диссоциативному механизму, необходимые при оптимизации технологического процесса с применением биокатализаторов.

Апробация работы. Результаты работы доложены на 1У-ой Республиканской конференции молодых ученых-химиков ЭССР (г. Таллин, 1981) — 1У-ом Всесоюзном симпозиуме по инженерной энзимологии (г. Киев, 1983).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 научных статьи и тезисы двух докладов.

Содержание и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения полученных результатов и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы (163).

ВЫВОДЫ.

1. Детально изучена кинетика термоинактивации дрожжевой галактозидазы из к/иууегс/пусев ?/Ы^/кв в растворе и установлено, что термоинактивация фермента происходит по двух стадийной кинетической схеме диссоциативной термоинактивации.

2. Изменение удельной активности фермента при разбавлении коммерческого препарата связано с ингибирупцим эффектом галактоза на активность дрожжевой уЗгалактозидазы. Установлено, что ингибирование фермента галактозой является смешанным и вычислены константы равновесия диссоциации галактозы из комплекса со свободным ферментом и для фермент-субстратного комплекса, равные <1 = 1,7.Ю~2 М и к/= 5,6-Ю~2 М, соответственно.

3. Показано, что моносахариды — глюкоза и галактоза, а также дисахариды — лактоза, сахароза и рафиноза стабилизируют активную уЗгалактозидазу, препятствуя диссоциации комплекса фермент-сахар. Наличие в системе Ъ% раствора лактозы стабилизирует иммобилизованный препарат /3 -галактозидазы.

4. Изучено влияние модификации дрожжевой уЗгалактозидазы глиоксалем на диссоциативную термоинактивацию и показано, что в растворе глиоксаль не приводит к стабилизации активной четвертичной структуры и способствует дестабилизации субъединиц фермента.

5. Показано, что нестабильность у? -галактозидазы в растворе является результатом окисления ЗНгрупп, ответственных за формирование активной (стабильной) четвертичной структуры фермента.

6. Изучены способы ковалентной иммобилизации фермента и включением в ПАА-гель и предложен способ иммобилизации дрожжевой ргалактозидазы на органоминеральном носителе с использованием активного красителя «ярко-голубой КХ», показана пригодность полученных нерастворимых препаратов для гидролиза лактозы при нейтральных значениях рН. л.

7. Изучена териоинактивация различных иммобилизованных препаратов уЗгалактозидазы я показано, что инактивация также протекает по механизму двухстадийной диссоциативной инактивации. При атом не наблюдается изменение константа скорости денатурации.

8. Использование бифункционального реагента — глиоксаля для кодификации иммобилизованной дрожжевой /2 -галактозидазы показало, что обработка глиоксалем не закрепляет активную четвертичную структуру, но повышает стабильность диссоциированных субъединиц.

