ΠΠΏΡΠΈΠΌΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½Π° EGFP Π‘ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΎΠ² Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° ΠΈ ΠΏΠΈΡΠ΅Π½Π°
Π Π°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ° Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΎΠ², ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡΠΈΡ Π½Π° ΡΡΠΎΠ²Π½Π΅ Π³Π΅Π½Π° ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΎΡΠ²ΡΠ°ΡΠ°ΡΡ ΡΠ°Π·Π²ΠΈΡΠΈΠ΅ Π·Π°Π±ΠΎΠ»Π΅Π²Π°Π½ΠΈΠΉ, Π²ΡΠ·Π²Π°Π½Π½ΡΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠ΅ΠΉ ΠΏΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² (Π²ΠΈΡΡΡΠ½ΡΠ΅, ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ ΠΎΠ½ΠΊΠΎΠ³Π΅Π½ΠΎΠ²) ΠΈΠ»ΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ², ΠΏΡΠ΅ΠΏΡΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΡ Π΅Π³ΠΎ ΠΈΠ·Π»Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ (MDR), ΠΏΡΠΈΠ²Π΅Π»Π° ΠΊ ΠΏΠΎΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΈ ΡΠ°Π·Π²ΠΈΡΠΈΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π½Ρ-ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ. ΠΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π½Ρ-ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΡΡΠΎ: Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½Π°-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ… Π§ΠΈΡΠ°ΡΡ Π΅ΡΡ >
ΠΠΏΡΠΈΠΌΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½Π° EGFP Π‘ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΎΠ² Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° ΠΈ ΠΏΠΈΡΠ΅Π½Π° (ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΠ°Ρ, ΠΊΡΡΡΠΎΠ²Π°Ρ, Π΄ΠΈΠΏΠ»ΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΡΠ½Π°Ρ)
Π Π°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ° Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΎΠ² Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΡΠΈΠΎΡΠΈΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ Π·Π°Π΄Π°ΡΠ΅ΠΉ ΡΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠΉ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ, Π±ΠΈΠΎΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Ρ ΠΈΠΌΠΈΠΈ ΠΈ ΠΌΠ΅Π΄ΠΈΡΠΈΠ½Ρ. Π Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅Π΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠ°Π±ΠΎΡ, ΠΎΡΡΠ°ΠΆΠ°ΡΡΠΈΡ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ΄Ρ ΠΎΠ΄Ρ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠΎΠΉ Π·Π°Π΄Π°ΡΠΈ. ΠΠΎ ΡΡΠ΄Ρ ΠΏΡΠΈΡΠΈΠ½ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΏΠ΅ΡΡΠΏΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΌ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΠΎΠ΄Ρ ΠΎΠ΄, ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΉ Π½Π° Π²ΡΠ±ΠΎΡΠ΅ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ ΠΌΠ ΠΠ ΠΏΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° ΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡΠ²Π° ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΏΡΠΈ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠΈ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ Π΄ΡΡΠ³ Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΌ. ΠΠ° ΡΠ΅Π³ΠΎΠ΄Π½ΡΡΠ½ΠΈΠΉ Π΄Π΅Π½Ρ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ Π²Π΅Π΄ΡΡΡΡ Π² ΡΡΡΡ Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡΡ :
— Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ;
— ΡΠΈΠ±ΠΎΠ·ΠΈΠΌΡ ΠΈ ΠΠΠΠ·ΠΈΠΌΡ;
— siRNA ΠΈ miRNA.
Π ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ ΡΡΠΈΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ² Π»Π΅ΠΆΠΈΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ (17 — 70 Π½.) Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΡ, ΡΠ°ΡΡΠΈΡΠ½ΠΎ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΡ ΠΌΠ ΠΠ — ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ. ΠΠ±ΡΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏΡ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ ΡΠ°ΠΊΠΈΡ Π°Π³Π΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΎΠ±ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡΡ ΠΈΡ ΠΈ Π² ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡΠΈ Π²ΠΎΠ·Π½ΠΈΠΊΠ°ΡΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ±Π»Π΅ΠΌ, ΡΡΠ΅Π΄ΠΈ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΎΡΡΡΡΠΌΠΈ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ Π΄ΠΎΡΡΠ°Π²ΠΊΠ° Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ, ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΡ ΠΊ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· ΠΈ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Ρ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΡ. Π₯ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΠ-Π°Π³Π΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΏΠΎΠΌΠΎΠ³Π°ΡΡ ΡΠ°ΡΡΠΈΡΠ½ΠΎ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡΡΡ ΡΠ΅ΡΠΈΡΡ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΠ΅ ΠΈΠ· ΡΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ±Π»Π΅ΠΌ ΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠΈΡΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π°Π³Π΅Π½ΡΠΎΠ².
ΠΠ·ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½Π°, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»ΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠ΅ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ² Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π°, ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡΠΈΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ·Π½Π°ΡΠ½ΠΎ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΠΈΡΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠ΅ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ².
Π¦Π΅Π»ΡΡ Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΎΡΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ° ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½Π° EGFP Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΎΠ² ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° Ρ ΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΎΠΌ.
1. ΠΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ²
Π Π°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ° Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΎΠ², ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡΠΈΡ Π½Π° ΡΡΠΎΠ²Π½Π΅ Π³Π΅Π½Π° ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΎΡΠ²ΡΠ°ΡΠ°ΡΡ ΡΠ°Π·Π²ΠΈΡΠΈΠ΅ Π·Π°Π±ΠΎΠ»Π΅Π²Π°Π½ΠΈΠΉ, Π²ΡΠ·Π²Π°Π½Π½ΡΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠ΅ΠΉ ΠΏΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² (Π²ΠΈΡΡΡΠ½ΡΠ΅, ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ ΠΎΠ½ΠΊΠΎΠ³Π΅Π½ΠΎΠ²) ΠΈΠ»ΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ², ΠΏΡΠ΅ΠΏΡΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΡ Π΅Π³ΠΎ ΠΈΠ·Π»Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ (MDR), ΠΏΡΠΈΠ²Π΅Π»Π° ΠΊ ΠΏΠΎΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΈ ΡΠ°Π·Π²ΠΈΡΠΈΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π½Ρ-ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ. ΠΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π½Ρ-ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΡΡΠΎ: Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½Π°-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ ΡΠΈΠΊΠ²Π΅Π½Ρ-ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡΡΡ Ρ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΡ ΠΏΠΎΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ²ΠΎΠΌ Π£ΠΎΡΡΠΎΠ½-ΠΡΠΈΠΊΠΎΠ²ΡΠΊΠΈΡ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠΉ. ΠΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄, ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΡ Ρ Π ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΡ, ΠΏΡΠ΅ΠΏΡΡΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ Π΅Ρ Π΄Π°Π»ΡΠ½Π΅ΠΉΡΠ΅ΠΌΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΈΠ½Π³Ρ [1−3]. ΠΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΡ Π½Π° ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΡΡ ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ°Ρ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π»ΠΈ, ΡΡΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² (Π΄Π°Π»Π΅Π΅ ODN) Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ 20 — 30 Π½., ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»ΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΡ ΠΌΠ ΠΠ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠ½ΠΈΠΆΠ°Π΅Ρ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ Π΅Ρ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°. Π Π°Π·Π²ΠΈΡΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π»ΠΎ ΡΡΠ΄ ΠΏΡΠΈΡΠΈΠ½, ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΡΡΠΈΡ ΠΊ ΡΠ½ΠΈΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ODN: ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΎΠ΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΠΆΠΈΠ·Π½ΠΈ ODN Π² ΡΡΠ²ΠΎΡΠΎΡΠΊΠ΅, Π½ΠΈΠ·ΠΊΠ°Ρ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΎΠ½ΠΈΠΊΠ½ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΈΡ (ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡΠ°) Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ ΠΈ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½Π°Ρ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠΎ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΠΌΠΈ Π ΠΠ.
Π Π°Π·Π²ΠΈΡΠΈΠ΅ ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Ρ ΠΈΠΌΠΈΠΈ, Π² ΡΠ°ΡΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, Ρ ΠΈΠΌΠΈΠΈ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ, ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΠΈΡΠΊΠ°ΡΡ ΠΏΡΡΠΈ ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π²ΠΎΠ·Π½ΠΈΠΊΠ°ΡΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ±Π»Π΅ΠΌ Π²Π½Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΉ ODN. Π₯ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°ΡΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ Π°Π·ΠΎΡΠΈΡΡΡΠ΅ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ ΡΠ°Ρ Π°ΡΠΎ-ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ ΠΎΡΡΠΎΠ², ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π΅Π³ΠΎ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·ΠΎΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΠΈ ODN ΠΈ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π΅Π³ΠΎ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΡ. ΠΠΎΠ²ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π΄ΠΎΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ ODN Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ ΠΏΡΡΠ°ΡΡΡΡ ΡΠ΅ΡΠΈΡΡ Π²Π²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π² Π΅Π³ΠΎ ΡΠΎΡΡΠ°Π² ΠΏΠΎ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΌΡ ΠΈΠ· ΠΊΠΎΠ½ΡΠΎΠ² ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ Π³ΡΡΠΏΠΏ, ΠΎΠ±Π»Π΅Π³ΡΠ°ΡΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΡ ΠΎΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΡΠ΅Π· ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ [1,3].
Π ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΠΎΠΌ Π²ΡΠ΄Π΅Π»ΡΡΡ Π΄Π²Π° ΠΌΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ° Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ²: Π°ΡΠ΅ΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ Π·Π° ΡΡΡΡ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡΠΈ ΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π ΠΠ Π² ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π΅ Π ΠΠ-ΠΠΠ-Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ°. ΠΠ΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΉ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°ΡΡ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΠΎΠ΅ Π²Π»ΠΈΡΠ½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎ ΡΠΎΠΌΡ ΠΈΠ»ΠΈ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΌΡ ΠΌΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΡ, ΡΡΠΎ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ ΡΡΠΈΡΡΠ²Π°ΡΡ ΠΏΡΠΈ Π²ΡΠ±ΠΎΡΠ΅ Π²Π°ΡΠΈΠ°Π½ΡΠ° ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ [1,3,4].
