Помощь в учёбе, очень быстро...
Работаем вместе до победы

Анализ участия электрогенного насоса плазматических мембран в формировании потенциала действия у высших растений

ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

В то же время известно, что во время генерации импульса в клетках высших растений, в отличие от животных, имеет место значительное изменение концентраций основных ПД-образующих ионов (Опритов, Ретивин, 1982; Fromm, Spanswick, 1993; Fromm, Bauer, 1994). Однако при этом клетки высших растений могут генерировать не только одиночные импульсы, но и серии ПД (Духовный, 1973; Пятыгин, Опритов, 1988… Читать ещё >

Содержание

  • Список сокращений и условных обозначений
  • Глава 1. Механизмы биоэлектрогенеза у высших растений в покое и при возбуждении
    • 1. 1. Механизм генерации потенциала покоя в клетках высших растений
      • 1. 1. 1. Природа пассивной (диффузионной) компоненты мембранного потенциала
      • 1. 1. 2. Природа злектрогенной (метаболической) компоненты мембранного потенциала
      • 1. 1. 3. Эквивалентная электрическая цепь плазматической мембраны
    • 1. 2. Механизм генерации потенциалов действия у высших растений
  • Глава 2. Объект и методы исследования
    • 2. 1. Объект исследования
    • 2. 2. Методы исследования
      • 2. 2. 1. Регистрация мембранного потенциала клеток
      • 2. 2. 2. Внеклеточная (поверхностная) регистрация электрической активности
      • 2. 2. 3. Дозированное изменение температуры и ее регистрация
      • 2. 2. 4. Выделение фракции, обогащенной плазматическими мембранами, методом дифференциального ультрацентрифугирования
      • 2. 2. 5. Определение АТФазной активности во фракции изолированных плазматических мембран
      • 2. 2. 6. Определение величины рН и разности потенциалов на везикулах фракции плазматических мембран методом флуоресцентных зондов
    • 2. 3. Статистическая обработка результатов
  • Глава 3. Зависимость процесса генерации потенциалов действия в клетках стебля тыквы от величины метаболической компоненты мембранного потенциала
    • 3. 1. Особенности потенциалов действия, возникающих в клетках стебля тыквы в ответ на постепенное локальное охлаждение
    • 3. 2. Связь импульсной электрической активности клеток стебля тыквы с величиной метаболической компоненты мембранного потенциала
    • 3. 3. Генерация потенциалов действия в условиях исключающих возникновение пассивных потоков основных ПД-образующих ионов (СГи К+)
  • Глава 4. Анализ участия электрогенного насоса плазматических мембран в генерации фазы реполяризации потенциала действия
    • 4. 1. Зависимость скорости изменения мембранного потенциала от его величины во время генерации потенциала действия
    • 4. 2. Особенности формирования фазы реполяризации потенциала действия в средах с различным ионным составом
  • Глава 5. Анализ участия Н±насоса плазматических мембран в формировании фазы деполяризации потенциала действия
    • 5. 1. Зависимость активности Н±АТФазы плазматических мембран от концентрации ионов Са2+
    • 5. 2. Особенности формирования фазы деполяризации потенциала действия при действии ингибиторов и
  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ АПд — амплитуда потенциала действия
  • БСА — бычий сывороточный альбумин
  • 2,4-ДНФ — 2,4-динитрофенол
  • ДЦКД — М, М'-дициклогексилкарбодиимид
  • ПД — потенциал действия
  • ПМ — плазматическая мембрана
  • ТХУ — трихлоруксусная кислота
  • ТЭА — тетраэтиламмоний
  • ЭГТА — этиленгликоль-бис-(р-аминоэтил)-тетраацетат
  • ЭДТА- этилендиаминтетраацетат
  • ЭК — этакриновая кислота diS-C3-(5) — 3,3-ди-пропил-2,2-тиокарбоцианин
  • FITC — флуоресцеин изоцианат
  • Е0 — диффузионная компонента мембранного потенциала диффузионный потенциал)
  • Ек — К±равновесный потенциал
  • Ет — мембранный потенциал
  • Ет° - критический (пороговый) уровень Ет
  • Ет* - уровень Ет в максимуме ПД
  • ЕР — электрогенная (метаболическая, активная) компонента мембранного потенциала
  • AU — внеклеточно (поверхностно) регистрируемая разность потенциалов

Анализ участия электрогенного насоса плазматических мембран в формировании потенциала действия у высших растений (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность проблемы. Свойство возбудимости присуще всем живым организмам и необходимо для существования в постоянно изменяющихся условиях окружающей среды. Одним из наиболее важных проявлений возбудимости является способность генерировать распространяющиеся электрические импульсы — потенциалы действия (ПД) — в ответ на разнообразные внешние факторы. ПД у высших растений являются не просто неким экзотическим феноменом, а выполняют важную физиологическую функцию, обеспечивая быструю связь между частями растительного организма (Davies, 1987; Опритов, 1998). В частности, ПД Играют существенную роль в предадаптации растений к неблагоприятным условиям окружающей среды (Ретивин и др., 1997), участвуют в процессе оплодотворения (Духовный, 1973) и т. д. В связи с важной ролью импульсной электрической активности в жизнедеятельности биологических объектов, механизмы процесса генерации ПД в возбудимых клетках давно привлекают внимание исследователей. К настоящему времени наибольшие успехи достигнуты при изучении механизмов этого процесса в нервных волокнах животных (Иост, 1975; Ходоров, 1975; Ohki, 1985) и гигантских по размерам клетках ряда водорослей (прежде всего, харовых) (Берестовский и др., 1973; Lunevsky et al., 1983; Kourie, 1994). Менее исследованным остается процесс генерации ПД в клетках высших растений.

Между тем, изучение природы распространяющегося возбуждения у высших растений важно не только для выявления особенностей этого процесса у данного объекта, но и для понимания эволюции механизмов генерации ПД в живых организмах в целом. Исследование природы ПД значимо также для раскрытия механизмов преобразования электрических сигналов в функциональный ответ у высших растений.

