Помощь в учёбе, очень быстро...
Работаем вместе до победы

Создание бактериального продуцента антигенной детерминанты панкреатической холистеролэстеразы человека и разработка на его основе иммуноферментного анализа для определения аутоантител

Диссертация: Создание бактериального продуцента антигенной детерминанты панкреатической холистеролэстеразы человека и разработка на его основе иммуноферментного анализа для определения аутоантител
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Начиная с середины текущего столетия в связи с внедрением достижений биологической науки в практику здравоохранения произошли существенные изменения в структуре заболеваний человека. Изменился спектр инфекционных заболеваний за счет широкого применения антибиотиков и вакцинации населения против наиболее опасных микроорганизмов, возросла доля внутренних болезней, обусловленных нарушением… Читать ещё >

Содержание

  • Список принятых сокращений
  • Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Особенности структурной организации молекулы пХЭ- ее биологические и иммунологические свойства
    • 1. 2. Клонирование и определение нуклеотидной последовательности кДНК пХЭ- организация гена пХЭ
    • 1. 3. Роль пХЭ в нормальных физиологических условиях и в патологии
  • Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
  • Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ
    • 3. 1. Клонирование, определение первичной структуры и экспрессия в
  • Е. coli иммуногенного белка — С-терминального участка пХЭ человека
    • 3. 2. Локализация линейной антигенной детерминанты пХЭ в пролин-богатых повторах
    • 3. 3. Разработка ИФА для определения антител к пХЭ в сыворотке человека и животных
    • 3. 4. Выявление антител к пХЭ человека у больных с кистами головки поджелудочной железы

Создание бактериального продуцента антигенной детерминанты панкреатической холистеролэстеразы человека и разработка на его основе иммуноферментного анализа для определения аутоантител (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Начиная с середины текущего столетия в связи с внедрением достижений биологической науки в практику здравоохранения произошли существенные изменения в структуре заболеваний человека. Изменился спектр инфекционных заболеваний за счет широкого применения антибиотиков и вакцинации населения против наиболее опасных микроорганизмов, возросла доля внутренних болезней, обусловленных нарушением нормальных физиологических процессов, протекающих в человеческом организме. Согласно данным, опубликованным в ежегодном докладе Всемирной Организации Здравоохранения, число онкологических, сердечно-сосудистых заболеваний и ряда других хронических болезней, ежегодно уносящих жизни 24 миллионов людей на планете, возрастет и достигнет в следующем тысячелетии сотен миллионов. Среди них отдельно следует выделить патологические процессы, связанные с нарушением обмена веществ (эндокринные заболевания) и онкологические заболевания. Так, ожидается, что в течение ближайших 25 лет количество заболеваний раком в большинстве стран мира удвоится. Диагностика внутренних болезней, особенно превентивная диагностика, весьма затруднительна, так как клиническая картина болезни наблюдается при уже значительных поражениях органов и тканей.

Одной из основных задач клинической биохимии является поиск новых гуморальных маркеров для дифференциальной диагностики различных заболеваний внутренних органов и прогнозирования их осложнений и тяжести течения. Такого рода маркерами могут служить антитела, вырабатываемые к наиболее иммуногенным белкам органов и тканей. Эти же белки могут играть существенную роль в этиопатогенезе патологического процесса.

Представляемое исследование является частью общей научной работы, проводимой в лаборатории молекулярной эндокринологии Эндокринологического Научного Центра РАМН с использованием ткани инсулиномы человека после хирургической резекции опухоли. Основным направлением этой работы является выявление наиболее иммуногенных белков, экспрессируемых клетками инсулиномы человека, создание их бактериальных продуцентов и разработка методов тестирования аутоантител при использовании рекомбинантных белков в качестве антигена.

В качестве объекта исследования были выбраны клетки инсулиномы человека, как возможный продуцент маркеров сахарного диабета. Можно предположить, что аутоантитела образуются к наиболее иммуногенным белкам. Таким образом, выявление этих белков могло бы привести к открытию новых гуморальных маркеров инсулин зависимого сахарного диабета или других заболеваний.