1.1 ΠΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ²
ΠΡΠΈ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠΈ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° Ρ ΠΌΠ ΠΠ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΡΡ Π΄Π²Π° ΡΠΎΠ±ΡΡΠΈΡ: ΡΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ΅ Π±Π»ΠΎΠΊΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Π ΠΠΠ°Π·ΠΎΠΉ H. ΠΠ»Ρ ΠΎΠ΄Π½ΠΈΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΎΠ±Π° ΡΠΎΠ±ΡΡΠΈΡ (Π ΠΠΠ°Π·Π° H-ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ), Π΄Π»Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ — ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ΅ Π±Π»ΠΎΠΊΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ (Π ΠΠΠ°Π·Π° H-Π½Π΅Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΠ΅). ΠΡΠΈ Π΄Π²Π° Π²Π°ΡΠΈΠ°Π½ΡΠ° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½Ρ Π½Π° ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΡΡ ΠΌΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ°Ρ . ΠΠ°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠΈΡΠΎΠΊΠΈΠΉ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΡΡ ΠΌΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² Π·Π°ΡΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Π²ΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ Π²Π°ΡΠΈΠ°Π½ΡΠ°. ΠΡΠΎ Π΄ΠΎΡΡΠΈΠ³Π°Π΅ΡΡΡ Π°Π΄ΡΠ΅ΡΠ°ΡΠΈΠ΅ΠΉ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΊ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ½Π½ΡΠΌ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΡΠΌ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΠΌ, ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΠΏΡΠ΅-ΠΌΠ ΠΠ, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΠΌΠ ΠΠ. Π ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ ΠΏΡΠ΅-ΠΌΠ ΠΠ Π°Π΄ΡΠ΅ΡΠ°ΡΠΈΡ ODN ΠΊ Π³ΡΠ°Π½ΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡΠΈ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΠΈΠ½ΡΡΠΎΠ½ΠΎΠΌ ΠΈ ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΠΎΠΌ Π½Π°ΡΡΡΠ°Π΅Ρ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΠ½Π³, ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π»ΠΈΠ±ΠΎ ΠΊ Π΅Π³ΠΎ ΠΎΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΊΠ΅, Π»ΠΈΠ±ΠΎ ΠΊ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ, ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡΠ΅ΠΉ Π½Π΅ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΠΉ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ (ΡΠΌ. ΡΠΈΡ.1). ΠΡΡΠ³ΠΈΠΌ ΠΏΠ΅ΡΡΠΏΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΌ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠΎΠΌ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ ODN Π² ΠΏΡΠ΅-ΠΌΠ ΠΠ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π³ΠΈΠΎΠ½. ΠΠ·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ODN Ρ ΡΡΠΈΠΌ ΡΠ΅Π³ΠΈΠΎΠ½ΠΎΠΌ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ Π±Π»ΠΎΠΊΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΊΠ΅ΠΏΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ [2,4,5].
ΠΡΠΈ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠΈ ODN Ρ ΠΌΠ ΠΠ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π½Π°ΡΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π΅Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ, Π° ΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΈ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·Π° Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Π·Π° ΡΡΡΡ Π±Π»ΠΎΠΊΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π΄Π²ΠΈΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠΈΠ±ΠΎΡΠΎΠΌΡ ΠΏΠΎ ΠΌΠ ΠΠ ΠΈΠ»ΠΈ Π΄Π°ΠΆΠ΅ Π΅Ρ ΡΠ±ΠΎΡΠΊΠΈ Π² Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ ΠΎΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠ°ΠΉΡΠ° ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ.
Π ΠΈΡ. 1. Π Π°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΠΌΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΡ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ².
Π ΠΠΠ°Π·Π° H-ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΠ½ΡΠ΅ ODN ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π±ΡΡΡ Π°Π΄ΡΠ΅ΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΠΊ Π»ΡΠ±ΠΎΠΌΡ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΡ ΠΏΡΠ΅-ΠΌΠ ΠΠ ΠΈ ΠΌΠ ΠΠ, ΡΠ°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈΡ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΎ Π½Π° Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π°ΡΠΈΠΈ Π ΠΠΠ°Π·Ρ H, ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠΎΠΌ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π ΠΠ Π² ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π΅ Π΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠΎΠ² Π ΠΠ — ΠΠΠ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΠ΅ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ Π½Π΅ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Ρ Π²ΠΊΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΡΡΠΎΡ ΠΌΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ Π²Π²ΠΈΠ΄Ρ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π ΠΠΠ°Π·Ρ H. ΠΡΠΎ ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½ΠΎ Ρ ΡΠ΅ΠΌ, ΡΡΠΎ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ½ΡΡΠ²ΠΎ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΉ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΠΎΠ² ΡΠΏΠΈΡΠ°Π»ΠΈ Π΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° ODN — Π ΠΠ, ΠΈ ΠΎΠ½ΠΈ ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΡΡΠ°ΡΡ Π±ΡΡΡ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠ°ΠΌΠΈ Π΄Π»Ρ Π ΠΠΠ°Π·Ρ H.
ΠΠ½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ Π²ΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠΊΠΎΠ»Π΅Π½ΠΈΡ — ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎ 2'-ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ° ΡΠ°Ρ Π°ΡΠ°, Π½Π΅ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠ°ΠΌΠΈ Π ΠΠΠ°Π·Ρ Π, ΠΏΠΎΡΡΠΎΠΌΡ Π½ΡΠΆΠ½ΠΎ ΠΈΡΠΊΠ°ΡΡ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠ΅ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»ΡΡΡΠΈΠ΅ Π°Π³Π΅Π½ΡΡ (ΠΈΡΠΊΡΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΠ΅ Π ΠΠΠ°Π·Ρ). Π ΡΠ΄ ΠΌΠ°Π»ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» (ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΡΡΠΎΡΡ, ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΠ½Ρ) ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Ρ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»ΡΡΡ Π ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Ρ. ΠΡΠΈΠΊΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°ΠΌ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΡΡ Π³ΡΡΠΏΠΏ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΆΠ΅Π»Π°Π΅ΠΌΡΡ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠΎΠ² Π ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ. Π’Π°ΠΊΠΈΠ΅ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ — ΡΡΠΎ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠ°Π»Π»ΠΎΠ², Π°ΠΌΠΈΠ½Ρ, ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄Ρ ΠΈ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΡΠΌΠΈ Ρ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ°ΠΌΠΈ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅Π½ΡΡΠ° Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· (ΠΈΠΌΠΈΠ΄Π°Π·ΠΎΠ»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΡΡΠΎ, COO--, NH2-Π³ΡΡΠΏΠΏΡ, Π³ΡΠ°Π½ΠΈΠ΄ΠΈΠ½) [3−7].
1.2 ΠΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ²
1.2.1 Π‘ΡΡΠ°ΡΠ΅Π³ΠΈΠΈ ΡΠ°Π·Π²ΠΈΡΠΈΡ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΉ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ²
ΠΠ° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½Π½ΡΡ Π΄Π°Π½Π½ΡΡ ΠΏΠΎ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² Π±ΡΠ» ΡΡΠΎΡΠΌΡΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ ΡΡΠ΄ ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΈΠ΅Π², ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΌ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ ΡΠ΄ΠΎΠ²Π»Π΅ΡΠ²ΠΎΡΡΡΡ ODN, ΡΡΠΎΠ±Ρ Π±ΡΡΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΌ ΡΠ΅ΡΠ°ΠΏΠ΅Π²ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌ Π°Π³Π΅Π½ΡΠΎΠΌ [1,5,8,9]:
Β· ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΡ ΠΊ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°ΠΌ
Β· Π²ΡΡΠΎΠΊΠ°Ρ Π°ΡΡΠΈΠ½Π½ΠΎΡΡΡ ΠΊ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ
Β· ΡΠΎΡΠΌΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠ° Π ΠΠΠ°Π·Ρ H
Β· ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΠΌΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΡ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ (Π²Π»ΠΈΡΠ½ΠΈΠ΅ Π°Π»ΡΡΠ΅ΡΠ½Π°ΡΠΈΠ²Π½ΡΠΉ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΠ½Π³, Π°ΡΠ΅ΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ)
Β· Π½Π΅ΡΠΎΠΊΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ
Β· Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ Π½Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ Ρ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°ΠΌΠΈ Π΄Π»Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡΠ°
Β· Π»ΡΠ³ΠΊΠΎΡΡΡ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·Π°, ΠΏΠ°ΡΠ΅Π½ΡΠ°Π±Π΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ, Π²ΡΠ³ΠΎΠ΄Π° ΠΠ°ΡΠΈΠ²Π½ΡΠ΅ ODN Π½Π΅ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Ρ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡΡΡ ΡΠ΄ΠΎΠ²Π»Π΅ΡΠ²ΠΎΡΡΡΡ Π²ΡΠ΅ΠΌ ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΡΠΈΡΠ»Π΅Π½Π½ΡΠΌ ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΈΡΠΌ. ΠΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΡΠΌΠΈ ΠΎΠ³ΡΠ°Π½ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΡΠΌΠΈ Π²ΡΡΡΡΠΏΠ°ΡΡ ΡΠ»Π°Π±Π°Ρ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½Π°Ρ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΡ ΠΈ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΡ ODN — Π ΠΠ.
ΠΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅
Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΉ Π² ODN ΠΏΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΌ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π²Π·ΡΡΡΠΌ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°ΠΌ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ Π² Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½ΠΈ ΡΡΡΡΠ°Π½ΠΈΡΡ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡΠΈΠ΅ΡΡ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΈ. ΠΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ODN ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΏΠΎ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ΅, ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΡ ΡΠ°Ρ Π°ΡΠΎΠ·Ρ, Π°Π·ΠΎΡΠΈΡΡΠΎΠΌΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠΌ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ°ΠΌ. ΠΠ»Ρ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½ΠΎΠΉ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ°ΡΠ΅ Π²ΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ ΠΏΠΎ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ΅ ΠΈ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΡ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ·Ρ [5−7,11]. ΠΠΎΠ²ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡ Π·Π° ΡΡΡΡ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π°Π·ΠΎΡΠΈΡΡΡΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ [22,23], Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ° Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ·Ρ [6,16−21]. ΠΠ»Ρ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ Ρ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°ΠΌΠΈ ΠΈ ΡΠ»ΡΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡΠ° ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΈΡ Ρ Π»ΠΈΠ³Π°Π½Π΄Π°ΠΌΠΈ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΄Ρ [20,24−32]. Π ΡΡΠ΄Π΅ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅Π² ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΠ½Π½ΡΠ΅ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Π²ΡΠΏΠΎΠ»Π½ΡΡΡ ΡΠΎΠ»Ρ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΎΡΠΎΠ² ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΠ²ΡΠ·Π΅ΠΉ Π² Π ΠΠ [3,10].