По существующим представлениям формирование фазы деполяризации ПД у высших растений сопряжено, в основном, с 7 выходящим из клетки по электрохимическому градиенту потоком ионов хлора (Abe, 1981; Samejima, Sibaoka, 1980; Опритов, Ретивин, 1982; Sibaoka, 1991). Что же касается фазы реполяризации импульсов, то её формирование связывают обычно с выходящим из клетки потоком ионов калия (Опритов, Ретивин, 1982; Ретивин, Опритов, 1986). То есть, согласно существующим представлениям, формирование ПД в клетках высших растений связано с пассивными потоками ионов, подобно тому, как это имеет место при генерации нервного импульса.

В то же время известно, что во время генерации импульса в клетках высших растений, в отличие от животных, имеет место значительное изменение концентраций основных ПД-образующих ионов (Опритов, Ретивин, 1982; Fromm, Spanswick, 1993; Fromm, Bauer, 1994). Однако при этом клетки высших растений могут генерировать не только одиночные импульсы, но и серии ПД (Духовный, 1973; Пятыгин, Опритов, 1988; Hodick, Sievers, 1988). Следует отметить, что при генерации серии импульсов временной интервал между ними меньше, чем время, необходимое для восстановления ионного гомеостаза (Ретивин, 1988). Это наводит на мысль о том, что электрогенный насос в клетках высших растений не только участвует в создании электрохимических градиентов основных ПД-образующих ионов (Opritov, Pyatygin, 1989), но и может принимать непосредственное участие в формировании ПД.

Цель и основные задачи исследования. Целью работы является изучение возможности непосредственного участия электрогенного насоса плазматических мембран (ПМ) в генерации ПД в возбудимых клетках высшего растения (тыквы Cucurbita реро L.). В связи с поставленной целью выполнялись следующие задачи:

• определение зависимости процесса генерации ПД от величины метаболической компоненты (ЕР) мембранного потенциала (Ет) в возбудимых клетках стебля тыквы- 8.

• анализ участия электрогенного насоса ПМ в генерации фазы реполяризации ПД;

• обоснование возможности участия электрогенного насоса в формировании фазы деполяризации импульса.

Научная новизна. В ходе проведенного исследования показано, что способность генерировать ПД зависит от величины ЕР возбудимых клеток высших растений. Амплитуда ПД (АПд) прямо пропорциональна величине ЕР и не обнаруживает отчетливой зависимости от величины диффузионной компоненты (ED) Ет.

Впервые показана возможность генерации ПД клетками Cucurbita реро в условиях, исключающих возникновение пассивных потоков ПД-образующих ионов. При этом ПД формируются, по-видимому, при участии преимущественно электрогенного насоса ПМ.

Обнаружено, что фаза реполяризации ПД развивается в два этапа. Полученные данные свидетельствуют, что второй этап фазы реполяризации, обладающий высокой температурной чувствительностью, связан, вероятнее всего, с работой электрогенного насоса ПМ.

Показана принципиальная возможность участия электрогенного насоса ПМ в формировании фазы деполяризации ПД за счет его временной инактивации, вызванной повышением концентрации ионов Са2+ в цитозоле клеток высших растений в начальный момент возбуждения. Время инактивации Н±насоса сопоставимо со временем формирования переднего фронта ПД в клетках объекта.

Предложена схема генерации ПД в клетках высших растений, учитывающая вклад в этот процесс наряду с пассивными ионными потоками переходного изменения активности электрогенного насоса ПМ.

Научно-практическое значение. Результаты работы углубляют понимание механизмов генерации ПД в клетках высших растений. Предложена схема генерации ПД у высших растений, учитывающая участие в этом процессе наряду с пассивными ионными потоками 9 переходного изменения активности электрогенного насоса. Предложенная схема генерации ПД способствует развитию представлений об эволюции механизмов возбуждения в живых организмах.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Способность клеток высших растений генерировать ПД находится в прямой связи с величиной ЕР. В клетках Cucurbita реро возможна генерация ПД в условиях, исключающих возникновение пассивных ионных потоков.

2. Формирование фазы реполяризации ПД в клетках объекта происходит в два этапа, обладающих различной температурной чувствительностью. Первый этап фазы реполяризации формируется выходящим потоком ионов К+. Второй этап фазы реполяризации, больший по амплитуде, очевидно, формируется электрогенным насосом ПМ. Активный механизм формирования фазы реполяризации может компенсировать убыль или полное отсутствие пассивного механизма.

3. В формировании фазы деполяризации импульса, вероятно, принимает участие электрогенный насос плазмалеммы за счет временного снижения активности. Инактивация электрогенного Н±насоса вызвана увеличением концентрации ионов Са2+ в цитозоле растительных клеток в начальный момент возбуждения. Апробация работы. Основные результаты работы были представлены на 2-ом съезде биофизиков России (Москва, 1999), Международной конференции «Ксенобиотики и живые системы» (Минск,.

2000), International Symposium «Signaling Systems of Plants Cells» (Moscow,.

2001), Международной конференции молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы современной науки» (Самара, 2001), Международной конференции «Регуляция роста, развития и продуктивности растений» (Минск, 2001), а также на региональных конференциях.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано и направлено в печать 15 работ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, 5 глав (включая обзор литературы), заключения, выводов и списка литературы. Изложена на 109 страницах, содержит 24 рисунка. Список цитируемой литературы включает 177 работ, из них 98 на иностранных языках.

ВЫВОДЫ.

1. Способность генерировать ПД в клетках стебля Cucurbita реро находится в прямой зависимости от величины метаболической компоненты Ет. Амплитуда ПД линейно зависит от величины ЕР и не проявляет четкой зависимости от величины от диффузионной составляющей Ет, что указывает на сопряжение процесса генерации ПД в клетках высших растений с работой электрогенного насоса. В клетках стебля тыквы возможна генерация ПД в условиях, исключающих возникновение пассивных потоков ионов К+ и СГ. Основная роль в формировании импульса в этих условиях, вероятно, принадлежит активным механизмам транспорта ионов.

2. С помощью предложенного нового методического подхода к изучению механизмов генерации ПД в возбудимых клетках высших растений, основанного на анализе скорости изменения Ет при формировании импульса, показано, что фаза реполяризации ПД формируется в два последовательных этапа. Первый этап фазы реполяризации, обладающий низкой температурной чувствительностью, формируется выходящим по электрохимическому градиенту потоком ионов К+. Второй этап фазы реполяризации, обладающий более высокой температурной чувствительностью в сравнении с первым, формируется, вероятно, электрогенным насосом ПМ. При исключении первого этапа из состава фазы реполяризации значение потенциала возвращается на исходный (до возбуждения) уровень, что указывает на возможность компенсации электрогенным насосом отсутствия пассивного этапа в составе фазы реполяризации.

