Актуальность проблемы. В настоящее время в России сохраняется напряженная эпидемическая обстановка по туберкулезу (Ловкова М.Я. и др., 2001; Перельман М. И., Шилова М. В., 2002; Шилова М. В., 2005). Остаются на крайне низком уровне все показатели эффективности лечения впервые выявленных больных туберкулезом легких: прекращение бактериовыделения составило 73,5%- закрытие полости распада — 62,4%- летальность — 4,5% (Шилова М.В., 2005). Очевидные причины терапевтических неудач обусловлены неблагоприятным социальным и экологическим фоном, снижением способности организма больных к репаративным процессам, распространенностью устойчивости микобактерий к химиопрепаратам (Перельман М.И., Шилова М. В., 2002; Левашев Ю. Н., 2003; Онищенко Г. Г., 2003; Репин Ю. М., 2003; Вишневский Б. И., 2003). В клинико-морфологическом плане это сказывается в появлении прогрессирующих форм туберкулеза легких (до 72,3%) с острым началом и массивным бактериовыделением (Соколова Г. Б. и др., 2000; Иванова Л. А. и др., 2001; Мишин В. Ю., 2001; Ариэль Б. М., 2003; Iseman М., 1998; Davey S., 2001). На фоне вынужденной полихимиотерапии с привлечением противотуберкулезных препаратов резервного ряда снижается функциональная активность систем защиты макроорганизма, регистрируются побочные реакции со стороны различных органов и систем, что обусловливает затяжное течение и хронизацию воспалительных процессов (Павлова М.В., 2000; Елькин A.B., 2000; Мишин В. Ю. и др., 2004). Более того, полирезистентность микобактерий и дефекты иммунной системы выделены в качестве ведущих факторов неэффективности лечения больных туберкулезом (Иванова Л.А., 1995; Аленова А. Х. и др., 2002; Жук H.A., 2003). Поэтому активно разрабатываются и применяются различные технологии совершенствования терапии туберкулеза.
К настоящему времени во фтизиатрии накоплен определенный опыт использования в комплексе терапевтических мероприятий лекарственных растений, обладающих как этиотропным действием, так и способствующих купированию патофизиологических нарушений, вызванных туберкулезным процессом и длительной химиотерапией. Согласно экспериментально-клиническим данным, лекарственные растения и препараты на их основе, проявляющие туберкулостатическую активность, в сочетании с базовой химиотерапией повышают эффективность лечения на 8 — 20%, снижают формирование лекарственной устойчивости возбудителя, усиливают бактерио-статическую активность крови, сокращают бактериовыделение и сроки закрытия полостей распада в легких (Макаренко А.Б., 1989; Негматов М. М., 1991; Руденко И. В., Тронникова И. В., 1997; Джумаев Б. Д. и др., 1998; Шку-рупий В.А. и др., 2002; Виноградова Т. И. и др., 2003). В этом аспекте широкие перспективы имеет цетрария исландская или исландский мох (Cetraria islandica (L.) Ach.). Цетрария исландская издавна использовалась народами России и Европы, ас 1671 г. — в официальной медицине для лечения многих заболеваний, в том числе туберкулеза. Это многолетний, листовидно-кустистый лишайник, который произрастает в странах Европы, Азии, Америки и Австралии. Лекарственным сырьем является слоевище, где в течение всего вегетационного периода накапливаются биологически активные вещества, в том числе, полисахариды, лишайниковые кислоты (Горшкова Р.П. и др., 1997). Показано, что полисахариды цетрарии исландской (лихенин, изо-лихенин, галактоманнан) обладают иммуномодулирующими, противовоспалительными, противоопухолевыми, гепатопротекторными свойствами (Га-лицкий JI.A. и др., 1997; Ingolfsdottir К. et al., 1997; Ogmundsdottir Н.М. et al., 1998). Лишайниковые кислоты (усниновая, лихестериновая, протолихестери-новая) характеризуются противомикробной активностью в отношении стафилококков, стрептококков, кислотоустойчивых микроорганизмов, грибов, простейших и вирусов (Ahmadjian V., Hale М. Е., 1973). Однако, в современной фармацевтической индустрии при наработке широкого ассортимента БАД и фитопрепаратов сложного состава, используются только полисаха-ридные комплексы цетрарии.
В рамках отраслевых программ «Конструирование и изучение новых лекарственных соединений на основе органического синтеза или лекарственных трав» и «Фтизиопульмонология» специалистами Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии разработана технология получения сухого экстракта (ислацет) из слоевищ цетрарии исландской, обеспечивающая максимальное извлечение, а также длительное сохранение действующих веществ (полисахаридов, лишайниковых кислот). На основании фармакологических исследований установлены низкая токсичность, противовоспалительный, антигипоксический, гепатои гастропротекторный эффекты сухого экстракта (Сафонова М.Ю., 2002).
Цель исследования: на основе экспериментальных исследований определить возможность повышения эффективности этиотропной терапии генерализованного туберкулеза за счет сухого экстракта цетрарии исландской.
Задачи исследования:
1. Изучить влияние ислацета на ростовые свойства микобактерий с различной характеристикой лекарственной чувствительности.
2. Оценить протективное и лечебное действие ислацета в условиях монотерапии экспериментального генерализованного туберкулеза мышей в сравнении с противотуберкулезными препаратами (изониазид, этамбутол, офлок-сацин).
3. Изучить эффективность ислацета в составе базовой химиотерапии на моделях генерализованного лекарственно-чувствительного и устойчивого туберкулеза у животных.
4. Исследовать особенности состояния системы иммунитета у инфицированных микобактериями туберкулеза животных, в первую очередь, моноци-тарно-макрофагального звена, в условиях применения ислацета.
