Бактериофаг Т4: молекулярное клонирование генов и суперпродукция ферментов метаболизма ДНК
Диссертация
В связи с наличием большого количества мутантов по существенным фаговым функциям биохимики предпочитали проводить свои работы именно с фагом Т4. Анализ функций на молекулярном уровне давал биохимикам основание предположить возможность получения новых типов мутантов, которые часто действительно изолировались и, естественно, снова подвергались биохимическому анализу. Становилось ясным, что… Читать ещё >
Содержание
- Введение. II
- Обзор литературы
- ГЛАВА I. Контролируемая крупноблочная фрагментация ДНК. Системы модификации-рестрикции в* coli и Т-четных бактериофагов
- 1. 1. Бактериофаги с двух спиральной ДНК
- 1. 2. Гидродинамическая фрагментация ДНК
- 1. 3. Индуцируемая хозяином модификация-рестрикция
- 1. 4. Номенклатура систем модификации-рестрикции
- 1. 5. Генетический контроль индуцируемой хозяином модификации-рестрикции
- 1. 6. Системы модификации-рестрикции Т-четных фагов
- 1. 7. Эндонуклеазы рестрикции класса II. Распространение в природе
- 1. 8. Эндонуклеазы рестрикции класса II в E, col
- 1. 9. Особенности действия рестриктаз класса II при изменении условий гидролиза, добавлении антибиотиков и при использовании необычных субстратов
- ГЛАВА 2. Управляемая ассоциация фрагментов ДНК в функционирующей генетический материал
- 2. 1. Соединение фрагментов ДНК
- 2. 2. ДНК-лигазы
- 2. 2. 1. Механизм реакции
- 2. 2. 2. Субстратная специфичность
- 2. 2. 3. Функции ДНК-лигазы фага Т
- 2. 2. 4. Клонирование структурных генов полинуклеотидлигаз E. coli и фага Т
- 3. 1. Блочный характер организации природных плазмид
- 3. 2. Блоки репликации
- 3. 3. Блоки, контролирующие стабильность плазмид
- 3. 4. Блоки антибиотикорезистентности
- 3. 5. Специализированные векторы, обеспечивающие высокий уровень экспрессии клонированных генов
- 3. 6. Промоторы
- 3. 7. Сайт связывания с рибосомой
- 3. 8. Получение негибридных белков с использованием промотора PL
- 3. 9. Векторы с промоторами фага
- 3. 11. Плазмидные векторы, применявшиеся для клонирования фрагментов ДНК фага Т
- 3. 12. Векторы на основе бактериофага. III
- 3. 13. Общие представления о бактериофаге А. III
- 3. 14. Размножение мутантов фага ^ в различных клетках-хозяевах
- 3. 15. Регуляция развития бактериофага У
- 3. 16. Общие принципы конструирования векторов на основе фага
- 3. 17. Выбор и использование векторов на основе бактериофага
- 3. 18. Векторы, полученные на основе фага ^ и использовавшиеся для клонирования фрагментов ДНК фага Т
- 3. 19. Экспрессия генов прокариот в составе векторов, полученных на основе бактериофага
- 4. 1. Особенности фрагментации ДНК Т-четных фагов с помощью эндонуклеаз рестрикции
- 4. 2. Получение и характеристика мутантов фага Т4, содержащих Ц-ДНК
- 4. 3. Рестрикционное картирование ДНК фага Т
- 4. 4. Клонирование фрагментов ДНК фага Т
- 4. 5. Первичная структура некоторых областей ДНК фага
- 4. 6. Функциональный анализ гибридных молекул ДНК, содержащих гены бактериофага Т
- 4. 7. Использование рекомбинантных ДНК для изучения транскрипции фага Т
- 4. 8. Использование банка клонированных генов для изучения репарации и репликации фага Т
- 4. 9. Индукция мутаций в специфических генах бактериофага Т4 с использованием клонированных фрагментов и метода спасения маркера
- 4. 10. Проблема клонирования генов фага Т4, продукты которых летальны для E. col
- 6. 1. Исследование гидродинамического разрыва ДНК фагов Т5+ и Т5 st (o) до и после обработки полинуклеотидлигазой
- 6. 2. Гидродинамический разрыв и биологическая активность ДНК фагов Т4, Т5 и Л
- 7. 1. ecoRI — рестрикция ОМЦ ДНК фага Т
- 7. 2. Рестрикция Ц-ДНК фага Т
