Эколого-микробиологический мониторинг эшерихиоза новорожденных телят в современных условиях Восточной Сибири

Одной из важнейших задач животноводства является производство высококачественных, безопасных в экологическом и санитарном отношении продуктов питания — молока и мяса. Однако на протяжении длительного времени животноводство несет значительные потери, обусловленные желудочно-кишечными болезнями новорожденных телят, основным этиологическим фактором которых является условно-патогенная микрофлора и, прежде всего, энте-ропатогенные эшерихии. Заболеваемость телят желудочно-кишечными болезнями в первые дни жизни на животноводческих фермах и комплексах России достигает 60−90% (Воронин Е.С. и др., 1996; Девришов Д. А., 2000; Шкиль Н. А., 2001; Джупина С. И., 2001; Мищенко В. А. и др., 2002).

Современный этап развития цивилизации характеризуется невиданными до сих пор масштабами антропогенного воздействия на наземные и водные системы, в том числе на сферу агропромышленного производства. Неизбежные процессы их преобразования являются закономерностью социального развития общества. Интенсивное воздействие на природные и сельскохозяйственные экосистемы ухудшило среду обитания животных и стало выходить за пределы биологической приспособляемости организмов (Донник И.М., Смирнов Н. П., 2001; Кашин А. С., 2002, 2003; Шахов А. Г., Аргунов М. Н., Бузлама B.C., 2003).

Практика показывает, что существующий в настоящее время комплекс экологических, технологических, зоогигиенических, ветеринарно-санитарных приемов при содержании и кормлении коров-матерей, проведении отелов, выращивании телят в молочный период не позволяет получать новорожденных телят с высоким уровнем естественной резистентности. Поэтому основным проявлением иммунной недостаточности служит высокая подверженность телят в ранний постнатальный период желудочно-кишечным инфекциям.

Ежегодно в мире, по данным ВОЗ, регистрируется около одного миллиарда диарейных заболеваний, среди которых эшерихиоз у телят является одной из частых причин их массовой заболеваемости и гибели.

Эшерихиоз у телят широко распространен во всех развитых странах мира, при этом летальность, даже при оптимальных условиях содержания, может достигать 40−75%. Установлено, что падеж телят в молозивный период составляет 20−50% от общей гибели за период выращивания (Коляков Я.Е., Гиттель-сон С.С., Каврук Л. С., 1970, 1973; Сидоров М. А., 1980, 2001; Фельдман И. И., 1992; Терехов В. И., 2002; Smith H.W., Halls S., 1968, 1969; Monn H.W., 1976; Smith H.W., 1995; Джупина С. И., 2001, 2003).

Широкое распространение болезни органов пищеварения получили и в животноводческих хозяйствах Сибири, нанося значительный экономический ущерб. Причем, если в 70-е годы отход телят составлял всего 2−2,5%, в 80-е годы — 4,5−5, то к 1995 г этот показатель колебался по отдельным областям Сибири в пределах от 8,5 до 13%, а в настоящее время возрос до 26−30%.

В этиологии желудочно-кишечных инфекций новорожденных телят в условиях Сибири по массовости поражения, тяжести проявления и гибели, животных одно из ведущих мест занимают энтеропатогенные Е. coli. При этом выявлено наличие большого количества серологических вариантов Е. coli, способных продуцировать энтеротоксины, обладающих высокой адгезивной и ин-вазивной активностью, а также устойчивых к антибактериальным препаратам, что обеспечивает возможность данному микроорганизму циркулировать как во внешней среде, так и в организме животных (Самаркин В.А., 1985; Фельдман И. И., 1992; Шкиль Н. А., 2001, 2003; Ковальчук Н. М., 2001, 2002, 2003; Заздравных М. И., 2001; Кашин С. И. с соавт., 2003; Чулков Н. В., 2004).

Считают, что под влиянием антропогенных факторов происходит ускорение темпов изменчивости микроорганизмов, что рассматривается как «искусственная эволюция возбудителей инфекционных заболеваний» (Бароян О.В., Портер Д. Р., 1975; Бухарин О. В., 1999). С позиций качественных характеристик санитарно-показательной микрофлоры, изолируемой из антропогенно-загрязненных экологических ниш, можно не только оценить опасность распространения заболеваний бактериальной этиологии, но и охарактеризовать интенсивность и направленность влияния на этот процесс ряда экзогенных модифицирующих факторов. Пристальное внимание при этом должно быть обращено на изучение изменчивости факторов вирулентности и персистенции инфекционных агентов, определяющих особенности их взаимодействия с организмом хозяина.

