Помощь в учёбе, очень быстро...
Работаем вместе до победы

Анализ структуры и получение в прокариотической системе рекомбинантного белка G2 хантавируса серотипа пуумала, изолированного из зоонозного очага на территории Республики Башкортостан

Диссертация: Анализ структуры и получение в прокариотической системе рекомбинантного белка G2 хантавируса серотипа пуумала, изолированного из зоонозного очага на территории Республики Башкортостан
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Разработанные и лицензированные на сегодняшний день вакцинные препараты для профилактики ГЛПС представляют собой «живые» аттенюированные вакцины, созданные на основе вирусов серотипов HTN и SEU, циркулирующих, преимущественно, в странах Азии — Китае и Южной Корее (Song et al., 1998; Lee et al., 2001). К тому же, по ряду сообщений, указанные вакцинные препараты индуцируют низкий уровень синтеза… Читать ещё >

Содержание

  • Список сокращений
  • Глава 1. Обзор литературы
    • 1. 1. Общие сведения о геморрагической лихорадке с почечным синдромом
    • 1. 2. Молекулярная биология, филогения и зоогеография хантавирусов
      • 1. 2. 1. Зоогеография хантавирусов
      • 1. 2. 2. Особенности организации генома хантавирусов
      • 1. 2. 3. Синтез вирусной РНК и созревание вирионов
      • 1. 2. 4. Функции вирусных белков
    • 1. 3. Вакцины
      • 1. 3. 1. Генно-инженерные вакцины
      • 1. 3. 2. ДНК-вакцины. Особенности генетической иммунизации
      • 1. 3. 3. Преимущества ДНК-вакцин и возможные ограничения в их применении
      • 1. 3. 4. Вакцины против геморрагической лихорадки с почечным синдромом
  • Глава 2. Объект и методы исследований
    • 2. 1. Краткая характеристика объектов исследований
    • 2. 2. Выделение и очистка тотальной РНК из образцов легочной ткани 54 рыжей uoRQBKii.(Clethrionomys glareolus)
    • 2. 3. Выделение и очистка суммарной РНК из образцов крови 55 больных, заболевших ГЛПС
    • 2. 4. Выделение и очистка плазмидной ДНК
    • 2. 5. Выделение плазмидной ДНК методом мягкого лизиса
    • 2. 6. Удаление РНК из препаратов плазмидной ДНК
    • 2. 7. Расщепление ДНК рестрикционными эндонуклеазами
    • 2. 8. Аналитический гель-электрофорез ДНК в неденатурирующих 60 условиях
    • 2. 9. Препаративный гель-электрофорез ДНК в неденатурирующих 62 условиях
    • 2. 10. Синтез кДЬЖ
    • 2. 11. Полимеразная цепная реакция
    • 2. 12. Элюция ДНК из агарозных гелей
    • 2. 13. Концентрирование ДНК бутанолом
    • 2. 14. Приготовление компетентных клеток
    • 2. 15. Приготовление вектора для клонирования
    • 2. 16. Секвенирование ДНК
    • 2. 17. Цитирование вектора и фрагмента ДНК
    • 2. 18. Трансформация компетентных клеток E. coli плазмидной ДНК
    • 2. 19. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей
    • 2. 20. Индукция lac промотора
    • 2. 21. Электрофорез полипептидов Е. col
    • 2. 22. Твердофазный иммуноферментный анализ
    • 2. 23. Реактивы и материалы
  • Глава 3. Результаты исследований и их обсуждение

Анализ структуры и получение в прокариотической системе рекомбинантного белка G2 хантавируса серотипа пуумала, изолированного из зоонозного очага на территории Республики Башкортостан (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность проблемы. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) — широко распространенное в странах Евроазиатского континента вирусное природно-очаговое заболевание. В Европейской части Российской Федерации на территории Республики Башкортостан (РБ) находится самый крупный и активный природно-зоонозный очаг этого заболевания. Природные очаги в РБ характеризуются высокой эпидемической активностью и являются самыми напряженными в мире. В РБ уровень заболеваемости в 5 — 10 и более раз превышает общефедеративный и составляет 40−60% заболеваемости по России. С 1957 г. по 2003 г. в республике переболело более 70 тыс. человек. Наивысшие показатели достигнуты в 1997 г.: по РБ — 224,5 на 100 000 населения, из них 34 случая (0,4%) смертельного исхода (Нургалеева и др., 1999) — по г. Уфе — 512, а по Благовещенскому р-ну — 1059. Серологическими методами была установлена принадлежность возбудителя данной вспышки к серотипу PUU. В Восточной Сибири и на Дальнем Востоке ГЛПС с более тяжелой формой и смертностью от 1% до 12%, вызывается серотипом Сеул (SEU) и Хантаан (HTN). Актуальность изучения проблемы обусловлена отсутствием тенденции к снижению заболеваемости, тяжестью течения с развитием различных тяжелых осложнений (токсико-инфекционный шок, почечная недостаточность, разрыв почек, тромбогеморрагический синдром, кровоизлияние) и значительным экономическим ущербом. К сожалению, на сегодняшний день еще не получены эффективные специфические средства для профилактики и этиотропной терапии ГЛПС. Динамика заболеваемости ГЛПС в республике характеризуется эпидемическими вспышками каждые 3— 4 года. Подобные вспышки связаны с массовым размножением рыжих полевок и высоким уровнем инфицированности грызунов — природного резервуара для вируса. Кроме того, подъем заболеваемости ГЛПС в годы с низкой численностью полевок, а также отличия в тяжести инфекционного процесса могут быть вызваны, в том числе и антигенной вариабельностью и разной степенью патогенности циркулирующих на территории республики Башкортостан штаммов хантавирусов, возбудителей ГЛПС. Передача вируса от грызуна к человеку происходит в основном воздушно-капельным путем и через экскременты животных (Avsic-Zupanc et al., 1995; Chu et al., 1994; Schmaliohn et al., 1985). Ежегодно по всему миру фиксируется более 150−200 тысяч случаев заболевания ГЛПС. Эффективность лечения любого заболевания определяется его точной диагностикой на раннем этапе заболевания.