Показать весь текст

Список литературы

  1. B.C. О возможности получения низколактозных молочных продуктов детского питания с использованием? -галактозида-зы. Вопр. питания, 1981, № 2, с. 63−65.
  2. И.В., Клесов A.A. Практический курс химической и ферментативной кинетики. M., 1976. — 320 с.
  3. Й.В., Мартинек К. Основы физической химии ферментативного катализа. М., Высшая школа, 1977. — 279 с.
  4. Дж.Ф. Конформационные переходы белков в воде и в смешанных водных растворителях. В кн.: Структура и стабильность биологических макромолекул /Под ред. М.В.Волькен-штейна. M., 1973, с. 174−254.
  5. В.В., Чеботарева Н. Г., Василисин C.B. Ферментативный гидролиз лактозы молочной сыворотки. Нов. в техн. и технол. перераб. молоч. сыворотки. Углич: 1981, с. 50−54.
  6. К.П., Кууск И. Э., Тамм А. О. Молоко и молочный сахар.- Ээсти лоодус, 1977, № 9, с. 558−562.
  7. Ю.П. Математические методы планирования экспериментов. M., 1979, с. 92−99.
  8. A.A., Песлякас И. И., Дагене М. И., Паулгоконис А. Б. Определение количества белка, иммобилизованного на нерастворимом носителе. В кн.: Методы в биохимии. Вильнюс, 1975, с. 13−17.
  9. В. Катализ в химии и энзимологии. М., Мир, 1972, — 467 с.
  10. М. Физическая химия денатурации белков. М., Мир, 1968, — 363 с. ш
  11. H.A., Тихомирова A.C. Очистка и свойства /3 -га-лактозидазы из гриба Curvulsria ihseCjua/ie. Биохимия, 1976, т. 41, вып. 6, с. I061−1965.
  12. H.A., Тихомирова A.C., Рафаловская Т. Я., Янголь Л. М., Грачева А. Ю., Фениксова Р. В. Получение и свойства препарата уЗ -галактозидазы из Alt&rnsr/a fenU/s. Прикл. биохим. и микробиол., 1975, т. II, № 5, с. 724−729.
  13. B.C., Тихомирова A.C., Козлов Л. В., Антонов В. К. Модифицирование и иммобилизация уЗ -галактозидазы. Биохимия, 1976, т. 41, вып. 9, с. I07I-I676.
  14. Иммобилизованные ферменты. I /Под ред. И. В. Березина, В. К. Антонова, К.Мартинека. М., Изд. Моск. ун-та, 1976, с. 202−224.
  15. А.И., Сиймер Э. Х., Таммеранд И. И. Математическая модель макрокинетики иммобилизованных ферментов для глубокой конверсии субстрата. Труды Таллинского политехи, ин-та, 1983, № 552, с. 3−16.
  16. А.И., Креэн М. И. Способ получения иммобилизованных в структуре полимеризационных гелей ферментов. Заявл. 13.09.73, опубл. 25.09.74 БИ. № 35, м.кл. clZd, 13/10. СССР A.C. $ 443 902.
  17. Корниш-Боуден Э. Основы ферментативной кинетики. М., 1979, с. 81.
  18. А.К., Тихомирова A.C., Фениксова Р. В. Очистка и свойства? -галактозидазы SsccharornifCcs fragt Ifs. -Прикл. биохим. и микробиол., т. 1972, т. 37, № 4, с. 405.
  19. .И. Аллостерические ферменты. М.: Наука, 1978, — 248 с.
  20. Г. Д. Влияние химической модификации функциональных групп ферментов на их структуру и стабильность (на примереиз 1&-пероксидазы из хрена). Автореферат, МГУ, 1981. — 17 с.
  21. Г. Д., Угарова Н. Н., Березин И. В. Взаимосвязь между структурой и стабильностью белков и ферментов из мезофиль-ных и термофильных источников. Биоорг. хим., 1982, т. 8, № II, с. 1445−1461.
  22. В.П. Конформационная изменчивость и денатурация биополимеров. Л.: Наука, 1977. — 274 с.
  23. М.О., Сиймер Э. Х., Кярема К. А., Кестнер А. И. Торможение ферментативного гидролиза бензилпенициллина в условиях применения иммобилизованной пенициллинамидазы. Труды Таллинского политехи, ин-та, 1974, № 367, с. 9−15.