Несмотря на высокий уровень инфекционной патологии в структуре заболеваемости, проблема связи инфекционной патологии с воздействием техногенного загрязнения окружающей среды до настоящего времени остается недостаточно исследованной. Более того, заболеваемость инфекционными болезнями в целом или отдельными нозологическими формами не включена в перечень экологически обусловленных статистических показателей (Щербакова Е.Г., 2001).

Считается, что влияние разнообразных стрессовых факторов, в том числе экологических, в ранний постнатальный период приводят к нарушению функционирования системы «тимус — гипофиз — надпочечники», ответственной за поддержание иммунного гомеостаза в организме, а это сопровождается повышенной чувствительностью к инфекциям и нежизнеспособностью приплода. У таких животных понижена неспецифическая защитная реактивность к новым условиям обитания и на фоне высокой обсемененности бактериями внешней среды, а зачастую и молозива, условно-патогенными микроорганизмами происходит их инфицирование и опережающее заселение кишечника вирусами, энтеробактериями а, как следствие, развитие диареи. Существенно возросло значение нетривиальных грамотрицательных бактерий семейства Enterobacteriaceae в патологии животных и человека, не сбраживающих сахара (Вейант Р. и др., 1999).

Желудочно-кишечные инфекции у животных устойчиво занимают второе-третье место среди всех инфекционных заболеваний. При этом наиболее частыми возбудителями выступают условно-патогенные бактерии: Escherichia coli, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumonia, Morganella morgani и др., которые широко представлены в окружающей среде, а также являются резидентными представителями нормальной микрофлоры животных. Высокая экологическая пластичность этих бактерий позволяет им легко адаптироваться к различным условиям обитания.

В общей и местной защите организма новорожденных животных важную роль выполняет пищеварительная система. Клетки эпителия кишечника (энте-роциты) новорожденных животных обладают высокой авидностью ко всем белкам, с которыми соприкасаются. Вследствие того, что пищеварительные железы не функционируют, молозивные гамма глобулины адсорбируются и транспортируются в лимфопроток, а затем в кровь в неизменном состоянии. После контакта с белками молозива энтероциты заменяются зрелыми эпителиальными клетками, период полной замены которых по всей длине тонкого кишечника составляет 12−96 часов.

Комплекс защитных механизмов пищеварительного тракта можно условно разделить на три группы: неиммунологические, нормальная микрофлора и иммунные механизмы защиты, которые взаимосвязаны и дополняют друг друга.

К неиммунологическим механизмам защиты кишечного тракта относятся целостность покровного эпителия слизистых оболочек, наличие на них защитного мукопротеидного комплекса — гликокаликса, процессы гидролиза и моторика кишечника.

Иммунная система слизистых оболочек объединяет компоненты специфической защиты. Лимфоидная ткань кишечника отличается особенностью синтеза секреторных антител не только в местах антигенного воздействия, но и во всех участках желудочно-кишечного тракта.

В процессе развития острой кишечной инфекции характер иммунного ответа на микробные антигены и токсины существенно отличается от иммунного ответа на патогенны, проникшие в организм иным путем. Это, прежде всего, связано с тем, что иммунная система подвергается постоянному и усиленному взаимодействию разнообразных микробных продуктов, особенно относящихся к факторам патогенности (Дьяченко А.Г., Липовская В. В., Дьяченко П. А., 2001).

По данным многих авторов (Першин Б.Б., 1990; Алипер Т. И. и др., 2001) в пищеварительном тракте содержится около 2/3 всей лимфоидной ткани. Среди ее лимфоцитов 65−72% составляют В-лимфоциты и 15−20% Т-лимфоциты, кроме того, в нее входят макрофаги и плазматические клетки.