Для диагностики ГЛПС наиболее широко используются методы, основанные на детекции специфических антител. В этих методиках используется фиксированный ацетоном антиген, полученный из культуры клеток Vero Е6, инфицированных патогенным хантавирусом (Lee et al., 1985). Получение подобного препарата является весьма трудоемкой и небезопасной процедурой. Альтернативой традиционному получению антигена может стать рекомбинантный вирусный белок, синтезированный в проили эукариотической системе экспрессии. При наличии эффективных штаммов-продуцентов получение рекомбинантного белка потребует значительно меньше времени, кроме того, отсутствует необходимость работы с вирусом.

Разработанные и лицензированные на сегодняшний день вакцинные препараты для профилактики ГЛПС представляют собой «живые» аттенюированные вакцины, созданные на основе вирусов серотипов HTN и SEU, циркулирующих, преимущественно, в странах Азии — Китае и Южной Корее (Song et al., 1998; Lee et al., 2001). К тому же, по ряду сообщений, указанные вакцинные препараты индуцируют низкий уровень синтеза нейтрализующих антител у иммунизированных людей. На территории России основным возбудителем ГЛПС является вирус серотипа PUU, и поэтому нет оснований утверждать, что данные вакцины окажут эффективное профилактическое действие. Альтернативой обычным вакцинам разрабатываются и уже разработаны рекомбинантные вакцины, например, от гепатита В и С (Спасокукоцкий, 2000). Стратегия создания таких вакцин сводится к клонированию гена, чей продукт при экспрессии в подходящей системе приведет к продукции белка, способного вызвать при введении в организм человека синтез вируснейтрализующих антител, против данного вируса. Еще одним направлением в области рекомбинантных технологий является разработка ДНК-вакцин. Принцип ДНК-вакцинации основан на введении в организм векторной ДНК, несущей гены белков, продукция которых приведет к полноценному иммунному ответу. Данный подход позволил получить антитела к множеству антигенов инфекционных патогенов вирусной и бактериальной природы (Dertzbaugh et al., 1997). В настоящее время в ряде стран Западной Европы, а также в Китае, Южной Корее активно ведутся исследования, направленные на создание ДНК-вакцин для лечения и профилактики ГЛПС. Однако до введения ДНК-вакцин в медицинскую практику необходимо провести длительные эксперименты для того, чтобы подтвердить их эффективность и безопасность.

Цель работы заключалась в исследовании структуры гена поверхностного гликопротеина G2 хантавируса, выделенного из зоонозного очага на территории Республики Башкортостан и создании системы получения рекомбинантного белка G2 в клетках Е. coli.

Задачи исследования:

1. Амплификация, клонирование и секвенирование гена гликопротеина G2 хантавируса, выделенного из органов грызунов и крови больных ГЛПС на территории Республики Башкортостан;

2. Анализ нуклеотидной и выведенной из нее аминокислотной последовательности клонированного гена гликопротеина G2 и сравнение с аналогичными последовательностями исследованных ранее вирусов;

3. Получение генетической конструкции, содержащей ген поверхностного гликопротеина G2 исследуемого хантавируса, способного экспрессироваться в прокариотической системе;

4. Получение рекомбинантного белка G2 в клетках Е. coli.

Научная новизна. Из результатов проведенных нами исследований установлено, что на территории Республики Башкортостан циркулирует хантавирус Ufa-2005 серотип PUU. Определена полная последовательность кодирующей области гена G2. Получены генно-инженерные конструкции на основе векторов pGEM Teasy, pBluescript и pPinPoint, включающие в себя кодирующую область гена гликопротеина G2 хантавируса серотипа PUU, экспрессия которого регулируется бактериальным lac промотором. Показана возможность экспрессии полноразмерного белка G2 хантавируса серотипа Пуумала в Е. coli (штамм JM 109).

Практическая значимость Полученные результаты расширяют и дополняют представления о структуре нуклеотидной и белковой последовательностей хантавируса, который циркулировал на территории Республики Башкортостан и являлся причиной вспышки заболевания ГЛПС в 2001;2005гг. Ген G2 из плазмидных конструкций можно использовать для получения штамма-продуцента гликопротеина, для диагностических целей, ДНК-вакцины и рекомбинантной вакцины.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на конференции «Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов (Уфа, 2000) — на Всероссийской научно-практической конференции «Медицина будущего» (Сочи, 2002) — на Всероссийской конференции с международным участием «Медицинские иммунобиологические препараты в XXI веке: разработка, производство и применение», посвященной 100-летию основания филиала «Иммунопрепарат» (Уфа, 2005) — «История изучения и современное состояние эпидемиологии, патогенеза, диагностики, лечения и профилактики» (Уфа, 2006). Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 статей и тезисы научных конференций.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания объектов и методов исследования (глава 2), результатов исследования и их обсуждения (глава 3), заключения, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 157 работ отечественных и зарубежных авторов. Работа изложена на 125 страницах и содержит 18 рисунков и 3 таблицы.