  24. К., Можаев В. В., Березин И. В. Основные принципы стабилизации ферментов. Докл. АН СССР, 1978, т. 239, с. 483−485.
  25. К., Торчилин В. П. Основные принципы стабилизации ферментов. В кн.: Итоги науки и техники. Биологическая химия /В.Л.Кретович, И. В. Березин. М., 1978, т. 12, с. 17−48.
  26. А.А. Кинетика односубстратных ферментативных реакций. Сообщение УЛ. Использование автоматического анализатора «Контифло» для исследования кинетики ферментативного гидролиза лактозы. Труды Таллинского политехи, ин-та, 1984, в печати.
  27. Методы химии углеводов. Под ред. Н. К. Кочеткова, М.: Мир, 1967. — 174 с.
  28. В.В., Мартинек К. Инактивация и реактивация белков (ферментов). -Мол. биол., 1982, т. 16, № 4, с. 676−694.
  29. Молочная промышленность СССР. Мол. пром., 1982, № 6, с. 4−16.
  30. Д. Биохимия. I. М.: Мир, 1980, с. 173.1^4м
  31. В.В., Чернова И. А. Статистические методы планирования экстремальных экспериментов. М.: Наука, 1965. 145 с.
  32. П.Г., Василисина В. В., Чеботарев Е. А. Использование молочной сыворотки в хлебопекарном и кондитерском производстве. Молоч. пром., 1982, № 5, с. 25−27.
  33. К.Э., Кестнер А. И., Фениксова Р. В., Тихомирова А. С. Получение иммобилизованной уЗ -галактозидазы. Труды Таллинского политехи, ин-та, 1974, № 367, с. 35−40.
  34. О.М., Чухрай Е. С. Кинетика и механизм инактивации ферментов с четвертичной структурой. Вестн. Моск. унта, сер. 2, Химия, 1979, т. 20, № 3, с. 195−211.
  35. М.Е., Батунер Л. М. Математические методы в химической технике. Л.: Химия, 1971, с. 609−659.
  36. Производство сухой подсырной сыворотки. М.: ЦНИИ Инф. и тех. эконом, исс., 1975. — 40 с.
  37. Рид Дж. Ферменты в пищевой промышленности. М.: Пищевая промышленность, 1971. — 410 с.
  38. Т.В. Полимерные комплексы, включающие синтетические полиэлектролиты и физиологически активные компоненты. Высокомолекулярные соединения, 1979, т. (А)ХХ1, № 4,с. 723−733.
  39. Э.Х., Мандель М.0. 0 рН-зависимости ферментативных реакций. Труды Таллинского политехи, ин-та, 1975, № 383, с. 3−7.
  40. .И. Введение в химию и технологию органических красителей. М.: Химия, 1977, с. 190−194.
  41. А.С., Куликова А. К., Фениксова Р. В. 0 лабильности растворов уЗ -галактозидазы ЗэссИагртусез ^г<�эд///'$>• -Прикл. биохим. и микробиол., 1971, т. 7, № 2, с. 155−159.1.i.
  42. A.C., Куликова A.K., Фениксова P.B. Образование уЗ -галактозидазы в культурах грибов и бактерий. Микробиология, 1974, т. 43, № 2, с. 257−260.
  43. A.C., Загустина H.A. Получение препаратов уЗ -галактозидазы из Curvular/'a /nae^ualis. Прикл. биохим. и микробиол., 1976, т. 12, № 2, с. 221−226.
  44. А., Хендлер Ф., Смит Э., Хилл Р., Леман И. Основы биохимии. I. М.: Мир, 1981, с. 166−206.
  45. H.H., Рожкова Г. Д., Березин И. В. Химическая модификация 6 NHi -групп лизина в пероксидазе хрена. Влияние ее на каталитические свойства и пространственную структуру фермента. — Биохимия, 1978, т. 43, вып. 7, с. 1242−1250.
  46. Р.В., Тихомирова A.C., Куликова А, К., Эльпинер И. Е., Тоголев М. Н. Получение препаратов уЗ -галактозидазы из дрожжей S. fragil?5. Прикл. биохим. и микробиол., 1971, т. 7, № I, с. 34.