Многие ученые (Мищенко В.А., Яременко Н. А., Павлов Д. К. и др., 2002; Томчук В. А., Мельничук В. А., 2003) относят диарею у новорожденных телят к мембранопатологиям. Отмечено, что болезни телят, протекающие с симптомами поражения желудочно-кишечного тракта и токсикоза, сопровождаются активацией процессов перекисного окисления липидов, накоплением в межклеточном пространстве супероксидного иона перекиси водорода и гипероксидного радикала, являющихся основной причиной повреждения тканей. В плазме крови и эн-тероцитах накапливаются диеновые коньюгаты и малоновый диальдегид, которые подавляют иммунологическую активность клеток крови, вызывая апаптоз.

Перекисное окисление жирных ненасыщенных кислот вызывает деструктивные изменения в цитоплазматических и других мембранах, дестабилизацию транспорта ионов, образование простогландинов. Это приводит к угнетению синтеза ДНК, белка и некоторых других жизненно важных веществ, что вызывает снижение антиокислительной активности.

Возникновение и клиническое проявление диарей в ранний постнаталь-ный период связано как с состоянием колострального иммунитета, так и с микробным прессингом эшерихий, других энтеробактерий и различных факторов внешней среды. В Сибирском регионе заболевание вызывают широко распространенные энтеротоксигенные штаммы — продуценты термолабильного и термостабильного энтеротоксина, имеющие в своем составе адгезивные антигены А20, F41, К99, К88, тогда как в состав применяемой вакцины против колибак-териоза входит только один штамм патогенных эшерихий К99. Низкая эффективность лечебно-профилактических мероприятий объясняется несколькими причинами и одной из самых важных — высокой антигенной вариабельностью и изменчивостью колибактерий.

Успехи в разработке и внедрении средств профилактики и лечения очевидны. Однако рост заболеваемости и падежа животных (к обороту стада) за последние 30 лет в 3−3,5 раза не дает основания для оптимизма. Создавшаяся ситуация требует коррекции системы профилактики и лечения массовых болезней органов пищеварения, в том числе у телят, в сторону экологизации.

В связи с изложенным в современных условиях ведения животноводства по-прежнему актуальным направлением в решении продовольственной безопасности России остается снижение заболеваемости и гибели новорожденных телят.

В этой связи несомненный научный интерес представляют результаты сравнительного анализа качественных и количественных характеристик эшери-хий, выделенных из различных экологических районов, потенциально участвующих в формировании системы «организм хозяина — внешняя среда». Необходимость подобного исследования биологических свойств возбудителя эшери-хиоза связана с тем, что они изучались разрозненно, без учета экологических факторов внешней среды.

Цель работы. Основной целью работы явился мониторинг энтеропато-генных эшерихий и её- синергистов, выделенных из хозяйств с различной экологической нагрузкой по основным факторам вирулентности. Изучение формирования микроэкологического статуса и некоторых факторов естественной резистентности новорожденных телят в зависимости от экологических факторов хозяйств, а также обоснование применения местных цеолитов, как энтеро-сорбентов при острых кишечных заболеваниях телят.

Задачи исследования. Для реализации поставленных целей необходимо решить следующие задачи:

1. Провести анализ и дать общую оценку антропогенно-экологических факторов, влияющих на организм новорожденных телят.

2. Изучить распространение острых кишечных инфекций у новорожденных телят, а также формирование микроэкологического статуса в зависимости от различных экологических факторов хозяйств.

3. Определить видовой состав и серологический профиль этиологически значимых условно-патогенных бактерий при диареях новорожденных телят.

4. Разработать иммунохимический метод обнаружения эшерихий, продуцентов термостабильного энтеротоксина и установить их значение в патологии новорожденных телят в Сибирском регионе.

5. Дать биологическую характеристику эпизоотических штаммов эшерихий (по основным факторам вирулентности), выделенных из различных хозяйств при различной экологической нагрузке.

6. Оценить возрастные показатели функционального состояния нейтро-фильных гранулоцитов (и других факторов естественной резистентностиБАСК, JIACK и др.) у новорожденных телят при острых кишечных инфекциях.

7. Изучить эффективность применения энтеросорбентов (цеолитов) при массовых желудочно-кишечных заболеваниях телят.

Диссертационная работа является частью комплексных исследований в рамках программ фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК на 1982;2004 гг., и одобренных общим собранием СО РАСХН, а также КНЦ СО РАН «Сельскохозяйственные животные в экстремальных условиях среды» (1998).