3. В опытах на изолированных везикулах ПМ показана принципиальная возможность участия Н±насоса плазмалеммы в формировании фазы деполяризации за счет его временной инактивации, вызванной увеличением концентрации ионов Са2+ в цитозоле. Время Са2+.

92 индуцированной инактивации Н±насоса, сопоставимо со временем формирования фазы деполяризации в клетках Cucurbita реро. Увеличение или снижение активности Н±насоса ПМ аналогичным образом отражается на амплитуде фазы деполяризации. Это указывает на то, что в ее формирование может вносить вклад диссипация протонного градиента, возникающего за счет работы Н±насоса ПМ.

4. С учетом полученных в работе результатов предложена новая схема генерации ПД в возбудимых клетках высших растений. Эта схема учитывает непосредственное участие в формировании ПД (наряду с пассивными потоками ионов СГ и К+) переходное изменение активности электрогенного насоса ПМ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Проведенное исследование позволяет с определенностью заключить, что в процессе формирования ПД в клетках стебля тыквы наряду с пассивными потоками ионов Са2+, СГ и К+ непосредственное участие принимает Н±насос ПМ. Схема, учитывающая роль пассивных и активных механизмов формирования импульса, представлена на рис. 24. Согласно предложенной схеме ионы Са2+, входя в клетку по достижении Ет уровня Етс, активируют СГ-каналы и инактивируют Н±насос ПМ. Выходящий поток ионов СГ и диссипация протонного градиента формируют фазу деполяризации. Выходящий поток ионов К+ формирует первый этап фазы реполяризации до значения Ет, равного Ек. Восстановление в цитозоле исходной концентрации Са2+ приводит к активации Н±насоса ПМ, который формирует второй этап фазы реполяризации. При этом, если удаление избытка ионов Са2+ должно возвращать активность электрогенного насоса на исходный уровень (судя по рис. 21), то закисление цитозоля, имеющее место вследствие диссипации протонного градиента на фазе деполяризации, и увеличение концентрации ионов К+ с наружной стороны ПМ, вероятно, должны переводить активность электрогенного Н±насоса на более высокий, чем до возбуждения, уровень (Воробьев, 1988; Morsomme, Boutry, 2000).

По-видимому, у разных групп растений соотношение между метаболическим и пассивным механизмами генерации ПД может быть различным. Так, у некоторых низших растений формирование ПД целиком связано с переходным изменением активности электрогенного насоса (Рогатых и др., 1976; Gradmann, 1976). У «обычных» (не обладающих локомоторной активностью) растений, к которым относится тыква, вклад электрогенного насоса в формирование импульса, как показано в работе, весьма значителен, но наряду с насосом в этом процессе также принимают участие пассивные потоки ионов. У локомоторных растений, в жизнедеятельности которых импульсная электрическая активность играет большую роль в сравнении с.

Cl’i K+ Ca2+ 1 Н+.

Рис. 24. Предполагаемая схема генерации потенциала действия на плазматической мембране возбудимой клетки высшего растения.

Етскритический (пороговый) уровень Ет, Ек — калий-равновесный потенциал Ет*- уровень Ет в пике ПД.

90 обычными" растениями, судя по всему, происходит возрастание вклада пассивного механизма в формирование импульса. Об этом свидетельствуют меньшая длительность ПД и имеющий место при генерации импульса овершут (Samejima, Sibaoka, 1982; lijima, Sibaoka, 1985; Hodick, Sievers, 1988), объяснить появление которого возможно только участием пассивных ионных потоков, способных переполяризовать мембрану. В то же время у «обычных» растений овершут отсутствует, а величина Ет* очень близка к величине Е0 (рис. 15а), то есть развитие импульса достаточно легко связать с переходным изменением активности насоса. Можно предположить, что эволюция механизмов возбуждения шла по пути снижения сопряжения процесса генерации ПД с работой электрогенного насоса, что ведет к снижению энергетических затрат и уменьшению зависимости от условий окружающей среды процесса возбуждения, и, как следствие, к повышению его устойчивости и эффективности.

Роль изменения Ет при воздействии на организм каких-либо факторов в процессе эволюции механизмов генерации ПД, вероятно, также изменяется. Если первоначально главная роль изменения (падения) потенциала состояла в повышении устойчивости (защитная функция), то возникшее позднее быстрое импульсообразное изменение Ет по типу ПД является, главным образом, сигналом о внешнем воздействии (Опритов, 1998). По состоянию на сегодняшний день, при рассмотрении механизмов преобразования электрических сигналов в функциональный ответ в клетках высших растений учитывают в первую очередь изменения концентраций ионов Са2+, СГ и К+ в цитозоле и в примембранном слое снаружи клеток. Предложенная схема генерации ПД (рис. 24) показывает, что наряду с этим следует также учитывать переходное изменение активности Н±насоса, вызывающее изменение рН цитозоля и аппопласта, от величины которого зависит активность многих ферментов (Тарчевский, 2001).