  47. П., Шлейх Т. Влияние нейтральных солей на структуру и конформационную стабильность макромолекул в растворе. В кн.: Структура и стабильность биологических макромолекул / Под ред. М. В. Волькенштейна. М., 1973, с. 320−480.
  48. А.Г., Василисина В. В., Чеботарева Н. Г., Фисенко Л. П. Теоретическое обоснование гидролиза лактозы молочной сыворотки. Ставроп. политехи, ин-т, Ставрополь, 1961•- 6 с.
  49. А.К., Куликова А. К., Шиян С. Д., Тихомирова A.C. Очистка внутриклеточной уЗ -галактозидазы Saccharomyces fragil?5, Прикл. биохим. и микробиол., 1980, т. ХУ1, вып. 6, с. 902−908.
  50. Е.С. Критерии диссоциативного механизма термоинактивации ферментов с четвертичной структурой. Вестн. Моск. ун-та. Серия 2, Химия, 1981, т. 22, № 4, с. 331−340.
  51. Е.С., Кирсис В. Х. Трехстадийная диссоциативная термоинактивация кислой фосфатазы из Asfi. i^rrcus в растворе. Вестн. Моск. ун-та. Серия 2, Химия, 1980, т. 21, № 5, с. 432−437.
  52. Anfinsen C.B., Pfaber E. Studies on the reduction and reformation of protein disulfide bounds. J.Biol.Chem., 1961, vol.236, p.1361.
  53. Anfinsen C.B., Scheraga H.A. Experimental and theoretical aspects of Protein folding. Adv. Chem., 1975, vol.29, pp. 205−300.
  54. Applications of yeast lactases a Review. — Novo Industry A/S — Novo Alle — DK — 2880 Bagsvaerd, Denmark, 1979, -29 p.
  55. Arakawa M., Ogata S. fi -galactosidases from jack bean meal and almond emulsin. Application for the enzymatic distinction of Galfi—M GlcNAc and Gal/51-*-3GlcNAc linkages.
  56. J. Biochem., 1974, vol.75, Nr.4, pp.707−714.
  57. Bavet J.A., Dohan L.A. Corning glass works. Pat. (France), Nr. 2 483 728, 6.06.80, Nr. 801 216, 11.12.81., № A 23 c 2t/02, c 12 P 19/02.
  58. Bartley I.M. fi -galactosidase activity in ripening apples. -Phytocdemistry, 1974, vol.13, Nr.10, pp.2107−2111. k
  59. Bernal J.D. Structure arrangements of maoromolecules. -Faraday Soc., 1958, vol.25, p.7.
  60. Borglum G.B., Sternberg M.Z. Properties of a fungal lactase. J. Food Sci., 1972, vol.37, Nr.4, p.619.
  61. Boury F.A.H. Applications for lactase treated whey. Food Prod. Develop., 1975, vol.9, Nr.2, pp.10−14.
  62. Brandts J.F. Heat effects on protein and enzymes. In: Ther-mobiology/ A.H.Rose, London-New York etc.: Acad. Press, 1967, p.25−72.
  63. Chotia C. Hydrophobic bonding and accessible surface area in proteins. nature, 1974, vol.248, p.338.
  64. Chotia C., Janin J. Principles of protein-protein recognition. Nature, 1975, vol.256, p.705.
  65. Chotia C., Wodak S., Janin J. Role of subunit interfaces in the allosteric mechanism of hemoglobin. Proc. Hat. Acad. Sci. USA, 1976, vol.73, p.3793.
  66. Craven 6.R., Steers E., Anfinsen C.B. Purification, composition and molecular weight of the p -galactosidase of E. coli K 12. J. Biol. Chem., 1965, vol.240, Nr.6, pp.24 682 477.
  67. Coughlin R.V., Charles M., Julkowski K. Experimental results from a pilot plant for converting acid whey to potentially useful food products. Food, Phaxmaoential and Bioeng.
  68. A1 Che Symp. Ser., 1976/77, vol.74, Nr. 172, pp.40−46.
  69. Dairy by-product converted to human food ingradient by new process. Confect. prod., 1982, vol.48, Nr.2, pp.58−59, 67.