ВЫВОДЫ:

1. Амплифицирован, клонирован и секвенирован ген гликопротеина G2 хантавируса, выделенного из органов грызунов и крови больных во время вспышки ГЛПС 2001;2005 г. г. на территории Республики Башкортостан.

2. Показано, что исследуемый хантавирус Ufa-2005 относится к серотипу Пуумала и имеет общее генетическое происхождение со штаммами, выделенными ранее на данной территории.

3. Из анализа нуклеотидной и выведенной из нее аминокислотной последовательности клонированного гена гликопротеина G2 в сравнении с аналогичными последовательностями исследованных ранее вирусов следует, что гликопротеин G2 Ufa-2005 относится к белку слияния.

4. Получена генетическая конструкция на основе вектора pPinPoint, способная экспрессироваться в клетках Е. coli, содержащая полную последовательность кодирующей области гена поверхностного гликопротеина G2 исследуемого хантавируса под контролем индуцируемого бактериального lac промотора.

5. Показано, что синтезируемый в клетках Е. coli белок G2 содержит антигенные детерминанты, определяемые иммуноферментным анализом тест-системой «Хантагност», и может быть использован для диагностических целей.

Заключение

.

В результате проведенных исследований, нами был выделен и получен полноразмерный ген вирусного гликопротеина G2 хантавируса Ufa-2005. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей изолированного вируса Ufa-2005 показал, что вирус имеет генетически общее происхождение со штаммами, выделенными ранее в Республике Башкортостан из рыжей полевки {Clethrionomys glareolus). Были выявлены замены в нуклеотидной последовательности выделенного гена G2 от соответствующего участка первичной структуры М-сегмента штаммов: CG-1820, CG17, К27. Наличие целого ряда отличий в первичной структуре исследованного участка М-сегмента вируса Ufa-2005 требует проведения дополнительных исследований, направленных на установление стабильности и возможности появления другого варианта вируса в последующие годы.

