Помощь в учёбе, очень быстро...
Работаем вместе до победы

Разработка и апробация тест-систем на основе гелевых биочипов для изучения генетического полиморфизма человека

Диссертация: Разработка и апробация тест-систем на основе гелевых биочипов для изучения генетического полиморфизма человека
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Сердечно-сосудистая патология является самой распространенной причиной смертности во всем мире. Изучение патогенеза и диагностика генетической предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям имеет большое значение не только для фундаментальной медицинской науки, но и становиться важным инструментом, для решения задач профилактической (предиктивной) медицины. Уже на сегодняшний день для… Читать ещё >

Содержание

  • Список сокращений
  • Глава I. 1 Обзор литературы
    • 1. 1. Микрочипы в диагностике и научных исследованиях
      • 1. 1. 1. Нанотехнологии на основе биологических микрочипов
      • 1. 1. 2. Перспективные методы анализа генетического полиморфизма
      • 1. 1. 3. Биочипы для изучения генетической предрасположенности
    • 1. 2. Изучение генетического полиморфизма репин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой системы
      • 1. 2. 1. Генетический полиморфизм и сердечно-сосудистая система
        • 1. 2. 1. 1. Определение генетического полиморфизма. Его значение в современной медицинской генетике
        • 1. 2. 1. 2. Сердечно-сосудистые заболевания
        • 1. 2. 1. 3. Гены «предрасположенности» к сердечно-сосудистым заболеваниям
      • 1. 2. 2. Артериальная гипертензия
        • 1. 2. 2. 1. Этиология и патогенез
        • 1. 2. 2. 2. Формирование представлений о генетической природе артериальной гипертензии
      • 1. 2. 3. Ренин-ангиотензиповая и кинин-брадикининовая системы
      • 1. 2. 4. Гены «предрасположенности» к артериальной гипертензии
        • 1. 2. 4. 1. Рении
        • 1. 2. 4. 2. Ангиотензиноген
        • 1. 2. 4. 3. Ангиотензинпревращающий фермент
        • 1. 2. 4. 4. Рецептор 1 к аигиотензину II
        • 1. 2. 4. 5. Рецептор 2 к аигиотензину II
        • 1. 2. 4. 6. Рецептор 2 к брадикинину
      • 1. 2. 5. Комплексное изучение ассоциации полиморфизма генов ренин-ангиотензиновой системы с предрасположенностью к артериальной гипертензии
  • Глава II. 2 Материалы и методы
    • 2. 1. Характеристика исследуемых групп
    • 2. 2. Синтез олигонуклеотидов и изготовление микрочипов
    • 2. 3. Экстракция геномной ДНК из лимфоцитов периферической крови и клеток буккального эпителия
    • 2. 4. Проведение полимеразной цепной реакции
      • 2. 4. 1. Амплификация фрагментов ДНК для анализа методом ПААГ
      • 2. 4. 2. Амплификация фрагментов ДНК для анализа методом гибридизации на олигонуклеотидном биочипе
    • 2. 5. Анализ ПЦР продуктов методом ПААГ
    • 2. 6. Визуализация ПЦР продуктов в агарозном геле
    • 2. 7. Гибридизация меченого продукта на микрочипе
    • 2. 8. Регистрация изображения и его обработка
      • 2. 8. 1. Анализ «фармакогенетического биочипа»
      • 2. 8. 2. Анализ «кардиочипа»
    • 2. 9. Статистическая обработка данных
  • Глава III. 3 Результаты и обсуждение
    • 3. 1. Разработка алгоритма создания биочип-тест-систем для анализа генетического полиморфизма человека
      • 3. 1. 1. Создание «фармакогенетического биочипа»
        • 3. 1. 1. 1. Выбор генов и полиморфных вариантов
        • 3. 1. 1. 2. Выбор нуклеотидных последовательностей и длин ПЦР продуктов, последовательностей концевых праймеров и последовательностей иммобилизованных олигонуклеотидных зондов
    • 4. 3.1.1.3 Особенности проведения мультиплексной ПЦР и гибридизации
      • 3. 1. 1. 4. Конструирование биочипа. Блочный подход
        • 3. 1. 1. 5. Блочная организация микрочипа
        • 3. 1. 1. 6. Анализ контрольных и диагностических образцов. Специфичность и чувствительность метода
        • 3. 1. 1. 7. Алгоритм создания биочипов для анализа генетического полиморфизма
      • 3. 2. Создание «кардиочипа»
        • 3. 2. 1. Выбор генов и полиморфных вариантов
        • 3. 2. 2. Схема и структура микрочипа
        • 3. 2. 3. Анализ контрольных и диагностических образцов
      • 3. 3. Сравнение метода гибридизации на биочипах с классическими методами анализа генетического полиморфизма
      • 3. 4. Применение биочипов в медицине и биологии
      • 3. 5. Анализ полиморфизма генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой систем у больных артериальной гипертензией и в контроле
        • 3. 5. 1. Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов у детей, больных артериальной гипертонией, и в контроле
          • 3. 5. 1. 1. Аиализ соответствия распределений закону Харди-Вайнберга
          • 3. 5. 1. 2. Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей изученных генов
        • 3. 5. 2. Анализ ассоциации показателей ИМТ, САД, ДАД и генотипов изученных генов у детей, больных артериальной гипертонией
        • 3. 5. 3. Корреляционный анализ взаимосвязи генотипов изученных генов, 4 ИМТ, САД и ДАД у детей, больных артериальной гипертонией, и в контроле
        • 3. 5. 4. Комплексный анализ ренин-апгиотензиновой и кинин-брадикининовой систем у детей, больных артериальной гипертонией, и в контроле

