Оценка иммуномодулирующего действия профеталя при экспериментальном проникающем ранении глаза

Актуальность проблемы. Феномен иммунной привилегированности глаза привлекает внимание современных исследователей [Архипова Л.Т., 2000, 2006; Слепова О. С. и др., 2005; Гундорова Р. А. и др., 2006; Черешнева М. В. и др., 2006; Martin-Fontecha A. et al., 2003; Novak N. et al., 2003; Streilein J., 2003; Yanoff M. et al., 2004]. При проникающем ранении глаза (ПРГ) развивается комплекс типовых изменений в иммунной системе, в том числе системных [Архипова Л.Т., 2000, 2006; Слепова О. С. и др., 2005], являющихся общими для травмы в целом, несмотря на ограниченный по объему характер повреждения. В частности, при ПРГ как у человека, так и у животных важную роль играют стрессорные изменения в иммунной системе [Черешнева М.В. и др., 2006] и развитие синдрома вторичной комбинированной иммунной недостаточности [Волик Е.И., 2000; Черешнева М. В., 2000; Гаврилова Т. В. и др., 2005].

Одним из подходов к иммунокоррекции является включение в терапию наряду с антибиотиками, стероидными и нестероидными противовоспалительными средствами современных отечественных иммуномодуляторов [Архипова JI.T., 2000; Волик Е. И., 2000; Черешнева М. В., 2000; Гаврилова Т. В., 2006]. Среди них перспективен отечественный препарат «Профеталь» (далее профеталь), действующее вещество которогосывороточный белок альфа-фетопротеин (АФП) [Родионов С.Ю. и др., 1997; Черешнев В. А. и др., 2004]. В настоящее время он положительно зарекомендовал себя при лечении заболеваний, протекающих с иммунными нарушениями [Родионов С.Ю. и др. 1997, 2006; Черешнев В. А. и др., 2003, 2004]. Показано, что в системе in vitro профеталь усиливает дифференцировку и цитотоксическую активность NK-клеток, дифференцировку и экспрессию костимулирующих молекул дендритными клетками [Гаврилова Т.В., 2006; Лебединская О. В., 2006]. Однако многие аспекты механизма иммуномодулирующего действия профеталя остаются неизученными.

Дальнейшее исследование характера изменений иммунной системы при ПРГ и разработка патогенетически обоснованных методов их коррекции определяют актуальность данной проблемы.

Цель работы — исследовать характер изменений иммунной системы и их коррекцию профеталем при экспериментальном проникающем ранении глаза.

Основные задачи.

1. Оценить эффект действия проникающего ранения глаза и профеталя в варианте монотерапии и при комбинации со стандартной терапией на процессы антителогенеза, выраженность реакции гиперчувствительности замедленного типа, клеточность органов лимфомиелоидного комплекса.

2. Исследовать влияние проникающего ранения глаза и действие профеталя на фагоцитарную активность клеток лимфатических узлов, периферической крови и брюшной полости.

3. Изучить воздействие проникающего ранения глаза и профеталя на частоту выявления антител в плазме периферической крови к аутоантигенам тканей глаза.

4. Исследовать изменение содержания альфа-фетопротеина в плазме периферической крови экспериментальных животных в зависимости от схем введения профеталя.

5. Оценить морфологическую картину травматического воспаления при проникающем ранении глаза в условиях разных схем введения профеталя.

Научная новизна. В экспериментальной модели ПРГ крыс популяции Wistar исследованы особенности течения травматического воспаления, изменения иммунной системы, влияние на них нового отечественного иммунотропного препарата профеталя при разных схемах введения.

В работе впервые установлено: при введении профеталя в комплексе со стандартной терапией уровень АФП в плазме крови животных ниже, чем в варианте монотерапии, что указывает на необходимость учета взаимодействия профеталя с препаратами стандартной терапии. Показана возможность снижения профеталем выраженности аутосенсибилизации. Установлено, что в условиях как изолированного, так и комбинированного введения препарата животным с ПРГ наблюдается угнетение антителообразования и степени выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ).