Научная новизна. Дана комплексная оценка ветеринарно-экологической ситуации по антропогенной нагрузке региона. Проведено ранжирование состояния экосистемы в опорных хозяйствах по совокупности антропогенных нагрузок и оценка степени экологического риска заболеваемости эшерихиозом новорожденных телят.

Впервые в условиях Красноярского края проведен комплексный мониторинг эшерихий, выделенных у телят из различных экологических зон, по факторам вирулентности. Установлено, что при острых кишечных инфекциях.

ОКИ) у сельскохозяйственных животных главной их причиной являются условно-патогенные микроорганизмы, обладающие широким спектром вирулентности (энтеротоксигенности, адгизивности, гемолитической активности, анти-биотикоустойчивости и антилизоцимной активности). ОКИ возникали при дисбалансе организма новорожденных телят с внешней средой. На этом фоне инфекционный агент, представленный разнообразными серотипами эшерихий в различных сочетаниях, является ведущим этиологическим фактором.

Установлено, что эшерихии, выделенные у телят способны подавлять ли-зоцимную, бактерицидную активность сыворотки крови, что усугубляет дефицит гуморальных неспецифических факторов иммунитета. Проведена оценка неспецифической резистентности у телят с использованием лизосомально-катионного теста (JIKT), как интегрального показателя активности микробо-цидной системы нейтрофилов при эшерихиозе телят.

Экспериментально обоснован и разработан принципиально новый подход иммунохимической индикации энтеротоксигенных эшерихий, продуцирующих термостабильный энтеротоксин (в РДП и РИФ), позволяющий проводить быструю идентификацию их продуцентов в кишечном содержимом, молозиве и молоке. Получено авторское свидетельство на способ получения термостабильного энтеротоксина эшерихий (А.с. 1 220 177 СССР, МКИ С12К1/04).

Изучена профилактическая эффективность природных энтеросорбентов (цеолитов) при кишечных инфекциях у телят.

Практическая значимость. Определены основные антропогенно-экологические характеристики, влияющие на организм новорожденных телят в условиях региона. Созданная специализированная информационная база (эко-лого-эпизоотологическая карта) может быть использована в качестве основы для научных прогностических разработок природоохранной деятельности, для решения современных задач по устойчивому развитию региона.

Материалы диссертационной работы включены в методические рекомендации «Желудочно-кишечные болезни новорожденных телят в условиях Сибири» (утверждены на заседании подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины СО РАСХН. — Новосибирск, протокол № 19 от 17 июня 2004 г.).

Разработаны иммунохимические методы обнаружения энтеротоксиген-ных эшерихий, продуцентов термостабильного энтеротоксина, использующиеся при идентификации энтеропатогенных эпизоотических штаммов микроорганизмов (одобрены ВАСХНИЛ. — М., 1985 г.).

Методические рекомендации «Методы определения показателей естественной резистентности у крупного рогатого скота» позволяют врачам ветеринарных лабораторий и практикующим ветеринарным специалистам своевременно диагностировать иммунные дефициты у новорожденных телят, а также прогнозировать их устойчивость к инфекционным заболеваниям (утверждены на заседании подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины СО РАСХН. — Новосибирск, протокол № 12 от 27 августа 2003 г.).

Научно-технические разработки рекомендованы к внедрению в производство (подтверждено актами внедрения в хозяйствах, ветеринарных лабораториях и НТС Управления ветеринарии администрации Алтайского края и республики Хакасия, 2003;2004 гг.).

Предложена концептуальная модель по эколого-микробиологическому мониторингу эшерихиоза и оптимизации противоэпизоотических мероприятий по профилактике ЖКИ в современных условиях. Результаты проведенных исследований представляют интерес для экологов, физиологов, генетиков, микробиологов и могут быть использованы в практике ветеринарных лабораторий при идентификации нетипируемых энтеропатогенных эшерихий и других энтеропатогенных бактерий.

Материалы работы включены в учебные программы по курсу «Ветеринарная микробиология и иммунология» для студентов факультета ветеринарной медицины по специальности 310 800 и используются в аграрных вузах России.