С другой стороны, так как инсулинома — это опухоль, в ее клетках экспрессируются белки, характерные для опухолевых тканей организма. Как правило, опухолевые белки являются сильными антигенами. Учитывая этот факт можно было предполагать, что в ходе данной работы мог бы быть выявлен рекомбинантный клон, экспрессирующий опухолевый антиген. Результаты такого рода исследования могли бы быть использованы для направленной иммунотерапии раковых клеток.

В рамках этого общего направления исследований была создана библиотека кДНК из инсулиномы человека в экспрессирующем плазмидном векторе риЕХ1, из которой методом нуклеотидного скрининга извлечен рекомбинантный клон, кодирующий полноразмерный белок препроинсулина в составе гибридного белка с р-галактозидазой [6].

Целью представляемой диссертационной работы было создание бактериального продуцента антигенной детерминанты панкреатической холестеролэстеразы человека и разработка на его основе методов тестирования антител с использованием существующей клонотеки кДНК из инсулиномы человека.

Конкретными задачами исследования являлись:

• получение иммунологически активной антисыворотки морской свинки к суммарным белкам инсулиномы человека, содержащей антитела к панкреатической холестеролэстеразе;

• проведение с помощью последней иммуноскрининга клонотеки кДНК из инсулиномы человека в экспрессирующем плазмидном векторе рЦЕХ! и выявление иммунопозитивных рекомбинантных клоновидентификация иммунопозитивных белковустановление локализации антигенной детерминанты в структуре иммунопозитивного фрагмента панкреатической холестеролэстеразы, используя методы молекулярного клонирования, секвенирования и иммуноферментного анализав выделение гибридных белков, вырабатываемых созданными генно-инженерными продуцентами;

• использование рекомбинантных белков в качестве антигена в разработке лабораторного варианта твердофазного иммуноферментного метода выявления антител к панкреатической холестеролэстеразе в сыворотке человека и морской свинки;

• проведение скрининга больных с различными нарушениями функции поджелудочной железы с целью выявления у них аутоантител к панкреатической холестеролэстеразе человека и установления корреляции с определенными видами патологии.

Представляемое научное исследование проводилось на базе лаборатории молекулярной эндокринологии Эндокринологического Научного Центра РАМН с использованием созданной ранее клонотеки кДНК из инсулиномы человека [6] и выделенных параллельно из того же биологического материала суммарных белков инсулиномы.

Первая часть диссертационной работы посвящена выявлению и идентификации иммунопозитивных рекомбинантных клонов. Предложена методика получения антисыворотки для иммуноскрининга клонотекииммунизация морских свинок суммарным раствором белков инсулиномы. Оригинальность этого подхода состоит в том, что для создания клонотеки кДНК и получения антисыворотки был использован один и тот же биологический материал. Единый образец ткани инсулиномы человека был подвергнут биохимической обработке, в результате которой был выделен пул мРНК, послуживший основой для создания клонотеки кДНК, и суммарные белки инсулиномы, в дальнейшем использованные для иммунизации морских свинок. Этот подход позволил получить антисыворотку, специфичную к сильному иммуногенному белку панкреатической холестеролэстеразе. Иммунопозитивный рекомбинантный клон, содержащий кДНК вставку 3' концевого фрагмента панкреатической холестеролэстеразы, был выявлен традиционным методом иммуноскрининга. Идентификацию вставки кДНК проводили с помощью рестрикционного анализа и частичного определения нуклеотидной последовательности методом Сенгера. Аналогичный подход может быть использован для обнаружения антигенов любых других органов и тканей.

