Помощь в учёбе, очень быстро...
Работаем вместе до победы

Усовершенствование элементов технологии получения удвоенных гаплоидов капусты белокочанной в культуре микроспор

Диссертация: Усовершенствование элементов технологии получения удвоенных гаплоидов капусты белокочанной в культуре микроспор
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

В кочанах капусты в обилии содержатся витамины Р, К, Bl} В2, РР, С, инозит, фолиевая кислота, биотин. Все эти вещества и витамины полезны и необходимы для> организма человека. Зеленые листья капусты служат источником каротина, переходящего в организме человека в витамин А. В капусте был также обнаружен витамин U, который употребляют в качестве эффективного быстродействующего средства для лечения… Читать ещё >

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
  • ГЛАВА 1. ГАПЛОИДИЯ. СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ ГАПЛОИДНЫХ 13 РАСТЕНИЙ В КУЛЬТУРЕ МИКРОСПОР BRASSICA OLERACEA L
    • 1. 1. Гаплоидия и её значение для селекции растений
    • 1. 2. Культура микроспор Brassica olerace L
    • 1. 3. Некоторые ботанические и биологические особенности Bras- 22 sic a oleraceae L
      • 1. 3. 1. Развитие пыльника и микроспор
    • 1. 4. Изменение программы развития микроспор под действием фак- 28 торов влияющих на андрогенез in vitro
      • 1. 4. 1. Оптимальная стадия развития пыльцы для введения в 28 культуру
      • 1. 4. 2. Условия выращивания растений-доноров
      • 1. 4. 3. Влияние генотипа на андрогенез in vitro
      • 1. 4. 4. Влияние температурной предобработки на андрогенез in 32 vitro
      • 1. 4. 5. Влияние регуляторов роста на морфогенез микроспор ка- 37 пусты белокочанной
      • 1. 4. 6. Другие факторы, влияющие на андрогенез in vitro
    • 1. 5. Способы получения удвоенных гаплоидов
  • ГЛАВА 2. УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ, ИСХОДНЫЙ МАТЕРИАЛ, 48 СХЕМА И МЕТОДИКИ ПРОВЕДЕНИЯ ОПЫТОВ
    • 2. 1. Цель, задачи и схема исследований
      • 2. 1. 1. Схема исследований
    • 2. 2. Условия проведения исследований
      • 2. 2. 1. Почвенные и агрохимические условия проведения иссле- 56 дований
      • 2. 2. 2. Погодные условия вегетационных периодов 2007 — 2009 58 гг
    • 2. 3. Материал и методика проведения исследований
      • 2. 3. 1. Исходный материал
      • 2. 3. 2. Методика лабораторных опытов 60 2зз Проведение оценки исходного и полученного в ходе исследо- ^ ваний материала
  • ГЛАВА 3. Усовершенствование элементов технологии получения уд- 67 военных гаплоидов капусты белокочанной в культуре микроспор
    • 3. 1. Влияние наночастиц серебра на донорные растения капусты 67 белокочанной
    • 3. 2. Влияние температуры на эмбриоидогенез капусты белокочан- 69 ной в культуре микроспор
    • 3. 3. Определение зависимости стадии развития микроспоры от 71 длинны бутона
    • 3. 4. Определение зависимости эмбриоидогенеза от стадии развития 75 микроспор
    • 3. 5. Определение зависимости эмбриоидогенеза от плотности сус- 77 пензии микроспор
    • 3. 6. Влияние питательной среды на эмбриоидо-и каллусогенез
    • 3. 7. Влияние регуляторов роста на эмбриоидогенез
    • 3. 8. Влияние сахарозы на эмбриоидогенез
    • 3. 9. Влияния кислотности среды на эмбриоидогенез
    • 3. 10. Влияние аскорбиновой кислоты на эмбриоидогенез
    • 3. 11. Влияния питательных сред, регуляторов роста и сахарозы на 91 рост и развитие эмбриоидов
  • ГЛАВА 4. ОЦЕНКА РАСТЕНИЙ-РЕГНЕРАНТОВ КАПУСТЫ 95 БЕЛОКОЧАННОЙ, ПОЛУЧЕННЫХ В КУЛЬТУРЕ МИКРОСПОР
    • 4. 1. Цитологический анализ растений-регенерантов капусты бело- 95 кочанной поколения R0 по количеству хромосом
    • 4. 2. Оценка растений-регенерантов капусты белокочанной поколе- 97 ния R0 по количеству устьиц и числу хлоропластов в них
    • 4. 3. Подтверждение гаплоидной природы растений-регенерантов 100 методом ПЦР
    • 4. 4. Характеристика удвоенных гаплоидов капусты белокочанной 103 полученных в культуре микроспор по морфологическим признакам
    • 4. 5. Биохимический анализ растений-регенерантов капусты белоко- 104 чанной, полученных в культуре микроспор

Усовершенствование элементов технологии получения удвоенных гаплоидов капусты белокочанной в культуре микроспор (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность темы

Капуста была введена в культуру более 5000 лет назад. Родиной всех возделываемых видов капусты считают Средиземноморье. На протяжении тысячелетий из дикой капусты человеку удалось получить большое разнообразие форм. В результате отбора растений и укорачивания междоузлий были получены кочанные формы. — белокочанная, краснокочанная и савойская'(Пивоваров В.Ф., Старцев В. И., 2006).

В кочанах капусты в обилии содержатся витамины Р, К, Bl} В2, РР, С, инозит, фолиевая кислота, биотин. Все эти вещества и витамины полезны и необходимы для> организма человека. Зеленые листья капусты служат источником каротина, переходящего в организме человека в витамин А. В капусте был также обнаружен витамин U, который употребляют в качестве эффективного быстродействующего средства для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Капуста богата полезными минеральными солями. Особенно много в ней калия, фосфора, есть кальция железо, марганец. Капуста является так же источником Сахаров и легкоусвояемых белков. По содержанию азотистых веществ она превышает брюкву, репу, морковь, свеклу. Клетчатка капусты способствует выведению из организма жироподобных веществ — холестерина (Петрушко Ю.Н., 2003).