Впервые выявлено, что введение профеталя отменяет ряд эффектов стандартной терапии на функции фагоцитирующих клеток, приводит к повышению интегральных показателей моноцитарного фагоцитоза и числа моноцитов крови при отсутствии влияния на поглотительную активность нейтрофилов и эозинофилов периферической кровинаблюдается активация поглотительной способности перитонеальных мононуклеарных фагоцитов и увеличение их количества, а также стимуляция фагоцитарной активности тучных клетокв регионарном лимфатическом узле снижаются показатели суммарной фагоцитарной активности клеток.

Впервые обосновано восстановление тканевых дефектов за счет репаративной регенерации при использовании профеталя как в монотерапии, так и при комбинированном введении с другими препаратами.

Теоретическая и практическая значимость работы. В теоретическом плане исследования существенно расширяют представления о роли иммунной системы в патогенезе ПРГ и дополняют сведения об иммунотропном действии профеталя в условиях индуцированного изменения функций иммунной системы при данном виде патологии: показана высокая иммуномодулирующая активность препарата.

В практическом плане полученные результаты демонстрируют перспективность дальнейшего изучения возможности использования профеталя для коррекции иммунных нарушений при аутоиммунных заболеваниях глаза.

Внедрение в практику. Основные положения диссертации используются при чтении лекций студентам, магистрам, аспирантам биологического факультета Пермского государственного университета. Фрагменты работы вошли в материалы доклинического испытания профеталя и были представлены в Фармакологический комитет РФ для получения разрешения на его производство.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Проникающее ранение глаза вызывает ряд изменений иммунной системы, включая стимуляцию гуморального и клеточноопосредованного иммунного ответа, модуляцию функций фагоцитирующих клеток, регенеративной активности зоны повреждения, провоцируя развитие аутоиммунного ответа к тканям глаза.

2. Применение стандартной терапии, экстраполированной со схем, используемых в клинике у пострадавших с проникающим ранением глаза, усугубляет развитие дисфункции иммунной системы при сохранении воспалительной инфильтрации и рубцовых изменений в поврежденной ткани.

3. Включение профеталя в комплексную патогенетическую терапию травматических и стрессорных изменений функций иммунной системы оптимизирует течение воспалительного процесса при экспериментальном проникающем ранении глаза.

Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены на VI Международной конференции «Проблемы загрязнения окружающей среды» ICEP — 2005 (Пермь — Казань — Пермь, 2005) — Российском научном симпозиуме «Цитокины. Стволовые клетки. Иммунитет» (Новосибирск, 2005) — VIII Всероссийском научном форуме с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2006) — IV Евро-Азиатской конференции по офтальмохирургии (Екатеринбург, 2006) — X Международной Пущинской школы-конференции молодых ученых (Пущино, 2006) — V конференции иммунологов Урала (Оренбург, 2006) — Всероссийской конференции молодых ученых «Иммунитет и аллергия: от эксперимента к клинике» (Пермь, 2006).

Диссертационная работа апробирована и обсуждена на заседании научной проблемной комиссии по аллергологии и иммунологии ИИФ УрО РАН (г. Екатеринбург, 2007).

Публикации. Основные положения диссертации изложены в 13 печатных работах, в том числе 4 публикации (3 статьи, 1 материалы конференции) в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Связь работы с научными программами. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР ИИФ УрО РАН, является частью исследований по теме «Иммунологическая регуляция физиологических функций в норме и при патологических процессах» (номер госрегистрации 01.120.411 946). Выполнение работы поддержано грантами для молодых ученых УрО РАН, Программы Президиума РАН «Молекулярная и клеточная биология» и интеграционного проекта фундаментальных исследований, проводимых в УрО РАН совместно с СО и ДВО РАН «Коррекция стрессорных и травматических нарушений функций иммунной системы в экспериментальной модели проникающего ранения глаза».