Вторая часть работы заключалась в изучении природы иммуногенности панкреатической холестеролэстеразы человека, выявлении локализации антигенной детерминанты в структуре молекулы белка. Эта задача решена на генетическом уровне путем клонирования субфрагментов фермента, создания их бактериальных продуцентов и тестирования иммунологических свойств экспрессируемых гибридных белков. В результате этого исследования установлена локализация антигенной детерминанты панкреатической холестеролэстеразы человека в пролин-богатых повторах фермента. Таким образом, экспериментально показана неизвестная ранее функция уникальной белковой структуры — пролин-богатых повторов панкреатической холестеролэстеразы человека.

Третья часть иллюстрирует практическое применение созданных бактериальных продуцентов в качестве источников антигенов для иммуноферментного тестирования наличия антител к панкреатической холестеролэстеразе в сыворотках человека и морской свинки. Ценность разработанного метода представлена результатами клинической апробации, которая показала возможность оценки наличия антител к панкреатической холестеролэстеразе человека для дифференциальной диагностики кист поджелудочной железы. ^ эК.

Автор выражает огромную благодарность Юрию Александровичу Панкову за мудрое научное руководство и предоставленную возможность выполнить настоящее исследование. Искренняя признательность Чехрановой М. К., Шуваловой Е. Р., Яцышиной С. Б за непосредственную помощь в выполнении поставленных задач, а также сотрудникам Центрального научно-исследовательского института гастроэнтерологии Садокову В. М. и Винокуровой A.B. за предоставление клинического материала и помощь в интерпретации полученных данных с точки зрения практикующих врачей. Вклад соавторов отражен в совместных публикациях.

ВЫВОДЫ.

1. Иммуноскринингом клонотеки кДНК из инсулиномы человека в экспрессирующем плазмидном векторе pUEXl антисывороткой к суммарным белкам инсулиномы отобран рекомбинантный клон, синтезирующий белок, идентичный С-концевому фрагменту панкреатической холестеролэстеразы человека, содержащий антигенную детерминанту.

2. Получена иммунологически активная антисыворотка морской свинки к суммарным белкам инсулиномы человека, содержащая антитела к панкреатической холестеролэстеразе.

3. С помощью клонирования фрагментов кДНК панкреатической холестеролэстеразы человека в экспрессирующий плазмидный вектор pUEX, экспрессии гибридных белков в клетках Е. Coli и анализа их иммуноферментными методами установлена локализация антигенной детерминанты панкреатической холестеролэстеразы в области пролин-богатых повторов.

4. Выделенные рекомбинантные белки, содержащие антигенную детерминанту панкреатической холестеролэстеразы человека, использованы в качестве антигена для разработки твердофазного иммуноферментного анализа наличия антител к панкреатической холестеролэстеразе.

5. Разработан лабораторный вариант иммуноферментного метода, позволяющего выявлять антитела к панкреатической холестеролэстеразе человека в сыворотке крови человека и морской свинки.

6. При проведении клинической апробации разработанного иммуноферментного метода определения антител к панкреатической холестеролэстеразе человека на сыворотках крови больных с нарушением функций поджелудочной железы установлено наличие искомых антител у пациентов с кистами головки поджелудочной железы.

СПИСОК РАБОТ, опубликованных по теме диссертации.

1. Y.A. Pankov, М.К. Chekhranova, E.R. Schuvalova, A.M. Kutin, E.N. Ilyina, A.B. Valentsova. Utilization of a human insulinoma cDNA library to identify novel proteins of islet cells. Abst. P-17.04.036, p.541 in «Ninth International Congress of Endocrinology» abstracts, France, Nice, 1992.

2. М. К. Чехранова, E.H. Ильина, E.P. Шувалова, Д. Ю .Панков, Ю. А. Панков. Клонирование, определение первичной структуры и экспрессия в Escherichia coli С-концевого участка человеческой холестерол-эстеразы/липазы, содержащего антигенную детерминанту белка. Молекулярная биология, 1994, т. 28, стр. 464−467.

3. М. К. Чехранова, Е. Р. Шувалова, Е. Н. Ильина, Д. Ю. Панков, С. Б. Дябирова, Ю. А. Панков. Исследование структурных генов, экспрессирующихся в инсулиноме человека. Вестник РАМН, 1994, т. 12, стр. 17−19.