  70. Dicker R. Whey hydrolysis a «sweet» breakthrough. Dairy Ind. Int., 1982, vol.47, Nr.4, pp.19−21.
  71. Dickson R.C., Dickson L.R., Markin J.S. Purification and properties of an inducible^-galactosidase isolated from the yeast Kluyveromyces lactis. J. of Bacteriology, 1979, vol.137, Nr.1, pp.51−61.
  72. Feeney R.E. Chemical modification of food proteins. Ins Food Proteins. Improvement through chemical and enzymatic modification / R.E.Feeney, J.R.Whitaker, Washington, 1977, p.3−36.
  73. Fenton D.M. Solvent treatment fory?- c?) -galactosidase release from yeast cells. Enzyme and Microbiol. Technol., 1982, vol.4, Nr.4, pp.229−232.
  74. Fink A.L., Angelides E.J. The j3 -galactosidase-catalysed hydrolysis of o-nitrophenol-yS-c^-galactoside at subzero temperatures: evidence for a galactosylenzyme intermediate. Biochem. Res. Communs., 1975, vol.64, Nr.2, pp.701−708.
  75. Finocchiaro T., Olson N.F., Ricardson T. Use of immobilized lactase in milk systems. Adv. Biochem. Eng., 1980, vol.15, pp.71−88.
  76. Fisher H.F. A limiting law relating the size and shape of protein molecule to their composition. Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 1964, vol.51, Nr.6, pp.1285−1291.
  77. Frezal J., Ogier H. Les intolerences aux sucres. Med. et nutr., 1981, vol.17, Nr.3, pp.189−191.
  78. Frigon R.P., Lee J.C. The stabilization of calf-brain microtubule protein by sucrose. Arch. Biochem. Biophys., 1972, vol.153, pp.587−589.
  79. Griffiths U.W., Muir D.D. Hydrolysis of lactose by a thermostable? -galactosidase immobilised on DEAE-cellulose. -J. Sei. Pood and Agr., 1980, vol.31, Nr.4, pp.394−404.
  80. Groen G. Van der, Wouters-Leysen J., Yde M., De Bryne O.K. Effects of alcohols on? -galactosidase catalyzed hydrolysis of n-alkyl-^-^Q-galactopyranosides. Eur. J. Biochem., 1973, vol.38, Nr.1, pp.122−129.
  81. Guy E.J. Stabilization of frozen goat milk concentrates by enzymatic lactose hydrolysis. J. Food Sei., 1982, vol.47, Nr.2, pp.423−428.
  82. Gunther E., Burger E. A new method of manufacturing lactose-hydrolysed yoghurt by means of JZ -galactosidase. Util. enzymes technol. alim. Symp. int. Versailles, 1982, Paris, pp. 243−248.
  83. Hayn M., Heikonen M", Kreula U. Heiko M. Optimization of an immobilized? -galactosidase system. Food Process Eng. Proc. 2nd Int. Congr. Eng. and Food and 8th Eur. Food Symp., Helsinki, 1979, vol.2, London 1980, pp.133−136.
  84. Hartmeier W. Immobilisierte Enzyme fur die Lebensmitteltechnologie. Int. Z. fur Lebensm. Technol., 1977, vol.77, Nr.9.
  85. J.C., Vedamuthu E.R. ? -galactosidase of Propionibacterium shermanii. Appl. Microbiol., 1975, vol.29, Nr.1, pp.74−80.
  86. J.A., ШЬег R.E. The mechanism of Na activation of E. coli? -galactosidase and the inhibitory effect of high con2+centrations of Mg T on this activation. Int. J. Biochem., 1974, vol.5, Nr.9−10, pp.773−779.
  87. Hirschmann R., Nutt R.F., Veber D.F., Vitali R.A., Varga S.L., Jacob T.A., Holly F.W., Denkewalter R.G. Studies on the total synthesis of an enzyme. V. The preparation of enzymati-cally active material. J.Amer.Chem.Soc., 1969, vol.91,p.507.