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 185 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 3 глав собственных экспериментальных исследований, заключения, выводов. В диссертации 3 рисунка, 39 таблиц. Прилагаемый список литературы включает 313 наименования (204 отечественных и 109 зарубежных).

149 ВЫВОДЫ.

1. Проникающее ранение глаза вызывает ряд изменений иммунной системы, включая развитие аутоиммунного ответа к тканям глаза, усиление выраженности локального клеточноопосредованного и гуморального иммунного ответа на ксеноантиген, фагоцитарной активности моноцитов периферической крови, повышение количества эозинофилов и лимфоцитов в костном мозге, на фоне восстановления дефекта повреждения через рубцевание.

2. Применение стандартной терапии не снижает вероятность развития аутоиммунных реакций, одновременно приводит к угнетению клеточноопосредованного и гуморального иммунного ответа, уменьшению числа эозинофилов и базофилов в костном мозге, активации нейтрофильного и угнетению макрофагального фагоцитоза при сохранении выраженности воспалительной инфильтрации и фиброзных изменений в поврежденной ткани.

3. Применение при проникающем ранении глаза одного профеталя отменяет стимуляцию антителообразования и уменьшает степень выраженности реакции ГЗТпри комплексной терапии сохраняются эффекты, вызванные препаратами стандартной терапии.

4. Профеталь повышает количество лимфоцитов, гранулоцитов, моноцитов и эритроцитов в костном мозге как при монотерапии, так и в комплексе с препаратами стандартной терапии, отменяет супрессивное действие последних на общую клеточность костного мозга и тимуса.

5. Применение одного профеталя и его комбинации со стандартной терапией оказывает разнонаправленное действие на функцию фагоцитов: повышает фагоцитарную активность моноцитов, макрофагов, мастоцитовне влияет на поглотительную способность нейтрофилов и эозинофилов кровиснижает поглотительную активность фагоцитов реагирующего лимфатического узла и перитонеальных гранулоцитов.

6.

Введение

одного профеталя и его комбинации с препаратами стандартной терапии снижает частоту выявления антител в плазме крови травмированных животных к аутоантигенам тканей глаза: ретинальному S-антигену, а-кристаллину и белку роговицы ВСР-54, при максимальном защитном эффекте по отношению к S-антигену — наиболее «увеитогенному» белку глаза. При введении профеталя с препаратами стандартной терапии уровень альфа-фетопротеина в плазме крови ниже, чем в варианте монотерапии, что указывает на необходимость учета их взаимодействия.

7.

Введение

одного профеталя, как и совместно с препаратами стандартной терапии, индуцирует репаративную регенерацию, замедляя раннее формирование грубой рубцовой ткани, ускоряет эпителизацию зоны повреждения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Развитие дисфункции иммунной системы при травме является одной из тяжелых и требующих коррекции форм иммунной патологии, характеризующейся следующими типовыми изменениями: системным выбросом провоспалительных цитокинов (IL-la и р, IL-6, TNF-a и TNF-p, хемокинов и пр.), который индуцирует развитие острофазного ответа, нейроэндокринных изменений (повышение выброса кортикотропин-рилизинг гормона, АКТГ, глюкокортикоидов, адреналина, изменение экспрессии Р-адренорецепторов) и других реакций при участии центральной нервной системыактивацией хемотаксиса и эмиграции неспецифических эффекторных и иммунокомпетентных клеток в зону травматического воспаления, их реакциями, направленными на устранение повреждения и регенерацию тканейразвитием ранней травматической иммунодепресии, связанной со стрессом, токсемией микробного и тканевого происхожденияпереключением цитокинового профиля с Thl на Th2 тип, связанным с повышением уровня глюкокортикоидов и катехоламинов [Черешнев В.А. и др., 2006].