4. Y.A. Pankov, М.К. Chekhranova, E.N. Il’ina, E.R. Schuvalova, S.B. Diybirova, D.Yu. Pankov. Proline-rich repeats are the antigenic determinants of human carboxylic ester hydrolase/lipase. Abst. P. 49 in «Third International Symposium on Bioorganic Chemistry» abstracts, Dagomys, 1995.

5. Y.A. Pankov, M.K. Chekhranova, E.N. Il’ina, S.B. Diybirova, E.R. Schuvalova, V.N. Goncharova, V.A. Gorelysheva, O.M. Smirnova. Antibodies to human pancreatic cholesterol esterase as markers of late diabetic complications. P3−866 Reproduction Poster Presentations of 10th International Congress of Endocrinology, San Francisco, USA, 1996.

6. M.K. Чехранова, E.H. Ильина, E.P. Шувалова, C.B. Дябирова, A.B. Винокурова, В.M. Садоков, Ю. А. Панков. Создание бактериального продуцента антигенной детерминанты панкреатической холестеролэстеразы человека и разработка на его основе иммуноферментного метода определения аутоантител. III Всероссийский съезд эндокринологов. Тезисы докладов, стр. 26, 1996.

7. Ю. А. Панков, М. К. Чехранова, E.H. Ильина, Е. Р. Шувалова, C.B. Дябирова. Локализация антигенной детерминанты панкреатической холестеролэстеразы человека в пролин-богатых повторах. Молекулярная биология, 1997, т. 31, стр. 160−162.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Представленное исследование проводилось в рамках общего направления научной работы лаборатории молекулярной эндокринологии ЭНЦ РАМН, посвященного изучению гуморальных маркеров инсулин зависимого сахарного диабета. Объектом была выбрана секретируюгцая инсулинома человека, из ткани которой сконструирована клонотека кДНК в экспрессирующем плазмидном векторе риЕХ1 и выделена суммарная фракция экспрессируемых белков.

На первом этапе диссертационной работы решены проблемы получения антисыворотки морской свинки к суммарным белкам инсулиномы человека и использования ее для скрининга имеющейся клонотеки кДНК. Оригинальность этого подхода состояла в использовании одного и того же образца ткани для конструирования клонотеки кДНК и иммунизации морских свинок. В этом случае можно утверждать, что антитела в организме морской свинки вырабатываются к тем же белкам, чьи кДНК представлены в клонотеке. В результате иммуноскрининга клонотеки кДНК полученной антисывороткой морской свинки выявлен рекомбинантный клон рН1СЕ0.9, содержащий вставку кДНК С-концевого участка пХЭ человека. Эти данные подтверждены на генном уровне с помощью определения нуклеотидной последовательности концевых фрагментов вставки кДНК и построения ее рестриктной карты. Специфичность антисыворотки морской свинки к С-концу пХЭ человека была подтверждена методом иммуноблотта. Дальнейшие этапы диссертационной работы носили как фундаментальный, так и прикладной характер и представляли изучение свойств фрагмента пХЭ человека молекулярно-биологическими, биохимическими и иммунологическими методами.

Фермент поджелудочной железы человека пХЭ до настоящего времени изучен не полностью, возможно, в силу сложности своей организации. Наиболее полно представлены данные о первичной структуре [68], ферментативной активности пХЭ человека [21], процессах Ки О-гликозилирования белка [31, 69]. При этом ряд важных биологических свойств этого фермента остаются не исследованными. Так, однозначно не установлен механизм активации пХЭ солями желчных кислот, нет единого мнения о функциональной значимости С-концевого фрагмента пХЭ человека, содержащего уникальные пролин-богатые повторы. До настоящего времени не установлена трехмерная структура пХЭ человека, хотя существуют данные компьютерного моделирования [25]. Сведения об иммунологической активности пХЭ носят отрывочный характер и ограничиваются наблюдением об уникальности антител, вырабатываемых к пХЭ человека, в отличие от антител к пХЭ быка, собаки, крысы, перекрестно реагирующих между собой [64].