Немаловажное значение капуста имеет в качестве кормового растения для сельскохозяйственных животных и птиц, для чего в свежем или силосованном виде используют отходы от столовых сортов и специально культивируют кормовые сорта, но главным образом листья капусты (Петрушко Ю.Н., 2003).

Капуста белокочанная является перекрёстноопыляемым растением, имеющим двухлетний цикл развития. В связи с этим селекционный процесс этой культуры является длительным и трудоемким и основан преимущественно на внутривидовой гибридизации с последующим многократным отбором, использовании инфекционно-провокационных фонов для оценки материала на устойчивость к стрессовым факторам среды (Поляков А.В., 2000).

Основные направление в селекции капусты белокочанной, это скороI спелость, устойчивость к болезням (кила, сосудистый бактериоз, фузариоз и др.) и вредителям (Пивоваров В.Ф., Старцев В. И., 2006).

Использование удвоенных гаплоидов в овощеводстве особенно актуально в связи с тем, что в последние годы в производстве особое внимание стали уделять технологиям, сортам и гибридам, приводящим к получению высокой выравненное&trade-, и урожайности (Литвинов С.С., 2003). В связи с этим роль гаплоидных растений в селекции очень велика. Применение их позволяет существенно повысить эффективность селекционного процесса, ускорить получение генетически стабильных линий и облегчить поиск редких признаков, контролируемых рецессивными генами (Поляков А.В., 2000).

В настоящее время гаплоиды можно получать различными способами, однако искусственным путем с использованием методов культуры изолированных тканей удается получать большее их количество. На сегодняшний день разработаны и наиболее часто применяются следующие способы получения гаплоидов с использованием методов in vitro:

— культура изолированных пыльников и микроспор;

— культура семяпочек;

— метод гаплоиндуктора, при котором из-за несовместимости родителей происходит элиминация отцовских хромосом. Однако, метод гаплоиндуктора и культура семяпочек очень трудоёмки, а в культуре пыльников происходит развитие диплоидов из соматических тканей. Наиболее эффективным и технологичным является использование метода культуры микроспор. Но в данном направлении остаётся ещё много проблемных вопросов.

Исходя из вышеописанных проблем, целью исследований является усовершенствование элементов технологии получения удвоенных гаплоидов капусты белокочанной в культуре микроспор для использования их в селекционном процессе.

Объект исследований — технология получения удвоенных гаплоидов капусты белокочанной в культуре микроспор.

Предмет исследований — бутоны, пыльники, микроспоры, эмбриоиды, растения — регенераты капусты белокочанной.

Научная новизна работы. Впервые в России усовершенствованы компоненты и технологические элементы, позволяющие получать гаплоиды и удвоенные гаплоиды капусты белокочанной в культуре микроспор. В результате проведённых исследований усовершенствованы элементы технологии культуры микроспор: установлена оптимальная длина бутона капусты белокочанной — 3−5 мм, содержащая невакуолизированные микроспоры, обладающие морфогенетической активностью. Выявлены эффективные концентрации 6-бензиламинопуриа (БАП) — 4 мг/л, а-нафтилуксусной кислоты (НУК) — 0,3 мг/л для индуцирования эмбриоидогенеза Показана эффективность температурной предобработки бутонов повышенной (+32°С) температурой в течение 1 суток. В результате оптимизации условий культивирования микроспор (соотношение и концентрация регуляторов роста, состава питательной среды, концентрации сахарозы) повышена эффективность эмбриоидогенеза до 0,164±0,04%. Проведена оценка с помощью RAPD-анализа полученных растений-регенерантов, в результате которой установлена их генетическая гетерогенность в сравнении с исходным материалом. С помощью цитологического анализа доказана гаплоидная природа растений-регенерантов капусты белокочанной, полученных в культуре микроспор.

Впервые в России усовершенствованы технологические элементы культуры микроспор капусты белокочанной, позволяющие получать гаплоиды и удвоенные гаплоиды. Выявлены эффективные концентрации 6-бензиламинопуриа (БАП) — 4 мг/л, а-нафтилуксусной кислоты (НУК) — 0,3 мг/л для индуцирования эмбриоидогенеза, показана эффективность температурной предобработки бутонов повышенной (+32°С) температурой в течение 1 суток, установлено высокая эффективность использования наночастиц серебра в концентрации 0,12 л*М для снижения бактериальной и грибной инфекции у донорных растений.

Практическая ценность. Установлено, что использование питательной среды Мурасиге — Скуга (Murashige Т., Skoog F., 1962) (MS), содержащей БАЛ в концентрации 4 мг/л, НУК — 0,3 мг/л, аскорбиновую кислоту— 1 мг/л, сахарозу — 120 г/л, и режима температурной предобработки бутонов капусты белокочанной +32°0 в течение 1 суток, индуцирует эмбриоидогенез микроспор с частотой 0−164±0,04% и позволяет получить гаплоиды и удвоенные гаплоиды.

Обоснование и достоверность научных положений. Исследования выполнены по методикам, рекомендованным научными учреждениями страны. Все выводы и предложения подтверждены экспериментальными исследованиями^ статистической обработкой полученных данных.