Сконструированы векторные системы pGEM-G2, pBluescript-G2 и pPinPoint-G2, кодирующие ген гликопротеина G2. Плазмидные конструкции могут использоваться в качестве донора гена G2 при получении рекомбинантной вакцины в дрожжевой векторной системе (Р/с/?ш pastoris) и ДНК-вакцины. Следует отметить, что плазмида была получена на основе серотипа PUU — основного возбудителя ГЛПС в Республике Башкортостан.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Alexeyev О., Elgh F., Zhestkov A., Wadell G., Juto P. Hantaan and Puumala vitus antibodies in blood donors in Samara, an HFRS-endemic region in European Russia // Lancet. 1996. — V. 347. — P. 1483−1494.
  2. Alff P., Sen N., Gorbunova E., Gavrilovskaya I.N., Mackow E.R. The NY-1 Hantavirus Gn cytoplasmic tail coprecipitates TRAF3 and inhibits cellular interferon responses by disrupting TBK1-TRAF3 complex formation //J Virol. 2008. — V. 82.-P. 9115−9122
  3. Andersson H., Barth B.-U., Ekstrom M. Garoff H. Oligomerization-dependent folding of the membrane fusion protein of Semliki Forest virus. J. Virology. 1997. — V. 71. — P. 9654−9663.
  4. Antic D., Lim B.-U., Kang C.Y. Molecular characterization of the M genomic segment of the Seoul 80−39 virus-nucleotide and amino acid sequence comparisons with other hantaviruses reveal the evolutionary pathway // Virus Res. 1991. — V. 19. — P. 47−58.
  5. Antic D., Lim B.-U., Kang C.Y. Nucleotide seqvuence and coding capacity of the large (L) genomic RNA segment of Seoul 80−39 virus a mamber of the hantavirus genus // Virus Res. 1991. — V. 19. — P. 59−66.
  6. Antic D., Wright K.E., Kang C.Y. Maturation of Hantaan virus glicoprotein G1 and G2 // Virology. 1992. — V. 189. — P. 324−328.
  7. Antic D., Wright K.E., Kang C.Y. Maturation of Hantaan virus glycoproteins G1 and G2 // Virology.- 1992. V. 189. — P. 324−328.
  8. Antic D., Yong Kang C., Kristin S., Schamaljohn C., Vapalahti O., Vaheri A. Comparison of the deduced gene of the L, M, S genom segments of hantaviruses // Virus Res. 1992. — V. 24. — P. 35−46.
  9. Arikawa, J., Takashima, I., Hashimoto, N. Cell fusion by haemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) viruses and its application for titration of virus infectivity and neutralizing antibody // Arch Virology 1985. — V. 86. -P. 303−313.
  10. Avsic-Zupanc Т., Toney A., Anderson K., Chu Y.K., Schmaliohn C.S. (1995). Genetic and antigenetic properties of Dobrava virus: a unique member of the Hantavirus genus, family Bynyaviridae // J. Gen. Virol. -1995.-V. 76.-P. 2801−2808.
  11. Babiuk L.A., Lewis J., Suradhat S., Baca-Estrada M., Foldvari M., Babiuk S. Polynucleotide vaccines: potential for inducing immunity in animals // J. Biotechnol. 1999. — V. 73. — P. 131−140.
  12. Barry M., Johnston S. Biological features of genetic immunization // Vaccine. 1997. -V. 15. — P. 788−791.
  13. Beaty B. J., Miller B.R., Shope R.E., Rozhon E.J., Bishop D.H. Molecular basis of bunyavirus per os infection of mosquitoes: role of the middle-sized RNA segment // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1982. — V. 79. — P. 12 951 297.
  14. Beaty B.J., Rozhon B.R., Gensemer P., Bishop D.H. Formation of reassortant buniaviruses in dually infected mosquitoes // Virology. 1981. -V.lll.-P. 662−665.
  15. Boshart M., Weber F., Jahn G., Dorsh-Hasler K., Fleckenstein В., Schaffner W. A very strong enhancer is located upstream of an immediate early gene of human cytomegalovirus. // Cell. 1985. — V. 44. — P.521−530.
  16. Bowen M.D., Kariwa H., Rollin P.E., Peters C.J., Nichol S.T. Genetic charaterization of a human isolate of Puumala hantavirus from France // Virus Res. 1995. — V. 38. — P. 279−89.
  17. Chapman B.S., Thayer R.M., Vincent K.A., Haigwood N.L. Effect of intron A from human cytomegalovirus immediate-early gene on heterologous expression in mammalian cells // Nuc. Acids Res. 1991. — V. 19. — P. 3979−3986.
  18. Chen S.-Y., Compans R.W. Oligomerization, transport, and Golgi retention of Punta Того virus glycoproteins // Virology. 1991. — V. 65. — P. 59 025 909.
  19. Chomczynski P., Sacchi N.// Anal. Biochem. 1987. -V. 162. -P.156−59.
  20. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidium-thiocyanate-phenol-chlorofonn extraction // Anal. Biochem. — 1987.-V. 162.-P. 156−159.
  21. Chu Y.K., Jenning G., Leduc J.W., Lee H.W., Schmaliohn C.S., Dalrymple J.M. Serologgical relathionships among viruses in the Hantavirus genus, family Bunyaviridae // Virology. 1994. — V. 198. — P. 196−204.
  22. Clare J.J., Rayment F.B., Ballantine S.P., Sreekrismna K., Romanos M.A. High-level expression of tetanus toxin fragment С in Pichia pastoris strainscontaining multiple tandem integrations of the gene // BioTechnology. -1991.-V. 9.-P. 455−460.
  23. Collett M.S. Messenger RNA of the M segmeent RNA of Rift Vallay fever vurus//Virology.- 1986.-V. 151.-P. 151−156.