Совокупность полученных на первом этапе работы данных позволили сделать предположение о локализации антигенной детерминанты пХЭ человека в С-концевом домене. Второй этап диссертационного исследования носит фундаментальный характер и направлен на изучение природы иммунногенности пХЭ человека. В результате проведенных на молекулярном уровне экспериментов показана локализация антигенной детерминанты пХЭ человека в области пролин-богатых повторов типа.

РУРРТОБЗОАР, и таким образом, однозначно установлена одна из функций этой уникальной белковой структуры. Кроме того, созданы бактериальные штаммы-продуценты, экспрессирующие антигенную детерминанту пХЭ человека в составе гибридного белка с 3-галактозидазой (рН1СЕ0.9, рНГСЕМ).

Последующие разработки носили прикладной характер и иллюстрировали возможность практического использования созданных бактериальных штаммов-продуцентов антигенной детерминанты пХЭ человека. Выделенные гибридные белки, экспрессируемые этими бактериальными клонами, использованы в качестве антигена для разработки твердофазного иммуноферментного метода выявления антител к пХЭ человека. Лабораторный вариант иммуноферментного метода разработан с использованием антисыворотки морской свинки к суммарным белкам инсулиномы, содержащей антитела к пХЭ человека. Специфичность разработанной тест-системы подтверждена истощением иммунопозитивной антисыворотки в результате предыинкубации с белком-антигеном.

Существующие в мировой научной литературе данные об изменении уровня пХЭ в сыворотки крови человека при различных заболеваниях поджелудочной железы (острый и хронический панкреатит, рак) [] позволили сделать предположение о возможном образовании антител к пХЭ у больных с хроническими патологиями поджелудочной железы.

По данным клинической апробация разработанного иммуноферментного метода определения антител к пХЭ на сыворотках больных с различными хроническими патологиями поджелудочной железы, антитела к пХЭ встречаются преимущественно в группе больных хроническим панкреатитом с диагностированными кистами головки поджелудочной железы.

Сейчас в мире возрос интерес к пХЭ в связи с обнаружением экспрессии этого белка в макрофагах и мононуклеарах крови [42], а также эндотелиальных клетках стенки аорты [43]. Последний факт является наиболее интересным, так как служит основанием предполагать наличие связи между уровнем экспрессии пХЭ клетками стенок кровеносных сосудов и развитием атеросклероза. Одновременно исследуются процессы активации пХЭ солями желчных кислот [48], влияние пХЭ на абсорбцию пищевого холестерина [34, 51], предприняты попытки моделирования трехмерной структуры белка [25]. На общем фоне исследований, посвященных пХЭ, представленная диссертационная работа вносит вклад в установление одной из функций пролин-богатых повторов пХЭ человека и изучение иммунологических свойств этого фермента.