Разработка и апробация тест-систем на основе гелевых биочипов для изучения генетического полиморфизма человека (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Лавинообразное нарастание интереса к изучению генетической предрасположенности требует разработки новых подходов к идентификации и анализу ДНК-полиморфизма. Современное развитие науки невозможно без создания новых технологий, позволяющих’проводить анализ множества генетических изменений одновременно. Одним из наиболее перспективных методов для решения этой задачи является метод мультиплексной ПЦР с дальнейшей гибридизацией на олигонуклеотидной матрице (Kolchinsky and Mirzabekov, 2001; Nasedkina et al, 2003; Колчинский и др., 2005; Wang et al, 2005).

Сердечно-сосудистая патология является самой распространенной причиной смертности во всем мире. Изучение патогенеза и диагностика генетической предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям имеет большое значение не только для фундаментальной медицинской науки, но и становиться важным инструментом, для решения задач профилактической (предиктивной) медицины. Уже на сегодняшний день для многих социально-значимых заболеваний сердечно-сосудистой системы, таких как артериальная гипертензия, ишемическая болезнь сердца, инфаркт миокарда, атеросклероз и другие, показана ассоциация определенных полиморфных вариантов некоторых генов с данными болезнями (Нефедова и Шварц, 1998, Баранов и др., 2000, 2003; Иващенко и др., 2004, Babunova et al, 2003). Очевидно, что для более точной оценки роли генетического полиморфизма в этиологии заболевания необходимо использование системного подхода, заключающегося в выборе и анализе генов, продукты которых находятся в биохимически последовательно связанных реакциях. В связи с чем, особый интерес представляет изучение полиморфизма генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой систем, принимающих участие в регулировании артериального давления и обмене электролитов. Показано, что генетический подиморфизм данных систем существенно меняет их активность, что и является зачастую причиной сердечно-сосудистой патологии (Пузырев, 2003; Chistiakov et al., 1998, 2000; Rupert et al., 2003; Zhu et al., 2003; Naber et al., 2004a, b). С другой стороны большое значение имеет анализ генетического полиморфизма у больных в детском возрасте, где значительно сильнее проявляются внутренние — генетические факторы, накладывающиеся на факторы внешней среды во взрослом состоянии (Obraztsova et al., 1998).

Таким образом, разработка методических (биочипы) и методологических основ современного анализа генетического полиморфизма человека является актуальной проблемой современной молекулярной биологии и медицинской генетики.

Цель работы заключается в разработке тест-систем на основе гелевых биочипов для анализа генетического полиморфизма человека и их использование при изучении генетической предрасположенности к артериальной гипертензии у детей. Достижение этой цели предусматривало решение следующих задач:

1. Разработать алгоритм создания биочип-тест-систем для анализа генетического ч/ —, полиморфизма человека на примере детекции мутаций в генах CYP1A1 (48 870А, 4889A>G и 6235Т>С), CYP2D6 (1934G>A и 2637delA), GSTM1 (деления), GSTT1 (делеция), NAT2 (481Т>С, 590A>G и 857A>G), MTHFR (6770Т), CYP2C9 (4300Т и 10 750Т) и CYP2C19 (681G>A).