  24. Combet C., Blanchet C., Geourjon C., Deleage G. NPS network protein sequence analysis // Trends Biochem. Sci. 2000 — V. 25. — P. 147−150.
  25. Corver J., Ortiz A., Allison S.L., Schalich J., Heinz F.X., Wilschut, Membrane fusion activity of tick-borne encephalitis virus and recombinant subviral particles in a liposomal model system // Virology. 2000. — V. 269, 37−46.
  26. Davis H.L., Michel M.L., Whalen R.G. DNA-based immunization induces continuous secretion of hepatitis-B surface-antigen and high-levels of circulating antibody // Human Mol. Genet. 1993. — V. 2 — P. 1847−1851.
  27. Donelly J., Ulmer J., Shiver J., Margaret A. DNA vaccines // Annu. Rev. Immunol. 1997. — V. 15. — P. 617−648.
  28. Easterbrook J.D., Klein S.L. Immunological mechanisms mediating hantavirus persistence in rodent reservoirs // PLoS Pathog. -2008 V. 4. -P.42−49.
  29. Eisenberg D., Liithy R., Bowie J.U. VERIFY3D: assessment of protein models with three-dimensional profiles. Methods // Enzymol. 1997. — V. 277. — P. 396−404.
  30. Elliot R.M. Molecular biology of the Buniaviridae // J. Gen. Virol. 1990. -V. 71-P. 501−522.
  31. Epand R.M. Fusion peptides and the mechanism of viral fusion // Biochim. Biophys. Act.-2003.- V. 1614.-P. 116−121.
  32. Ferreira G., Monteiro G., Prazeres D., Cabral J. Downstream processing of plasmid DNA for gene therapy and DNA vaccine applications // Trends. Biotechnol. 2000. — V. 18. — P.380−388.
  33. Gallaher W.R., DiSimone M.J., Buchmeier M. J The viral transmemrane superfamily possible divergence of Arenavirus and Filovirus glycoproteins from a common RNA virus ancestor // Microbiol. -2001. — V. 1. — P.24—34
  34. Garcin D., Lezzi M., Dobbs M., Elliot R.M., Schmaljiohn C., Kang C.Y., Kolakofsky D. The 5'-ends of Hantaan virus (Buniaviridae) RNAs suggest a prime-and-realign mechanism for the initiation of RNA synthesis // J. Virol. 1995. — V. 69. — P. 5754−5762.
  35. Gibbons D.L., Vaney M.-C., Roussel A., Vigouroux A., Reilly В., Lepault, J., Kielian M., Rey F.A. Conformational change and protein-protein interactions of the fusion protein of Semliki Forest virus // Nature. 2004. -V. 427.-P. 320−325.
  36. Giulian G.G. Resolution of low molecular weight polypeptides in a non-urea sodium dodecyl sulfate slab polyacrylamid gel system // Fed. Proc. 1985. -V. 44.-P. 686−693.
  37. Gonzalez-Scarano F., Janssen R., Najar J.A., Pobjecky N., Nathanson N. An avirulent G1 glycoprotein variant of La Crosse bunyavirus with defective fusion function // J. Virol. 1985. — V. 54. — P. 757−763.
  38. Guirakhoo F., Heinz F.X., Mandl C.W., Holzmann H., Kunz C. Fusion activity of flaviviruses: comparison of mature and immature (prMcontaining) tick-borne encephalitis virions // J. Gen. Virol. 1991. — V. 72. -P. 1323−1329.
  39. Hacker J.K., Hardy J. L Adsorptive endocytosis of California encephalitis virus into mosquito and mammalian cells: a role for G1 // Virology. 1991. -V. 235.-P. 40−47.
  40. Hardestam J., Karlsson M., Falk K.I., Olsson G., Klingstrom J., Lundkvist A. Puumala hantavirus excretion kinetics in bank voles (Myodes glareolus) II Emerg. Infect. Dis. 2008 -V.14. — P. 1209−1215
  41. Henikoff S., Henikoff J.G. Protein family classification based on searching a database of blocks // Genomics. 1994. — V. 19. — P. 97−107.
  42. Hernandez L.D., Hoffman L.R., Wolfsberg T.G., White J.M. Virus-cell and cellcell fusion // Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 1996. — V.12.- P. 627−661.
  43. Hjelle В., Chavez G., Torrez N., Yates S., Sarisky J., Webb J., Ascher M. Genetic identification of a novel hantavirus of the harvest mouse Reithrodontomys megalotis // J. Virol. 1994. — V. 68. — P. 6751−6754
  44. Holand J.J., Spindler K. Horodyski F. Rapid evolution of RNA genomes // Science. 1982 -V.215. — P.1577−1585.
  45. Hooper J., Kamrud K., Eigh F., Custer D., Schmaliohn C. DNA vaccination with Hantavirus M segment elicit neutralizing antibodies and protects against Seoul virus infection // Virology. 1999. — V. 255. — P.269−278.
  46. Huang H., Li X., Zehua Z. Genetic immunization with Hantavirus vaccine combining expression of G2 glycoprotein and fused interleukin-2 // Genetic Vaccines and Therapy. 2008. — v. 6. — P. 15−21.
  47. Ikegami Т., Won S., Peters C.J., Makino S. Characterization of Rift Valley Fever Virus Transcriptional Terminations // J. Virol. 2007 — V. 16 — P. 8421−8438.
  48. Janssen R ., Nathanson N., Endres M.J., Gonzalez-Scarano F. Virulence of La Crosse virus is under polygenic control // J. Virol. 1986. — V. 59. — P. 1−7.
  49. Jardetzky T.S., Lamb R.A. Structure of the parainfluenza virus 5 F protein in its metastable prefusion conformation // Nature 2004. — Vol. 438. — P. 3844.
  50. Jin M., Park J., Lee S. Hantaan virus enters cells by clathrindependent receptor-mediated endocytosis // J. Virol 2002. — V. 294. — P. 60−69.