Подобные изменения характерны для механической травмы в целом, при этом выраженность иммунных сдвигов определяется тяжестью и объемом повреждения [Вагнер Е.А. и др., 1990; Черешнев В. А. и др., 1997; Юшков Б. Г. и др., 2001]. При ПРГ, учитывая ограниченный характер повреждения, развитие системных реакций не столь очевидно [Архипова Л.Т., 2000, 2006; Слепова О. С. и др., 2005]. Тем не менее, при этой патологии выявлено развитие не только локальных реакций, но и синдрома вторичной комбинированной иммунной недостаточности [Волик Е.И., 2000; Черешнева М. В., 2000; Черешнева М. В. и др., 2001, 2004; Гаврилова Т. В. и др., 2005]. При травме глаза возможно развитие аутоиммунных реакций [Слепова О.С. и др., 2005; Архипова Л. Т., 2006; Yanoff М. et al., 2004], характеризующихся иммунным воспалением второго нетравмированного глаза. Развитие подобных реакций зависит от ряда факторов: характера травмы, ее тяжести, локализации, степени повреждения тканей глаза и других, т. е. от пускового фактора, от путей миграции антигенов и особенностей состояния иммунной системы организма.

Другим типовым нарушением функций иммунной системы при травме глаза является развитие синдрома вторичной иммунной недостаточности. Значительная выраженность последнего связана со стрессорными реакциями вследствие утраты информационно важного органа [Черешнева М.В. и др., 2006].

Наряду с первичной микрохирургической обработкой ПРГ и проведением стандартной терапии, обязательно включающей антибиотики, нестероидные противовоспалительные препараты и глюкокортикоиды, рекомендуется назначение в ранние сроки иммуномодуляторов, например, полиоксидония, миелопида [Архипова Л.Т., 2000; Волик Е. И., 2000; Черешнева М. В. и др. 2000, 2004, 2006; Гаврилова Т. В., 2006]. В последнее время в клинической практике при заболеваниях, протекающих с аутоиммунным компонентом, положительно зарекомендовал себя отечественный препарат — профеталь [Родионов С.Ю. и др. 1997, 2006; Черешнев В. А. и др., 2003, 2004], действующим компонентом которого является сывороточный белок альфа-фетопротеин (АФП) [Родионов С.Ю. и др., 1997; Черешнев В. А. и др., 2004, Родионов С. Ю., 2005], основная биологическая роль которого состоит в регуляции иммунных реакций при процессах репродукции [Абелев Г. И., 1989; 1994; Родионов С. Ю. и др., 1997; Шмагель К. В., Черешнев В. А., 2002; 2003; Bartha J., Comino-Delgado R., 1999; Feuchtbaum L., Currier R., 2000; Lazarevich N., 2000; Mizejewski G., 2001].

В связи с вышеизложенным, актуальным явилось проведение исследования характера изменений иммунной системы и их коррекции профеталем при экспериментальном проникающем ранении глаза.

В качестве экспериментального подхода выбрана модель локального иммунного ответа, развивающегося при подкожной иммунизации крыс эритроцитами барана. Развитие иммунного ответа при ПРГ оценивали по числу АОК в регионарном и отдаленном лимфатических узлах, селезенкеуровню антител в плазме кровистепени выраженности воспаления при реакции ГЗТизменению фагоцитарной активности клеток регионарного лимфатического узла. Проанализировано изменение фагоцитарной активности клеток периферической крови и брюшной полости.

Полученные данные можно свести к следующим положениям. При проникающем ранении глаза наблюдается: усиление степени выраженности клеточноопосредованного и гуморального иммунного ответа на эритроциты барана в условиях использованной схемы иммунизацииактивация реакции ГЗТ, развитие локального иммунного ответа с преимущественным увеличением числа АОК, повышение клеточности в регионарном лимфатическом узле;

— повышение количества эозинофилов и лимфоцитов в костном мозге;

— увеличение абсолютного числа лимфоидных клеток в регионарном лимфатическом узле;

— слабая активация фагоцитарной активности моноцитов периферической крови;

— восстановление тканевого дефекта через реализацию «аварийного» механизма рубцевания.