  88. Huber R.E., Fowler A.V. Zabin I. Inactivation of? -galac-tosidase by iodination of tyrosine-253. Biochemistry, 1982, vol.21, pp.5052−5055.
  89. Huber R.E., Gaunt M.T. The inhibition of? -galactosidase (Escherichia coli) by amino sugars and amino alcohols. -Can.J.Biochem., 1982, vol.60, pp.608−612.
  90. Huber R.E., Kurz G., Wallenfols K. A quantitation of the factors which affest the hydrolase and transgalactosylase C activities of? -galactosidase (E. coli) on lactose. -Biochemistry, 1976, vol.15, Nr.9, pp.1994−2001.
  91. Holsinger V.H., Robert N.E. Hew products from lactose hydro-lysed milk. Dairy and Ice Cream Field, 1976,'vol.159, Nr. 3, p.30.
  92. Huang C.Y., Rhee S.G., Chock P.B. Annu. Rev. Biochem., 1982, vol.51, pp.935−971.
  93. Immobilized enzymes. Ed. by Mosbach K. New-York, London: Acad. Press, 1976, 996 p.
  94. Janin J. Chotia C. Stability and specifity of proteinprotein interactions: The case of the trypsin-trypsin inhibitor complexes. J.Mol.Biol., 1976, vol.100, p.197.
  95. Jornwell H., Fowler R. Probe of? -galactosidase structure with iodoacetate. Biochemistry, 1978, vol.17, Nr.24, p. 5160.
  96. Kaheshi.ro C.M., Enns C.A., Hahn M.G., Peterson J.S., Reithel F.J. Evidence for active dimer of E. coli? -ga-lactosidase. Biochem. J., 1975, vol.151, Nr.2, pp.433 434.
  97. Kasemolke wird zu sussem Sirup. Lebensmitteltechnik, 1982, vol.14, Hr.6, pp.266−268.
  98. Kauzmann W. Some factors in the interpretation of protein denaturation. Adv. Prot. Chem., 1959″ vol.14, p.1.
  99. Kim D.H., Hahn Y., Hong S.K. Inactivation kinetics of ?~ JO -galactosidase. Hanguk Saenghwa Hakhoe Chi., 1982, vol.15, Nr.1, pp.26−41.
  100. Klostermeyer H., Herlitz E., Jurgens R.H., Reimerdes E.H., Thomasow J. Lactasebehandlung von Magermilch zur Herstellung lactosereduzierten Magermilchpulvers. Kieler Miloh-wirtschaftliche Forschungsberichte, 1978, vol.30, Nr.3, pp.334.
  101. Klotz I.M., Darnall D.W., Langerman N.R. Quaternary structure of proteins. In: The Proteins (H.Neurath, Ed.), 3rd., vol.1, New-York: Acad. Press, 1975, pp.293−411.
  102. Kuby S.A., Lardy H.A. Purification and kinetics ot? -?>-galactosidase from E. coli, strain K-12. J.Amer. Chem. Soc., 1953, vol.75, pp.890−896.
  103. Lactose hydrolysates. MKT Tehtoaat OY, Finland, Firmas New-letter, 1981, may.
  104. Lee J.C., Timasheff S.N. The stabilization of proteins by sucrose. J. Biol. Chem., 1981, vol.256, Nr.14, pp. 7193−7201.
  105. Levitt M., Warshel A. Computer simulation of protein folding. Nature, 1975, vol.253, Nr.5494, pp.694−698.
  106. Loo L.G.W. van der. De bereiding van instant vol melkpoe-der. Voedingsmiddelen technologie7 1976, vol.9, Nr.22, pp. 14−17.
  107. Mahoney R.R. Whitaker J.R. Purification and physicocherai-cal properties of J& -galactosidase from Kluyveromyces fra-gilis. J. Food Sci., 1978, vol.43, pp.584−591.
  108. Means G.E., Feeney R.E. Chemical Modification of Proteins. -San Francisco: Holden-Day, 1971, -254 p.
  109. Miyata N., Kikuchi T-, Furuichi E. Lactose hydrolysis in milk and whey with lactic acid bacteria cells immobilized in agar gel. XX Inter. Dairy Congress, 1978, E, pp.957 958.
  110. Monod J., Wymann J., Changeux J.-P. On the nature of allosteric transitions: A plausible model. J. Mol. Biol., 1965, vol.12, p.88.