2. Разработать биочип для анализа генетического полиморфизма генов REN (19−83G>A), AGT (М235Т), AGTR1 (1166A>C), AGTR2 (3123C>A), BKR2 (-58T>C), MTHFR (677С>Т), ADRB2 (48A>G и 81C>G) («кардиочип»). 3. Проанализировать полиморфные варианты генов REN (I9−83G>A), AGT у.

М235Т), ACE (I/D), AGTR1 (1166A>C), AGTR2 (3123C>A), BKR2 (-58T>C и I/D) у детей, больных артериальной гипертензией, и в популяционном контроле. N.

Провести сравнительный анализ частот генотипов и аллелей генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикиииновой систем в подгруппах больных артериальной гипертензией с различными клиническими проявлениями. Провести комплексную оценку влияния полиморфизма генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой систем на развитие артериальной ги-пертензии у детей. у .^ ' ' ' ;

Выводы.

1. Предложенный алгоритм создания биочипов позволяет с высокой эффективностью разрабатывать тест-системы для анализа генетического полиморфизма человека.

2. Разработан «кардиочип» для идентификации полиморфных вариантов генов REN, AGT, AGTR1, AGTR2, MTHFR, BKR2, ADRB2.

3. Метод гибридизации на «кардиочипе» обладает высокой специфичностью (99%) и может быть предложен для использования при массовом скрининге образцов ДНК пациентов для изучения заболеваний сердечно-сосудистой системы.

4. Аллели генов BKR2 (С-аллель) и AGTR2 (Л-аллель) ассоциированы с развитием артериальной гипертензии у мальчиков.

5. Наличие вариантов генов REN (А-аллель и А/А генотип), AGT (Г-аллель) и АСЕ (.D-аллель) ассоциировано с формированием стабильной формы артериальной гипертензии у детей.

6. Показатели диастолического АД значимо выше у пациентов с Т/Т гепотипом гена AGT по сравнению с М/М и/или М/Т генотипами.

7. Комплексная оценка полиморфизма генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой систем подтверждает роль данных каскадов в развитии АГ и формировании стабильного АД.

Заключение

.

Лавинообразное нарастание интереса к изучению генетической предрасположенности к развитию социально значимых заболеваний требует разработки новых подходов к идентификации и анализу ДНК-полиморфизма. Современное развитие науки требует создание новых технологий, позволяющих проводить анализ множества генетических изменений одновременно. И в настоящий момент одним из наиболее перспективных методов для решения этой задачи является метод мультиплексной ПЦР с дальнейшей гибридизацией на олигонуклеотидной матрице. Нами предложен алгоритм создания биочипов для анализа генетического полиморфизма на примере детекции мутаций в генах CYP1A1 (4887С>А, 4889A>G и 6235Т>С), CYP2D6 (1934G>A и 2637delA), GSTM1 (делеция), GSTT1 (делеция), NAT2 (481Т>С, 590A>G и 857A>G), MTHFR (677С>Т), CYP2C9 (4300Т и 1075С>Т) и CYP2C19 (681G>A). На основе разработанного алгоритма нами создан биочип для анализа полиморфизма генов REN (I9−83G>A), AGT (М235Т), AGTRl (1166A>C), AGTR2 (31230A), BKR2 (-581>C), MTHFR (677C>T) и ADRB2 (48A>G и 81C>G) с целью изучения генетической предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям (артериальной гипертонии).

Как известно, основной причиной смертности на сегодняшний день является сердечно-сосудистая патология. Наиболее распространенные ее формы — ишемическая болезнь сердца и артериальная гипертония. И хотя в настоящее время достигнут большой прогресс в лечении сердечно-сосудистых заболеваний, разработки ученых, направленные на профилактику данных недугов представляются наиболее актуальным и востребованным направлением современной медицины. Основой его служит исследование генетической предрасположенности к развитию заболевания. Однако, учитывая то, что сейчас известно более 150 генов, полиморфизм которых влияет на развитие патологии сердца и сосудов, существует острая необходимость в разработке новых подходов к идентификации и анализу ДНК-полиморфизма. Разработка, создание и применение «кардиочипа» позволило существенно снизить трудоемкость и себестоимость анализа (в 2−3 раза), а также обеспечить высокий уровень современного исследования.