Показать весь текст

Список литературы

  1. Н.И., Лялин О. О. Действие ионов тяжёлых металлов на функционирование электрогенной Н±помпы плазматических мембран II Известия АН АзССР. Сер. биол. наук. 1987. № 2. С. 128−132.
  2. Г. Н. Ионные каналы плазмалеммы и тонопласта // Вестник ННГУ им. Н. И. Лобачевского. Сер. Биол. Материалы выезд, сессии ОФР РАН по пробл. биоэлектрогенеза и адаптации. Н. Новгород: ННГУ, 2001. С.11−15.
  3. Г. Н., Жерелова О. М., Катаев А. А. Ионные каналы клеток харовых водорослей // Биофизика. 1987. Т.32, № 6. С. 1011 -1027.
  4. А.А. Биологические мембраны и транспорт ионов. М.: Изд-во МГУ, 1985. 208 с.
  5. А.А. Определение неорганического фосфата // Транспортные аденозинтрифосфатазы. Современные методы исследования / Под ред. А. А. Болдырева. М.: МГУ, 1977. С. 179−181.
  6. Бос Д. Ч. Избранные произведения по раздражимости растений. М.: Наука, 1964. Т. 1.427 е., Т.2. 395 с.
  7. Д.Б., Воробьев Л. Н., Мельников П. В. К±термодинамический потенциал и дискретные уровни мембранных потенциалов корневых клеток Trianea bogotensisll Докл. АН СССР. 1974. Т. 215, № 6. С.1501−1504.
  8. В.А. Первичная биоэлектрическая реакция клеток тыквы при воздействии высоких концентраций ионов кальция // Биосистемы: Структура и регуляция / Под ред. Г. А. Ануфриева. Н. Новгород: ННГУ, 2000. С.132−141.
  9. Л.Н. Регулирование ионного транспорта: теоретические и практические аспекты минерального питания растений // Итоги науки и техники. Сер. Физиология растений. 1988. Т.5. М.: ВИНИТИ. С.5−77.
  10. Л.Н. Регулирование мембранного транспорта в растениях // Ионный транспорт в растениях. Итоги науки и техники. Сер. Физиология растений. 1980. Т.4. М.: ВИНИТИ. 179 с.
  11. Э.И., Синюхин A.M. Влияние ионов калия на генерацию и проведение потенциалов действия в проводящих пучках стебля тыквы (Cucurbits реро L.) // Физиол. растений. 1967. Т. 14, № 5. С.823−833.
  12. Л.М., Трофимова М. С., Молотковский Ю. Г. Протонный контроль электрогенной Н±АТФазы в везикулах плазматических мембран из клеток суспензионной культуры сахарной свеклы II Докл. АН СССР. 1987. Т.292, № 3. С. 759−762.
  13. Р. Биомембраны: молекулярная структура и функции. М.: Мир, 1997.624 с.
  14. И.И., Каменская К. И., Паничкин Л. А., Соколова Н. П. Мембранные потенциалы клеток различных тканей стебля тыквы // Известия ТСХА. 1977. № 2. С.209−213.
  15. И.И., Каменская К. И., Паничкин Л. А. Влияние состава внешней среды на потенциалы действия стебля тыквы // Известия ТСХА. 1978. № 2. С. 16−20.95
  16. И.И., Паничкин Л. А. Водно-ионные потоки и передача возбуждения у растений // Известия ТСХА. 1969. № 4. С.3−13.
  17. И.И., Синюхин A.M. Распространяющаяся волна возбуждения у высших растений //Докл. АН СССР. 1962. Т.142, № 4. С. 954−956.
  18. Г. Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов. М.: Наука, 1989. 274 с.
  19. А.И. Электрофизиология опыления у высших растений (на примере кукурузы). Кишинев: Штиинца, 1973.100с.
  20. Г. Н., Цаплев Ю. Б. Природа электрической полярности высшего растения // Биофизика. 1980. Т.25, № 1. С. 144−147.
  21. Н.Г., Новак В. А. Локализация редокс-реакций в плазмалемме клеток листа элодеи // Stud. Biophys. 1981. V. 83, N3. Р.197−206.
  22. ИостХ. Физиология клетки М.: Мир, 1975. 864 с.
  23. Я. Биомембраны. М.: Высш. шк., 1985. 303 с.
  24. Г. Т., Арцуни И. Г., Паносян Г. А. Мембранный потенциал клеток алейронового слоя семян пшеницы // Физиол. растений. 1981. Т.28, № 6. С.1174−1180.
  25. В.А., Опритов В. А. Протонно-калиевый обмен при генерации АТФ-зависимого градиента рН в везикулах плазматических мембран клеток флоэмы высших растений // Биофизика. 1985. Т. ЗО, № 1. С.76−78.
  26. В.А., Опритов В. А., Швец И. М., Сидоркин В. Г., Фирсова И. А. О типах АТФаз плазматических мембран клеток флоэмы борщевика Heracleum sosnovskyi II Докл. АН СССР. 1979 б. Т.248, № 6. С. 1510−1513.
  27. К.И., Слесак Е. Влияние содержания калия и кальция в питательном растворе на параметры потенциалов действия у растений // Известия ТСХА. 1981. № 6. С. 180−183.96
  28. С.Н. Микроэлектроды // Приборы и методы для микроэлектродного исследования клеток / Под ред. Б. Н. Вепринцева. Пущино, 1975. С.62−83.
  29. С.В. Структурная лабильность биологических мембран и регуля-торные процессы. Мн.: Наука и техника, 1987. 240 с.
  30. Е.Б., Верховская М. Л. Редокс-компоненты в плазмалемме растительных клеток// Физиол. растений. 1984. Т.31, № 3. С.496−501.
  31. Г. Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1973. 343 с.
  32. Г. Г., Красанова М. С., Лялин О. О. О роли различных тканей стебля в передаче возбуждения II Физиол. растений. 1973. Т.20, № 3. С.442−450.
  33. B.C., Пастушенко В. Ф., Чизмаджев Ю. А. Теория возбудимых сред. М.: Наука, 1981. 276 с.
  34. С.С. Электрофизиология растений. СПб.: Изд-во СПбГУ, 1998.184 с.
  35. С.С., Маркова И. В. Роль ионов Са2+ при передаче сигналов в клетках растений // Вестник ННГУ им. Н. И. Лобачевского. Сер. Биол. Материалы выезд, сессии ОФР РАН по пробл. биоэлектрогенеза и адаптации. Н. Новгород: ННГУ, 2001. С.20−25.
  36. Н.Е., Тихая Н. И., Чаплыгина Н.С. Na++K+ -Атфазная активность изолированных мембран побегов галофита Halocnemum Strobilaceum И Физиол. растений. 1979. Т.26, № 3. С.541−547.
  37. В.А., Иванкина Н. Г. Зависимость светоиндуцированного внутриклеточного электрического потенциала элодеи от процессов фотосинтеза // Цитология. 1977. Т. 19, № 5. С.508−513.