1.2.2 ΠΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ
Π Π°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°ΠΌΠΈ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΠ²ΡΠ·Π΅ΠΉ Π² ΠΠΠ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΡΠ΅ΡΠ΅Π· ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠ΅ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π² Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΌ ΡΠ΅Π½ΡΡΠ΅ ΠΈ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΠ½ΠΎ-ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΡΡ ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡΠ² ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ. ΠΠ΄ΠΈΠ½ ΠΈΠ· ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±ΠΎΠ² ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠΈΡΡ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΡ ΡΠ²ΡΠ·Π΅ΠΉ ODN ΠΊ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· — ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½ΠΈΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΠ½Π½ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠΈΠ³ΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ. ΠΠ»Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ ΠΈΠ· Π½Π΅ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½Π½ΡΡ Π°ΡΠΎΠΌΠΎΠ² ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΠΎΠ΄Π° Π·Π°ΠΌΠ΅Π½ΡΡΡ Π°ΡΠΎΠΌΠΎΠΌ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°. ΠΠ΄Π½ΠΈΠΌ ΠΈΠ· ΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΡ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΡΠ°ΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΠ΅ΡΡ, Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΠ΅Π³ΠΎ Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Ρ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠΎΡΠΈΠΎΠ°ΡΡ (ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ ΠΏΠ΅ΡΠ²ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠΊΠΎΠ»Π΅Π½ΠΈΡ; ΡΠΌ. ΡΠΈΡ. 2, II).
Π ΠΈΡ. 2. ΠΠΠ (I) ΠΈ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠΎΡΠΈΠΎΠ°Ρ (II).
Π€ΠΎΡΡΠΎΡΠΎΡΠΈΠΎΠ°ΡΡ ΠΏΡΠΎΡΠ²ΠΈΠ»ΠΈ Π²ΡΡΠΎΠΊΡΡ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΡ ΠΊ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·, ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΡΠ°ΠΊΠ°Ρ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠΈΠ»Π° ΡΠΎΠΊΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ ODN [5,6].
ΠΠ°ΠΌΠ΅Π½ΠΎΠΉ Π½Π΅ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π°ΡΠΎΠΌΠ° ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΠΎΠ΄Π° ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΡΠΎΡΡΠΎΠ½Π°ΡΡ (ΡΠΌ. ΡΠΈΡ. 3, III), ΠΏΡΠΎΡΠ²Π»ΡΡΡΠΈΠ΅ Π²ΡΡΠΎΠΊΡΡ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΡ ΠΊ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·. ΠΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ ΡΠ°ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΏΠΎ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠΌ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°ΠΌ, ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠΎΠΊΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ.
ΠΡΠ»ΠΈ Π·Π°ΠΌΠ΅Π½ΠΈΡΡ Π°ΡΠΎΠΌ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΠΎΠ΄Π° ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ° ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠΌ BH3-, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡΡΡ Π±ΠΎΡΠ°Π½ΠΎΡΠΎΡΡΠ°ΡΡ. ΠΡΡΠ°ΡΠΎΠΊBH3- ΠΈΠ·ΠΎΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΠ½Π΅Π½ Π°ΡΠΎΠΌΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΠΎΠ΄Π° Π² ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΠ²ΡΠ·ΡΡ , Π·Π° ΡΡΡΡ ΡΠ΅Π³ΠΎ Π±ΠΎΡΠ°Π½ΠΎΡΠΎΡΡΠ°ΡΡ ΡΠΎΡ ΡΠ°Π½ΡΡΡ ΡΠ²ΠΎΠΉ ΠΎΡΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΉ Π·Π°ΡΡΠ΄, Ρ ΠΎΡΠΎΡΠΎ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΈΠΌΡ Π² Π²ΠΎΠ΄Π΅ ΠΈ ΡΠΎΡΠΌΠΈΡΡΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΡ Ρ Π ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΡ. Π’Π°ΠΊΠΆΠ΅ ΡΡΠΎΡ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠΊ ΠΈΠ·ΠΎΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΠ½Π΅Π½ ΠΈ ΠΈΠ·ΠΎΡΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅Π½ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ΅, Π±Π»Π°Π³ΠΎΠ΄Π°ΡΡ ΡΠ΅ΠΌΡ ΠΎΡ Π½ΠΈΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ ΠΎΠΆΠΈΠ΄Π°ΡΡ ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡΠ²Π°, Π°Π½Π°Π»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡΠ²Π°ΠΌ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΡΠΎΡΡΠΎΠ½Π°ΡΠΎΠ², ΡΠ°ΠΊΠΈΠ΅ ΠΊΠ°ΠΊ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΡ ΠΊ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°ΠΌ.
Π ΠΈΡ. 3. ΠΠ΅ΡΠΈΠ»ΡΠΎΡΡΠΎΠ½Π°Ρ (III) ΠΈ Π±ΠΎΡΠ°Π½ΠΎΡΠΎΡΡΠ°Ρ (IV).
1.2.3 ΠΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ° ΡΠ°Ρ Π°ΡΠ°
ΠΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΠ²ΡΠ·Π΅ΠΉ Π½Π΅ ΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°ΡΡ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠ° Π½Π° ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° ΠΠΠ — Π ΠΠ. ΠΠΎΡΡΠΎΠΌΡ, ΠΊΡΠΎΠΌΠ΅ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ², ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΡΡ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅Ρ ΡΠ°ΠΊ Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ Π²ΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠΊΠΎΠ»Π΅Π½ΠΈΡ — ΡΡΠΎ Π·Π°ΠΌΠ΅ΡΡΠ½Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎ 2'-Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΊΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ΅ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ° ΡΠΈΠ±ΠΎΠ·Ρ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ. Π’Π°ΠΊΠ°Ρ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ°Π΅Ρ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΡ ΠΊ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·. Π₯ΠΎΡΡ Π ΠΠ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²Ρ ΠΊ Π²ΠΎΠ·Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ ΠΎΠΊΡΡΠΆΠ°ΡΡΠ΅ΠΉ ΡΡΠ΅Π΄Ρ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΠΠΠ Π·Π° ΡΡΡΡ Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΡ 2'-OH-Π³ΡΡΠΏΠΏΡ, ΠΈΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎ ΡΡΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ΅ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠΈΡΡ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ, ΠΏΡΠΎΡΠ²Π»ΡΡΡΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΡΡ ΡΠΎΠΊΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΡΠΎΡΡΠΎΠ½Π°ΡΠ°ΠΌΠΈ. Π’Π°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΊ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠΌ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°ΠΌ Π²ΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠΊΠΎΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ°ΡΡΠΎ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ Ρ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌ ΠΎΡΡΠΎΠ²ΠΎΠΌ Π½Π΅ ΡΠ°Ρ Π°ΡΠΎΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΄Ρ, Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, ΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΡ, ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΏΡΠΎΡΠ²Π»ΡΡΡΠΈΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·ΠΎΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΡ ΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΡΠΌΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² Ρ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Π°ΠΌΠΈ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ.
Π ΠΈΡ. 4. ΠΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π²ΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠΊΠΎΠ»Π΅Π½ΠΈΡ: V — 2'-O-Π°Π»ΠΊΠΈΠ»-Π ΠΠ, VI — LNA, VII — Morpholino, VIII — PNA.
ΠΠ½Π°Π»ΠΈΠ· Π΄Π°Π½Π½ΡΡ ΠΏΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΡΠ΄Π° 2'-O-Π°Π»ΠΊΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄Π½ΡΡ Π ΠΠ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΡ ΠΎΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π΄ΠΎ ΠΏΡΡΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π΅Π½ΠΎΠ²ΡΡ Π·Π²Π΅Π½ΡΠ΅Π² Π² Π°Π»ΠΊΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΠΌ ΡΠ°Π΄ΠΈΠΊΠ°Π»Π΅, ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π», ΡΡΠΎ Ρ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π΅Π½ΠΎΠ²ΡΡ Π·Π²Π΅Π½ΡΠ΅Π² Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π΅Ρ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΡ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° ΠΊ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· (ΠΏΠ΅Π½ΡΠΎΠΊΡΠΈ > ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΠΊΡΠΈ > ΠΌΠ΅ΡΠΎΠΊΡΠΈ > Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈ). ΠΡΠ° Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΡ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½ΡΡΡΡΡ ΡΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΡΠΏΠ½ΠΎΡΡΡΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° ΠΏΡΠΈ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠΈ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π·Π°ΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ, ΡΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ Π·Π°ΡΡΡΠ΄Π½Π΅Π½ΠΈΡ, Π²ΡΠ·Π²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΠ΅ΠΌ ΠΎΠ±ΡΡΠΌΠ½ΡΡ Π·Π°ΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΉ, ΡΠ½ΠΈΠΆΠ°ΡΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠΎΠ² Ρ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΡ, ΠΏΠΎΡΡΠΎΠΌΡ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π³ΠΎ ΡΡΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° ΠΊ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Π΄ΠΎΡΡΠΈΠ³Π»ΠΈ ΠΏΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΌΠ°Π»ΡΡ Π·Π°ΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΉ [5−7]. ΠΡΠΈ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠΈ ΡΠΈΠ·ΠΈΠΊΠΎ-Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΠΎΠ² 2'-O-ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠΎΡΠΈΠΎΠ°ΡΠΎΠ² (Me-S-ODN), S-DNA ΠΈ Π½Π΅ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΠΠ Π²ΡΡΡΠ½ΠΈΠ»ΠΎΡΡ, ΡΡΠΎ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ° ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ (Tm) Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠΎΠ² ΠΠΠ — Π ΠΠ Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π΅Ρ Π² ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠ΅ΠΌ ΠΏΠΎΡΡΠ΄ΠΊΠ΅: Me-S-ODN — RNA > normal DNA — RNA > S-ODN — RNA. ΠΠ΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠΊ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ Π² ΡΠΎΠΌ, ΡΡΠΎ Π ΠΠΠ°Π·Π° H Π½Π΅ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠΈΡΡ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Ρ Π² Π ΠΠ — Π ΠΠ-ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ΅. ΠΠ°ΠΊ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ°, ΡΠ°ΠΊΠΈΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ ΠΌΠΎΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΈΠ½Π³ΠΈΠ±ΠΈΡΠΎΡΠ°ΠΌΠΈ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ Π½Π΅ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ [3,5,12−15].