Наряду с новыми методиками и технологиями, не менее важным для медицинской генетики является разработка методологических основ анализа генетического полиморфизма, которая заключается, прежде всего, в адекватном выборе генов-кандидатов, групп обследуемых пациентов и методов анализа данных. Для выяснения роли генетических факторов в развитии артериальной гипертензии были выбраны полиморфные варианты генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой систем REN (I9−83G>A), AGT (М235Т), ACE (I/D), AGTR1 (1166A>C), AGTR2 (31230A), BKR2 (-58T>C и I/D), контролирующих уровень АД. Продукты, изученных нами генов, вовлечены в последовательно связанные биохимические реакции. С целью выяснения наследственной составляющей заболевания (и для исключения влияния факторов окружающей среды) наше исследования было проведено на образцах ДНК пациентов в молодом возрасте (9−17 лет).

В результате сравнительного анализа частот аллелей и генотипов изученных генов показано, что наличие АГ у мальчиков ассоциировано с аллелями генов, контролирующих заключительные этапы ренин-ангиотензинового и кинин-брадикининового каскада (BKR2 и AGTR2). Формирование стабильной АГ у детей вне зависимости от пола ассоциировано с аллелями и генотипами генов, контролирующих начальные этапы (REN, AGT и АСЕ). Таким образом, наличие закономерностей, обнаруженных у больных детей, в значительной степени свидетельствует о том, что развитие гипертонии, ее прогрессирование связано с генетическими факторами, а именно, с полиморфизмом ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовых систем.

Для оценки комплексного влияния полиморфизма изученных генов нами предложен подход на основе анализа суммы баллов. Применение данного подхода показало, что полиморфизм генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой систем оказывает существенное влияние на развитие АГ у мальчиков. С другой стороны, он в большей степени ответственен за формирование стабильно повышенного АД у девочек, чем у мальчиков. Кроме того, существенным плюсом такого подхода является то, что он позволяет сравнивать достаточно небольшие выборки по значительному числу полиморфных генов.

И хотя изучение генетической предрасположенности к различным мультфакториальным заболеваниям как область медицинской генетики быстро и активно развивается, становиться, очевидно, что ее совершенствование в будущем не возможно без развития методической базы, прежде всего, технологии биологических микрочипов, и выработки определенных методологических подходов, позволяющих анализировать полиморфизм по многим генам одновременно.