Основные итоги исследования отражены в монографии «Эколого-этиологические аспекты колибактериоза телят в условиях Средней Сибири» (Красноярск, 2004), практикуме по микробиологии «Морфология и физиология микроорганизмов» (Красноярск, 2002), методических пособиях (Красноярск, 2004) и указаниях (Красноярск, 2000;2002).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на: научных конференциях ветеринарного факультета МВА (Москва, 1982;1984), VII и VIII конференциях молодых ученых МВА (Москва, 1985, 1987), II и III зональных научно-производственных конференциях молодых ученых и специалистов «Пути повышения эффективности сельскохозяйственного производства Восточной Сибири» (Красноярск, 1987, 1989) — Всесоюзной научно-технической конференции «Использование гормональных препаратов в животноводстве» (Подольск, 1991) — Всесоюзной научно-технической конференции «Проблемы болезней молодняка» (Воронеж, 1991) — региональной научно-технической конференции «Молодежь — аграрному производству» (Красноярск, 1991) — научных конференциях профессорско-преподавательского состава КрасГАУ (Красноярск, 1993, 1995, 1997, 1998, 2003) — Всероссийской научно-производственной конференции «Гигиена, ветсанитария и экология животноводства» (Чебоксары, 1994) — IX, XI Международных симпозиумах «Реконструкция гомеостаза» (Красноярск, 1998, 2003) — Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Достижения науки и техники — развитию сибирских регионов» (Красноярск, 1999) — Международной научной конференции «Инфекционные и инвазионные болезни» (Казань, 2000) — 7-й международной научно-практической конференции «Природные и интеллектуальные ресурсы Сибири» (Сибресурс — 7−2001) (Томск, 2001) — Международной научной конференции «Достижения ветеринарной медицины — XXI веку» (Барнаул, 2002) — Международной научной конференции «Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных» (Улан-Удэ, 2003) — Всероссийской научно-практической конференции «Инновационные технологии в образовательной сфере России» (Ульяновск, 2003) — научно-практической региональной конференции «Современные проблемы и достижения аграрной науки в животноводстве, растениеводстве и экономике» (Томск, 2003) — Всероссийской научно-практической конференции «Аграрная наука на рубеже веков» (Красноярск, 2003) — Международной научно-практической конференции, посвященной 150-летию ветеринарной службы Оренбуржья «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биологии» (Оренбург, 2003) — Международной научной конференции «Актуальные аспекты экологической, сравнительно-видовой, возрастной и экспериментальной морфологии» (Улан-Удэ, 2004).

По материалам исследований опубликовано 49 научных работ (всего опубликовано 70 работ).

Основные положения, выносимые на защиту:

• Анализ антропогенно-экологической ситуации по результатам ветери-нарно-экологического мониторинга региона;

• Изучение распространения желудочно-кишечных инфекций у новорожденных телят в условиях экологического неблагополучия;

• Формирование микроэкологического статуса (ротоглотки и кишечника) новорожденных телят в зависимости от аутоэкологических факторов хозяйств;

• Разработка иммунохимического метода идентификации энтеротокси-генных эшерихий, продуцентов термостабильного энтеротоксина;

• Выявленные особенности биологических характеристик эшерихий, выделенных из различных экологических ниш.

307 ВЫВОДЫ.

1. Воздействие антропогенных факторов на агроэкосистему животноводческих хозяйств Сибирского региона достигло опасных уровней, что создает сложную ветеринарно-экологическую ситуацию, связанную с комбинированным их влиянием, и способствует рождению нежизнеспособного приплода, увеличению желудочно-кишечных патологий у новорожденных телят.

2. Проведенное ранжирование территории региона по совокупности антропогенных нагрузок позволило составить эколого-эпизоотологическую карту в компьютерном варианте, отражающую взаимосвязь интенсивности антропогенных нагрузок с заболеваемостью телят ОКЗ по территории региона.

3. Установлена прямая корреляционная зависимость гибели телят от загрязнения природной окружающей среды, при этом потенцированное действие антропогенных факторов в 5−10 раз превышает повреждающий эффект, который они могут причинить в отдельности.