  38. В.А. Распространяющееся возбуждение у высших растений // Успехи современной биологии. 1977. Т.83, № 3. С.442−458.
  39. В.А. Функциональные аспекты биоэлектрогенеза у высших растений: 59-е Тимирязевское чтение. Н. Новгород: Изд-во ННГУ, 1998. 46 с.97
  40. В.А., Калинин В. А., Ретивин В. Г. Теоретические основы и методы изучения биофизических процессов у растений. Горький: ГГУ, 1979. 54 с.
  41. В.А., Пятыгин С. С. Уровни мембранных потенциалов клеток стебля тыквы при изменении температуры среды // Ферменты, ионы и био-электрогенез у растений. Горький: Горьк. ун-т. 1984. С.51−54.
  42. В.А., Пятыгин С. С., Воденеев В. А. Непосредственное сопряжение генерации потенциала действия в клетках высшего растения Сисиг-bita реро L. с работой электрогенного насоса // Физиол. растений. 2002. Т.49, № 1. С.160−165.
  43. В.А., Пятыгин С. С., Ретивин В. Г. Биоэлектрогенез у высших растении. М: Наука, 1991. 216 с.
  44. В.А., Пятыгин С. С., Ретивин В. Г. Возникновение потенциалов действия у высших растений в ответ на незначительное локальное охлаждение // Физиол. растений. 1982. Т.29, № 2. С.338−344.
  45. В.А., Пятыгин С. С., Ретивин В. Г. Участие электрогенного ионного насоса возбудимой мембраны в формировании потенциала действия у высших растений //Докл. АН СССР. 1988. Т.300, № 2. С.466−468.
  46. В.А., Ретивин В. Г. О механизме распространяющегося возбуждения у высших растений // Физиол. растений. 1982. Т.29, № 5. С.915−924.
  47. В.А., Ретивин В. Г. Регистрация потенциалов действия у высших растений // Методы изучения мембран растительных клеток / Под ред. В. В. Полевого. Л.: Изд-во ЛГУ, 1986. С.96−111.
  48. В.А., Щвец И.М. Na+, К±АТФаза плазматических мембран клеток флоэмы высших растений // Передвижение ассимилятов в растениях и проблема сахаронакопления / Под ред. А. Л. Курсанова. Фрунзе: изд-во «Илим», 1986. С.267−275.
  49. В.В., Шарова Е. И., Танкелюн О. В. О роли Н±помпы в действии ИУК на биопотенциал и рост отрезков колеоптилей кукурузы // Физиол. растений. 1989. Т.36, № 5. С.998−1002.98
  50. С.С. Электрогенез клеток высшего растения при адаптации к охлаждению: Дисс.. докт. биол. наук. Пущино: ИБК РАН, 2001. 292 с.
  51. С.С., Опритов В. А. Анализ температурной зависимости электрогенной компоненты мембранного потенциала у Cucurbita реро // Биофизика. 1987. Т.32, № 4. С.656−659.
  52. С.С., Опритов В. А., Абрамова Н. Н., Воденеев В. А. Первичная биоэлектрическая реакция клеток высшего растения на комбинированное действие стресс-факторов различной природы // Физиол. растений. 1999а. Т.46, № 4. С.610−617.
  53. С.С., Опритов В. А., Воденеев В. А. Доказательство стабилизации величины мембранного потенциала клеток высшего растения при участии электрогенного насоса плазмалеммы // Вестник ННГУ им. Н. И. Лобачевского. Сер. Биол. 2001. Вып. 1 (2). С. 187−189.
  54. С.С., Опритов В. А., Крауз В. О., Абрамова Н. Н., Воденеев В. А. Биоэлектрическая активность клеток высшего растения при химическом стресс-воздействии // Вестник ННГУ им Н. И. Лобачевского. Сер. Биол. Н. Новгород: ННГУ, 19 996. Вып.1. С. 119−123.
  55. С.С., Опритов В. А., Половинкин А. В., Воденеев В. А. О природе генерации потенциала действия у высших растений // Докл. АН. 1999 В. Т.36, № 3, с. 404−407.99
  56. С.С., Опритов В. А., Худяков В. А., Гнездилов А. В. Природа температурной зависимости потенциала покоя холодочувствительного растения Cucurbita // Физиология растений. 1989. Т.36, № 1. С. 118−125.
  57. В.Г. Ионный механизм генерации потенциала действия в проводящих тканях стебля высшего растения: Автореф. дис.. канд. биол. наук. М., 1988. 23 с.
  58. В.Г., Опритов В. А. Анализ электрохимических градиентов по-тенциалопределяющих ионов в клетках проводящих тканей тыквы в покое и при возбуждении//Физиол. растений. 1986. Т. ЗЗ, № 3. С.447−459.
  59. В. Г., Опритов В, А Кабельные свойства стебля высшего растения II Физиол. растений. 1987. Т.34, № 1. С.5−12.
  60. В.Г., Опритов В. А., Федулина С. Б. Предадаптация тканей стебля Cucurbita реро к повреждающему действию низких температур, индуцированная потенциалом действия // Физиол. растений. 1997. Т.44, № 4. С.499−510.
  61. В.Г., Федосеев В. В. Влияние блокаторов ионной проницаемости на биоэлектрические реакции изолированных проводящих пучков стебля тыквы // Мембранный транспорт и биоэлектрогенез у растений. Горький: Горьк. ун-т. 1987. С.55−63.
  62. Н.П., Ясинковский В. Г., Зубарев Т. Н. Уровни мембранного потенциала у клетки ацетабулярии // Биофизика. 1976. Т.21, № 4. С.656−660.
  63. А.Б. Биофизика. М.: Высш. шк., 1987. Кн.2. 303 с.
  64. A.M. Электрофизиологические исследования клеток флоэмы высших растений // Известия ТСХА. 1964. № 3. С. 59−70.100
  65. A.M., Горчаков В. В. Потенциалы действия высших растений, не обладающих моторной активностью// Биофизика. 1966. Т.11, № 5. С. 840 846.
  66. A.M., Горчаков В. В. Роль проводящих пучков стебля в передаче раздражения на расстояние с помощью биоэлектрических импульсов // Физиол. растений. 1968. Т. 15, № 3. С.477−487.
  67. И.А. Метаболизм растений при стрессе. Казань: Фэн, 2001. 448 с.
  68. Дж. Введение в теорию ошибок. М.: Мир, 1985. 272 с.
  69. Н.И., Максимов Г. Б. Выделение плазмалеммы из растительных клеток // Методы изучения мембран растительных клеток / Под ред. В. В. Полевого. Л.: Изд-во ЛГУ, 1986. С.20−29.