Показать весь текст

Список литературы

  1. A.A. Повышенное артериальное давление в детском и подростковом возрасте (ювенильная артериальная гипертония) // РМЖ. 1997. Т. 9. Стр. 559−565.
  2. B.C. Баранова Е. В. Иващенко Т.Э. Асеев М. В. Геном человека и гены «предрасположенности» (Введение в предиктивную медицину) // СПб. Интермедика. 2000.263с.
  3. B.C., Баранова Е. В., Иващенко Т. Э. Научные основы предиктивной медицины. Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике // Новосибирск. Альта Виста. 2003. Стр. 3−19.
  4. И.П. Первичная артериальная гипертензия у детей и подростков // Вопросы современной педиатрии. 2003. Т. 2(3). Стр. 68−71.
  5. A.C., Глотов О. С., Москаленко М. В., Рогозкин В. А., Иващенко Т. Э., Баранов B.C. Анализ полиморфизма генов репин-апгиотепзиновой системы в популяции Северо-западного региона России // Экологическая генетика. 2004. В. 4. Стр. 40−43.
  6. Животовский J1.А. Популяционная биометрия // М. Наука. 1991.271с.
  7. С.П. Персонифицированный подбор лекарственных препаратов при онкологических заболеваниях. Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике // Новосибирск. Альта Виста. 2003. Стр. 158−165.
  8. A.M., Грядунов Д. А., Лысов Ю. П., Михайлович В. М., Наседкина Т. В., Турыгин А. Ю., Рубина А. Ю., Барский В. Е., Заседателев A.C. 2004. Микрочипы на основе трехмерных ячеек геля: история и перспективы // Молекуляр. биология. Т. 38. Стр. 5−16.
  9. В.В., Вавилин В. А. 2003. Фармакогенетика сегодня. Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике // Новосибирск. Альта Виста. 2003. Стр. 20−27.
  10. Ю.Б., Шварц Е. Молекулярно-генетические механизмы развития артериальной гипертензии // Артериальная гипертензия. 1998. Т. 4. №. 1. Стр. 63−71.
  11. В.П. Генетика артериальной гипертензии (современные исследовательские парадигмы) // Клиническая медицина. 2003. Н. 1. Стр. 12−18.
  12. Л.Г., Дмитриев В. В., Толпыгина С. Н., Чазова И. Е. Суточное мониторирование артериального давления в клинической практике // Клиническая фармакология и терапия Consilium medicum. 2001. Вып. 2. Стр. 3−4.
  13. О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA // Москва. Издательство Медиа Сфера. 2003. 305с.
  14. И.Г., Брагина А. Е. Достижения и перспективы в изучении генетических аспектов артериальной гипертензии // Кардиоваскулярная терапия и профилактика 2003. Т. 2(5). Стр. 90−92.
  15. Е.В., Конради А. О. Роль генетических факторов в ремоделировании сердечно-сосудистой системы при гипертонической болезни // Артериальная гипертензия. 2002. Т. 4. Н. 3.
  16. Akhmedova S.N., Pushnova Е.А., Anisimov S., Bogdanova L.A., Bova L.K., Schwartz E.I. CYP2D6 genotyping in a Russian population using a novel approach for identification of the CYP2D6A mutation // Biochem. Mol. Med. 1996. V. 58(2). P. 234−236.
  17. Benetos A., Safar M.E. Aortic collagen, aortic stiffness, and ATI receptors in experimental and human hypertension // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1996. V. 74(7). P. 862 866.
  18. Case-Green SC, Mir KU, Pritchard CE and Southern EM: Analysing genetic information with DNA arrays // Curr. Opin. Chem. Bio. l 1998. V. 2. P. 404−410.
  19. Chistiakov D.A., Kobalova Zh.D., Tereshchenko S.N., Moiseev S.V., Nosikov V.V. Polymorphism of vascular angiotensin II receptor gene and cardiovascular disorders // Ter. Arkh. 2000. V. 72(4). P. 27−30.
  20. Dufour C., Casane D., Denton D., Wickings J., Corvol P., Jeunemaitre X. Human-chimpanzee DNA sequence variation in the four major genes of the renin angiotensin system // Genomics. 2000. V. 1−69(1). P. 14−26.
  21. Favis R., Day J.P., Gerry N.P., Phelan C., Narod S., Barany F. Universal DNA array detection of small insertions and deletions in BRCA1 and BRCA2 //Nat Biotechnol. 2000. V. 18(5). P. 561−564.