- 7. 3. EcoRV — рестрикция ДНК Т-четных бактериофагов
- 7. 4. Ограничение Т-четных фагов in vivo
- 7. 5. Получение EcoRI — ЛТ4-рекомбинантов и их идентификация
- 7. 6. Получение Hindlll — «ХТ4-рекомбинантов и их идентификация
- 7. 7. Клонирование EcoRV — фрагментов ДНК фага
- 7. 8. Исследование ДНК АТ4-рекомбинантов с ранними генами фага Т4. Рестрикционный анализ ДНК! ХТ4-рекомбинантов, содержащих гены фага Т4 62,
- 44. 45. 46 и
- 7. 9. Определение ориентации встроенного фрагмента
- 7. 10. Исследование рекомбинантного фага
- 7. 11. Исследование ДНК АТ4-рекомбинантов с поздними генами фага Т
- 7. 12. /Т4-рекомбинанты, содержащие Hindlll — фрагмент ДНК фага Т4 с генами
- 7. 13. АТ4-рекомбинант, содержащий EcoRI — фрагмент да фага Т4 с генами
- 7. 14. ^Т4-рекомбинанты, содержащие Hindlll — фрагменты ДНК фага Т4 с генами
- 7. 15. Локализация участков узнавания эндонуклеазы рестрикции Smal на генетической карте фага
- 7. 16. Рестрикционный и функциональный анализ ДНКТ4-рекомбинантов, несущих фрагменты ДНК из области генов
- 7. 17. Конструирование векторных плазмид для клонирования фрагментов ДНК области генов
- 7. 18. Клонирование фрагментов ДНК, содержащих ген дигидрофолатредуктазы в плазмидных векторах в E. coli и S. marcescens
- 7. 19. Исследование экспрессии поздних генов фага Т в составе рекомбинантных ДНК
- 42. в составе Т4-рекомбинантов
- 8. 1. Анализ экспрессии генов фага Т4, клонированных в составе бактериофага методом электрофореза в полиакриламидном геле
- 8. 2. Комплементация in vivo
- 8. 3. Особенности внутриклеточного развития ЛТ4-рекомбинантных фагов и их генетическая характеристика
- 9. 1. Получение гибридной плазмиды piL203 и анализ функционирования ее генов
- 9. 2. Идентификация фрагментов гибридных плазмид
- 9. 3. Анализ синтеза репрессора с1857 в клетках, содержащих гибридные плазмиды plL
- 9. 4. Генетический анализ регуляторной области фага лямбда, введенной в плазмиду
- 9. 5. Доказательство наличия в гибридных плазмидах термочувствительной транскрипции с левого фагового прэмотора
- 9. 6. Делеционные мутанты плазмид plL202 и plL
- 10. 1. Клонирование гена полинуклеотидлигазы фага
- 10. 2. Конструирование рекомбинантной плазмидой ДНК PILL435, кодирующей синтез ДНК-лигазы фага Т
- 10. 3. Анализ генетических маркеров в штаммах E. coli, содержащих рекомбинантную плазмиду piLL
- 10. 4. Синтез ДНК-лигазы фага Т4 в клетках E. col
- 11. 1. Ферментативный гидролиз ДНК Т-четных бактериофагов и клонирование полученных фрагментов
- 11. 2. Исследование ДНК Т4-рекомбинантов, содержащих ранние гены фага Т
- 11. 3. Проблема выделения генов области 30−34 фага Т4. Клонирование и экспрессия гена дигидрофолат-редуктазы в E. coli и S. marcescens
- 11. 4. Экспрессия генов базальной пластинки фага Т4 в составе рекомбинантных ДНК
- 11. 5. Анализ экспрессии генов фага Т4, клонированных в составе бактериофагаХ методом электрофореза в полиакриламидном геле
- 11. 6. Селективные преимущества векторных плазмид, содержащих область иммунитета фага А
- 11. 7. Акцепторная способность гибридных плазмид с областью иммунитета фага 'А
- 11. 8. Редуцированные плазмиды piL233, 243, 242, их селективные и акцепторные характеристики
- 11. 9. Регулируемая экспрессия генов, встроенных в piL-плазмиды, обеспечиваемая за счет функционирования промоторов вектора. Относительное расположение промоторов и сайтов интеграции
- 11. 10. Регуляция экспрессии клонируемых фрагментов с использованием мутантов по генам негативных регуляторов транскрипции (его, cl)
- 11. 11. Экспрессия гена ДНК-лигазы фага Т4 в составе плазшды plLL
- 11. 12. Перспективы исследований по клонированию генов ферментов и сверхсинтезу кодируемых ими продуктов