  70. Н.И., Максимов Г. Б., Коренькова Н. В., Вахмистров Д. Б. Полная активность К, Мд-АТФазы и ориентация везикул мембранных препаратов растительных клеток//Физиол. растений. 1984а. Т.31, № 5. С. 882−888.
  71. Н.И., Максимов Г. Б., Мишустина Н. Е., Куркова Е. Б., Батов А. Ю., Семенова Т. В., Тазабаева К. А., Вахмистров Д. Б. Катионзависимая АТФазная активность мембран, изолированных из корней кукурузы // Физиол. растений. 19 846. Т.31, № 2. С.221−228.
  72. .И. Общая физиология возбудимых мембран. М.: Наука, 1975.408 с.
  73. Abe Т. Chloride ion efflux during an action potential in the main pulvinus of Mimosa pudica/l Bot.Mag.(Tokio) 1981. V.94, № 1036. P.379−383.
  74. Adamec L. The comparison between membrane and transorgan electric potentials in Chenopodium rubrum: The methods // Biol. Plant. 1989. V.31, № 5. P.327−335.
  75. Barbier-Brygoo H., Vinauger M" Colcombet J., Ephritikhine G., Frachisse J., Maurel C. Anion channels in higher plants: functional characterization, molecular structure and physiological role // Biochim. et Biophys. Acta. 2000. V.1465, № 1. P.199−218.
  76. Barr R. The effect of inhibitors of plasma membrane redox reactions on proton excretion by plant cells // Physiol, plant. 1988. V.73, № 1. P. 194−199.
  77. Beilby M.J. Calcium and plant action potential // Plant, Cell and Environ. 1984. V.7. P.415−421.
  78. Bennet A.B., O’Neill S.D., Spanswick R.M. H±ATPase activity from storage tissue of Beta vulgaris. 1. Identification and characterization of an anion-sensitive H±ATPase // Plant Physiol. 1984. V.74, № 3. P.538−544.
  79. Bentrup F.-W. Botanische Elektrophysiologie. Vom Phanomen zum moleku-laren Mechanismus // Naturwissenschaften. 1985. V.72, № 4. P. 169−179.
  80. Bentrup F.-W. Potassium ion channels in the plasmalemma // Physiol. Plant. 1990. V.79. P.705−711.
  81. Blatt M R. Reassessing roles for Ca2+ in guard cell signaling // J. Exp. Bot. 1999. V.50. P.989−999.
  82. Bowman J.B. Effects of inhibitors on the plasma membrane and mitochondrial adenosine triphosphatase of Neurospora crassa II Biochim. et Biophys. Acta. 1978. V.512, № 1. P. 13−28.
  83. Bown A.W., Craufold L.A. Evidence that H+ efflux stimulated by redox activity is independent on plasma membrane ATPase activity // Physiol, plant. 1988. V.73, № 1. P. 170−174.
  84. Briskin D.P., Basu S., Assmann S.M. Characterization of the red beet plasma membrane H±ATPase reconstituted in a planar bilayer system // Plant Physiol. 1995. V.108, № 1. P.393−398.
  85. Briskin D.P., Gawieowski M.C. Role of the plasma membrane H±ATPase in K+ transport // Plant Physiol. 1996. V. 111. P. 1199−1207.
  86. Bush D.R., Sze H. Calcium transport in tonoplast and endoplasmic reticulum vesicles isolated from cultured carrot cells // Plant Physiol. 1986. V.80, № 2. P.549−555.
  87. Bushmann P., Sack H., Kohler A.B., Dahse I. Modeling plasmalemma ion transport of the aquatic plant Egeria densa // J. Membrane Biol. 1996. V.154, № 2. P.109−118.102
  88. Cheeseman J.M., LaFayette P.R., Gronewald J.W., Hanson J.B. Effect of ATPase inhibitors on cell potentials and K±influx in corn roots // Plant Physiol. 1980. V.65, № 6. P. 1139−1145.
  89. Cheeseman J.M., Pickard B.G. Electrical characteristics of cells from leaves of Lycopersicon И Can. J. Bot. 1977. V.55, № 5. P. 497−510.
  90. Chrispeels M.J., Crawford N.M., Schroeder J.I. Proteins for transport of water and mineral nutrients across the membranes of plant cells // Plant Cell. 1999. V.11. P.661−675.
  91. Czempinski K., Gaedeke N., Zimmermenn S., Muller-Rober B. Molecular mechanisms and regulation of plant ion channels // J. Exp. Bot. 1999. V.50. P.955−966.
  92. Davies E. Action potentials as multifunctional signals in plants: a unifying hypothesis to explain apparently disparate wound responses // Plant, Cell and Environ. 1987. V.10, № 8. P. 623−631.
  93. De Nisi P., Dell’Orto M., Pirovano L., Zocchi G. Calcium-dependent phosphorylation regulates the plasma-membrane H±ATPase activity of maize (Zea mays L.) roots // Planta. 1999. V.209, № 1. P.187−194.
  94. Dunlop J. Membrane potentials in the xylem in roots of intact plants // J. Exp. Bot. 1982. V. 33, N 136. P. 910−918.
  95. Evans D.E., Williams L.E. P-type calcium ATPases in higher plants biochemical, molecular and functional properties // Biochim. et Biophys. Acta. 1998. V.1376, № 1. P.1−25.
  96. Felle H. The Н+/СГ symporter in root-hair cells of Sinapis alba. An electrophysiological study using ion-selective microelectrodes // Plant Physiol. 1994. V.106, № 3. P.1131−1136.
  97. Fleurat-Lessard P., Bouche-Pillon S., Leloup C., Bonnemain J.-L. Distribution and activity of the plasma membrane H±ATPase in Mimosa pudica L. in relation to ionic fluxes and leaf movements // Plant Physiol. 1997. V.113. P.747−754.
  98. Frachisse J.-M., Thomine S., Colcombet J., Guern J., Barbier-Brygoo H. Sulfate is both a substrate and an activator of the voltage-dependent anion channel of Arabidopsis hypocotyl cells // Plant Physiol. 1999. V.121. P.253−261.
  99. Fromm J., Bauer T. Action potentials in maize sieve tubes change phloem translocation//J. Exp. Bot. 1994. V.45, № 273. P.463−469.
  100. Fromm J., Eschrich W. Electric signals released from roots of willow (Salix vimvnalis L.) change transpiration and photosynthesis // J. Plant Physiol. 1993. V.141, № 6. P.673−680.