  22. Flynn J.T. Differentiation between primary and secondary hypertension in children using ambulatory blood pressure monitoring // Pediatrics. 2002. V. 110(1 Pt 1). P. 89−93.
  23. Fotin, A., Drobyshev A., Proudnikov D., Perov A., Mirzabekov A. Parallel thermodynamic analysis of duplexes on oligodeoxyribonucleotide microchips // Nucleic Acids Res. 1998. V. 26. P. 1515−1521.
  24. Fox C.S., Heard-Costa N.L., Vasan R.S., Murabito J.M., D’Agostino R.B. Sr., Atwood L.D. Genomewide Linkage Analysis of Weight Change in the Framingham Heart Study // J. Clin. Endocrinol. Metab. 2005. V. 15. P. 3197−3201.
  25. Frossard P.M., Gonzalez P.A., Fritz L.C., Ponte P.A., Fiddes J.C., Atlas S.A. Two RFLPs at the human renin (ren) gene locus // Nucleic. Acids. Res. 1986. V. 27−14(10). P. 4380.
  26. Frossard P.M., Lestringant G.G., Elshahat Y.I., John A., Obineche E.N. An Mbol two-allele polymorphism may implicate the human renin gene in primary hypertension // Hypertens. Res. 1998. V. 21(3). P. 221−225.
  27. Frossard P.M., Lestringant G.G., Malloy M.J., Kane J.P. Human renin gene Bgll dimorphism associated with hypertension in two independent populations // Clin. Genet. 1999. V. 56(6). P. 428−433.
  28. Gerold D., Rushmore T. and Caskey C.T. DNA chips: promising toys have become powerful tools // Trends. Biochem. Sei. 1999. V. 24. P. 168−173.
  29. Giner V., Poch E., Bragulat E., Oriola J., Gonzalez D., Coca A., De La Sierra A. Renin-angiotensin system genetic polymorphisms and salt sensitivity in essential hypertension // Hypertension. 2000. V. 35(1 Pt 2). P. 512−517.
  30. Haywood G.A., Gullestad L., Katsuya T., Hutchinson H.G., Pratt R.E., Horiuchi M., Fowler M.B. ATI and AT2 angiotensin receptor gene expression in human heart failure // Circulation. 1997. V. 4−95(5). P. 1201−1206.
  31. Heux S., Morin F., Lea R.A., Ovcaric M., Tajouri L., Griffiths L.R. The methylentetrahydrofolate reductase gene variant (C677T) as a risk factor for essential hypertension in Caucasians // Hypertens. Res. 2004. V. 27(9). P. 663−667.
  32. K.F., Langenfeld M.R., Schlaich M., Veelken R., Schmieder R.E. 1166 A/C polymorphism of the angiotensin II type 1 receptor gene and the response to short-term infusion of angiotensin II // Circulation. 1999. V. 28−100(13). P. 1394−1399.
  33. Huber M., Losert D., Hiller R., Harwanegg C., Mueller M.W., Schmidt W.M. Detection of single base alterations in genomic DNA by solid phase polymerase chain reaction on oligonucleotide microarrays // Anal. Biochem. 2001. V. 1−299(1). P. 24−30.
  34. Hubert C., Houot A.M., Corvol P., Soubrier F. Structure of the angiotensin I-converting enzyme gene. Two alternate promoters correspond to evolutionary steps of a duplicated gene//J. Biol. Chem. 1991. V. 15−266(23). P. 15 377−15 383.
  35. Hunt C.C., Burley J.E., Chapman C. M, Beilby J.P. A high-throughput MS-PCR method on MADGE gels for ANG II type-1 receptor A1166C polymorphism // Physiol. Genomics. 1999. V. 31−1(2). P. 71−73.
  36. Iqbal M.P., Mahmood S., Mehboobali N., Ishaq M., Fatima T., Parveen S., Frossard P. Association study of the angiotensin-converting enzyme (ACE) gene G2350A dimorphism with myocardial infarction // Exp. Mol. Med. 2004. V. 30−36(2). P. 110−115.
  37. Jin J.J., Nakura J., Wu Z., Yamamoto M., Abe M., Chen Y., Tabara Y., Yamamoto Y., Igase M., Bo X., Kohara K., Miki T. Association of angiotensin II type 2 receptor gene variant with hypertension // Hypertens. Res. 2003. V. 26(7). P. 547−552.
  38. Jones A., Woods D.R. Skeletal muscle RAS and exercise performance // Int. J. Biochem. Cell. Biol. 2003. V. 35(6). P. 855−866.
  39. Kolchinsky A., Mirzabekov A. Analysis of SNPs and other genomic variations using gel-based chips // Hum. Mutat. 2002. V. 19(4). P. 343−360.
  40. Landi S., Gemignani F., Gioia-Patricola L., Chabrier A., Canzian F. Evaluation of a microarray for genotyping polymorphisms related to xenobiotic metabolism and DNA repair //Biotechniques. 2003. V. 35(4). P. 816−820, 822, 824−827.