  111. Montreuil J. Les voies metaboliques du lactose et du galactose. Med. et nutr. 1981, vol.17, Nr.3, pp.163−166.
  112. Morisi F., Pastore M., Viglia A. Reduction of lactose content of milk by entrapped-galactosidase. I Characteristics of JS -galactosidase from yeast and E.coli. J. Dairy Sci., 1973, vol.56, Nr.9, pp.1223−1127.
  113. Naudts M. L’hydrolyse du lactose. Lait et nous, 1982, Nr.3, pp.25−28.
  114. Nourinen E. Hydrolysoideen laktoosin Kayttomahdollisuuksista elintarviketeollisuudessa. Karjantuote, 1975, vol.58,1. Nr.4, pp.12−15.
  115. Norden A.G.W., O’Brien J.S. Gangloside GM, fe -galactosidase: studies in human liver and brain. Arch. Biochem. and Biophys., 1973, vol.159, Nr.1, pp.383−392.13 u
  116. Okos M.R., Grubke E.A., Syverson A. Hydrolysis lactose in acid whey using yS-galactosidase adsorbered to a phenol formaldehyde resin. J. Pood Sci., 1978, vol.43, Nr.2, pp.566 571.
  117. Ooshima H., Harano Y. Kinetics and Properties of Immobilized Lactose on Sepharose 2B. Mem. Pac. Eng. Osaka City Univ., 1976, vol.17, pp.131−138.
  118. Pace C.N. Picher L.M., Cupo J.P. Globular protein stability: aspects of interest in protein turnover. Acta biol. et med.germ., 1981, vol.40, Nr.10−11, pp.1385−1392.
  119. Pastore M. Produzione industriale di Latti Delattosati Mediante j3 -galaktosidasi Immobilizata in Pibse. II latte r Riv. techn. ind. lattiero-casenaria, 1977, vol.2, No. 7−8, pp.456−460.
  120. Pauling L., Corey R.B., Branson H.R. The Structure of proteins: Two hydrogen-bounded helical configurations of the polipeptide chain. Proc. Acad. Sci. USA, 1951, vol.37, p.205.
  121. Perutz M.P. Stereochemistry of cooperative effects of haemoglobin. Nature, 1970, vol.228, p.726.
  122. Pollard H.B., Steers E. Jr. Bacillus megaterium, KM J3 -ga-lactosidase: purification by affinity chromatography and characterization of the active species. Arch. Biochem. and Biophys., 1973, vol.158, Nr.2, pp.650−661.
  123. Pomeranz V. Lactase (^5-<^7-galactosidase). II. Possibilities in the food industries. Pood Technol., 1964, Nr.5, pp. 96−103.
  124. Ponnuswaray P.K., Muthusamy R., Manavalan P. Aminoacid composition and thermal stability of proteins. Int. J. Biol.
  125. Macromol., 1982, vol.4, pp.186−190.
  126. Premi L., Sandine W.E., Elliker P.R. Lactosahydrolyzing enzymes of Lactobacillus species. Appl. Microbiol., 1972, vol.24, Nr.1, p.51.
  127. Reimerdes E.H., Gottschick W. Neue Verwendung smoglich-keiten fur Milch, Molke und Permeate durch Milchzuker-spaltung (Teil I). Lebensmitteltechnik, 1981, vol.13, No. 9, pp.402−403, 406.
  128. Rheinlander M. Lactosehydrolysatie van wei en de berei-ding van gehydrolyseerd weipoeder. Voedingsmiddelen-technologie, 1982, vol.15, Nr.12, pp.27−31.
  129. Richmond M.L., Gray J.I., Stine C.M.y^-galactosidase. -J.Dairy Sci., 1981, vol.64, pp.1759−1771.
  130. Rippa M., Signorini M., Bellini T. The effect of inorganic phosphate on the stability of some enzymes. Bio-chem. J., 1981, vol.197, pp.747−749.
  131. Roseanu A., Vasu S. Activitatea lactazica si maltazicaa unoz tulpini de Aspergillus. Stud, si cerc. biochim., 1980, vol.23, Nr.1, pp.69−73.