На фоне применения стандартной терапии при проникающем ранении глаза отмечается:

— угнетение клеточноопосредованного и гуморального иммунного ответа на эритроциты баранадепрессия реакции ГЗТ, снижение числа антителопродуцентов, клеточности регионарного (правого подколенного) лимфатического узла, числа ЯСК тимуса, костного мозга, но не селезенки;

— уменьшение числа эозинофилов и базофилов в костном мозге;

— снижение количества лимфоидных клеток в регионарном лимфатическом узле относительно травмы, макрофагов относительно контроля и ПРГ без терапии, относительных и абсолютных интегральных показателей суммарной фагоцитарной активности;

— развитие нейтрофильного лейкоцитоза, моноцитопении, лимфопении, активация нейтрофильного фагоцитоза, депрессия фагоцитарной активности моноцитов, и эозинофилов;

— депрессия числа и фагоцитарной активности мононуклеарных фагоцитов, фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов относительно контроля, тучных клеток относительно травмы;

— формирование рубца с преобладанием соединительнотканного компонента, включающего коллагеновые волокна и фибробласты с признаками функциональной активности, обширную васкуляризацию, сохранение признаков экссудативного воспаления в рубцовой ткани.

На фоне введения профеталя в составе комплексной терапии выявляется:

— отсутствие изменений степени выраженности иммунодепрессивного действия стандартной терапии на гуморальный иммунный ответ, клеточность регионарного лимфатического узла и селезенки, депрессия реакции ГЗТ, отмена супрессивного действия стандартной терапии на клеточность тимуса и костного мозга;

— отмена супрессивного действия стандартной терапии на число эозинофилов, моноцитов в костном мозге, увеличение суммарного числа нейтрофильных гранулоцитов;

— снижение количества лимфоидных клеток регионарного лимфатического узла в сравнении с травмой и фагоцитирующих клеток в сравнении с контролем и травмой без лечения, депрессия фагоцитарной активности макрофагов относительно контроля, снижение фагоцитарного числа относительно травмы;

— моноцитоз, увеличение фагоцитарной активности моноцитов, повышение их вклада в суммарный фагоцитоз в периферической крови, отмена вызванных препаратами стандартной терапии снижения абсолютного количества лимфоцитов, повышения уровня палочкоядерных нейтрофилов и показателей нейтрофильного фагоцитоза до уровня контроля;

— уменьшение количества лимфоцитов в брюшной полости, активация фагоцитарной активности мононуклеарных фагоцитов, тучных клеток, отмена супрессивного действия стандартной терапии на фагоцитоз мононуклеаров, более выраженное супрессивное действие на фагоцитарную активность нейтрофильных гранулоцитов, чем при монотерапии профеталем;

— снижение угрозы развития аутосенсибилизации организма;

— индуцирование репаративной регенерации, замедление раннего формирования грубой рубцовой ткани, ускорение эпителизации зоны повреждения.

На фоне введения профеталя в варианте монотерапии отмечается:

— угнетение антителообразования и степени выраженности реакции ГЗТ, отмена увеличения клеточности регионарного лимфатического узла, повышение клеточности костного мозга при отсутствии изменений числа ЯСК в селезенке и тимусе по сравнению с ПРГ;

— увеличение суммарного числа нейтрофильных клеток за счет промиелоцитов и нейтрофильных метамиелоцитов, повышение уровня эозинофилов, моноцитов, лимфоцитов костного мозга;

— уменьшение количества лимфоидных клеток в регионарном лимфатическом узле относительно травмы, а также фагоцитирующих клеток относительно контроля и ПРГ, депрессия фагоцитарной активности;

— развитие моноцитоза, активация фагоцитарной активности моноцитов (процент фагоцитоза), повышение их вклада в суммарный фагоцитоз относительно контроля, снижение относительных показателей фагоцитарной активности нейтрофилов относительно травмы в периферической крови;

— снижение количества лимфоцитов, показателей фагоцитарной активности перитонеальных гранулоцитов, повышение поглотительной способности мононуклеарных фагоцитов, тучных клеток брюшной полости;

— снижение угрозы развития аутосенсибилизации организма;

— индуцирование репаративной регенерации, замедление раннего формирования грубой рубцовой ткани, ускорение эпителизации зоны повреждения.