  101. Fromm J., Spanswick R. Characteristics of action potentials in willow (Salix viminalis L.) // J. Exp. Bot. 1993. V.44, № 264. P.1119−1125.
  102. Gerhardt В., Beevers H. Influence of sucrose on protein determination by the Lowry procedure //Analit. Biochem. 1969. V. 23, N. 1. P. 193−195.
  103. D. «Metabolic» action potentials in Acetabularia II J. Membrane Biol. 1976. Vol.29, № 1. P.23−45.
  104. Gradmann D., Hoffstadt J. Electrocoupling of ion transporters in plants: interaction with internal ion concentrations // J. Membrane Biol. 1998. V.166, № 1. P.51−59.
  105. Higinbotham N., Graves J.S., Davis R.F. Evidence for an electrogenic ion transport pump in cells of higher plants // J. Membrane Biol. 1970. V.3, № 3. P.210−222.
  106. Ikoma S., Okamoto H. The quantitative and chronological relationship between lAA-induced H±pump activation and elongation growth studied by means of xylem perfusion // Plant Cell Physiol. 1988. V.29. P.261−267.
  107. Katou K. Distribution of electric potential and ion transport in the hypocotyls of Vigna sesquipedalis V. Electrogenic activity of the parenchyma cells in hypo-cotyl segments // Plant and Cell Physiol. 1978. V.19, № 4. P.523−535.
  108. Klusener В., Weiler E.W. A calcium-selective channel from root-tip en-domembranes of garden cress // Plant Physiol. 1999. V.119. P. 1399−1405.
  109. Knight H., Trewavas A.J., Knight M.R. Cold calcium signaling in Arabidopsis involves two cellular pools and a change in calcium signature after acclimation // Plant Cell. 1996. V.8. P.489−503.
  110. Knight M.R., Campbell A.K., Smith S.M., Trewavas A.J. Transgenic plant aequorin reports the effects of touch and cold-shock and elicitors on cytoplasmic calcium // Nature. 1991. V.352. P.524−526.
  111. Kojima H., Katou K., Okamoto H. Homeostatic regulation of membrane potential by an electrogenic ion pump against change in the K+ concentration of the extra- and intra-organ perfusion solutions // Plant Cell Physiol. 1985. V.26, № 2. P.351−359.
  112. Kourie J.I. Transient СГ and K+ currents during action potential in Chara inflate. Effects of External sorbitol, cations, and ion channel blockers // Plant Physiol. 1994. V.106, № 2. P.651−660.
  113. Krol E., Trebacz K. Ways of ion channel gating in plant cells // Annals of Botany. 2000. V.86. P.449−469.
  114. Lainson R., Field C.D. Electrical properties of Valonia ventricosa // J. Membrane Biol. 1976. V.29, № 1−2. P.81−94.
  115. Leonard R.T., Hodges Т.К. Characterization of plasma membrane-associated adenosine triphosphatase activity of oat roots // Plant Physiol. 1973. V. 52, N1. P. 6−12.
  116. Lin W., Hanson J.B. Cell potentials, cell resistance, and proton fluxes in corn root tissue. Effects of dithioerythritol // Plant Physiol. 1976. V.58. P. 276 282.105
  117. Lino В., Baizabal-Aguirre V.M., Gonsales de la Vara L.E. The plasma-membrane H±ATPase from beet root is inhibited by a calcium-dependent phosphorylation // Planta. 1998. V.204, № 3. P.352−359. ч
  118. Lowry O.H. Rosebrough N.G., Farr A.L., Randall R.G. Protein measurement with the Folin phenol reagent//J. Biol. Chem. 1951. V. 193, N 1. P. 265−275.
  119. Lunevsky V.Z., Zherelova O.M., Vostrikov I.Y., Berestovsky G.N. Excitation of characeae cell membranes as a result of activation of calcium and chloride channels // J. Membrane Biol. 1983. V.72, № 1. P.43−58.
  120. Maathuis F.J.M., Ichida A.M., Sanders D., Schroeder J.I. Roles of higher plant K+channels//Plant Physiol. 1997. V.114. P.1141−1149.
  121. Maathuis F.J.M., Sanders D. Plant membrane transport // Curr. Opin. Cell Biol. 1992. V.4, № 4. P.661−669.
  122. Maathuis F.J.M., Sanders D. Plasma membrane transport in context making sense out of complexity// Cur. Opin. Plant Biol. 1999. V.2, № 3. P.236−243.
  123. Maeshima M. Tonoplast transporters: organization and function // Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 2001. V.52. P.469−497.
  124. Mancuso S. Hydraulic and electrical transmission of wound-induced signals in Vitis vinifera //Aust. J. Plant Physiol. 1999. V.26, № 1. P.55−61.
  125. Marty-Fleurence F.St., Bourdil I., Rossignol M., Blein J.-P. Active vanadate-sensitiven H+ translocation in corn roots membrane vesicles and proteolipo-somes // Plant Sci. 1988. V.54, N3. P. 177−184.
  126. Michelet В., Boutry M. The plasma membrane H±ATPase. A highly regulated enzyme with multiple physiological functions // Plant Physiol. 1995. V.108, № 1. P.1−6.
  127. Moran M., Ehrenstein G., Iwasa K., Mischke C., Bare C., Satter R.L. Potassium channels in motor cells of Samanea saman II Plant Physiol. 1988. V.88, № 3. P.643−648.
  128. Morsomme P., Boutry M. The plant plasma membrane H±ATPase: structure, function and regulation // Biochim. et Biophys. Acta. 2000. V.1465, № 1. P.1−16.106
  129. Ohki S. The origin of electrical potential in biological systems // Comprehensive Treatise Electrochem. 1985. V. 10. P. 1 -130.
  130. Palmgren M.G., Harper J.F. Pumping with plant P-type ATPases II J. Exp. Bot. 1999. V.50. P.883−893.
  131. Paszewski A., Zawadzki Т., Dziubinska H. Higher plant biopotentials and the integration of biological sciences // Folia Soc. Scient. Lublin. Biol. 1977. V.19, № 2. P.95−116.
  132. Pickard B.G. Action potentials in higher plants II Bot. Review. 1973. V.39, № 2. P. 172−201.