  41. Landi S., Gemignani F., Gioia-Patricola L., Chabrier A., Canzian F. «MetaboChip» // Biotechniques. 2003. V. 35(4). P. 816−820, 822, 824−827.
  42. Lifton R.P., Gharavi A.G., Geller D.S. Molecular mechanisms of human hypertension // Cell. 2001. V. 23- 104(4). P. 545−556.
  43. Liljedahl U., Karlsson J., Melhus H., Kurland L., Lindersson M., Kahan T., Nystrom
  44. F., Lind L., Syvanen A.C. A microarray minisequencing system for pharmacogenetic profiling of antihypertensive drug response // Pharmacogenetics. 2003. V. 13(1). P. 7−17.
  45. Lipshutz R.J., Fodor S.P., Gingeras T.R. and Lockhart D.J. High density synthetic oligonucleotide arrays //Nat. Genet. 1999. V. 21. P. 20−24.
  46. Lung C.C., Chan E.K., Zuraw B.L. Analysis of an exon 1 polymorphism of the B2 bradykinin receptor gene and its transcript in normal subjects and patients with CI inhibitor deficiency//J. Allergy. Clin. Immunol. 1997. V. 99(1 Pt 1). P. 134−146.
  47. Masharani U., Frossard P.M. Mbol RFLP at the human renin (ren) gene locus // Nucleic. Acids. Res. 1988. V. 25- 16(5). P. 2357.
  48. McCarthy J.J. and Hilfiker R. The use of single-nucleotide polymorphism maps in pharmacogenomics //Nat. Biotechnol. 2000. V. 18. P. 505−508.
  49. Meyer J.M., Ginsburg G.S. The path to personalized medicine // Curr. Opin. Chem. Biol. 2002. V. 6. P. 434−438.
  50. Mondry A., Loh M., Liu P., Zhu A.L., Nagel M. Polymorphisms of the insertion / deletion ACE and M235T AGT genes and hypertension: surprising new findings and metaanalysis of data// BMC. Nephrol. 2005. V. 11−6(1). P. 1−10.
  51. Mukae S., Itoh S., Aoki S., Iwata T., Nishio K., Sato R., Katagiri T. Association of polymorphisms of the renin-angiotensin system and bradykinin B2 receptor with ACE-inhibitor-related cough // J. Hum. Hypertens. 2002. V. 16(12). P. 857−863.
  52. Naber C.K., Siffert W., Erbel R., Heusch G. Genetics of human coronary vasomotion // Arch. Mai. Coeur. Vaiss. 2004. V. 97(3). P. 255−260.
  53. Naber C.K., Siffert W. Genetics of human arterial hypertension // Minerva. Med. 2004. V. 95(5). P. 347−356.
  54. Nasedkina T., Domer P., Zharinov V., Hoberg J., Lysov Y., Mirzabekov A. Identification of chromosomal translocations in leukemias by hybridization with oligonucleotide microarrays // Haematologica. 2002. V. 87(4). P. 363−372.
  55. Nazarov I.B., Woods D.R., Montgomery H.E., Shneider O.V., Kazakov V.I., Tomilin N.V., Rogozkin V.A. The angiotensin converting enzyme I/D polymorphism in Russian athletes // Eur. J. Hum. Genet. 2001. V. 9. P. 797−801.
  56. O’Shaughnessy K.M. The genetics of essential hypertension // Br. J. Clin. Pharmacol. 2001. V. 51(1). P. 5−11.
  57. O’Sullivan J.J., Derrick G., Griggs P., Foxall R., Aitkin M., Wren C. Ambulatory blood pressure in schoolchildren // Arch. Dis. Child. 1999. V. 80(6). P. 529−532.
  58. Papp F., Friedman A.L., Bereczki C., Haszon I., Kiss E., Endreffy E., Turi S. Renin-angiotensin gene polymorphism in children with uremia and essential hypertension // Pediatr Nephrol. 2003. V. 18(2). P. 150−154.
  59. Pastinen T., Kurg A., Metspalu A, Peltonen L. and Syvanen A.C. Minisequencing: a specific tool for DNA analysis and diagnostics on oligonucleotide arrays // Genome. Res. 1997. V. 7. P. 606−614.
  60. Pereira A.C., Mota G.F., Cunha R.S., Herbenhoff F.L., Mill J.G., Krieger J.E. Angiotensinogen 235T allele «dosage» is associated with blood pressure phenotypes // Hypertension. 2003. V. 41(1). P. 25−30.
  61. Popov V., Fomicheva E., Kovalev J., Schwartz E. Absence of association between the angiotensin-converting enzyme gene polymorphism and borderline hypertension in men of St Petersburg, Russia // J. Hum. Hypertens. 1996. V. 10(8). P. 557−559.