Обсуждая полученные результаты в целом, важно отметить, что в поздний травматический период (14-е сутки) при экспериментальном проникающем ранении глаза отсутствуют изменения гемограммы, наблюдается повышение числа эозинофильных гранулоцитов и лимфоидных клеток в костном мозге, относительных показателей фагоцитарной активности моноцитов периферической крови. Подобные изменения в системе костный мозг — кровь обусловлены развитием общего адаптационного синдрома, а также остаточным влиянием стрессорных факторов. При использованной схеме иммунизации развитие антителообразования, в основном, наблюдается в регионарном лимфатическом узле. Повышение клеточности регионарного узла наблюдается, в основном, за счет увеличения числа лимфоидных клеток. Количество макрофагов, их фагоцитарная активность в лимфатическом узле, брюшной полости приближается к показателям контроля. При гистологическом исследовании выявляется формирование рубца с преобладанием соединительнотканного компонента, включающего коллагеновые волокна и фибробласты с признаками функциональной активности, обширную васкуляризацию, а также сохранение признаков экссудативного воспаления в рубцовой ткани.

У животных, получавших стандартную терапию, изменение иммунологических показателей обусловлено действием глюкокортикоидов. Так, выявляются классические гематологические изменения: лимфопения, моноцитопения, нейтрофильный лейкоцитоз [Горизонтов П.Д. и др., 1983; Воронина Н. П., 1989; Юшков Б. Г. и др., 1999; Selye Н., 1937; McEwen В. et al., 1997], а также выраженная активации нейтрофильного фагоцитоза, угнетение фагоцитарной активности моноцитов, увеличение удельного вклада нейтрофилов и снижение вклада моноцитов и эозинофилов в суммарную фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови. Подобные изменения выявляются в костном мозге: снижение количества эозинофильных и базофильных гранулоцитов, лимфоидных клеток. Иммунодепрессивный эффект стандартной терапии в регионарном лимфатическом узле характеризуется угнетением и гуморального, и клеточноопосредованного иммунитета, снижением клеточности органа преимущественно за счет макрофагов. Выраженное влияние на макрофагальные клетки проявилось снижением относительных и абсолютных показателей суммарной фагоцитарной активности клеток регионарного лимфатического узла. Изменения в брюшной полости характеризуются снижением абсолютного числа и фагоцитарной активности перитонеальных мононуклеарных фагоцитов, удельного вклада этого типа клеток и нейтрофильных гранулоцитов в суммарную фагоцитарную активность. Противоположная направленность действия стандартной терапии, в состав которой входит глюкокортикоид, на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови и брюшной полости объясняется изменением процессов созревания фагоцитирующих клеток в костном мозге, выхода в кровеносное русло и эмиграции в ткани [Spencer R., Miller А., 1991; McEwen В., Biron С., 1997]. При гистологическом исследовании выявлено формирование рубца с преобладанием соединительнотканного компонента, включающего коллагеновые волокна и фибробласты с признаками функциональной активности, обширную васкуляризацию, сохранение признаков экссудативного воспаления в рубцовой ткани.