Показать весь текст

Список литературы

  1. М.М. Методы исследования поджелудочной железы, Новосибирск: Наука, 1982.
  2. В.А. Изучение спектров аутоантител при инсулинозависимом сахарном диабете и стрептозотоциновом диабете крыс. Автореф. дис. на соискание ученой степени канд. биол. наук. М.: Эндокринологический Научный Центр РАМН, 1996.
  3. ГловерД. Клонирование ДНК. Методы, М.: Мир, 1988.
  4. А.В., Кузнеделов К. Д., Краев А. С. Методы молекулярной генетики и генной инженерии, Новосибирск: Наука, 1990.
  5. Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование, М.: Мир, 1984.
  6. Abouakil N., Rogalska E., Bonicel J. and Lombardo D. Purification of pancreatic carboxylic-ester hydrolase by immunoaffinity and its application to the human bile-salt-stimulated lipase.- Biochim Biophys Acta, 1988, v. 961, p. 299−308.
  7. Baba T., Downs D., Jackson K., Tang Y., Wang Ch.-S. Structure of human milk bile salt activated lipase.- Biochemistry, 1991, v. 30, p. 500−510.
  8. Blackberg L., Angquist K.A. and Hernell O. Bile-salt-stimulated lipase in human milk: evidence for its synthesis in the lactating mammary gland.-FEBS Letters, 1987, v. 217, p. 37−41.
  9. Bruneau N., Delaporte P.L., Sbarra V. and Lombardo D. Association of bile salt-dependent lipase with membranes of human pancreatic microsomes.- Eur J Biochem, 1995, v. 233, p. 209−218.
  10. Christie D.L., Cleverly D.R. and O’Connor C.J. Human milk bile-salt stimulated lipase- Sequence similarity with rat lisophospholipase and homology with the active site region of cholinesterase.- FEBS Lett, 1991, v. 278, p. 190−194.
  11. Colwell N.S., Aleman-Gomez J.A. and Kumar B.V. Molecular cloning and expression of rabbit pancreatic cholesterol esterase.- Biochim Biophys Acta, 1993, v. 1172, p. 175−180.
  12. Cox D.G., Tom Leung C.K., Kyger E.M., Spilburg C.A. and Lange L.G. Pancreatic cholesterol esterase. 1. Pancreatic cholesterol esterase induction during maturation.- Biochemistry, 1990, v. 29, p. 3842−3848.
  13. Deaizpurua H.J., Harrison L.C. and Cram D.S. An ELISA for Antibodies to Recombinant Glutamic Acid Decarboxylase in IDDM.- Diabetes, 1992, v. 41, p. 1182−1187.
  14. DeCaro J., Boudouard M., Bonicel J., Guidoni A., Desnuelle P., Rovery M. Porcine pancreatic lipase. Completion of primary structure.- Biochim Biophys Acta, 1981, v. 671, p. 129−138.
  15. Dipersio L.P., Carter C.P. and Hui D.Y. Exon 11 of the Rat Cholesterol Esterase Gene Encodes Domains Important for Intracellular Processing and Bile SaltModulated Activity of the Protein.- Biochemistry, 1994, v. 33, p. 3442−3448.
  16. Dipersio L.P., Fontaine R.N. and Hui D.Y. Identification of the active site serine in pancreatic cholesterol esterase by chemical modification and sitespecific mutagenesis.- J Biol Chem, 1990, v. 265(28), p. 16 801−16 806.
  17. Duan R.D. and Borgstrom B. Is there a specific lysophospholipase in human pancreatic Juice.- Biochim. Biophys. Acta, 1993, v. 1167, p. 326 330.
  18. Escribano M.J., Imperial S. Purification and molecular characterization of FAP, a feto-acinar protein associated with the differentiation of human pancreas.- J Biol Chem, 1989, v. 264, p. 3780−3787.
  19. Feaster S.R., Quinn D.M., Barnett B.L. Molecular modeling of the structures of human and rat pancreatic cholesterol esterases.- Protein Sci, 1997, v. 6, p. 73−79.
  20. Fontaine R.N., Carter C.P. and Hui D.Y. Structure of the rat pancreatic cholesterol esterase gene.- Biochemistry, 1991, v. 30, p. 7008−7014.