  51. Kallio-Kokko, Leveelahti R. Human immune response to Puumala virus glycoproteins and nucleocapsid protein expressed in mammalian cells // Hannimari Journal of Medical Virology-2001. V. 65. — P. 605−613.
  52. Kamrud K., Hooper J., Eigh F., Schmaljohn C. Comparison of the protective of naked DNA, DNA-based Sindbis replicon, and packaged Sindbis replicon vectors expressing hantavirus structural genes in hamsters // Virology. -1999.-V. 263.-P. 209−219.
  53. Kim T.-Y., Choi Y., Cheong H.-S., Choe J. Identification of a cell surface 30 kDa protein as a candidate receptor for Hantaan virus // J. Gen. Virol. -2002.- V. 83.-P. 767−773.
  54. Krautkramer E., Zeier M. Hantavirus Causing Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome Enters from the Apical Surface and Requires Decay-Accelerating Factor (DAF/CD55) // J. Virol. 2008 — V.82. — P. 4257−4264.
  55. Kyte J., Doolittle, R.F. A simple method for displaying the hydropathic character of a protein // J. Mol. Biol. 1982. — V. 157. — P. 105−132.
  56. Lai W.C., Bennett M., Johnston S.A., Barry M.A., Pakes S.P. Protection against Mycoplasma -pulmonis infection by genetic vaccination // DNA Cell Biol. 1995.-V. 14.-P. 643−651.
  57. Lee H.W., Baek L.J., Johnson K.M. Isolation of Hantaan virus, the etiologic agent of Korean hemorrhagic fever with renal syndrom in humans // Arch. Virol. Suppl. 1982. — V. 1. — P. 35−47.
  58. Lee H.W., Lee P.W. Korean hemorrhagic fever. I. Demonstration of causative antigen and antibodies // Korean J. of Internal Medicine. 1976. -V. 19.-P. 371−383.
  59. Lee P.W., Amyx H.L., Gajdusek D.C., Yanagihara R.T., Goldgaber D., Gibbs C.J. New hemorrhagic fever with renal syndrome-related virus in rodents in the United States // Lancet. 1982. — V. 2. — P. 1405−1411.
  60. Lee P.W., Gibbs С .J., Gajdusek D.C., Yanagihara R. Serotypic classification of hantaviruses by indirect immunofluorescent antibody and plaque reduction neutralization tests // J. Clin. Microbiol. 1985. — V. 22. -P. 940 944.
  61. Lescar J., Roussel A., Wien M.W., Navaza J., Fuller S.D., Wengler G., Wengler G., Rey F.A. The fusion glycoprotein shell of Semliki Forest virus: an icosahedral assembly primed for fusogenic activation at endosomal Ph // Cell -2001. V. 105.-P. 137−148.
  62. Lewis P.J., Cox G.J.M., Hurk S., Babiuk L. Polynucleotide vaccines in animals: enhancing and modulating responses // Vaccine. 1997. — V. 15. -P.861−864.
  63. Liang M., Li D., Xiao S.Y., Hang C., Rossi C.A., Schmaliohn C.S. Antigenic and molecular characterization of hantavirus isolates from China // Virus. Res. 1994. — V. 31. — P. 219−233.
  64. Lober C., Anheier В., Lindow S., Klenk H.-D., Feldmann H. The Hantaan virus glycoprotein precursor is cleaved at the conserved pentapeptide WAASA // Virology. 2001. — V. 289. — P. 224−229.
  65. Lorenz I.C., Allison S.L., Heinz F.X., Helenius A. Folding and dimerization of tickborne encephalitis virus envelope proteins prM and E in the endoplasmic reticulum // J. Virol. 2002. — V. 76. — P. 5480−5491.
  66. Lundkvist A., Bjorsten S., Niklasson B. Immunoglobulin G subclass responses against the structural components of Puumala virus // J. Clin. Microbiol. 1993. -V. 31. — P. 368−372.
  67. Marquardt Т., Helenius A. Misfolding and agregation of newly synthesized proteins in the endoplasmic reticulum // J. Cell Biol. 1992. — V. 117. — P. 505−513.
  68. McAleer W.J., Buynak E.B., Maigetter R.Z., Wampler D.E., Miller W.J., Hilleman M.R. Human hepatitis В vaccine from recombinant yeast // Nature. -1984. V.307. — P. 178−180.
  69. McCaughey C., Shi X., Elliot R.M., Wyatt D.E., O’Neill H.J., Coyle P.V. Low pH-induced cytopathic effect a survey of seven hantavirus strains // J. Virol. Methods. — 1999.-V. 81.-P. 193−197.
  70. Mir A.M., Panganiban A.T. A protein that replaces the entire celluler elF4 °F complex //J.EMBO 2008. — P. 1 — 11
  71. Moreau P., Hen R., Wasylyr В., Everett R., Gaub M. P., Chambon P. The SV40 72 base pair repeat has a striking affect on gene expression both in SV40 and other chimeric recombinants // Nucl. Acids Res. 1981. — V. 9. -P. 6047−6068.
  72. Ogino M. Cell Fusion Activities of Hantaan Virus Envelope Glycoproteins // J. Virol. 2004. — Vol. 78. — P. 10 776−10 782.
  73. Parrington M.A., Lee P.-W., Kang C.Y. Molecular characterization of the Prospect Hill virus M RNA segment: a camparison with the M RNAsegment of other hantaviruses // J. of Gen. Virol. 1991. — V. 72. — P. 1845— 1854.
  74. Patterson J.L., Cabradilla C., Holloway B.P., Obueski J.F., Kolakofsky D. La Crosse virions contain a primer-stimulated RNA polymerase and a methylaited cap-dependent endonuclease // J. Virol. 1984. — V. 52. — P. 215−222.