2'-ΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΊ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠ²ΠΈΡΡΠ΅Ρ-ΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ². Π’Π°ΠΊΠΈΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ, ΠΊΡΠΎΠΌΠ΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠΎΠ², ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ Π½Π΅ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ, ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡΡ ΠΏΡΠΎΠ½ΠΈΠΊΠ°ΡΡ ΡΠ΅ΡΠ΅Π· Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ ΠΈ Π²ΡΡΠΎΠΊΡΡ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΊ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π· Π²ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΡΠ²ΠΎΠ΅Π³ΠΎ Π·Π°ΡΡΠ΄Π°. 2?-O-[2-[2-(N, N-Π΄ΠΈΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ½ΠΎ)ΡΡΠΎΠΊΡΠΈ]ΡΡΠΈΠ»]ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ (2'-O-DMAEOE, ΡΠΌ. ΡΠΈΡ 5), Π±Π»Π°Π³ΠΎΠ΄Π°ΡΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΡ Π·Π°ΡΡΠ΄Π°, ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΡ Ρ Π ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΡ Ρ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠΎΠΉ ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π½Π° 2? Π‘ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ Π½Π΅ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°ΠΌΠΈ. Π¦Π²ΠΈΡΡΠ΅Ρ-ΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ ΡΠΎΡ ΡΠ°Π½ΡΡΡ Π ΠΠΠ°Π·Π° H-ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΡΡΡ, Π΅ΡΠ»ΠΈ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΠ°Π·Π±ΡΠΎΡΠ°Π½Ρ ΠΏΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½Π΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°.
Π ΠΈΡ. 5. 2'-O-DMAEOE
ΠΠΎΠ½ΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎ ΠΎΠ³ΡΠ°Π½ΠΈΡΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ «Π±Π»ΠΎΠΊΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅» Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΡ (Locked Nucleic Acids, LNA) — ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΡ, ΠΈΠΌΠ΅ΡΡΠΈΠ΅ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΌΠΈΠ½ΠΈΠΌΡΠΌ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΌΠ΅Ρ Ρ Π±ΠΈΡΠΈΠΊΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΡΠ°Π½ΠΎΠ·ΠΎΠΉ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΡΠ°Ρ Π°ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ° (ΡΠΌ. ΡΠΈΡ. 4, VI). ΠΠ½ΠΈ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΌ ΡΡΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎΠΌ ΠΊ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ (ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ° ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π΅Ρ Π½Π° 6 Β°C ΠΏΡΠΈ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° [17]), ΡΡΠΎ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΈ Π΄ΠΎΡΡΠΎΠΈΠ½ΡΡΠ²ΠΎΠΌ (ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠ΅ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ), ΠΈ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠΌ (ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΏΠΈΠ»Π΅ΠΊ). Π’Π°ΠΊΠΎΠ΅ ΡΡΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ ΡΡΠΈΡΡΠ²Π°ΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ LNA. ΠΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π½Π° ΠΌΡΡΠ°Ρ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π»ΠΈ ΠΌΠ°Π»ΠΎΡΠΎΠΊΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ LNA.
ΠΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΡ (PNA) — Π°Π½Π°Π»ΠΎΠ³ΠΈ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ, Π² ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΠ°Ρ Π°ΡΠΎΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ ΠΎΡΡΠΎΠ² Π·Π°ΠΌΠ΅Π½ΡΠ½ Π½Π° ΠΏΡΠ΅Π²Π΄ΠΎΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄Π½ΡΠΉ N-(2-Π°ΠΌΠΈΠ½ΠΎΡΡΠΈΠ»)-Π³Π»ΠΈΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΠΉ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅Ρ. N-ΠΊΠΎΠ½Π΅Ρ ΠΈΠΌΠΈΠ½ΠΈΡΡΠ΅Ρ 3'-ΠΊΠΎΠ½Π΅Ρ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°, Π° C-ΠΊΠΎΠ½Π΅Ρ — Π΅Π³ΠΎ 5'-ΠΊΠΎΠ½Π΅Ρ (ΡΠΌ. ΡΠΈΡ. 3, VII). ΠΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΡ PNA — Π ΠΠ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½Ρ, ΡΠ΅ΠΌ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΡ ΠΠΠ — ΠΠΠ ΠΈ Π ΠΠ — Π ΠΠ. ΠΠ΅ΡΠΌΠΎΡΡΡ Π½Π° ΡΠΎ, ΡΡΠΎ PNA ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Ρ ΠΊΠ°ΠΊ Π² Π°Π½ΡΠΈΠΏΠ°ΡΠ°Π»Π»Π΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ (ΠΏΠΎ Π£ΠΎΡΡΠΎΠ½Ρ — ΠΡΠΈΠΊΡ), ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΠΏΠ°ΡΠ°Π»Π»Π΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ (ΠΏΠΎ Π₯ΡΠ³ΡΡΠΈΠ½Ρ) ΠΎΡΠΈΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠΈΠΈ, Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ ΠΏΡΠΈ Π°Π½ΡΠΈΠΏΠ°ΡΠ°Π»Π»Π΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΎΡΠΈΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠΈΠΈ PNA. ΠΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π»ΠΈ ΠΌΠ°Π»ΡΡ ΡΠΎΠΊΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ PNA.
ΠΠΎΡΡΠΎΠ»ΠΈΠ½Ρ (ΡΠΌ. ΡΠΈΡ. 3, VIII) — ΡΡΠΎ ΡΠ΅Π°Π³Π΅Π½ΡΡ, ΡΠΎΠ²ΠΌΠ΅ΡΠ°ΡΡΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ, ΡΠ΅Π·ΠΈΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΊ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·, ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ, Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄ΠΎΠ»Π³ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠ΅ΡΠΈΠΎΠ΄Π°, Π²ΠΎΠ΄ΠΎΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΈΠΌΠΎΡΡΡ, Π²ΡΡΠΎΠΊΡΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈ Π½ΠΈΠ·ΠΊΡΡ ΡΠΎΠΊΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ. ΠΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ Π½Π΅ΠΉΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΉ Π·Π°ΡΡΠ΄ [12,21]. ΠΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎΠΌ ΠΌΠΎΡΡΠΎΠ»ΠΈΠ½ΠΎΠ² Π·Π°Π½ΠΈΠΌΠ°Π΅ΡΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ°Π½ΠΈΡ Gene Tools, LLC (http://www.gene-tools.com).
ΠΠ»Ρ ΡΠΎΡ ΡΠ°Π½Π΅Π½ΠΈΡ Π ΠΠΠ°Π·Π° H-ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ, ΡΡΠΎΠ±Ρ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° Π±ΡΠ» ΡΡΠ°ΡΡΠΎΠΊ Ρ ΠΎΡΡ Π±Ρ ΠΈΠ· 7 Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ², ΠΏΠΎΡΡΠΎΠΌΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡΡΡ «ΡΠΌΠ΅ΡΠ°Π½Π½ΡΠ΅» Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ, Ρ. Π΅. ΠΈΠΌΠ΅ΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ°Π·Π½ΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π² ΡΠ°Π·Π½ΡΡ Π·Π²Π΅Π½ΡΡΡ (LNA/DNA, LNA/RNA ΠΈ Ρ. ΠΏ.). Π’Π°ΠΊΠΆΠ΅ Π² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΡ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΡΡ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠ΅ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ, Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Π·Π° ΡΡΡΡ ΡΡ ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° Ρ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΌ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΎΠΌ Π ΠΠΠ°Π·Ρ H, Π»ΠΈΠ±ΠΎ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Π½Π΅ Π²ΡΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ Π·Π²Π΅Π½ΡΡ (Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ 3'- ΠΈ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΡ). [3,5,12−15].
Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΡΠ΅ ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡΠ²Π° ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΠΏΠΎ ΡΠ°Ρ Π°ΡΠΎΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΌΡ ΠΎΡΡΠΎΠ²Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΡΠΌΠΌΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Π² ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠ°Π±Π»ΠΈΡΠ΅:
Π’Π°Π±Π»ΠΈΡΠ° 1. Π‘ΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΉ ΡΠ°Ρ Π°ΡΠΎΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΡΡΠΎΠ²Π°.
ΠΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ | Π‘ΡΠ°Π±. ΠΊ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°ΠΌ | Π‘ΡΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎ ΠΊ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ | ΠΠΊΡΠΈΠ²Π°ΡΠΈΡ Π ΠΠΠ°Π·Ρ H | ΠΠ΅ΡΠΎΠΊΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ | |
ODN | ; | ||||
S-ODN | ± | ; | |||
Me-ODN | ; | ± | |||
BH3-ODN | |||||
2'-O-Me-ON | ++ | ; | ± | ||
LNA | ++ | ; | |||
PNA | ++ | ; | |||
Morpholino | ++ | ; | |||
1.2.4 ΠΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π°Π·ΠΎΡΠΈΡΡΡΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ
ΠΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π±ΡΠ²Π°Π΅Ρ ΡΡΡΠ΄Π½ΠΎ Π΄ΠΎΡΡΠΈΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π·Π° ΡΡΡΡ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΉ ΡΠ°Ρ Π°ΡΠΎΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΡΡΠΎΠ²Π°. ΠΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π°Π·ΠΎΡΠΈΡΡΡΠ΅ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ°ΡΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ODN Π·Π° ΡΡΡΡ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° ΠΊ Π ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ (Π°ΠΌΠΈΠ½ΠΎΠ°Π΄Π΅Π½ΠΎΠ·ΠΈΠ½, G-clamp) ΠΈ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ ΠΏΡΠΎΠ½ΠΈΠΊΠ½ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΡΠ΅Π· ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΡΡ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ (ΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠ΅ ΠΈ ΡΠ²ΠΈΡΡΠ΅Ρ-ΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠ΅ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ).