  21. Freed L.M., Berkow S.E., Hamosh P., York C.M., Mehta N.R. and Hamosh M. Lipases in human milk: effect of gestational age and length of lactation on enzyme activity.- Journal of the American College of Nutrition, 1989, v. 8, p. 143−150.
  22. Gjellesvik D.R., Lombardo D., Walther B.T. Pancreatic bile salt dependent lipase from cod (Gadus morhua): purification and properties.- Biochim Biophys Acta, 1992, v. 1124, p. 123−134.
  23. Han J.H., Stratowa C., Rutter W.J. Isolation of full-length putative rat lysophospholipase cDNA using improved methods for mRNA isolation and cDNA cloning.- Biochemistry, 1987, v. 26, p. 6077−6081.
  24. Hernell O. and Blackberg L. Human milk bile salt-stimulated lipase: Functional and molecular aspects. J Pediatr 125(5 Suppl 1994 — Part 2):S56-S61, 1994.
  25. Howies PN, Carter CP, Hui DY Dietary free and esterified cholesterol absorption in cholesterol esterase (bile salt-stimulated lipase) gene-targeted mice.- J Biol Chem, 1996, v. 271, p. 7196−7202.
  26. Hui D.Y. and Kissel J.A. Sequence identity between human pancreatic cholesterol esterase and bile salt-stimulated milk lipase.- FEBS Lett, 1990, v. 276, p. 131−134.
  27. Kissel J.A., Fontaine R.N., Turck C.W., Brockman H.L. and Hui D.Y. Molecular cloning and expression of cDNA for rat pancreatic cholesterol esterase.- Biochim Biophys Acta, 1989, v. 1006, p. 227−236.
  28. Kumar B.V., Aleman-Gomez J.A., Colwell N., Lopez-Candales A., Bosner M.S., Spilburg C.A., Lowe M. and Lange L.G. Structure of the human pancreatic cholesterol esterase gene.- Biochemistry, 1992, v. 31, p. 60 776 081.
  29. Kumar V.B., Sasser T., Mandava J.B., al Sadi H., Spilburg C. Identification of 5' flanking sequences that affect human pancreatic cholesterol esterase gene expression.
  30. Kuopio T., Ekfors T.O., Nikkanen V., Navalainen T. Acinar cell carcinoma of the pancreas report of three cases.- ARMIS, 1995, v. 103, p. 69−78
  31. Kyger E.M., Wiegand R.C. and Lange L.G. Cloning of the bovine pancreatic cholesterol esterase/lysophospholipase.- Biochem Biophys Res Commun, 1989, v. 164, p. 1302−1309.
  32. Laemmly U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.- Nature, 1970, v. 227, p. 680−685.
  33. Li F., Hui D.Y. Synthesis and secretion of the pancreatic-type carboxyl ester lipase by human endothelial cells.- Biochem J, 1998, v. 329, p. 675 679.
  34. Lombardo D., Montalto G., Roudani S., Mas E., Laugier R., Sbarra V., Abouakil N. Is bile salt-dependent lipase concentration in serum of any help in pancreatic cancer diagnosis.- Pancreas, 1993, v. 8, p. 581−588
  35. Lombardo D., O. Guy, C. Figarella. Purification and characterization of a carboxyl ester hydrolase from human pancreatic juice.- Biochim Biophys Acta, 1978, v. 527. p. 142−149.
  36. Loomes K.M. Structural organisation of human bile-salt-activated lipase probed by limited proteolysis and expression of a recombinant truncated variant.- Eur J Biochem, 1995, v. 230, p. 607−613.
  37. Loomes K.M., Senior H.E. Bile salt activation of human cholesterol esterase dose not require protein dimerisation.- FEBS lett, v. 405, p. 369 372.
  38. Lowe M.E., Rosenblum J.L. and Strauss A.W. Cloning and characterization of human pancreatic lipase cDNA.- J Biol Chem, 1989, v. 264, p. 20 042−20 048.
  39. Nilsson J., Blackberg L., Carlsson P., Enerback S., Hernell O. and Bjursell G. cDNA cloning of human-milk bile-salt-stimulated lipase and evidence for its identity to pancreatic carboxylic ester hydrolase.- Eur J Biochem, 1990, v. 192, p. 543−550.