  75. Pfarr D.S., Rieser L.A., Woychik R.P., Rottman F.M., Rosenberg M., Reff M.E. Differential effects of polyadenylation regions on gene expression in mammalian cells // DNA. 1986. — V.5. — P. 115−122.
  76. Philpott M., Hioe C., Sheerar M., Hinshaw V.S. Hemagglutinin mutations related to attenuation and altered cell tropism of a virulent avain influenza A virus // J. Virol. 1990. — V. 64. — P. 2941−2947.
  77. Pisetsky D.S. Immunostimulatory DNA: a clear and present danger // Nat. Med. 1997. — V. 3. — P. 829−831.
  78. Poch O., Sauvaget I., Delarue M., Tordo N. Identification of four conserved motif among the RNA-dependent polymerare encoding elements // J.Embo. 1989. — V. 8. — P. 3867−3879.
  79. Polo J.M., Belli B.A., Driver D.A., Frolov I., Sherrill S., Hariharan M.J. Stable alphaavirus packaging cell lines for Sindbis virus and Semliki Forest virus derived vectors // Prot. Natl. Acad. Sci.USA. — 1999. — V. 96. -P.4598−4603.
  80. Porter D.C., Wang J., Moldoveanu Z., McPherson S., Morrow C.D. Immunization of mice with poliovirus replicons expressing the C-fragment of tetatus toxin protects agains lethal challenge with tetanus toxin // Vaccine. 1997. — V. 15.-P. 257−264.
  81. Puthavathana P., Lee H.-W., Kang C.Y. Typing of Hantaviruses from five continents by polymerase chain reaction // Virus Res. -1992. -V.26. -P. 614.
  82. Raz E., Carson D.A., Parker S.E. Intradermal gene immunization: the possible role of DNA uptake in the induction of cellular immunity to viruses //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. -V. 91. — P. 9519−9523.
  83. Robinson H. Nucleic acid vaccines: an overiew // Vaccine. 1997. — V. 15. -P. 785−787.
  84. Rodriguez F., Whitton J. Enhancing DNA immunization // Virology. -2000. V. 268. — P. 233−238.
  85. Rouse B.T. Induction of mucosal immunity against herpes simplex virus by plasmid DNA immunization // J. Virol. 1997. — V.71. — P. 3138−3145.
  86. Rowe J.E., Jeor S.C., Riolo J., Otteson E.W., Monroe M.C., Henderson W.W., Ksiazek T.G., Rollin P.E., Nichol S.T. Coexistence of several novel hantaviruses in rodents indigenousto North America // Virology. 1995. -V. 213.-P. 122- 130.
  87. J., Fritsch E.F., Maniatis T. // Molecular cloning: a laboratory manual./ 1989. p 134.
  88. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977. — V.74. -P.5463−5467
  89. Sarzottii M., Dean T.A., Remington M.P., Ly C.D., Furth P.A., Robbins D.S. Induction of cytotoxic T cell responses in newborn mice by DNA immunization // Vaccine. 1997. — V. 15. — P. 795−797.
  90. Schmaliohn A.L., Li D.L., Negley D.L., Bressler D.S., Turell M.J., Korch G.W., Ascher M.S., Schmaliohn C.S. Isolation and initial characterization ofa newfound Hantavirus from California // Virology. 1995. — V. 206. — P. 963−972.
  91. Schmaliohn C., Chu Y., Schamaljohn A., Dalrymple J. Antigenic subunits of Hantaan virus expressed by baculovirus and vaccinia virus recombinants //J. Virol. 1990. -V. 64. -P. 3162−3170.
  92. Schmaliohn C.S., Jennings G.B., Hay J., Dalrymple J.M. Coding strategy of the S genome segment of Hantaan virus // Virology. 1986. — V. 155. -P. 633−643.
  93. Schmaliohn C.S., Schmaliohn A.L., Dalrymple J.M. Hantaan virus M RNA coding strategy nucleotide sequence and gene order // Virology. — 1987.-V. 157.-P. 31−39.
  94. Sealey P.G., Southern E.M. Gel electrophoresis of DNA // In: Gel Electrophoresis of Nucleic Acids. A practical approach. IRL Press, Oxford. -1982.-P. 39−76.
  95. Seder R. DNA-vaccines-designer vaccines for the 21st century // The New England J. of Medicine. 1999. — V. 341. — P. 277−278.
  96. Shope R.E., Rozhon E.J., Bishop D.H.L. Role of the middle-sized bunyavirus RNA segment in mouse virulence // Virology. 1981. — V. 174. -P. 79−86.
  97. Song G. Successful development of inactivated cell culture vaccine against HFRS in China // Proc. the fotht international conference on HFRS and Hantaviruses, USA. 1998. — P. 102−113
  98. Song J.W., Baek L.J., Nagle J.W., Schlitter D., Yanagihara R. Genetic and pathogenetic hantavirus from white-footed mouse (Peromyscus leucopus) latter //Lancet. 1996.- V. 344.-P. 1637−1648.
  99. Song J.-W., Kang H.J., Gu S.H., Moon S.S., Bennet S.N., Song K.-J., Baek L.J., Kim H.-C., Guinn M.L., Chong S.-T., Klein T.A., Yanagihara R. Characterization of Imjin Virus, a newly isolated hantavirus from the Ussuri
  100. White-Toothed Shrew (Crocidura lasiura) //j.Virol. 2009. — V.83. — P.6184−6191
  101. Spiropoulou C.F., Albarino C.G., Ksiazek T.G., Rollin P.E. Andes and Prospect Hill hantaviruses differ in early induction of interferon although both can down regulate interferon signaling // J. Virol. 2007 — V.81. — P. 2769−2776.
  102. Spiropoulou C.F., Morzunov S., Feldmann H., Sanchez A., Peters C.J., Nichol S.T. Genome structure and variability of a virus causing Hantavirus pulmonary syndrome // Virology. 1994. — V. 200. — P. 715−723.