Апробация работы. Основные результаты экспериментальной работы по диссертации, выводы, и предложения были доложены и представлены на IV конференцииРАЕН Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты (Москва, 2007) — VIII и IX Молодежной научной конференции, посвященной памяти F.C. Муромцева (Москва, 2008, 2009) — на IX Международной научной конференции «Биология клеток растений in vitro и биотехнология» (Звенигород, 2008) — на Международной научно-практической конференции, посвящённой памяти Б. В. Квасникова (Верея, 2009):

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

• применение наночастиц серебра в концентрации 0,12 жМ в качестве стерилизующего агента для предобработки донорных растений капусты белокочанной позволяет снизить инфицированность эксплан-тов бактериальными и грибными инфекциями;

• лучшая стадия для получения гаплоидных растений является ранняя невакуолизированная микроспорапри введении в культуру, плотность суспензии микроспор составляет 50 000 шт./мл в жидкой питательной среде;

• культивирование микроспор на питательной среде-MS, содержащей БАЛ в концентрации 4 мг/л, НУК — 0,3 мг/л, сахарозу-120 г/л, рН-5,6, аскорбиновую кислоту — 1 мг/л, плант агар-5 г/л, при температуре +25°С и фотопериоде 16/8, позволяет получить эмбриоиды;

• культивирование эмбриоидов на питательной среде MS, содержащей БАЛ в концентрации 1 мг/л, НУК — 0,1 мг/л, сахарозу 30 — г/л, рН 5,6, плант агар 5 г/л, при температуре +25°С и фотопериоде 16/8 позволяет получить растения-регенеранты;

• линии, полученные на основе удвоенных гаплоидов капусты белокочанной сорта Подарок и линии 33, характеризуются высокой вы-равненностью, повышенным содержанием витамина С и Сахаров.

Публикации результатов исследований.

По результатам исследований по теме диссертации опубликовано 8 работ, в том числе одна в журнале «Картофель и овощи», рекомендованном ВАК РФ.

1. Зонтиков Д. Н. Культура микроспор: состояние иперспективы //А.В. Поляков, Д. Н. Зонтиков, Р. В Сергеев //Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты. Сб. науч. трудов. Москва: РАЕН, 2007, вып. 16. — С. 172 — 187.

2. Зонтиков, Д. Н. Культура микроспор Brassica oleracea L. /Д.Н. Зонтиков, С. А. Зонтикова //Сб. науч. трудов VIIIМолодежной научной конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» (Москва, 2 апреля 2008 г.). — М.: ГНУ ВНИИСБ, 2008. —С. 17−18.

3. Зонтиков, Д. Н. Эмбриоидогенез капусты белокочанной (.Brassica oleracea L.) в культуре микроспор /А.В. Поляков, Д. Н. Зонтиков, С. А. Зонтикова //Тезисы IX Международной конференции «Биология клеток растений in vitro и биотехнология» (Звенигород, 812 сентября 2008 г.). — М.: ИД ФБК-ПРЕСС, 2008. — С. 306−307.

4. Зонтиков, Д. Н. Регенерационная способность капусты белокочанной (Brassica oleracea L.) /С.А. Зонтикова, А. В. Поляков, О. Ф. Чикризова, Д. Н. Зонтиков, Г. Н. Ралдугина //Тезисы IX Международной конференции «Биология клеток растений in vitro и биотехнология» (Звенигород, 8−12 сентября 2008 г.). — М.: ИД ФБК-ПРЕСС, 2008. — С. 136−137.

5. Зонтиков, Д. Н. Влияние температурного стресса и борной кислоты на эмбриоидогенез капусты белокочанной (Brassica oleracea L.) в культуре микроспор /Д.Н. Зонтиков, А. В. Поляков //Сб. науч. трудов по овощеводству и бахчеводству к 110-летию со дня рождения Б. В. Квасникова. —Верея, 2009. — С. 191−193.

6. Зонтиков, Д. Н. Генетический и морфофизиологический полиморфизм овощных культур и использование его в селекции на устойчивость к стрессам /А.В.Поляков, О. Ф. Чикризова, Д. Н. Зонтиков, С. А. Зонтикова, Н. Н. Давыдова, К. Рабей //Сб. науч. трудов V Московского международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития», часть 1 (Москва, 16−20 марта 2009 г.). — М.: ЗАО «Экспо-биохим-технологии», РХТУ им. Д. И. Менделеева, 2009. — С. 258−259.

7. Зонтиков, Д. Н. Влияние температурного стресса и кислотности среды на эмбриоидогенез капусты белокочанной (Brassica oleracea L.) в культуре микроспор /Д.Н. Зонтиков //Сб. науч. трудов IX Молодежной научной конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» (Москва, 8 апреля 2009 г.). — М.: ГНУ ВНИИСБ, 2009: — С. 13−14.

8. Зонтиков, Д. Н. Температурный стресс повышает выход эмбриои-дов капусты белокочанной в культуре микроспор /А.В. Поляков, Д. Н. Зонтиков //Картофель и овощи. — 2009. — № 7. — С. 25.

Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, предложений для использования в селекционной практике, списка использованной литературы, содержащего 124 наименование, в том числе 67 иностранных авторов.

выводы.

1. Оптимизированы условия, влияющие на снижение инфицированности и морфогенетическую активность микроспор капусты белокочанной. Установлено, что:

• применение наночастиц серебра в качестве стерилизующего агента для предобработки донорных растений капусты белокочанной в концентрации 0,12 ./иМ позволяет снизить инфици рованность эксплантов от бактерий на 19−39% и от грибов на 25−31% соответственно;

• проведение температурной предобработки (+32°С, в течение 1 суток) позволяет повысить интенсивность эмбриоидогенеза у сорта Подарок на 34%, линии 33 на 33%, линии 34 на 25%.