  40. Nilsson J., Hellquist M. and Bjursell G. The human carboxyl ester lipase -like (CELL) gene is ubiquitously expressed and contains a hypervariable region.- Genomics, 1993, v. 17, p. 416−422.
  41. Pasqualini E., Caillol N., Mas E,. Bruneau N., Lexa D., Lombardo D. Association of bile-salt-dependent lipase with membranes of human pancreatic microsomes is under the control of ATP and phosphorylation.-Biochem J, 1997, v. 327, p. 527−535.
  42. Patton J.S., Warner T.G., Benson A.A. Partial characterization of the bile salt-dependent triacilglycerol lipase from the leopard shark pancreas.-Biochim Biophys Acta, 1993, v. 486, p. 322−330.
  43. Reue K., Zambaux J., Wong H., Lee G., Leete T.H., Ronk M., Shively J.E., Sternby B., Borgstrom B., Ameis D. cDNA cloning of carboxyl ester lipase from human ancreas reveals a unique proline-rich repeat unit.-J Lipid Res., 1991, v. 32, p. 267−276.
  44. Roudani S., Miralles F., Margotat A., Escribano M.J. and Lombardo D. Bile salt-dependent lipase transcripts in human fetal tissues.- Bba-Gene Struct Express, 1995, v. 1264, p. 141−150.
  45. Rudd E.A., Mizuno N.K. and Brockman H.L. Isolation of two forms of carboxylester lipase (cholesterol esterase) from porcine pancreas.- Biochim Biophys Acta, 1987, v. 918, p. 106−114.
  46. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors.-Proc Natl Acad Sci USA, 1977, v. 74, p. 5463−5467.
  47. Sbarra V., Mas E., Henderson T.R., Hamosh M., Lombardo D., Hamosh P. Digestive lipases of the newborn ferret: compensatory role of milk bile salt-dependent lipase.- Pediatr Res, 1996, v. 40, p. 263−268
  48. Singh S. and Gupta J. Some physicochemical properties of human milk bile-salt activated lipase.- Indian Journal of Biochemistry & Biophysics, 1991, v. 28, p. 155−157.
  49. Spilburg C.A., Cox D.G., Wang X., Bernat B.A., Bosner M.S., Lange L.G. Identification of a species specific regulatory site in human pancreatic cholesterol esterase.- Biochemistry, 1995, v. 34, p. 15 532−15 538.
  50. Taylor A.K., Zambaux J.L., Klisak I., Mohandas T., Sparker S.R., Schotz M.C., Lusis A.J. Carboxyl ester lipase: a highly polymorphic locus on human chromosome 9qter.- Genomics, 1991, v. 10, p. 425−431.
  51. Towbin H., Staehelin T. and Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrilamide gels to nitrocellulose sheet: Procedure and some applications.- Proc Natl Acad Sci USA, 1979, v. 76, p. 4350−4354.
  52. Wang C.S. and Hartsuck J.A. Bile salt-activated lipase. A multiple function lipolytic enzyme (review).- Biochim Biophys Acta, 1993, v. 1166, p. 1−19.
  53. Wang C.S. Purification of carboxyl ester lipase from human pancreas and the amino acid sequence of the N-terminal region.- Biochem Biophys Res Commun, 1988, v. 155, p. 950−955.
  54. Wang C.S., Dashti A., Jackson K.W., Yeh J.C., Cummings R.D. and Tang J. Isolation and characterization of human milk bile salt-activated lipase C-tail fragment.- Biochemistry, 1995, v. 34, p. 10 639−10 644.
  55. Wang C.S., Martindale M.E., King M.M. and Tang J. Bile-salt-activated lipase: effect on kitten growth rate.- American Journal of Clinical Nutrition, 1989, v. 49, p. 457−463.
  56. Wang X., Wang C.S., Tang J., Dyda F., Zhang X.C. The crystal structure of bovine bile salt activated lipase: insights into the bile salt activation mechanism.- Structure, 1997, v. 5, p. 1209−1218.
  57. Winkler F.K., D’Arcy A. and Hunziker W. Structure of human pancreatic lipase.- Nature, 1990, v. 343, p. 771−774.
Заполнить форму текущей работой

Пора сдавать?