  133. Pineros M., Tester M. Calcium channels in higher plant cells: selectivity, regulation and pharmacology//J. Exp. Bot. 1997. V. 48. P.551−577.
  134. Pyatygin S.S., Opritov V.A., Khudyakov V.A. Subthreshold changes in excitable membranes of Cucurbita pepo L. stem cells during cooling-induced action-potential generation // Planta. 1992. V.186, № 2. P. 161−165.
  135. Rasi-Coldongo F., Pugliarello M.C., De Michelis M.J. The Ca2±transport ATPase of plant plasma membrane catalyzes a nH+/Ca2+ exchange // Plant Physiol. 1987. V.83, № 4. P.944−1000.
  136. Reddy A.S.N. Calcium: silver bullet in signaling // Plant Sci. 2001. V.160. P.381−404.
  137. Rob M., Roelfsema G., Prins H.B.A. Ion channels in guard cells of Arabi-dopsis thaliana (L.) heynh. // Planta. 1997. V.202, № 1. P. 18−27.
  138. Rodrigues-Navarro A. Potassium transport in fungi and plants // Biochim. et Biophys. Acta. 2000. V.1469, № 1. P. 1−30.107
  139. Samejima M., Sibaoka Т. Changes in the extracellular ion concentration in the main pulvinus of Mimosa pudica during rapid movement and recovery // Plant and Cell Physiol. 1980. V. 21, № 3. P.467−479.
  140. Samejima M., Sibaoka T. Membrane potentials and resistances of excitable cells in the petiole and main pulvinus of Mimosa pudica II Plant and Cell Physiol. 1982. V.23, № 3. P.459−465.
  141. Sanders D., Brownlee C., Harper J.F. Communicating with Calcium // Plant Cell. 1999. V.11. P.691−706.
  142. Schachtman D.P. Molecular insights into the structure and function of plant K+ transport mechanisms II Biochim. et Biophys. Acta. 2000. V.1465, № 1. P.127−139.
  143. Schauf C.L., Wilson K.J. Properties of single K+ and СГ channels in Ascle-pias tuberosaprtoplast // Plant Physiol. 1987. V.85, № 2. P.413−418.
  144. Schoenmakers T.J.M., Visser G.J., Flik G., Theuvent A.P.R. CHELATOR: An improved method for computing metal ion concentrations in physiological solutions// Bio.Techniques. 1992. V.12. P.870−879.
  145. Schroeder J.I. Quantitative analysis of outward rectifying K+ channel currents in guard cell protoplasts from Vicia faba II J. Membrane Biol. 1989. V.107, № 3. P.229−235.
  146. Schroeder J.I., Hedrich R., Fernandez J.M. Potassium-selective single channels in guard cell protoplasts of Vicia faba II Nature. 1984. V.312. P.361−364.
  147. Shiina Т., Tazawa M. Action potential in Luffa cylindrica and its effects on elongation growth // Plant Cell Physiol. 1986. V.27, № 6. P. 1081−1089.
  148. Sibaoka T. Excitable cells in Mimosa И Science. 1962. V.137, № 3525. P.226.
  149. Sibaoka T. Rapid plant movements triggered by action potentials // Bot. Mag. Tokyo. 1991. V.104, № 1. P.73−95.
  150. C.L., Long W.S., Gradmann D. «Action potentials» in Neurospora crassa, a mycelial fungus // Biochim. et Biophys. Acta. 1976. V. 426, № 4. P.732−744.
  151. Stokes D.L., Aueer M., Zhang P., Kuhlbrandt W. Comparison of H±ATPase and Ca2±ATPase suggests that a large conformational change initiates P-type ion pump reaction cycles//Current Biology. 1999. V.9, № 13. P.672−679.
  152. Sze H. H±translocating ATPases: advances using membrane vesicles // Annu. Rev. Plant Physiol. 1985. V.36. P. 175−208.
  153. Sze H., Churchill K.A. Mg/KCI-ATPase of plant plasma membrane is an electrogenic pump. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. V.78. P. 5578−5582.
  154. Sze H., Li X., Palmgren M.G. Energization of plant cell membranes by H±pumping ATPases: regulation and biosynthesis // Plant Cell. 1999. V.11, № 4. P.677−689.
  155. Thibaud J.-B., Soler A., Grignon C. H+ and K+ electrogenic exchanges in corn roots // Plant Physiol. 1986. V.81, № 3. P.847−853.
  156. Thuleau P., Ward J.M., Ranjeva R., Schroeder J.I. Voltage-dependent calcium-permeable channels in the plasma membrane of a higher plant cell // EMBO J. 1994. V.13, № 13. P.2970−2975.
  157. Trebacz K., Simonis W., Schonknecht G. Cytoplasmic Ca2+, K+, and N03~ activities in the liverwort Conocephalum conicum L. at rest and during action potentials // Plant Physiol. 1994. Vol.106, № 3. P.1073−1084.
  158. Trebacz K., Tarnecki R., Zawadzki T. The effect of ionic channel inhibitors and factors modifying metabolism on the excitability of the liverwort Conocephalum conicum II Physiol. Plant. 1989. V.75, № 1. P.24−30.
  159. Trewavas A. Le calcium, c’est la vie: calcium makes waves // Plant Physiol. 1999. V.120, № 1. P.1−6.
  160. Ueoka-Nakanishi H., Maeshima M. Quantification of Ca2+/H+ Antiporter VCAXIp in Vacuolar Membranes and Its Absence in Roots of Mung Bean // Plant Cell Physiol. 2000. V.41, № 9. P. 1067−1071.109
  161. Volkov A.G. Green plants: electrochemical interfaces // J. Electroanalytical Chemistry. 2000. V.483, № 1. P.150−156.
  162. White P.J. Calcium channels in the plasma membrane of root cells // Annals of Botany. 1998. V.81, № 1. P. 173−183.
  163. Zawadzki Т., Trebacz K. Extra- and intracellular measurements of action potentials in the liverwort Conocephalum conicum // Physiol. Plant. 1985. V.64. P. 477−481.
  164. Zimmerman S., Ehrhardt Т., Plesch G., Muller-Rober B. Ion channels in plant signaling // Cell. Mol. Life Sci. 1999. V.55, № 1. P. 183−203.
  165. Zimmerman S., Sentenac H. Plant ion channels: from molecular structures to physiological functions // Cur. Opin. Plant Biol. 1999. V.2, № 6. P.477−482.
Заполнить форму текущей работой