2. Морфогенетическая активность микроспор капусты белокочанной зависит от стадии развития бутона, плотности суспензии культивируемых микроспор, вида питательной среды, концентрации регуляторов роста и сахарозы, кислотности среды и наличия в питательной среде аскорбиновой кислоты. Установлено, что:

• оптимальная длинна бутона, при которой микроспоры преимущественно находятся на невакуолизированной стадии развития, для сорта Подарок и линий 33, 34 составляет — от 3 до 4 мм;

• плотность суспензии микроспор следует доводить до 50 000 шт. в 1 мл питательной среды, что позволяет получить частоту эмбриоидогенеза на уровне 0,134−0,164%;

• для повышения эмбриоидогенеза культивирование микроспор капусты белокочанной следует проводить на питательной среде MS, обогащенной БАП в концентрации 4 мг/л и НУК — 0,3 мг/л, позволяющей получить 0,152−0,174% эмбриоидов;

• оптимальная концентрация сахарозы, составляющая 120 г/л, позволяет получить на 37% эмбриоидов больше чем в контрольном варианте с использованием 140 г/л;

• культивирование микроспор капусты белокочанной на питательной среде с кислотностью 5,6 позволяет получать более 80 эмбриоидов на чашку Петри, что соответствует частоте эм-бриоидогенеза 0,126−0,164%;

• использование аскорбиновой кислоты в концентрации 1,0 мг/л позволяет повышать интенсивность эмбриоидогенеза на 26%.

3. Культивирование эмбриоидов на питательной среде MS, содержащей БАП в концентрации 1 мг/л, НУК — 0,1 мг/л и сахарозу — 30 г/л и имеющая рН 5,6, позволяет получать около 25% растений-регенерантов от числа культивируемых эмбриоидов. При использовании этой среды было получено 27 растений-регенерантов, из них — 12 растений сорта Подарок, 11 растений линии 33 и 4 растения линии 34.

4. RAPD-анализ растений-регенерантов капусты белокочанной сорта Подарок, полученных в культуре микроспор, показал значительное снижение гетерогенности в спектрах их ДНК в сравнении с исходным образцом. Проведенный цитологический анализ (подсчёт устьиц, числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц и хромосом) подтвердил их гаплоидную природу.

5. Среди растений-регенерантов, полученных из микроспор сорта Подарок, был выделен образец, превышающий контроль (исходный сорт) по содержанию сухого вещества, витамина С, глюкозы и дисахаров на 26,9%, 46,7%, 16,5% и 31,7% соответственно.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В СЕЛЕКЦИОННОЙ.

ПРАКТИКЕ.

На основании полученных нами данных предложена усовершенствованная схема получения удвоенных гаплоидов в культуре микроспор капусты белокочанной предусматривающая:

— двукратную обработку донорных растений водным раствором наночастиц серебра за 7 и 2 суток до изоляции бутонов;

— стерилизацию бутонов капусты белокочанной в течение 1 минуты в 70% растворе этанола, 10 минут в 1% растворе гипохлорита кальция, трёхкратную промывку стерильной водой в течение 5 минут;

— предобработку бутонов температурой +32°С, в течение 1 суток;

— механическое выделение микроспор в жидкой питательной среде MS, содержащей БАП в концентрации 4 мг/л, НУК — 0,3 мг/л, сахарозу — 120 г/л, рН 5,6;

— культивирование микроспор на питательной среде MS содержащей БАП в концентрации 4 мг/л, НУК — 0,3 мг/л, сахарозу — 120 г/л, рН 5,6, аскорбиновую кислоту — 1 мг/лплант агар — 5 г/л, при температуре +25°С и фотопериоде 16/8 до образования эмбриоидов;

— пересадку образовавшихся эмбриоидов на среду MS, содержащую БАП в концентрации 1 мг/л, НУК — 0,1 мг/л, сахарозу — 30 г/л, рН 5,6, плант агар -5 г/л, культивирование при температуре +25°С и фотопериоде 16/8 до получение хорошо развитых растений-регенерантов;

— контроль плоидности: подсчёт хромосом, устьиц и хлоропластов в них, ПЦР-анализ;

— пересадку растений-регенерантов в почву в возрасте 60 суток, яровизацию, самоопыление, получение семян.

При использовании этой технологии, выход эмбриоидов составляет 0,164%, а выход растений-регенерантов 0,024%.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Полученные экспериментальные данные по морфогенезу микроспор капусты белокочанной сорта Подарок и линий 33 и 34 в культуре in vitro, позволили разработать систему получения гаплоидных растений-регенерантов из микроспор путём прямого эмбриоидогенеза и гемморизогенеза на основе каллусов.

Проведённые исследования позволили идентифицировать именно невакуолизированной микроспору как клетку, морфогенетически компетентную к переключению программы развития с гаметофитной на спорофитную. Одним из факторов переключения на спорофитный путь развития, является стрессовое воздействие повышенной температурой. Фактором индуцирующим эмбриоидогенез, приводящим к регенерации растения, является баланс регуляторов роста БАП и НУК в питательной среде. Нормальное развитие растений регенерантов, происходит на питательной среде MS, с содержанием сахарозы на разных этапах органогенеза от 120 г/л, до 30 г/л, а так же аскорбиновой кислоты, снижающей фенольную нагрузку на эмбриоиды.

Таким образом, полученные данные позволяют уже в настоящее время сделать сложный процесс морфогенеза микроспоры капусты белокочанной по спорофитной программе in vitro управляемым и получать полноценные андроклинные гаплоидные растения-регенеранты полученные в культуре микроспор в большом количестве для внедрения их в селекционную практику.