  62. Procopciuc L., Popescu T., Jebeleanu G., Pop D., Zdrenghea D. Essential arterial hypertension and polymorphism of angiotensinogen M235T gene // J. Cell. Mol. Med. 2002. V. 6(2). P. 245−250.
  63. Rupert J.L., Kidd K.K., Norman L.E., Monsalve M.V., Hochachka P.W., Devine D.V. Genetic polymorphisms in the Renin-Angiotensin system in high-altitude and low-altitude Native American populations // Ann. Hum. Genet. 2003. V. 67(Pt 1). P. 17−25.
  64. Sachse C., Brockmoller J., Bauer S., Roots I. Cytochrome P450 2D6 variants in a Caucasian population: allele frequencies and phenotypic consequences // Am. J. Hum. Genet. 1997. V. 60. P. 284−295.
  65. Sachse C., Brockmoller J., Bauer S., Roots I. Cytochrome P450 2D6 variants in a Caucasian population: allele frequencies and phenotypic consequences // Am. J. Hum. Genet. 1997. V. 60. P. 284−295.
  66. Safar M.E., Lajemi M., Rudnichi A., Asmar R" Benetos A. Angiotensin-converting enzyme D/I gene polymorphism and age-related changes in pulse pressure in subjects with hypertension // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2004. V. 24(4). P. 782−786.
  67. Sambrook J., Fritsch EP., Maniatis. Molecular cloning: a Laboratory Coldspring Harbour Lab. Coldspring Harbour. NY. 1989.
  68. Takahashi N., Hagaman J.R., Kim H.S., Smithies O. Minireview: computer simulations of blood pressure regulation by the renin-angiotensin system // Endocrinology. 2003. V. 144(6). P. 2184−2190.
  69. Takahashi N., Smithies O. Human genetics, animal models and computer simulations for studying hypertension // Trends. Genet. 2004. V. 20(3). P. 136−145.
  70. Tanaka C., Kamide K., Takiuchi S., Miwa Y., Yoshii M., Kawano Y., Miyata T. An alternative fast and convenient genotyping method for the screening of angiotensin converting enzyme gene polymorphisms // Hypertens. Res. 2003. V. 26(4). P. 301−306.
  71. Tillib S.V., Strizhkov B.N., Mirzabekov A.D. Integration of multiple PCR amplifications and DNA mutation analyses by using oligonucleotide microchip // Anal. Biochem. 2001. V. 1−292(1). P. 155−160.
  72. Wen S.Y., Wang H., Sun O.J., Wang S.Q. Rapid detection of the known SNPs of CYP2C9 using oligonucleotide microarray // World. J. Gastroenterol. 2003. V. 9(6). P. 13 421 346.
  73. Whitcombe D., Newton C.R. and Little S. Advances in approaches to DNA-based diagnostics // Curr. Opin. Biotechnol. 1998. V. 9. P. 602−608.c
  74. Yu H., Zhang Y., Liu G. Relationship between polymorphism of the angiotensin-converting enzyme gene and the response to angiotensin-converting enzyme inhibition in hypertensive patients // Hypertens. Res. 2003. V. 26(11). P. 881−886.
  75. Zhu X., Chang Y.P., Yan D., Weder A., Cooper R., Luke A., Kan D., Chakravarti A. Associations between hypertension and genes in the renin-angiotensin system // Hypertension. 2003. V. 41(5). P. 1027−34.117. Интернет-ссылки:1. Биочип: www.biochip.ru
  76. Интернет сайт молекулярных биологов: www.molbiol.ru
  77. Affvmetrix: www.affvmetrix.com
  78. Amersham Biosciences: www.amershambiosciences.com
  79. Applied Biosystems: www.europe.appliedbiosvstems.com
  80. Asper Biotech: www.asperbio.com
  81. GeneCards: www.bioinfo.weizmann.ac.il/cards/index.shtml8. Jurilab: www.jurilab.com9. Nanoeen: www.nanocen.com
  82. National centre for biotechnology information (NCBI): www.ncbi.nlm.nih.gov1. Благодарности.
  83. Говорю отдельное «спасибо» моим коллегам из Санкт-Петербургской педиатрической академии будущему д.м.н. Галине Игоревне Образцовой и Татьяне Степановой — за проведение совместной работы, сбор коллекции ДНК и тесное медико-биологическое сотрудничество.
  84. Однако больше всего я благодарен своему брату Олегу, маме Ольге Владимировне, отцу Сергею Александровичу, брату Ярославу и жене Тане, без помощи которых, эта работа просто не состоялась бы, да и не имела бы никакого смысла.
Заполнить форму текущей работой

Пора сдавать?