4. Установлена патогенетическая взаимосвязь между заболеваемостью коров субклиническими колиформными маститами в молозивный период и заболеваемостью новорожденных телят энтеритами. Из секрета вымени коров выделены следующие виды микробов: Str. pyogenes, Str. agalactiae, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aerugynosa, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumonia. Выделенные штаммы эшерихий от коров при маститах и от телят при энтероколитах отнесены к серотипам 0115 (3%), 026 (2%).

5. Микробная колонизация у новорожденных телят сопровождается характерным распределением отдельных видов микроорганизмов по изучаемым биотопам (кишечник, ротоглотка). Установлено явление микробной интерференции, т. е. взаимоотношений микроорганизмов, когда один из них препятствует колонизации других (колонизационная резистентность КР). При этом определяющими факторами, влияющими на процесс формирования микроэколо-гитческого статуса у новорожденных телят, являются экологические факторы конкретного хозяйства. Низкая колонизационная резистентность определяет группу риска новорожденных телят по развитию острых кишечных инфекций.

6. Установлена этиологическая значимость основных инфекционных агентов, циркулирующих у новорожденных телят при острых кишечных инфекциях в хозяйствах с различной экологической нагрузкой, при этом ведущая роль в сообществах принадлежала кишечной палочке. При исследовании биоматериалов на эшерихиозную инфекцию выделены 743 культуры микроорганизмов, которые по морфологическим и культурально-биохимическим свойствам отнесены к следующим видам: Escherihia coli (454 — 60,1%), Proteus vulgaris (95 — 13%), Proteus merabilis (45 — 6%), Pseudomonas aeruginosa (55 — 7,5%), Klebsiella pneumonia (20 — 2,6%), Morganella morgani (40 — 5,3%), Staphylococcus aureus (22 — 2,9%), Clostridium perfringens (12 — 1,6%) и некоторым другим.

На основании полученных результатов разработан специальный алгоритм эшерихиоза новорожденных телят: экотоксиканты + избыток (недостаток) микроэлементов —" стресс —" свободно-радикальная органопатология —> низкая неспецифическая сопротивляемость организма + энтеропатогенные и энтероток-сикогенные эшерихии + ассоцианты (условно-патогенная микрофлора + рото-вирусы + короновирусы + криптоспоридии) = эшерихиоз.

7. Клиническая картина кишечных инфекций у новорожденных телят характеризовалась рядом общих клинических симптомов независимо от формы заболевания, выраженности интоксикационного синдрома, и чаще всего зависела от тяжести заболевания и достоверно была продолжительнее в хозяйствах из экологически неблагополучных районов.

В лейкоцитарной формуле больных телят из обеих групп районов отмечался нейтрофильный лейкоцитоз со сдвигом ядра влево, характеризующийся увеличением количества юных и палочкоядерных нейтрофилов, что характерно для септических форм эшерихиоза, количество эозинофилов достоверно снижено (Р<0,05).

8. Фагоцитарная активность у здоровых однодневных телят из ЭБР составила 39±0,19%, фагоцитарное число — 2,90±0,07, фагоцитарный индекс.

7,44±0,10. Перечисленные показатели у телят этой же возрастной группы из ЭНР равнялись соответственно 24±0,15%, 1,75±0,03 и 7,29±0,06, то есть фагоцитарная активность нейтрофилов оказалась ниже на 13%, а фагоцитарное число и фагоцитарный индекс существенно не отличались.

9. Содержание катионного белка (КБ) в нейтрофильных гранулоцитах у новорожденных телят из ЭНР со среднетяжелой формой эшерихиоза в остром периоде составила 0,81±0,07, что на 23,9% ниже, чем у здоровых телят в тех же хозяйствах (1,05±0,02). У больных телят из хозяйств ЭБР содержание катионного белка (КБ) составило 0,98±0,20. В период выздоровления содержание катионного белка увеличивалось в среднем на 17%, разница показателя была достоверной (Р<0,05).

У здоровых телят из хозяйств ЭБР содержание катионного белка в ней-трофилах было выше (1,34±0,16), чем у здоровых телят (1,05±0,02) из ЭНР, что достоверно свидетельствует о функциональной противомикробной системе нейтрофилов у новорожденных телят.