  132. Rossmann M.G. Liljas A., Branden C.-I., Banaszak L.J. Evolutionary and structural relationships among dehydrogenases. The Enzymes, 1975, vol.11, p.61.
  133. Sadana A. A deactivation protection model for immobilized and soluble enzymes. Enzyme Microbiol. Technol., 1982, vol.4, Jan., pp.44−46.
  134. Sato M., Yamashina I. Purification of a J3 -galactosidase from hog smal intestine and its action on glucoproteins and glucopeptides. J.Biochem., 1974, vol.76, Nr.6, pp. 1155−1163.13 e
  135. Sewell A., Gehler G., Spranger C. Urinary Oligosaccharide Screening in Patients with J$ -galactosidase Deficiency. Bur. J. of Pediatrics, 1980, vol.133, Nr.3, p.269.
  136. Shukla T.P. yg-galactosidase technology: a solution to the lactose problem. CRC. Crit. Rev. Food Tech-nol., 1975, vol.5, p.325.
  137. Skinner K.J. Enzymes technology. Chem. Engn. News, 1975, vol.53, Nr.33, pp.22−37.
  138. Stasiw R.O., Patel A.B., Brown H.D. Utilization of bound lactase in clinical chemistry. Biotechn. Bioeng., 1972, vol.14, Nr.4, pp.629−635.
  139. Stephens R., De Busk A.G. -galactosidases from Neu-rospora crassa. Methods Enzymol., 1975, vol.42, pp. 497−503.
  140. Steven F.S., Podrazky V., Al-Habib A., Griffin M.M. Biphasic kinetics of metal ion reactivation of trypsin-thiol complexes. Biochim. Biophy. Acta, 1979, vol. 571, pp.369−373.
  141. Sugiura M., Suzuki M., Sasaki M., Shimomura T. Studies on yS -galactosidases. I. Purification and properties of j3 -galactosidase I and II from Sclerotium tulipa-rum. Chem. and Pharm. Bull., 1976, vol.24, Nr.4,pp.788−793.
  142. Tanaka Y., Kagamiishi A., Kiuchi A., Hoiiuchi T. Purification and properties of Jb -galactosidase from Aspergillus oryzae. J. Biochem., 1975, vol.77, Nr.1, pp.241−247.
  143. Thomas G.V., Kalra M.S., Singh A. Immobilization and Characterization of Kluyveromyces fragilis fi -galactosidase. -Indian J. of Exp. Biol., 1980, vol.18, pp.1020−1023.
  144. Tomino S., Meisler M. Biochemical and immunological studies of purified mouse j5 -galactosidase. J. Biol. Chem., 1975, vol.250, Nr.19″ pp.7752−7759.
  145. Tumerman L., Fram H., Comely K.W. The effect of lactose crystallization on protein stability in frozen concentrated milk. J. Dairy Sci., 1954, vol.37, pp.830−839.
  146. Udeira H., Udeira H. The effect of sugars on the thermal denaturation of lysosyme. Bull. Chem. Soc. Jap., 1980, vol. 53, Nr.9, pp.2451−2455.
  147. Vandamme K., Delbeke R. L’hydrolyse du lactose et la fabrication de lait chocolate. Lait, 1981, vol.61, Nr.605−606, pp.282−293.
  148. Wallenfels K., Malhotra 0.P.J3-galactosidase. Enzymes, 1960, vol.4, pp.409−429.
  149. Wallenfels K., Weil R. j3 -galactosidase. Enzymes, 1972, vol.7, pp.618−661.
  150. Wetlaufer D.B., Ristaw S. Aquisition of three-dimensional structure of proteins. Annu. Rev. Biochem., 1973, vol. 42, p.135.
  151. Wiederschain G.Y., Prokepenkov A.A. J3 -c^-galactosidase and -«^-fucosidase of pig kidney. Arch. Biochem. Bio-phys., 1973, vol.158, Nr.2, pp.539−543.
  152. Yu-Bin Ghiao, Moffitt K., Smallwood Y., Glew R. H* Glycon-amides as Inhibitors of Human J3 -galactosidases and J3 -Galactosidases. Arch, of Biochem. and Biophys., 1979, vol.192, Nr.1, pp.1−9.
Заполнить форму текущей работой

Пора сдавать?