Метод выявления гетерозиготного носительства

Для человека, чье гетерозиготное состояние по тому или иному заболеванию установлено, чрезмерно важно не встретиться в браке с носителем подобного рецессивного гена, т.к. риск рождения у них больного ребенка составляет 25% как при первой, так и последующих беременностях. Предположения о гетерозиготности женщины:

• 1) если у женщины поражен отец наследственнной болезнью;
• 2) если женщиина родила двух или нескольких пораженных сыновей;
• 3) если у женщины поражен брат (или братья), и, кроме того, она имеет пораженного сына или внука (от дочери);
• 4) если женщина имеет двух дочерей, причем у каждой из них родился пораженный сын (или сыновья).

Пути исследования:

• 1. Клиническое изучение микросимптомов заболевания с выявлением аномалий развития.
• 2. Использование нагрузочных тестов (прием фенилаланина выявляет повышение его содержания в крови — предположение о гетерозиготности по фенилкетонурии).
• 3. Микроскопическое исследование клеток крови и тканей.
• 4. Биологическое определение активности того или иного фермента, пострадавшего в результате мутации гена.

Молекулярно-цитогенетические и молекулярно-биологические методы Это большая и разнообразная группа методов исследования молекулярной структуры ДНК, основные дифференциально-диагностические тесты, необходимость разработки которых обусловлена генетической природой наследственных заболеваний, их выраженным клиническим полиморфизмом, а также существованием генокопий и фенокопий.

Особое место в этой группе занимают методы ДНК-диагностики (зондовой). Они позволяют диагностировать заболевание на уровне первичного молекулярного дефекта — патологического гена. Ее точность в установлении причины наследственного дефекта абсолютна.

Среди основных методов ДНК-диагностики выделяются:

• — дозовый блот-гибридизационный анализ;
• — анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ);
• — полимеразная цепная реакция (ПЦР);
• — анализ полиморфизма микросателлитных последовательностей.

Благодаря этим методам у врачей появились уникальные возможности эффективного применения в различных областях медицины самых совершенных технологий. В настоящее время в ДНК-диагностике выделяют 4 подхода. Они применяются в зависимости от того:

• 1. известен или не известен ген данного заболевания,
• 2. клонирован или нет этот ген или ДНК-копия его тРНК или кодирующей ДНК,
• 3. известна или нет природа мутации, вызывающей заболевание,
• 4. насколько широко распространена данная мутация в различных случаях данного заболевания в данной популяции, данном географическом регионе.

Виды ДНК-диагностики:

подтверждающая, пресимптоматическая, носительства, пренатальная.

Принципиально различают прямую и косвенную диагностику моногенных наследственных болезней.

Прямые методы возможны лишь при условии, что ген заболевания клонирован, известна его экзон-интронная организация или нуклеотидная последовательность полноразмерной комплементарной ДНК. При прямой диагностике предметом анализа являются мутации гена. Главным преимуществом прямых методов диагностики является почти 100% эффективность. Прямые методы основаны на технологии ПЦР. Однако в большинстве случаев наследственных заболеваний ген не клонирован или заболевание является генетически гетерогенным, т. е. обусловлено повреждением в разных генах, либо молекулярная организация гена не позволяет использовать прямые гены.

Эти трудности могут быть преодолены с помощью косвенных методов ДНК-диагностики, основанных на использовании сцепленных с геном полиморфных маркеров. В этом случае определяется гаплотип хромосомы, несущей мутантный ген в семьях высокого риска, т. е. у родителей больного и его ближайших родственников. Такой подход возможен практически для всех моногенных заболеваний с известной локализацией гена. Основной недостаток косвенных методов диагностики — обязательное предварительное изучение генотипа (гаплотипа) хотя бы одного пораженного родственника. В случае отсутствия пораженных родственников, «доступных» для обследования, проведение диагностики (за редким исключением) становится невозможным.