ΠΡΠΈ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠΈ ΡΠ΅Π½ΠΎΠΊΡΠ°Π·ΠΈΠ½Π° ΠΊ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΡ ΡΠΈΡΠΎΠ·ΠΈΠ½Π° ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ ΡΠ°ΠΊ Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΡΠΉ G-clamp (ΡΠΌ. ΡΠΈΡ. 6, X), ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΠΈΠΉ Π΄ΠΎΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ Π²ΠΎΠ΄ΠΎΡΠΎΠ΄Π½ΡΡ ΡΠ²ΡΠ·Ρ Ρ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠΌ Π³ΡΠ°Π½ΠΈΠ½Π°, Π±Π»Π°Π³ΠΎΠ΄Π°ΡΡ ΡΠ΅ΠΌΡ Π½Π° 6 — 18 Β°C ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ° ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄Π° ODN — Π ΠΠ. Π’Π°ΠΊΠ°Ρ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ ΠΏΠΎ 3'-ΠΊΠΎΠ½ΡΡ, ΡΡΠΎ Π½Π΅ Π½Π°ΡΡΡΠ°Π΅Ρ Π ΠΠΠ°Π·Π° H-ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΡΡΡ [3,22].
ΠΡΠΈ Π²Π²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠΈ Π°ΠΌΠΈΠ½ΠΎΠ³ΡΡΠΏΠΏΡ Π² ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠΊ Π°Π΄Π΅Π½ΠΈΠ½Π° (ΡΠΌ. ΡΠΈΡ. 6, XI) ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π΅Ρ ΡΡΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎ ΠΊ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Π·Π° ΡΡΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π΄ΠΎΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π²ΠΎΠ΄ΠΎΡΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΡΠ²ΡΠ·ΠΈ Ρ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠΌ ΡΠΈΠΌΠΈΠ½Π°.
Π ΠΈΡ.
Π ΠΈΡ. 6. ΠΠΎΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ Π²ΠΎΠ΄ΠΎΡΠΎΠ΄Π½ΡΠ΅ ΡΠ²ΡΠ·ΠΈ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ Π‘ ΠΈ G clamp (X), ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ T ΠΈ ANH2 (XI)
ODN Ρ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΠ½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΊ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ°ΠΌ Π°Π·ΠΎΡΠΈΡΡΡΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ ΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΈ ΡΠ²ΠΈΡΡΠ΅Ρ-ΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΌΠΈ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ°ΠΌΠΈ (Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠΈΠ΄ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ, ΡΠΈΡ. 7) Π·Π° ΡΡΡΡ ΡΠ²ΠΎΠ΅Π³ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π·Π°ΡΡΠ΄Π° Π½Π΅ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡ Π±ΡΠ»ΡΡΠΈΠΌ ΡΡΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎΠΌ ΠΊ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ, Π½ΠΎ ΠΈ ΡΠ»ΡΡΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΊ ΠΏΡΠΎΠ½ΠΈΠΊΠ½ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΈΡ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ ΠΈ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΡ ΠΊ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·.
Π ΠΈΡ. 7. Π‘ΠΏΠ΅ΡΠΌΠΈΠ΄ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΠΎΠ΅ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ΅ Π°Π·ΠΎΡΠΈΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ ΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ.
Π‘ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠΌΠΈ Π°Π·ΠΎΡΠΈΡΡΡΠΌΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡΠΌΠΈ Π΄Π»Ρ Π²ΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ΅ΡΡΠ° ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ ODN Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³ΠΈΡΡΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ Π»ΠΈΠ³Π°Π½Π΄Ρ, ΡΠ°ΠΊΠΈΠ΅ ΠΊΠ°ΠΊ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅ΠΈΠ½.
Π ΠΈΡ. 8. ΠΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ° ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅ΠΈΠ½Π° ΠΊ ΡΠΈΠΌΠΈΠ½Ρ.
1.2.5 ΠΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΠ±ΡΡΠΌΠ½ΡΡ Π·Π°ΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΉ
Π‘ΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΎΠ½ΠΈΠΊΠ°ΡΡ Π²Π½ΡΡΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ, ΠΌΠΈΠ½ΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΡΡ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ, — ΠΎΠ΄Π½ΠΎ ΠΈΠ· ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ², ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ΅ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°ΡΡ Ρ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°. ΠΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ½ΡΡΠ²ΠΎ ΠΎΠΏΠΈΡΠ°Π½Π½ΡΡ Π²ΡΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΉ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² Π² ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π΅ ODN Π½Π΅ ΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°ΡΡ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π²Π»ΠΈΡΠ½ΠΈΡ Π½Π° ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡ ODN ΡΠ΅ΡΠ΅Π· ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΡΡ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ. Π‘ΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΏΡΡΠ΅ΠΉ ΠΏΡΠΎΠ½ΠΈΠΊΠ½ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΡΠ΅ΡΠ΅Π· ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°Π»Π΅ΠΌΠΌΡ, Π½ΠΎ Π΄Π»Ρ ODN Π²Π°ΠΆΠ½Ρ Π΄Π²Π°: Π΄ΠΈΡΡΡΠ·Π½ΡΠΉ, ΠΈΠ»ΠΈ Π½Π΅ ΡΠ΅ΡΠ΅ΠΏΡΠΎΡ-ΠΎΠΏΠΎΡΡΠ΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΉ, ΠΈ ΡΠ΅ΡΠ΅ΠΏΡΠΎΡ-ΠΎΠΏΠΎΡΡΠ΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΉ. Π’ΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡ ΠΏΠΎ ΠΏΠ΅ΡΠ²ΠΎΠΌΡ Π²Π°ΡΠΈΠ°Π½ΡΡ Π·Π°ΡΡΡΠ΄Π½ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΡΠΌΠΌΠ°ΡΠ½ΡΠΌ ΠΎΡΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΌ Π·Π°ΡΡΠ΄ΠΎΠΌ ODN ΠΈ ΠΈΡ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΡ. ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π²ΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΡΠΈ ΠΎΠ³ΡΠ°Π½ΠΈΡΠ΅Π½ΠΎ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΡΠΌΠΈ Π΄Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΎ ΠΏΠΎΠ²Π΅ΡΡ Π½ΠΎΡΡΠ½ΡΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°Ρ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ, ΠΎΡΠ²Π΅ΡΠ°ΡΡΠΈΡ Π·Π° ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ. Π‘ΠΎΠ·Π΄Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΎΠ² ODN Ρ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠΌΠΈ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌΠΈ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ°ΠΌΠΈ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±ΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡΠ° ΠΏΠΎ ΡΠΎΠΌΡ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΈΠ½ΠΎΠΌΡ ΠΏΡΡΠΈ Π² Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ ΠΎΡ ΡΠΈΠΏΠ° Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΡΠ° Π΅Ρ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΊ ODN. ΠΠ° ΡΠΈΡΡΠ½ΠΊΠ΅ 9 ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Ρ Π²Π°ΡΠΈΠ°Π½ΡΡ Π»ΠΈΠ½ΠΊΠ΅ΡΠΎΠ², ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΎΠ². ΠΠΈΠ³Π°Π½Π΄Ρ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡΡ ΠΊ Π°Π·ΠΎΡΠΈΡΡΡΠΌ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡΠΌ, ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠΌ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ°ΠΌ, ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΠΌ (ΠΈΠ»ΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΡΠΌ ΠΈΠΌ) ΡΠ²ΡΠ·ΡΠΌ, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ°ΠΌ ΡΠ°Ρ Π°ΡΠ°. ΠΠ΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠΈΠΏΡ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ Π³ΡΡΠΏΠΏ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π²ΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ°ΡΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΏΡΡΡΠΌ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ.
Π ΠΈΡ. 9. ΠΡΠΈΠΌΠ΅ΡΡ Π»ΠΈΠ½ΠΊΠ΅ΡΠΎΠ² Π΄Π»Ρ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ Π»ΠΈΠ³Π°Π½Π΄ΠΎΠ².
Π§Π°ΡΡΠΈΡΠ½Π°Ρ ΠΈ Π΄Π°ΠΆΠ΅ ΠΏΠΎΠ»Π½Π°Ρ Π½Π΅ΠΉΡΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΎΡΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π·Π°ΡΡΠ΄Π° ODN Π½Π΅ ΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠ° Π½Π° ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡ ODN ΠΊ ΡΠ°ΠΌΠΎΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ½ΠΎΠΌΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡΡ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ. ΠΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ΠΎΠ±ΡΡΠΌΠ½ΡΡ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΡΠΎΠ±Π½ΡΡ Π»ΠΈΠ³Π°Π½Π΄ΠΎΠ², Π² ΡΠ°ΡΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, ΡΠ΅Ρ , ΡΡΠΎ ΠΈΠ·ΠΎΠ±ΡΠ°ΠΆΠ΅Π½Ρ Π½Π° ΡΠΈΡΡΠ½ΠΊΠ΅ 9, ΠΎΠ±Π»Π΅Π³ΡΠ°Π΅Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡ ODN ΡΠ΅ΡΠ΅Π· ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ.
Π ΠΈΡ. 10. ΠΡΠΈΠΌΠ΅ΡΡ Π»ΠΈΠΏΠΎΡΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ Π»ΠΈΠ³Π°Π½Π΄ΠΎΠ².
Π₯ΠΎΡΠΎΡΠΎ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΡ Ρ Ρ ΠΎΠ»Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠ»ΠΎΠΌ [3,4,24,25]. ΠΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ, ΡΠ»ΡΡΡΠ°ΡΡΠΈΠΉ ΠΏΡΠΎΠ½ΠΈΠΊΠ½ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ Π·Π° ΡΡΡΡ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΠΎΠ»Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠ»Π°, Π΅ΡΡ Π½Π΅ Π΄ΠΎ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ° ΡΡΠ΅Π½, Ρ ΠΎΡΡ, ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»Π°Π³Π°Π΅ΡΡΡ ΡΠ΅ΡΠ΅ΠΏΡΠΎΡ-ΠΎΠΏΠΎΡΡΠ΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠ΅ Π²ΠΊΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π»ΠΈΠΏΠΎΠΏΡΠΎΡΠ΅ΠΈΠ΄ΠΎΠ². Π₯ΠΎΠ»Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡ ΠΌΠΈΡΠ΅Π»Π»Ρ, ΡΡΠΎ ΠΎΠ±Π»Π΅Π³ΡΠ°Π΅Ρ ΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡ Π²Π½ΡΡΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ. ΠΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡΡ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠΊ Ρ ΠΎΠ»Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠ»Π° ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ ΠΏΠΎ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠΌ 5'- ΠΈ 3'-ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ°ΠΌ, ΠΏΡΠΈΡΡΠΌ 3'-ΠΌΠΎΠ½ΠΎΡ ΠΎΠ»Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½Ρ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ 5'-ΠΌΠΎΠ½ΠΎΡ ΠΎΠ»Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ, Π° ΡΠ°ΠΌΡΠΌΠΈ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ 5', 3'-Π±ΠΈΡΡ ΠΎΠ»Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ. Π ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΡ, ΡΠ΅ΡΠ΅Π· 6 ΠΌΠΈΠ½ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ Π² ΠΊΡΠΎΠ²Ρ ΠΌΡΡΠΈ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ Π² ΡΠΊΠ°Π½ΡΡ 3'-ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠΎΡΠΈΠΎΠ°ΡΠΈΠΎΠ² Π±ΡΠ» Π² 4 ΡΠ°Π·Π°, Π° 5'-ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΈ 3', 5'-Π±ΠΈΡΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ — Π² 7 ΡΠ°Π· Π²ΡΡΠ΅ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ Π½Π΅ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠΎΡΠΈΠΎΠ°ΡΠ°ΠΌΠΈ.
ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΌΠ΅ΡΡ Ρ 5'- ΠΈΠ»ΠΈ/ΠΈ 3'-Ρ ΠΎΠ»Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΈΠ»Π·Π°ΠΌΠ΅ΡΡΠ½Π½ΡΠΌ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠΌ [2,24], ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ Ρ Π»ΠΈΠ³Π°Π½Π΄ΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌ Ρ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ²ΡΠ·ΡΡ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄ 3'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠΌ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΠ·ΠΈΠ΄ΠΎΠΌ [25], Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Ρ ΠΎΠ»Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ Π΄Π΅Π½Π΄ΡΠΈΠΌΠ΅ΡΡ Ρ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠΌ Π»ΠΈΠ·ΠΈΠ½Π° Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ Π»ΠΈΠ½ΠΊΠ΅ΡΠ° (ΡΠΌ. ΡΠΈΡ. 11).
Π ΠΈΡ. 11. ΠΠ΅ΡΠ°Π·Π²Π΅ΡΠ²Π»ΡΠ½Π½ΡΠ΅ ΠΈ ΡΠ°Π·Π²Π΅ΡΠ²Π»ΡΠ½Π½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΡ Ρ Ρ ΠΎΠ»Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠ»ΠΎΠΌ.
ΠΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ, ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠΌΠΈ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΡΠΎΠ±Π½ΡΠΌΠΈ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Π°ΠΌΠΈ (Π°Π΄Π°ΠΌΠ°Π½ΡΠ°Π½, ΠΏΠΈΡΠ΅Π½, ΡΠΉΠΊΠΎΠ·Π°Π½ΠΎΠ²Π°Ρ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΠ° ΠΈ Π΄Ρ.), Π±ΡΠ»ΠΈ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΠΈ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½Ρ Ρ Ρ ΠΎΠ»Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠ»ΠΎΠ²ΡΠΌΠΈ. Π₯ΠΎΠ»Π΅ΡΡΠ΅ΡΠΎΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΡ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π»ΠΈ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ Π»ΠΈΠΏΠΎΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Ρ ΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡ ΠΊ Π°ΠΊΠΊΡΠΌΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ Π² ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈ.
ΠΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΈΡ Ρ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄Π½ΡΠΌΠΈ ΠΏΠΈΡΠ΅Π½Π°, ΠΊΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠ»ΡΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΊ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡΡ, ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅Ρ ΠΏΠΎ ΠΏΡΠΈΡΠΈΠ½Π΅ ΠΈΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΊ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ. ΠΠΈΡ-ΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄Π½ΡΠ΅ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²ΡΠ²Π°ΡΡ ΡΠΊΡΠΈΠΌΠ΅ΡΡ — Π±ΠΈΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΡ, Π² ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΠΎΠ΄Π½Π° ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Π° Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ Π² ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΠΎΠΌ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ, Π΄ΡΡΠ³Π°Ρ — Π² Π²ΠΎΠ·Π±ΡΠΆΠ΄ΡΠ½Π½ΡΠΌ. Π’Π°ΠΊΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΡ ΠΎΡΠ΅Π½Ρ ΡΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½Ρ ΠΊ ΠΏΡΠΎΡΡΡΠ°Π½ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠΌΡ ΠΎΠΊΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ, ΠΏΠΎ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΡΠ΄ΠΈΡΡ ΠΎ ΡΠΎΠΌ, Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ ODN Π² ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½Π½ΠΎΠΌ Ρ Π ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΡ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ ΠΈΠ»ΠΈ Π½Π΅Ρ [29−32]:
Π ΠΈΡ. 12. ΠΠΊΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½Π°Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ Π±ΠΈΡΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΎΠ².
ΠΠ»Ρ ΡΠ»ΡΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡΠ° Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡΡΡ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°Π½ΡΡ. Π ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°ΠΌ, Π² Ρ. Ρ. PNA, ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡΡ ΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄, ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΡΠΉ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΡΠΈΡΡ ΡΠ΅ΡΠ΅Π· ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ½ΡΠ΅ Π·Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ. Π’Π°ΠΊ, ΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄ Antennapedia ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ ΡΠ°ΠΉΡΡ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΠΠ. PNA Ρ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΠ½Π½ΡΠΌ ΠΏΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄ΠΎΠΌ Antennapedia Π½Π΅ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ½ΠΈΠΊΠ°Π΅Ρ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ, Π½ΠΎ ΠΈ ΠΌΠΈΠ³ΡΠΈΡΡΠ΅Ρ Π² ΡΠ΄ΡΠΎ.
Π ΠΈΡ. 13. ΠΠ΅ΠΏΡΠΈΠ΄Π½ΡΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°Ρ.
ΠΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°ΠΌ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ODN Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΡ ΠΏΠ»ΠΎΡΠΊΠΈΡ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ», ΡΠ°ΠΊΠΈΡ , ΠΊΠ°ΠΊ Π°ΠΊΡΠΈΠ΄ΠΈΠ½ (ΡΠΌ. ΡΠΈΡ. 14), ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅Ρ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ Π ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ. ΠΠ° ΡΡΡΡ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΡΡΠΈΠΈ Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠ°Π·ΡΡΡ Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ODN — Π ΠΠ. Π ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠ°ΡΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΡ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΠΠΠ ΠΈ Π ΠΠ Π·Π° ΡΡΡΡ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΡΡΠΎΡΠ° ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅ΡΡΡ «Π²ΡΠΏΠ΅ΡΠ»ΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅» ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ Π ΠΠ ΠΈΠ· Π΄Π²ΠΎΠΉΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΏΠΈΡΠ°Π»ΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ°. ΠΠ°ΡΠΈΠΎΠ½Ρ ΡΡΠΆΡΠ»ΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠ°Π»Π»ΠΎΠ², Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ Lu3+, ΠΊΠΎΠΎΡΠ΄ΠΈΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Ρ Π°ΡΠΎΠΌΠ°ΠΌΠΈ Π°Π·ΠΎΡΠ° ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ° Π°ΠΊΡΠΈΠ΄ΠΈΠ½Π°, ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ· Π ΠΠ Π±Π΅Π· ΡΡΠ°ΡΡΠΈΡ Π ΠΠΠ°Π·Ρ H, Π° «Π²ΡΠΏΠ΅ΡΠ»ΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅» ΠΊΠ°ΠΊ Π΄Π΅ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡΠ°Ρ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ° ΡΡΠΊΠΎΡΡΠ΅Ρ ΡΡΠΎΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡ.
Π ΠΈΡ. 14. ΠΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°Ρ Ρ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΠΈΡΡΡΡΠΈΠΌ Π°Π³Π΅Π½ΡΠΎΠΌ.
1.3 Π€ΠΈΠ·ΠΈΠΊΠΎ-Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ Π°ΡΠΏΠ΅ΠΊΡΡ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° ΠΈ Π ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ
ΠΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ Ρ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΡΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎΠΌ ODN ΠΊ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ ΠΈ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ°Π½ΡΠΎΠΉ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄Π½Π΅ΠΉ.
Π‘ΡΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎ ODN ΠΊ Π°Π΄ΡΠ΅ΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ Π΅ΠΌΡ Π ΠΠ (ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠ΄Π½Π°Ρ ΡΠ½Π΅ΡΠ³ΠΈΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ°) ΠΎΠΏΠΈΡΡΠ²Π°Π΅Ρ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄Π° ΠΠΠ — Π ΠΠ. rG ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½Π° ΠΊΠ°Π»ΠΎΡΠΈΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ [17], Π»ΠΈΠ±ΠΎ ΡΠ°ΡΡΡΠΈΡΠ°Π½Π° ΡΠ΅ΠΎΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ [34,35]. ΠΡΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΡΠ΅ ΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΡΠ½Π΅ΡΠ³ΠΈΠΈ ΠΠΈΠ±Π±ΡΠ° ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ Π·Π°ΠΊΠΎΠ½ ΠΠ΅ΡΡΠ° (ΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠ΄Π½Π°Ρ ΡΠ½Π΅ΡΠ³ΠΈΡ ΠΠΈΠ±Π±ΡΠ° ΡΠ»ΠΎΠΆΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Π½Π΅ Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΡ ΠΎΡ Π΅Ρ ΠΏΡΡΠΈ) ΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΡΡ ΡΠ½Π΅ΡΠ³ΠΈΠΉ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π²ΡΠΎΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΠΈ ΡΡΠ΅ΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡ ΠΏΠΎ ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΠ»Ρ «Π±Π»ΠΈΠΆΠ°ΠΉΡΠ΅Π³ΠΎ ΡΠΎΡΠ΅Π΄Π°» (nearest neighbor rule) Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΡ mfold, ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½Π½ΠΎΠΉ Π¦ΡΠΊΠ΅ΡΠΎΠΌ ΠΈ ΡΠΎΠ°Π²ΡΠΎΡΠ°ΠΌΠΈ. Π Π΅Π°ΠΊΡΠΈΡ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²ΠΈΡΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ:
Π ΡΡΠΎΠΉ ΡΡ Π΅ΠΌΠ΅ Π, O, H — ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Ρ, Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ODN ΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ ODN — Π ΠΠ Ρ ΡΡΡΡΠΎΠΌ ΠΈΡ Π²ΡΠΎΡΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈ ΡΡΠ΅ΡΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ, Πu, Ou, Hu — ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Ρ, Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ODN ΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ ODN — Π ΠΠ Π±Π΅Π· ΡΡΡΡΠ° ΠΈΡ Π²ΡΠΎΡΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈ ΡΡΠ΅ΡΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ, unG(M), unG(O), unG(H) — ΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠ΄Π½ΡΠ΅ ΡΠ½Π΅ΡΠ³ΠΈΠΈ ΠΠΈΠ±Π±ΡΠ° ΡΠΊΠ»Π°Π΄ΠΊΠΈ ΠΈΡ Π²ΠΎ Π²ΡΠΎΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΠΈ ΡΡΠ΅ΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ, rG, rG(unfolded) — ΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠ΄Π½ΡΠ΅ ΡΠ½Π΅ΡΠ³ΠΈΠΈ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ODN ΠΈ ΠΌΠ ΠΠ Π² ΡΠ²ΡΡΠ½ΡΡΠΎΠΌ ΠΈ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡΡΡ Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΌ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ.