При введении профеталя травмированным животным в периферической крови определяется повышение количества моноцитов, активация моноцитарного фагоцитоза, увеличение удельного вклада моноцитов в суммарную фагоцитарную активность. Анализируя показатели миелограммы, обращает на себя внимание повышение клеток моноцитарно-макрофагального ряда в костном мозге. Общее повышение клеточности костного мозга при введении профеталя в монотерапии и совместно с препаратами стандартной терапии обусловлено увеличением количества эозинофильных гранулоцитов, лимфоидных клеток. Механизм увеличения количества лимфоидных клеток в костном мозге у животных с введением одного профеталя характеризуется повышением числа лимфобластов, лимфоцитов и плазматических клеток, в то время как у крыс с ПРГ без лечения наблюдается увеличение только числа лимфоцитов. Последнее возможно связано с повышенной миграцией Т-лимфоцитов в костный мозг, описанной для многих экстремальных состояний [Зимин Ю.И., 1979, 1980, 1983; Гольдберг Е. Д. и др., 1991; Дыгай A.M. и др., 1989,1992; Хлусов И. А. и др., 1993].

Полученные в настоящей работе результаты указывают на выраженные отличия действия профеталя на фагоцитарную активность моноцитов периферической крови и их потомков — перитонеальных мононуклеарных фагоцитов и фагоцитирующих клеток регионарного лимфатического узла. Действие профеталя в регионарном лимфатическом узле проявляется угнетением антителообразования и степени выраженности реакции ГЗТ, снижением клеточности регионарного лимфатического узла. Снижение клеточности регионарного лимфатического узла наблюдается за счет макрофагов, именно поэтому снижение фагоцитоза происходит только за счет абсолютных показателей. Такое избирательное действие профеталя связано с его способностью снижать макрофагальное звено в количественном эквиваленте в зоне максимальной иммунологической атаки [Olinescu A. et al., 1977]. В работах С. Lu [Lu С. et al. 1984], изучающего влияние АФП на фагоцитарную активность макрофагов в зоне иммунного конфликта мышей CBA/J, выявлено прямое подавление активности макрофагов через действие на мембрану клетки. Именно этим и объясняется способность АФП подавлять экспрессию МНС II на мембране фагоцитирующих клеток. Это является одним из главных механизмов действия профеталя, обеспечивающего иммуносупрессию в зоне воспаления.

Тучные клетки являются одними из основных участников воспаления. При этом перитонеальные тучные клетки, являясь субпопуляцией соединительнотканных тучных клеток [Гущин И.С., 1998; Roitt I., Brostoff J.,.

Male D., 1996], представляют собой удобный объект для исследования. В работах ряда исследователей показана роль тучных клеток при воспалении [Malaviya R., Ross Е., 1994; Cone R., Wang Y., 1998]. Активность в очаге связана не только с выбросом содержимого гранул, синтезом медиаторов воспаления и провоспалительных цитокинов, но и со способностью к фагоцитозу. Установлено, что тучные клетки не только способны к продукции активных форм кислорода, но и обладают прямой микробицидностью по данным микробиологических исследований с определением числа выживших микроорганизмов по количеству образуемых ими колоний [Malaviya R., Ross Е., 1994]. В брюшной полости действие профеталя характеризуется снижением количества перитонеальных лимфоцитов, фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов, а так же повышением относительных и абсолютных показателей фагоцитарной активности тучных клеток. По мнению Aussel С. [Aussel С, Fehlmann М., 1987], стимулирующее действие АФП на фагоцитарную активность макрофагов невоспалительной ткани связано со способностью АФП повышать уровень ПГЕг. Следствием такой активности является способность белка супрессировать синтез TNF-a и IL-ip [Wang W., Alpert E., 1995]. He исключено, что разнонаправленное действие профеталя связано с перераспределением миграции клеток моноцитарного ряда между регионарным лимфатическим узлом и брюшной полостью, т. е. воспалительной и невоспалительной тканью. Эта точка зрения основывается на важном свойстве АФП — предупреждение иммунного конфликта при беременности, что достигается снижением иммунного ответа в точке максимальной агрессии антигенов. При гистологическом исследовании выявляется снижение формирования грубой рубцовой ткани с эпителизацией зоны повреждения, увеличение митотически делящихся клеток в эпителии, снижение интенсивности процессов фибриллообразования, стимуляция пролиферативной активности клеток многослойного плоского эпителия.