  103. Stafford D.W., Bieber D. Concentration of DNA solutions by extraction with 2-butanol // Biochim. Biophys. Acta. 1975. — V.378. — P.18−21.
  104. D.A. 5'- Terminal nucleotide sequence of Escherichia coli lactose repressor mRNA. Features of translational initiation and reinitiation sites // PNAS. 1977. -V. 74. — P. 4163−4167.
  105. Stohwasser R., Raab K., Darai G., Bautz E.K. Primary structure of the large (L) RNA segment of nephropathia epidemica virus strain Hallnas B1 coding for the viral RNA polymerase // Virology. 1991. — V. 183. — P. 386−391.
  106. Sundin D.R., Beaty B.J., Nathanson N., Gonzalez-Scarano F. A G1 glycoprotein epitope of La Crosse virus: a determinant of infection of Aedes triseriatus // Science. 1987. — V. 235. — P. 591−593.
  107. Tang D.C., Devit M., Jonston S.A. Genetic immunization is a simple method for eliciting an immune response // Nature. 1992. — V. 356. — P. 152−154.
  108. Taylor S., Frias-Staheli N., Garcia-Sastre A., Schmaljohn C. Hantaan virus nucleocapsid protein binds to importin a proteins and inhibits tumor necrosis factor alpha-induced activation of nuclear factor kappa В / J. Virol. 2009.- V. 83.-P. 1271−1279.
  109. Valenzuela P., Medina A., Rutter W., Ammerer G., Hall B. D. Synthesis and assembly of hepatitis В virus surface antigen particles in yeast // Nature.- 1982. V.298. — P. 347−350.
  110. Vapalahti O., Lundkvist A., Kallio-Kokko H., Paukku K., Julkunen I., Lankinen H., Vaneri A. Antigenic properties and diagnostic of Puumalavirus nucleocapsid protein expressed in insect cells // J. Clin. Microbiol. -1996.-V. 34.-P.l 19−125.
  111. Wells J.M., Wilson P.W., Norton P.M., Gasson M.J., Le Page R.W. Lactococcus lactis: High-level expression of tetanus toxin fragment С and protection against lethal challenge // Mol. Microbiol. 1993. — V.8. — P. 1155−1162.
  112. Wolff J.A., Malone R.W., Williams P. Direct gene transfer into mouse muscle in vivo // Sience. 1990. — V.247. — P. 1465−1468.
  113. Xiang Z.Q., Spitalnik S., Tran M., Wunner W.H., Cheng J., Ertl H. Vaccination with a plasmid vector carrieng the rabies virus glycoprotein gene induces protective immunity against rabies virus // Virology. 1994. — V. 139. — P.132−140.
  114. Xiao S.Y., Liang M., Schmaliohn C.S. Molecular and antigenic characterization of HV114, a hantavirus isolated from a patient with renal syndrom in China // J. Gen. Virol. 1993. — V. 74. — P. 1675−1679.
  115. Xiao S-Y., Ledus J.W., Chu Y.K., Schmaliohn C.S. Phylogenetic analyses of virus isolates in the genus Hantavirus, family Bunyaviridae // Virology. -1994.-V. 198.-P. 205−217.
  116. Yamasaki K., Weihl C., Roos R. Alternative translation initiation of Theiler’s murine encephalomyelitis virus // J. of Virol. -1999. V.73. -P.8519−8526.
  117. Yanigahara R., Svedmyr A.L., Lee P., Goldgaber D., Gajdusek D.-C., Gibbs Jr., Nystrom K. Isolation and propagation of nephropathia epidemica virus in bank voles // Scand. J.Infect. Dis. 1984. — V. 16. — P. 225−228.
  118. Yokoyama N., Maeda K., Mikami T. Recombinant viral vector vaccines for the veterinaiy use // J. Vet. Med. Sci. 1997. — V.59. — P.311−322.
  119. Yong-K.C., Gerald В., Jennings, Connie S., Schmaljohn A., Vaccinia Virus-Vectored Hantaan Virus Vaccine Protects Hamsters from Challenge with Hantaan and Seoul Viruses but Not Puumala Virus // Ft. Detrick, Frederick 21 702−50.
  120. Yoshimatsu K., Yoo Y., Yoshida R., Ishihara C., Azuma I., Arikawa J. Protective immunity of Hantaan virus nucleocapsid and envelope protein studies baculovirus expressed proteins // Arch. Virol. -1993. Vol. 130. — P.365−376.
  121. . Д. Новое в клонировании ДНК. Методы./ М. Мир, 1989. 346 с.
  122. В.Г. ДНК-вакцинация и генотерапия на основе транзиентной экспрессии нуклеиновых кислот в соматических клетках человека и животных // Мол. Биол. 1997. — Т. 31. — С. 209−215.
  123. Т.К. и др., // Акт. пробл. вир. 1999. — Т.2. С.60
  124. Льюин. Гены. / М. Мир 1987. 544 с.
  125. Р.Ш., Кулагин В. Ф., Хайбуллина С. Ф. ГЛПС некоторые современные аспекты лечения и профилактики // Сборник статей «Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом — пути решения проблемы». — Уфа. — 1995. — С. 5−9.
  126. А. Генные вакцины. Актуальность разработки новых вакцин // Еженедельник Аптека. 2000. — № 229. — С. 1−7.
  127. P.M., Хунафина Д. Х., Камилов Ф.Х. Сборник статей
  128. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом в республике" Башкортостан. // Уфа. 1995. С. 243−250.
  129. . Н., Найп Д. М., Мэрфи Ф. А., Харрисон С., Уайли Д., Ройзман Б., Холланд Д. Дж., Рэмиг Р. Ф., Шоуп Р., Кауфман Р., Пенмен Ш., Грин М., Лоуи Д. Вирусология. М. / Мир. 1989.492 с.
  130. Якименко и др., Природно-очаговое заболевания человека // Сб. научных работ. 2001. — С.32−39.
Заполнить форму текущей работой

Пора сдавать?