Показать весь текст

Список литературы

  1. , Б.Б. Гаплоидная биотехнология и перспективы её использования в генетической инженерии растений /Б.Б. Анапияев //Изучение генома и генетической трансформации растений.- Новосибирск, 2001- С. 174 184.
  2. , А. Биотехнология в растениеводстве /А. Атанасов Новосибирск: Институт цитологии и генетики СО РАН, 1993.- 241с.
  3. , Т.Б. Проблемы морфогенеза in vivo и in vitro. Эмбриогенез у покрытосеменных растений /Т.Б. Батыгина, В. А. Васильева, Т.Б. Маметь-ева. //Бот. Журн.69, № 1, 1978. С.- 32−34.
  4. , Т.Б. Эмбриоидогенез злаков /Т.Б. Батыгина //Эмбриология цветковых растений: Терминология и концепции. Т.2: Семя /Ред. Т. Б. Батыгина. — СПб.: Мир и семья, 1997. — С. 528−538.
  5. , Г. Б. Получение гаплоидов белокочанной капусты с помощью культуры пыльников для создания гетерозисных гибридов интенсивного типа /Г.Б. Бельская, Т. В. Семашко //Проблемы селекции овощных культур, Минск. 1997. С. 17−20.
  6. , С.В. Влияние температурного стресса на эффективность каллусо-генеза в культуре пыльников проса и гороха /С.В. Бобков //III Московском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития». М, 2005. — С.231.
  7. , Р.Г. Перспективы исследований в культуре клеток и тканей растений. /Р.Г. Бутенко. В кн.: Культура клеток растений. Труды II Всесо-юзн. Конф. Киев, Наук. Думка, 1978. — с. 5−11.
  8. , Р.Г. Культура изолированных тканей как метод изучения процессов роста и морфогенеза растений. /Р.Г. Бутенко М.: Наука. — 1964. -256 с.
  9. , Н.Б. Лабораторный практикум по общей микробиологии. /Н.Б. Градова. М.: ДеЛи принт, 2001. — 131 с.
  10. , Т.Н. Создание трансгенных линий белокочанной капусты с но-вымиагротехническими свойствами: Автореф. дисс. канд. биол. наук / РАН, 2006. 16 с.
  11. , А.Г. Гаплоидия у клещевины как метод создания гомозиготных форм в целях селекции: Автореф. дис .канд биол. наук. -/ВНИИМК.- Краснодар, 1972.-25 с.
  12. , Е.А. Развитие пыльников капусты брокколи in vivo и при культивировании in vitro. /Е.А. Домблидес, Н. А. Шмыкова. //Сб. науч. труд. Всероссийский НИИ селекции и семеноводства овощных культур.-2002 г.- Выпуск 37.- С. 82−92.
  13. , Б.А. Методика полевого опыта / под ред. Б. А. Доспехова -М.: Агропромиздат, 1985.
  14. , А.Г. Ботаника высших, или наземных растений. /А.Г. Еле-невский — М.: «Академия», 2000. — 432 с.
  15. , А.И. Биохимия льна. В кн.: Биохимия культурных растений./ А. И. Ермаков. — Сельхозгиз, 1972. — Т. 3. — С. 67−132.
  16. , И.П. Диморфизм пыльцы и андрогенез в культуре пыльников и микроспор./ И. П. Ермаков //Вестн. Моск. ун-та. Сер. 16, Биология. — 1986. № 3. — С. 28−40.
  17. , К.Ж. Гаплоидная биотехнология растений. /К.Ж Жамбакин -Алматы, 2004.-186с.
  18. , B.C. Идентификация генотипов растений с помощью ПЦР-анализа рассеянных повторяющихся последовательностей R173. /B.C. Зайцев Э. Е., Хавкин// Докл. РАСХН, 2001, 2: 3−5.
  19. , Е.А. Практикум по сельскохозяйственной биотехноло-гии./Е.А. Калашникова, Е. З. Кочиева, О. Ю. Миронова. М. — Колосс, 2006. — 144 с.
  20. , Ф.П. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений /Ф.П. Калинин, В. В. Сарнацкая, В. Е. Полищук. Киев. — Наук, думка, 1980.-488с.
  21. , Н.Н. Эмбриологические основы метода культуры пыльников пшеницы, как биотехнологического приема. /Н.Н. Круглова //В кн.: II съезд ВОГИС (1−5 февраля 2000 г.). Тез. докл. С.-П., 2000, т.1, с.151
  22. , Ф.П. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений /Ф.П. Калинин, В. В. Сарнацкая, В. Е. Полищук. — Киев. — Наук, думка, 1980.-488с.
  23. , Н.Н. Пыльник in vitro как модель для изучения путей морфогенеза растений in vivo /Н.Н Круглова //The Biology of Plant Cells in vitro and Biotechnology — Саратов.: Сарат. губерн. торгово-промыш. Палаты, 2003. 160с.
  24. , Н.Н. Эмбриологические основы андроклинии пшеницы /Н.Н. Круглова, Т. Б. Батыгина, В. Ю. Горбунова, Г. Е. Титова, О.А. Сельдими-рова. М.: Наука, 2005. — 97 с.
  25. , Т.В. Культурная флора СССР. /Т.В. Лизгунова. Т. П. Капуста. Л.: Колос. Ленингр. Отд. 1984. — С.5
  26. , С.С. Научные основы овощеводства /С.С. Литвинов. —М.: Россельхозакадемия, 2008.—776 с.
  27. , И.М. Каллусогенез и эмбриогенез в культуре пыльников картофеля /И.М. Маруненко, А. А. Кучко //Цитолог, и генет. 1989 — Т.23 № 3. С. 48−51.
  28. , Г. С. Основы сельскохозяйственной биотехнологии. /Г.С. Муромцев, Р. Г. Бутенко, Т. Н. Тихоненко. М.: Наука, 1990.- 176с.
  29. , В. Гаплоиды в селекции растений. /В. Ницше, Г. Венцель М.: Колос, 1980.- 128с.
  30. Д.В. Биологическое и технологическое обоснование семеноводства F1 гибридов капусты белокочанной: Автореф. дис. докт. с.-х. наук. // М.: МСХА, 2008.-24 с.