При совместном введении профеталя и препаратов стандартной терапии определяется отмена супрессивного действия последней на клеточность тимуса и костного мозга и отсутствие изменений степени выраженности иммунодепрессивного действия стандартной терапии на гуморальный иммунный ответ, клеточность регионарного лимфатического узла и селезенки. Это соответствовало эффектам действия одного профеталя, но степень выраженности была меньше.

Полученные данные свидетельствуют, что профеталь при экспериментальном ПРГ обеспечивает возможность снижения угрозы развития аутосенсибилизации. Существенным представляется факт максимального защитного эффекта в отношении формирования иммунного ответа к S-антигену, — наиболее «увеитогенному» белку глаза. Подобный механизм защиты альфа-фетопротеином эмбриона действует в системе «мать-плод» [Абелев Г. И., 1994; Шмагель К. В. и др., 2003; Черешнев В. А. и др., 2004].

Завершая обсуждение полученных данных по исследованию профеталя, необходимо еще раз обратить внимание на то, что основной особенностью действия АФП в организме является иммуносупрессорная активность [Шмагель К.В., Черешнев В. А., 2002]. В экспериментальных и клинических исследованиях описана способность данного белка изменять направленность иммунного ответа при ряде аутоиммунных заболеваний [Черешнев В.А., Родионов С. Ю., 2004; Родионов С. Ю., 2006; Matsuura Е., Kang Y., Kitakawa Н. et al., 1999].

В основе действия профеталя лежит способность к супрессии иммунного ответа в зоне максимального воспаления, а также направленное воздействие на поврежденное звено иммунитета, приводящее измененные иммунологические параметры к норме. Полученные данные по исследованию иммуномодулирующих эффектов профеталя, являющегося эндогенным иммунорегуляторным белком, подтверждают, что профеталь реализует свои эффекты по природным механизмам, осуществляет мягкую депрессию иммунного ответа в зоне воспаления, оказывает влияние на течение процессов регенерации, формируя в зоне повреждения «мягкий» рубец через процессы репарации.

Механизм действия профеталя в патогенетической терапии ПРГ представлен на рис. Профеталь включается в коррекцию травматических изменений, снижая формирование грубой рубцовой ткани, стимулируя пролиферацию клеток многослойного плоского эпителия и за счет этого ускоряет эпителизацию зоны повреждения. Все это, в конечном итоге, приводит к индукции репаративной регенерации, замедлению раннего формирования грубой рубцовой ткани, ускорению эпителизации зоны повреждения. Кроме того, у животных, получавших профеталь, понижается образование антител к аутоантигенам тканей глаза, что важно для снижения угрозы развития аутоиммунного повреждения. Профеталь существенно нивелирует поздние стрессорные изменения в иммунной системе, отменяет стимуляцию антителообразования и уменьшает степень выраженности реакции ГЗТ в поздний травматический период, снижает фагоцитарную активность мононуклеарных фагоцитов в регионарном, по отношению к месту иммунизации, лимфатическом узле. Одновременно повышается фагоцитарная активность моноцитов периферической крови и перитонеальных макрофагов. В костном мозге при введении профеталя отмечается повышение числа лимфобластов, лимфоцитов, плазматических клеток, стимуляция в этом органе гранулоцитои моноцитопоэза, эритропоэза.

Проведенные исследования существенно расширяют и дополняют представления о роли иммунной системы в патогенезе проникающего ранения глаза и механизме иммуномодулирующего действия профеталя в условиях индуцированного изменения функций иммунной системы при данном виде патологии. Результаты данной работы указывают на высокую иммуномодулирующую активность профеталя, демонстрируют перспективность дальнейшего изучения возможности использования профеталя для коррекции иммунных нарушений при аутоиммунных заболеваниях глаза.

Рис. Механизм действия профеталя в патогенетической терапии проникающего ранения глаза.