Научная новизна. Впервые в эксперименте установлено прямое ингиби-рующее действие ислацета на ростовые свойства лекарственно-чувствительных и устойчивых микобактерий. В условиях монотерапии экспериментального туберкулеза определена протективная и лечебная активность сухого экстракта цетрарии исландской в сравнении с противотуберкулезными препаратами (изониазида, этамбутола и офлоксацина). Изучены ан-тимикобактериальные и иммунотропные механизмы действия ислацета, обеспечивающие эффективность комплексной терапии туберкулеза.
Практическая значимость работы. Полученные в ходе исследования данные о противотуберкулезной активности ислацета и эффективности на фоне химиотерапии генерализованного туберкулеза после официального разрешения для клинического применения могут быть использованы для выбора дифференцированных режимов его назначения во фтизиатрии.
Положения, выносимые на защиту:
1. Оригинальный сухой экстракт из слоевищ цетрарии исландской (исл-ацет) подавляет ростовые свойства чувствительных и устойчивых культур микобактерий. Протективное и терапевтическое действие ислацета в условиях монотерапии экспериментальной туберкулезной инфекции сопоставимо с этамбутолом и офлоксацином. Выраженное противотуберкулезное действие in vitro и in vivo характеризует сухой экстракт из слоевищ цетрарии исландской как активное этиотропное вещество.
2. Применение ислацета в комплексе с противотуберкулезными препаратами при генерализованном туберкулезе у животных, инфицированных лекарственно-чувствительными и устойчивыми штаммами микобактерий, обеспечивает выраженную положительную динамику: уменьшение эндогенной интоксикации, сокращение бактериовыделения из селезенки, ускорение регрессии воспалительных изменений в легочной ткани.
3. Лечебное действие сухого экстракта из слоевищ цетрарии исландской при монотерапии экспериментального генерализованного туберкулеза воспроизводится на фоне достоверного снижения высеваемости МБТ из селезенки, активации поглотительной и переваривающей способности перитоне-альных макрофагов. Высокая обратная корреляционная связь между этими показателями свидетельствует о наличии у ислацета иммунотропного действия.
4. Иммунотропная направленность действия сухого экстракта из слоевищ цетрарии исландской вносит существенный вклад в улучшение результатов полихимйотерапии экспериментального туберкулеза за счет повышения пролиферации спленоцитов и продукции ими ИЛ-2, стимуляции фагоцитоза и генерации супероксиданиона перитонеальными макрофагами.
Реализация результатов работы. На основании проведенных исследований выдан патент № 2 203 081 ГШ «Препарат ислацет для профилактики и лечения туберкулеза и способ его получения».
Результаты по изучению эффективности ислацета в составе базовой химиотерапии туберкулеза включены в лабораторный регламент и отчет по его доклиническому изучению для получения разрешения на проведение клинических исследований во фтизиатрии.
Основные положения диссертации используются в научно-исследовательской работе на кафедрах фармакогнозии и фармацевтической химии Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии, в преподавании фтизиатрии, фармакологии и клинической фармакологии в Военно-Медицинской академии, Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования и Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И. И. Мечникова.
Апробация материалов диссертации. Основные положения работы обсуждены на конференции «Тибетская медицина Бурятии на рубеже XXI века: состояние и перспективы исследований» (Улан-Удэ, 1999) — на VII международной специализированной выставке «Аптека — 2000» (Москва, 2000) — на Всероссийской научно-практической конференции «Туберкулез. Проблемы диагностики, лечения и профилактики» (Санкт-Петербург, 2003) — на 10, 11 и 14 национальных конгрессах по болезням органов дыхания (Санкт-Петербург, 2000; Москва, 2001, 2004).
По результатам исследования опубликовано 12 работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 148 страницах текста и состоит из введения, обзора литературы, четырех глав с изложением использованных методов и результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, указателя литературы, включающего 330 источник, в том числе 247 отечественных и 83 иностранных. Работа иллюстрирована 28 таблицами и 6 рисунками.
выводы.
1. Сухой экстракт из слоевищ цетрарии исландской (ислацет) in vitro обладает прямым ингибирующим действием на жизнеспособность лекарственно-чувствительных культур МВТ и клинических изолятов с множественной лекарственной устойчивостью, более выраженным в отношении чувствительных штаммов.
2. Протективное действие ислацета в условиях ранней монотерапии мышей, зараженных М. tuberculosis Erdman, не уступает по выраженности изониазиду и этамбутолу, лечебный эффект вещества сопоставим с этамбутолом и офлоксацином. На фоне развившихся макроскопических изменений в легких мышей, инфицированных М. bovis bovinus 8, ислацет в виде монотерапии проявляет протективную и терапевтическую активность на уровне этамбутола и превосходящую офлоксацин.
3.
Введение
ислацета в комплексную противотуберкулезную терапию мышей и кроликов, зараженных М. bovis bovinus 8, способствует повышению ее эффективности. Отмечается снижение тяжести инфекции, обсемененности МВТ селезенки, исчезновение альтеративного компонента воспаления с рассасыванием некротических изменений, а также стимуляция местного иммунитета легких.
4. Использование ислацета в составе химиотерапии экспериментального лекарственно-устойчивого туберкулеза повышает результаты лечения за счет снижения показателей пораженности органов, повышения клиренса селезенки от МВТ, а также увеличения интенсивности инволюции воспалительных изменений и объема функционирующей воздушной легочной ткани.
5. Применение ислацета у животных с экспериментальным туберкулезом восстанавливает пролиферативную активность клеток селезенки и продукцию ими ИЛ-2, угнетенные в ходе развития туберкулезной инфекции. Ислацет обладает также существенным активирующим влиянием на моноцитарно-макрофагальное звено иммунитета: стойко усиливает поглотительную и переваривающую способность пМф, стимулирует генерацию супероксидных радикалов.