  31. Поддубная-Арнольди, В. А. Общая эмбриология покрытосеменных растений./В.А. Поддубная-Арнольди -М.: Наука, 1964.-257 с.
  32. , А.В. Усовершенствование селекционного процесса льна-долгунца (Linum usitatissimum L.) на основе использования биотехнологических методов: Автореф. дисс. д-ра биол. Наук / РАСХН, 1998. 50 с.
  33. , А.В. Биотехнология в селекции льна. /А.В. Поляков — Тверь, 2000 С.78−95.
  34. , А.В. Получение регенерантов овощных культур и их размножение in vitro. Методические рекомендации. /А.В. Поляков — М.: ГНУ ВНИИО Россельхозакадемии, 2005. — 36 с.
  35. , А.В. Получение растений огурца с повышенной устойчивостью к фузариозному увядянию методами in vitro. Методические рекомендации /А.В. Поляков, А. А. Ткачева, И. И. Тарасенков, Н. К. Бирюкова. — М.: ГНУ ВНИИО Россельхозакадемии, 2006. — 28 с.
  36. , П.В. Применение агробактериальной трансформации в селекции белокочанной капусты на устойчивость к болезням: Автореф. дис. канд. биолог, наук // М.: МСХА, 2002. 24 с.
  37. , В.А. Цитология и цитогенетика растений /В.А. Пухальский, А. А. Соловьев, В. Н. Юрцев. М.: Издат-во МСХА, 2004. 118с.
  38. , И.Р. Биотехнология зерновых культур. /И.Р. Рахинбаев, Ж. Тивари, Н. К. Бишимбаева, С. В. Кушнаренко, Е. Д. Азимов. Алма-ата: Гылым, -1992. С.- 40.
  39. , А.А. Синтез и свойства стабильных наночастиц металлов /А.А. Ревина //Наночастицы в природе. Нанотехнологии их создание в приложение к биологическим системам: Материалы 1-ого научно-методологического семинара. -М.: РАЕН-МААНОИ, 2003. С.61−68.
  40. , С.А. Цитология и физиология развивающегося пыльника. /С.А. Резникова. М.: Наука, 1984.- 272с.
  41. , С.А. Мейоз в культуре изолированных пыльников /С. А. Резникова, Ю.Ф.Богданов//Генетика. 1972.- 8 № 9. С.30−41.
  42. , И.Д. Особенности развития пыльцы злаков и значение их для некоторых генетических исследований /И.Д. Романов //Генетика. — 1970. Т.6.- № 10.- С.11−25.
  43. Справочник по климату СССР. — 1964. — Вып.8. — 4.2.
  44. Сельскохозяйственная биотехнология: Учеб. /B.C. Шевелуха, Е. А. Калашникова, С. В. Дягтерев и др.: под ред. B.C. Шевелухи //М.: Высшая Школа, 1998. С.69−70.
  45. , Г. Б. Биотехнологические основы селекционной технологии моркови (Daucus carota L.): Автореф. дис. докт. биолог, наук. / М., 2007. — 27с.1
  46. , З.Б. //В кн.: Культура клеток растений. /З.Б. Шамина. М.: Наука. 1981.- С.124−136.
  47. , Н.В. Влияние условий выращивания донорных растений пшеницы на эффективность пыльниковой гаплопродукции /Н.В. Шеррер //Материалы научной конференции. По с.-х. биотехнологии. Целиноград. 1991. С. 57.
  48. , Н.А. Диморфизм пыльцы и оценка эмбриогенной способности микроспор различных генотипов моркови /Н.А. Шмыкова, Г. Б. Тюкавин //Сельскохозяйственная биотехнология. № 5. 2001. С.53−60.
  49. , Н.А. Разработка системы биотехнологических методов, направленных на укоренение селекционного процесса овощных культур: Автореф. дис. докт. с.-х. наук. /ВНИИССОК М., 2006. — 20 с.
  50. , С.С. Гаплоидия и селекция. /С.С. Хохлов, B.C. Тырнов. М.: Наука. 1976.-С. 99- 105.
  51. В.Г. Практикум по курсу общей ботаники /В.Г. Хржанов-ский, С. Ф. Пономаренко. М.: Агропромиздат, 1989. — 416 с.
  52. , В.Ж. Основы биотехнологии: Культивирование изолированных клеток и тканей растений /В.Ж Цыренов //Учебно-методическое пособие. Улан-Удэ: ВСГТУ, 2003 С. 21−24.
  53. Arnison, P.F. Genotype specific response of cultured broccoli anther to cyto-kinins /P.F.Arnison, P. Donaldson, A. Jackson, C. Sempel, W. Keller // Plant Gell, Tissue and Organ Culture 1990. № 3 P. 217−222.
  54. Bajaj, Y.P.S. In vitro production of haploids /Y.P.S. Bajaj //Handbook of plant cell culture: Techniques for propagation and breeding (Eds D.A. Evans) New York, London: Macmillam. -1983. -V. 1, P.228−287.
  55. Batygina, T.B. Morhogenesis of somatic embryos developing in natural conditions // Biologija.-1998, N 3.-P. 61−64.
  56. Bedinger, P.A. The remarkable biology of pollen. /Р.А. Bedinger //Plant Cell. 1992. — V.4. P.879−887.
  57. Biddington, N.L. Variation in response to high temperature treatmens in anther culture of Brussels sprouts. /N.L. Biddington, H.T. Robinson. //Plant Cell, Tissue and Organ Culture 22.- 1990. P.48−54.
  58. Brooks, J. Chemical structure of the exine of pollen walls and a new function for carotenoids in nature /J. Brooks, G. Shaw //Nature. — 1978. V. 219. -P.532−533.
  59. Bhattacharya, N.M. Production of plantlets through somatic embryo-genesis in Brassica campestris. //N.M. Bhattacharya, S.K. Sen //Zeitschrift fur Pflanzenphysiologie. 1980. — V. 99.-P. 357−361.
  60. Bullock, P. Anther culture of wheat (Triticum aestivum L.) F-ls and their reciprocal crosses /Р. Bullock// Theor. Appl. Genet. -1982.- V. 62.-P. 155−159