10. Разработан иммунохимический метод идентификации энтеротокси-генных эшерихий, продуцентов термостабильного энтеротоксина (ТСЭ), позволяющий проводить экспресс-диагностику токсигенных штаммов эшерихий в РДП и РИФ. Отработаны режимы препаративного накопления, выделения и очистки с последующим получением диагностической антитоксической сыворотки.

11. Полученная антитоксическая сыворотка обладала высокой активностью и специфичностью при идентификации антигенных детерминант эшерихий в РДП и РИФ. С другими гетерологичными токсигенными культурами Klebsiella pneumonia, Aer. hydrophila, Sal. typhimurium, Sal. enteritidis, CI. perfringens, St. aureus не установлено перекрестных серологических реакций.

12. Иммунохимические методы идентификации энтеротоксигенных эшерихий позволили выявить у больных телят в животноводческих хозяйствах эшерихии, продуценты термостабильного энтеротоксина среди эпизоотических штаммов. Уровень энтеротоксигенности эшерихий, выделенных у телят в хозяйствах Сибирского региона, в зависимости от экологического благополучия колебался от 32 до 66%, в Московской области — в пределах 62% .

13. Установлена высокая межпопуляционная вариабельность эшерихий, которая адекватна спектру абиогенно-биотических факторов, сложившихся в конкретной биологической нише, по комплексу биологических характеристик (персистентность, гемолитическая и адгезивная активность, антибиотикоустой-чивость и энтеротоксигенность) и увеличивалась вдоль оси экотопов: внешняя среда — здоровые телята — больные телята в зависимости от экологической нагрузки в хозяйстве (Р<0,05).

14. При применении энтеросорбентов (цеолита сахаптин, сахаптин + Ве-том 1.1) с профилактической целью заболеваемость у новорожденных телят в опытных группах составила 10−40%, что на 60−90% ниже, чем в контроле.

На фоне применения энтеросорбента раздельно и в комплексе с Ветом 1.1 в крови телят опытных групп отмечалось повышение показателей БАСК, фагоцитарной активности, а также уровня лизосомально-катионный активности (ЛКТ) в крови новорожденных телят (Р<0,01).

15. Теоретически обоснована концептуальная модель по эколого-микробиологическому мониторингу в системе противоэпизоотического надзора за острыми кишечными инфекциями новорожденных телят.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. Результаты научно-исследовательской работы использованы при разработке методических рекомендаций по иммунохимической идентификации энтеротоксигенных эшерихий, продуцентов термостабильного энтеротоксина (одобренных ВАСХНИЛ, — 1985 — 21 с.) Получено авторское свидетельство на способ получения термостабильного энтеротоксина эшерихий (А.с. 1 220 177 СССР, МКИ С12К1/04).

2. Разработаны методические рекомендации по определению факторов естественной резистентности новорожденных телят с использованием современных методов исследования (утверждены на заседании подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины СО РАСХН. 2003 — Красноярск, 2004. — 70 е.), которые используются в работе бактериологического и биохимического отделов Красноярской краевой ветеринарной лабораторией и Хакасской Республиканской ветеринарной лабораторией (справка о внедрении № 29/3 от 5.02.04- акт о внедрении от 15.04.04).

3. Ветеринарной практике рекомендуется комплексная система эколого-микробиологического мониторинга при стационарном неблагополучии новорожденных телят острыми кишечными инфекциями. Для этого разработана концептуальная модель эпизоотологического надзора за эшерихиозами в системе противоэпизоотического наблюдения. В хозяйствах, неблагополучных по эшерихиозу, целесообразно проводить комплексное бактериологическое исследование с учетом выявления биологических характеристик возбудителя (перси-стентность, гемолитическая и адгезивная активность, антибиотикоустойчивость и энтеротоксигенность) и параметров внешней среды. При этом следует учитывать роль других условно-патогенных бактерий, выделяемых в ассоциатах, на фоне соблюдения технологических приемов разрыва эпизоотологической цепи.

Разработаны методические рекомендации по желудочно-кишечным болезням новорожденных телят в условиях Сибири: особенности эпизоотологии, патогенеза, характер клинического проявления, меры профилактики и борьбы (утверждены на заседании подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины СО РАСХН. — Новосибирск, — 2004 — 90 е.).

4. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе по курсу «Ветеринарной микробиологии и иммунологии» в сельскохозяйственных вузах по специальности 310 801.