unG(M), unG(O), unG(H) ΠΈ rG(unfolded) ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π±ΡΡΡ ΡΠ΅ΠΎΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ ΡΠ°ΡΡΡΠΈΡΠ°Π½Ρ. Π’ΠΎΠ³Π΄Π° ΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠ΄Π½Π°Ρ ΡΠ½Π΅ΡΠ³ΠΈΡ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ ΠΏΠΎ Π·Π°ΠΊΠΎΠ½Ρ ΠΠ΅ΡΡΠ°:
ΠΠΎΠ½ΡΡΠ°Π½ΡΡ ΡΠ°Π²Π½ΠΎΠ²Π΅ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ° Π°ΡΡΠΎΡΠΈΠ°ΡΠΈΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° K1 ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π½Π°ΠΉΡΠΈ, ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Ρ ΠΈΠ· ΡΠ°ΡΡΡΠΈΡΠ°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΡΠ½Π΅ΡΠ³ΠΈΠΈ ΠΠΈΠ±Π±ΡΠ° ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ° Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ:
ΠΠ»Ρ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΊΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡΡΡ ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΠΎΠΌ «Π±Π»ΠΈΠΆΠ°ΠΉΡΠ΅Π³ΠΎ ΡΠΎΡΠ΅Π΄Π°» ΠΈ ΡΠ°ΡΡΡΠΈΡΡΠ²Π°ΡΡ Π΅Ρ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌ.
ΠΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π½Π°ΠΉΡΠΈ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ°Π½ΡΡ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ keff Π±ΡΡΡΡΠΎ-ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠ΅Π²ΡΠ°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ M Π² ΡΡΠ»ΠΎΠ²Π½ΡΠΉ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡ X (ΡΡΠ° ΡΡΠ»ΠΎΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Π½Π΅ Π²Π»ΠΈΡΠ΅Ρ Π½Π° ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°Ρ ΠΊΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΡΠΎΠ², Π½ΠΎ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΈΡ ΡΠΏΡΠΎΡΠ°Π΅Ρ):
ΠΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½Π°Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ°Π½ΡΠ° ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ Π±ΡΡΡΡΠΎ-ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π°Π΅ΠΌΡΡ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ.
ΠΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²ΠΈΡΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠ΅ΠΉ ΡΡ Π΅ΠΌΠΎΠΉ:
Π ΡΡΠΎΠΉ ΡΡ Π΅ΠΌΠ΅ E — ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ Π ΠΠΠ°Π·Π° H, HE — ΠΏΡΠΎΠΌΠ΅ΠΆΡΡΠΎΡΠ½ΡΠΉ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ Π΅Ρ Ρ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠΎΠΌ H, K1 — ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ°Π½ΡΠ° Π°ΡΡΠΎΡΠΈΠ°ΡΠΈΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ°, ΡΠ°ΡΡΡΠΈΡΡΠ²Π°Π΅ΠΌΠ°Ρ ΠΏΠΎ ΡΠΎΡΠΌΡΠ»Π΅ (3).
ΠΠ»Ρ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΊΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡ Π΅ΠΌΡ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠΎΡΡΠ°Π²ΠΈΡΡ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ ΠΊΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠΉ:
Π³Π΄Π΅ Π‘A — ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ Π²Π΅ΡΠ΅ΡΡΠ²Π° A, ki — ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ°Π½ΡΠ° ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ i-ΠΉ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ.
ΠΠ±ΡΡΠ½ΠΎ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΡΠ΅ΠΌΡΠΌ ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΠΎΠΌ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Π² ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ΅ (ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½Π°Ρ CM0 ΠΈ ΡΠ΅ΠΊΡΡΠ°Ρ CM), ΠΏΠΎΡΡΠΎΠΌΡ keff ΡΡΠΈΡΠ°ΡΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΊ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅:
ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π² ΠΊΠ²Π°Π·ΠΈΡΡΠ°ΡΠΈΠΎΠ½Π°ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΠΏΡΠΈΠ±Π»ΠΈΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎ ΠΏΡΠΎΠΌΠ΅ΠΆΡΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΌΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ HE ΠΈ ΡΠΏΡΠΎΡΡΠΈΠ² Π²ΡΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄Π»Ρ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ w Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΠΈΡ Π°ΡΠ»ΠΈΡΠ° — ΠΠ΅Π½ΡΠ΅Π½:
Π³Π΄Π΅ — ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ°Π½ΡΠ° ΠΠΈΡ Π°ΡΠΈΡΠ°, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠ΅ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°ΡΡ Π²ΡΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄Π»Ρ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° H:
ΠΠ°ΠΉΠ΄ΡΠΌ Π²ΡΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄Π»Ρ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ°Π½ΡΡ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Π² Π΄Π²ΡΡ ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ : ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡ Π»ΠΈΠΌΠΈΡΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΌΠ ΠΠ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠΌ ODN ΠΈ Π»ΠΈΠΌΠΈΡΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Π² ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π΅ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ°.
Π‘Π»ΡΡΠ°ΠΉ 1. ΠΠΈΠΌΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠ΅ΠΉ.
Π ΡΡΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΈΠ΄ΡΡ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π±ΡΡΡΡΠ΅ΠΉ, ΡΠ΅ΠΌ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ. ΠΠΎΡΡΠΎΠΌΡ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π΄ΠΎΠΏΡΡΡΠΈΡΡ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΠ± ΡΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΡΡΠ°ΡΠΈΠΎΠ½Π°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° H, Ρ. Π΅.:
Π‘ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΉ ΡΡΠΎΡΠΎΠ½Ρ, Π»Π΅Π³ΠΊΠΎ ΡΠ²ΠΈΠ΄Π΅ΡΡ (6), ΡΡΠΎ:
ΠΏΠΎΡΡΠΎΠΌΡ:
Π’ΠΎ Π΅ΡΡΡ, Π² Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ Π²ΡΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄Π»Ρ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ ΡΠΎΠ²ΠΏΠ°Π΄Π°Π΅Ρ ΠΏΠΎ Π°Π±ΡΠΎΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠΌΡ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Ρ Π²ΡΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ (ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ° Π₯). ΠΠΎΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π²ΡΠΈΡΡ ΡΡΠΈΠΌ, ΠΏΡΠ΅ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅ΠΌ Π²ΡΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄Π»Ρ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°, ΠΌΡ ΡΠ²ΠΈΠ΄ΠΈΠΌ, ΡΡΠΎ Π΅Π³ΠΎ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΡΠΈΡΠ°ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ Π½Π΅ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ:
ΠΠΎΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π²ΡΠΈΡΡ Π²ΡΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ (14) ΠΈ, ΠΊΠ°ΠΊ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΠ²ΠΈΠ΅, ΠΏΡΠ΅Π½Π΅Π±ΡΠ΅Π³Π°Ρ Π²ΠΊΠ»Π°Π΄ΠΎΠΌ ΡΠ»Π΅Π½Π° k-1Π‘H Π² Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Π² Π½ΠΎΠ²ΠΎΠΌ Π²ΠΈΠ΄Π΅ ΠΈ Π²ΡΡΠ°ΠΆΠ°Π΅ΠΌ keff.
Π‘Π»ΡΡΠ°ΠΉ 2. ΠΠΈΠΌΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠ°.
Π ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅, ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΈΠ΄ΡΡ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΌΠ΅Π΄Π»Π΅Π½Π½Π΅Π΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ°, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΡΠΈΡΠ°ΡΡ, ΡΡΠΎ ΡΡΠΏΠ΅Π²Π°Π΅Ρ ΡΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΈΡΡΡΡ ΡΠ°Π²Π½ΠΎΠ²Π΅ΡΠΈΠ΅:
Π Π°Π²Π½ΠΎΠ²Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠ΅ΠΉ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π½Π΅Π±ΡΠ΅ΡΡ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ°Π½ΡΠΎΠΉ ΠΠΈΡ Π°ΡΠ»ΠΈΡΠ° Π² Π²ΡΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ:
ΠΠ°ΠΏΠΈΡΠ°Π² Π²ΡΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ°Π½ΡΡ ΡΠ°Π²Π½ΠΎΠ²Π΅ΡΠΈΡ K1 ΠΈ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π±Π°Π»Π°Π½ΡΠ° Π΄Π»Ρ Π ΠΈ Π, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΠΌ Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΉ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ:
Π³Π΄Π΅ [ A ] - ΡΠ°Π²Π½ΠΎΠ²Π΅ΡΠ½Π°Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ, Π‘Π 0 — ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½Π°Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ Π²Π΅ΡΠ΅ΡΡΠ²Π°.