  61. Cao, M.Q. Embryogenese et regenerationdeplantesde choucroute /Brassica oleracea L. ssp. Capitata) par culture in vitro de microspores.isolees. / M. Q. Cao, F. Chariot, C.C. Dore. Ж Acad. Sci. Paris t. 310- serie 3.-1990. P. 203f 209.
  62. Chase, S.S. Monoploid frequencies in a commercial double crass hybrid maize and its components single cross hybrids and: inbred lines. /S.S- Chase //Genetics. 1949- Vol.34 P.328−332.
  63. Chu, C.C. The N6 Medium and its Applications for Anther Culture of Cereal Crops /С.С. Chu//Proc. Plant. Tissue culture bening Geience Press. 1978. -P. 43−50.
  64. Chuang, C.C. A set of Potato medium for wheat anther culture /С.С. Chuang, J.W. Ouyang //Proc. Symp. Plant Tissue Culture. Science Press: Peking. -1978.- P.51−56.
  65. Constantin, M.J. Propagation of Higher Plants- througt Tissue Culture: Emerging Technique and Strategies/M.J: Constantin, R: R^ Henke, K.W.
  66. Hughes, B.V. Conger Envir. and Exper Botany. Special issue., 1981. — P. 452.
  67. Dunwell, J.M. Anther culture of Solatium tuberosum L / J. M Dunwell, N. Sunderland //Euphytica- 1973 V.22 P. 317−323.
  68. Dunwell, J.M. Embriogenesis from pollen in vitro. Biotechnology in plant science. Relevance to agriculture in the eighties. /J.M. Dunwell. //Acad. Press. — 1985. P.44−49.
  69. Dunwell, J.M. Pollen, ovule and embryo culture as a tool in plant breeding /J.M. Dunwell //Whither L.A. Anderson P.G. (eds) Plant. Tissue culture and its Agricultural Applications Butterworths. London. — 1986. P.375−404.
  70. Duijs, J.G. Highly regenerative cultivars in microspore culture in Brassica oleraseae L. var. Capitata. / J.G. Duijs, R.E. Voorrips. // Euphytica 60. 1992.- P. 45−55.
  71. Finnie, S.J. The effect of carbohydrate composition and concentration on anther culture response in barley (.Hordeum vulgare L.) /S.J. Finnie, W. Powell, A.F. Dyer //Plant Breed., 1989.-V.10.- P. 110−118.
  72. Gamborg, O.L. Nutrient requirements of suspension cultures of soybean root cells /O.L. Gamborg, R.A. Miller, K. Ojima //Exp. Cell. Res. 21. 1968. P. 359−368.
  73. Green, C.E. Prospects for crop improvement in the field of cell culture. /С.Е. Green.//Hort. Sci. 1977.-V. 12.-P. 131−134.
  74. Guha, S. In vitro production of embryos from anthers of Datura. /S. Guha, S. C Maheshwari. //Nature, 204, 1964. P. 497.
  75. Guo, J.D. Maintenance of male sterile germ-plasm in Brassica rapa by in vitro propagation. /J.D. Guo, T. Niemela, U. Talisalo, S. Pulli. //Agr, And Food Scince in Finland. 2000. — V. 9. -P. 231−238.
  76. Engvild, K.C. Plantlet ploidy and flower bud size in tobacco anther cultures /К.С. Engvild //Hereditas. — 1974. — V.76. — P. 320 — 322.
  77. Engvild, K.C. Anther cultures of Datura innoxia: Flower bud stage and em-bryoid level of ploidy. /К.С. Engvild, I. Linde -Laursen, A. Lundquist. //Hereditas. 1972. — V.72. — P. 331 — 332.
  78. Evans D.A. Somaclonal and gametoclonal variation / D.A. Evans, W.R. Sharp, M.P. Medina-Filho American Journal of Botany, 1984, V.71, N 6, P.759−774.
  79. Hu, Han. Wheat: improvement through anther culture /Ни Han //Biotechnology in agriculture and forestry. (Ed. By Y.P.S. Bajaj) Springer-Velag: Berlin Heidelber. — 1986. — V. 2. — P.55−71.
  80. Hunter, C.R. The effect of anther orientation on the production of microspore — derived embryoids and plants of Hordeus Vulgarie Salarlis. /C.R. Hunter. //Plant CelL-1985, 4. P.267−268.
  81. Qin, X. Chloroplast namber in Guard cells as ploidy indicator of in vitro grown androgenic peper plantlets /X. Qin, G.L. Rotino //Plant Cell, Tissue Organ Cult. 1995.-V. 41. P. 153−160.
  82. Kao K.N. Induction of pollen plant formation in barley anther culture /K.N Kao, D.C. Horn //Int. Symp. On genetic manipulation in crops. Abstracts. Beijing. China. 1984. P.64.
  83. Keller, W. A. In vitro production of plants from pollen in Brassica campre-stris. /W.A. Keller, R. Rajhathy, J. Lacapra. //Can. Genet Cytol 17, 1975: P. 655- 666.
  84. Kozai, T. Photoautotrophic micropropagation in vitro. /Т Kozai. //Cellular and Developmental Biology Plant. 1991. — V. 27. -P. 47−51.
  85. Kuginuki, Y. Varietal differences in embryogenic and regenerativ ability in microspore culture of Chinese cabbage {Br. Camperstris spp. Rekinesis). /Y. Kuginuki, K. Nacamura, K-I. Hida, H. Yosicawa. //Breeding Scince -1997- 47 -P.341−346.
  86. Lazar, M.D. Combining abilities and heritability of callus formation and plantley regeneration in wheat (Triticum aestivum) anther culture /M.D. Lazar //Theor. Appl. Genet., 1984a.- V.68. — P. 131−134.
  87. Mercy, S.T. Chromosomal behavior of anther culture derived plants of rice / S.T. Mercy, F.J. Zapata //Plant Cell Repts 1986. V. 5 № 3 P.215−218.
  88. Mukherjee, S.K. Low sugar and osmotic requirements for shoot regeneration from leaf pieces of Solanum melongena L. /S.K. Mukherjee, B. RathinasaEAIIathi, N, Gupta. //Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 1991. — V. 25.-P. 13−16.
  89. Murashige T. A. Revised Medium for Rapid Growth and Bio Assays with Tobacco Tissue Cultures /Т. Murashige, F. Skoog //Physiologia Plantarum. -1962. V. 15. -P.473−497.
  90. Nichterlein, K. Genotypic and exogenous factors affecting shoot regeneration from anther callus of linseed (Linnum usitatissimum L.). /К. Nichterlein, H. Umbach, W. Friedt //Institute of Agronomy and Plant Breeding, Giessen, 1991,-P. 125−128.
  91. Nitsch, J.P. Experemental Androgenesis in Nicotiana /J.P. Nitsch //Phytomorphology. 1969. — Vol. 19. P. 389−404.
  92. Nitsch, P.C. Effect dun choc termigue sur lepouvoir embryogenis pollen de Duture in noxia culture dans lanthereon isole de lantoure /Р.С. Nitsch, B. Noreel //C.R. Acad. Sci. 1973, 276D, 3 -P.305−306.
  93. Nitsch, P.C. Proceedings of the 18th International Horticulture Congress /Р.С. Nitsch //Tel Ariv. 1972. V.2 — P. 19−58.
  94. Ockendon, D.J. Utilization of anther culture in Breeding Brussels sprouts. /D.J. Ockendon. //Genetic Manipulation in plant Plant Breeding. Walter & Gruyter CO. Berlin New York Printed in Germany: 1986. P. 256−271.
  95. Oono, К. Production of haploid plantlets of rice (Oryza sativa) by anther culture and their use for breeding. /К. Oono. //Bull. Nat. Inst. Agric. Sci.- 1975 -Series D.-26-P. 139−222.
  96. Ouyang, J.W. The response of anther culture to culture temperature in Triti-cum aestivum /J.W. Ouyang, S.M. Zhou, S.E. Jia //Theor. and App. Genet. — 1983., V66, № 2, P.101−109.
  97. Pechan, P.M. W. A. Identification of potentially embryogenic in Brassica napus /Р.М Pechan, W.A. Keller //Physiologia Plantarum. 1988. — V.74. P.377−384.
  98. Phippen, C. Genotype plant, bud size and media factors affecting anther culture of califlowers (В. Oleraceae var. botrytis). /С. Phippen, D.J. Ockendon // Theor. Appi. Genet.-1990.-79.-№l.-P.33−38.
  99. Purahauser L. Stimulation of shoot regeneration in Triticum aestivum and Nicotiana plumbaginifo-lia in tissue culture using the ethylene inhibitor AgNOs PL. Purahauser, M. Medgyesy, P.J. Czenko, L. Marton //Plant Cell Reports, 1987. Vol. 6.-P. 1 -4.
  100. Shu, W. Secondary embryogenesis from thin cell layers of Brassica napus ssp. oleifera /W. Shu, C.S. Loh //New Phytologist. 1991. — V. 119. -P. 427−432.
  101. Singh, B. Heterosis in radish {Raphanus sativus L.). / B. Singh, V.P. Gupta, P.K. Gupta. //Indian J. Hort. 1986. — V. 43. 3−4. -P. 242−247.
  102. Sorvari, S. Influence of sucrose and milibiose on barley anther culture in starch media. // S. Sorvari, O. Schieder // Plant Breeding. -1982, 99.- P. 1−24.
  103. Sunderland, N. The consept of morfogenic competence with reference to anther and pollen culture. / N. Sunderland. // Plant Cell Culture Crop. Proc. Int. Symp., Calcutta., 6−10 Dec., 1981. N.Y.- L.P.- 1983.-P. 125−139.
  104. Telmer, T. A. Cellular changes During heat shock induction and embryo development of cultured microspores of Brassica napus sv. Topas / T. A. Telmer,
  105. W. Newcomb, D.H. Simmonds //Protoplasma. 1995. V. l85. — P. 106 — 112
  106. Thomas, E. Embryogenesis from microspores of Brassica napus. / E. Thomas, G. Wenzel. //Z. Planzenzucht 74, 1975: p77−81.
  107. Thurling, N. The influence of donor plant genotype and environment on production of multicellular microspores in cultured anther of Brassica napus ssp oleifera /N. Thurling, P.M. Chay //Ann. Bot. 1984. V/54 № 5. P.681−693
  108. Vagera, T. Regulation of in vitro androgenesis of tobacco: relationship between concertration of iron ions and kinetin. // T. Vagera, T. Havranek, Z. Opatrny. //Biohem U. Physiol. Pflanzen.- 1979 -P.759−760.
  109. Yang, O. A study of factors affecting anther culture of cauliflower Brassica oleracea var. botrytis. // O. Yang, J. E. Chauvin, Y. Herve. //Plant Cell, Tissue and Organ Culture 28, 1992.: 289−296
  110. Zagorsca, N. A. Morfogenesis and plant differentiation in anther cultures of the genus Lucopersicon Mill. / N. A. Zagorsca, M. Abadjieva, C. Georgiev, R. Georgieva. //Plant Tissue Cult., Tokio and lake Yamanaka, July 11−16, Tokyo-1982-P. 539−540.
  111. Zaki M.A.M. Microspore derived embryos in Brassica: the signiflcanceof division symmetry in pollen mitosis I to embryogenic development / M.A.M. Zaki, H.G. Dickenson //Sexual Plant Reproduction. -1991. V.4. — P.48−55
Заполнить форму текущей работой

Пора сдавать?