Π‘ ΡΡΡΡΠΎΠΌ (17) ΠΈ (18), ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΠΌ Π²ΡΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠ°Π²Π½ΠΎΠ²Π΅ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΉ H ΠΈ O:
ΠΠΎΠ΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΡ (21) Π² ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΠΈΡ Π°ΡΠ»ΠΈΡΠ° — ΠΠ΅Π½ΡΠ΅Π½ (16), ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΠΌ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠ΅ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ:
ΠΠΎΠ΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΡ Π²ΡΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ (20), (21) ΠΈ (22) Π² (12) ΠΈ ΠΎΠΏΡΡΠΊΠ°Ρ Π³ΡΠΎΠΌΠΎΠ·Π΄ΠΊΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΎΠΌΠ΅ΠΆΡΡΠΎΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΡΡ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΠΌ Π²ΡΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄Π»Ρ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ:
ΠΎΡΠΊΡΠ΄Π° Π½Π΅ΡΡΡΠ΄Π½ΠΎ Π½Π°ΠΉΡΠΈ ΡΠΎΡΠΌΡΠ»Ρ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ°Π½ΡΡ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ Π±ΡΡΡΡΠΎ-ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ°:
ΠΠ° ΠΏΡΡΠΈ ΡΠΎΠ·Π΄Π°Π½ΠΈΡ Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ² Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ODN Π»Π΅ΠΆΠΈΡ ΠΌΠ½ΠΎΠΆΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π³ΡΠ°Π΄: ΡΠ»Π°Π±Π°Ρ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡ ΠΊ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ½Π°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ, Π½Π΅ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΡ ΠΊ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°ΠΌ, ΡΠΎΠΊΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠ΅. Π₯ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Ρ ΡΡΡΡΠ°Π½ΠΈΡΡ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΠ΅ ΠΈΠ· ΡΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ±Π»Π΅ΠΌ, Π½ΠΎ Π»ΠΈΡΡ ΡΠ°ΡΡΠΈΡΠ½ΠΎ, ΠΈ ΡΡΡΠ΄Π½ΠΎ Π½Π°ΠΉΡΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠΏΡΠΎΠΌΠΈΡΡ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ Π΄ΠΎΡΡΠΎΠΈΠ½ΡΡΠ²Π°ΠΌΠΈ ΠΈ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ°ΠΌΠΈ ΠΊΠ°ΠΊΠΎΠΉ-Π»ΠΈΠ±ΠΎ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ. ΠΠ΅ΡΠΌΠΎΡΡΡ Π½Π° ΡΡΠΎ, ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΡ Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ ODN ΠΏΡΠΎΡΠ»ΠΈ ΠΈΡΠΏΡΡΠ°Π½ΠΈΡ. ΠΠ΅ΡΠ²ΠΎΠ΅ Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²ΠΎ Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ ODN — Vitravene, Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ΅ Π½Π° Π±ΠΎΡΡΠ±Ρ Ρ ΡΠΈΡΠΎΠΌΠ΅Π³Π°Π»ΠΎΠ²ΠΈΡΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ Ρ Π±ΠΎΠ»ΡΠ½ΡΡ Π‘ΠΠΠΠΎΠΌ.
2. ΠΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»Ρ ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ
2.1 Π Π΅Π°ΠΊΡΠΈΠ²Ρ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΡΠ΅ Π² ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅
Π ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈΡΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠ²Ρ: Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΠ·ΠΈΠ΄ΡΡΠΈΡΠΎΡΡΠ°ΡΡ, ΠΌΠΈΠ½Π΅ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΠΌΠ°ΡΠ»ΠΎ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° ΡΠΈΡΠΌΡ «Sigma» (Π‘Π¨Π), N, N'-ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π΅Π½Π±ΠΈΡΠ°ΠΊΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ΄ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° «MP Biomedicals» (ΠΠ΅ΡΠΌΠ°Π½ΠΈΡ), Π°ΠΊΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ΄ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° «Sigma» (Π‘Π¨Π) Ρ ΡΠΈΡΡΠΎΡΠΎΠΉ Π½Π΅ ΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ 99%, Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π° ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° «MP Biomedicals» (ΠΠ΅ΡΠΌΠ°Π½ΠΈΡ) (electrophoresis grade), ΡΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° ΡΠΈΡΠΌ «MP Biomedicals» (ΠΠ΅ΡΠΌΠ°Π½ΠΈΡ) (ΡΠ΅Ρ Π½.) ΠΈ «ICN Biomedicals» (Π‘Π¨Π) (ultra pure grade), ΠΠΠ’Π ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° ΡΠΈΡΠΌΡ «ICN Biomedicals» (Π‘Π¨Π), Π±ΠΎΡΠ½Π°Ρ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΠ° ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° «MP Biomedicals» (ΠΠ΅ΡΠΌΠ°Π½ΠΈΡ), ΠΌΠΎΡΠ΅Π²ΠΈΠ½Π° ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° MP Biomedicals" (ΠΠ΅ΡΠΌΠ°Π½ΠΈΡ), TEMED ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° «Sigma» (Π‘Π¨Π), DTT ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° ΡΠΈΡΠΌΡ «Fluka Chemica» (Π¨Π²Π΅ΠΉΡΠ°ΡΠΈΡ), ΡΠΈΡΠ°Π²Π»ΠΎΠ½, Π΄ΠΈΠΏΠΈΡΠΈΠ΄ΠΈΠ»Π΄ΠΈΡΡΠ»ΡΡΠΈΠ΄ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° ΡΠΈΡΠΌ «Fluka Chemica» (Π¨Π²Π΅ΠΉΡΠ°ΡΠΈΡ) ΠΈ «Aldrich» (ΠΠ΅ΡΠΌΠ°Π½ΠΈΡ), ΡΡΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ»ΡΠΎΡΡΠΈΠ½ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° ΡΠΈΡΠΌ «Fluka Chemica» (Π¨Π²Π΅ΠΉΡΠ°ΡΠΈΡ) ΠΈ «Aldrich» (ΠΠ΅ΡΠΌΠ°Π½ΠΈΡ), 2-(N, N-Π΄ΠΈΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ½ΠΎ)-ΠΏΠΈΡΠΈΠ΄ΠΈΠ½ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° ΡΠΈΡΠΌ «Fluka Chemica» (Π¨Π²Π΅ΠΉΡΠ°ΡΠΈΡ) ΠΈ «Aldrich» (ΠΠ΅ΡΠΌΠ°Π½ΠΈΡ), ΡΡΠΈΡΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ½ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° ΡΠΈΡΠΌΡ «Sigma-Aldrich» (Π‘Π¨Π), ΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ»-1-ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ½, Π»ΡΠ±Π΅Π·Π½ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΎΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π½ΡΠΉ …, ΡΠΎΠ»ΠΈ Ρ Π»ΠΎΡΠΈΠ΄ ΠΌΠ°Π³Π½ΠΈΡ, Ρ Π»ΠΎΡΠΈΠ΄ Π½Π°ΡΡΠΈΡ, Ρ Π»ΠΎΡΠΈΠ΄ ΠΊΠ°Π»ΡΡΠΈΡ, Π°ΡΠ΅ΡΠ°Ρ Π½Π°ΡΡΠΈΡ, ΠΏΠ΅ΡΡ Π»ΠΎΡΠ°Ρ Π»ΠΈΡΠΈΡ ΠΏΠ΅ΡΡΡΠ»ΡΡΠ°Ρ Π°ΠΌΠΌΠΎΠ½ΠΈΡ ΠΊΠ²Π°Π»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ «ΠΠ‘Π§», ΠΎΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠ²Ρ ΠΈΠΌΠ΅Π»ΠΈ ΠΊΠ²Π°Π»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ Π½Π΅ Π½ΠΈΠΆΠ΅ «Π₯Π§».
Π ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ: ΠΠΠΠ°Π·Π° I, ΡΠ²ΠΎΠ±ΠΎΠ΄Π½Π°Ρ ΠΎΡ Π ΠΠΠ°Π·, ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° ΡΠΈΡΠΌΡ «Fermentas» (ΠΠΈΡΠ²Π°), ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ½Π°Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠ°Π·Π° (ΡΠ΅Π²Π΅ΡΡΠ°Π·Π°) MuML-V ΠΈ ΡΠ΅ΡΠΌΠΎΡΠΈΠ»ΡΠ½Π°Ρ Taq-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π° (Taq-pol), Π»ΡΠ±Π΅Π·Π½ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΎΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π½ΡΠ΅ Π₯ΠΎΠ΄ΡΡΠ΅Π²ΠΎΠΉ Π‘.Π.
ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΡΠ΅ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»ΠΈ: DMSO (Π°Π±Ρ.), Π°ΡΠ΅ΡΠΎΠ½ («ΠΠ‘Π§»), Π΄ΠΈΡΡΠΈΠ»ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΡΠΈΡ, ΡΡΠ°Π½ΠΎΠ» (ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π³Π½., 96%), ΠΌΠ΅ΡΠ°Π½ΠΎΠ» (ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π³Π½.).
ΠΡΠ΅ Π±ΡΡΠ΅ΡΡ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π² ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅, Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ»ΡΡΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΡΠ΅ΡΠ΅Π· Π½ΠΈΡΡΠΎΡΠ΅Π»Π»ΡΠ»ΠΎΠ·Π½ΡΠ΅ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ ΡΠΈΡΠΌΡ «Millipore» Ρ Π΄ΠΈΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΠΎΠΌ ΠΏΠΎΡ 0,45 ΠΌΠΊΠΌ.
2.2 ΠΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π²ΡΠΈΠ΅ΡΡ Π² ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅
Π ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ, ΡΠΊΠ°Π·Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π² ΡΠ°Π±Π»ΠΈΡΠ΅ 2:
Π’Π°Π±Π»ΠΈΡΠ° 2. ΠΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΡΡ Π² ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠΎΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ².
EGFP-A | 5'-ACTTGTGGCCGTTTACGTCGC-3' | |
5'p-EGFP-A | 5'-pACTTGTGGCCGTTTACGTCGC-3' | |
EGFP-B | 5'-GAACTTCAGGGTCAGCTTGCCG-3' | |
5'p-EGFP-B | 5'-pGAACTTCAGGGTCAGCTTGCCG-3' | |
Scr-1 | 5'-CTTTCGGTAGCATAGCATCGTCTA-3' | |
5'p-Scr-1 | 5'-pCTTTCGGTAGCATAGCATCGTCTA-3' | |
EGFP-1 | 5'-AGAAGAACGGCATCAAGGT-3' | |
EGFP-2 | 5'-GGTGCTCAGGTAGTGGTTGT-3' | |
EGFP-3 | 5'-GAACGGCATCAAGGTGAA-3' | |
EGFP-5 | 5'-ACCACTACCAGCAGAACACC-3' | |
EGFP-6 | 5'-GGTCACGAACTCCAGCAG-3' | |
Π‘Π»ΡΡΠ°ΠΉΠ½ΡΠΉ Π³Π΅ΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊ. («Π³Π΅ΠΊΡΠ°ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅Ρ») | Π‘Π»ΡΡΠ°ΠΉΠ½Π°Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² | |
ΠΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ Π±ΡΠ»ΠΈ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ Π² ΠΠ₯ΠΠ€Π Π‘Π Π ΠΠ ΠΈ ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π½Ρ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΠΠΠ₯. Π§ΠΈΡΡΠΎΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΡΠ΅ΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² 18% GFFU Π² Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ , Π²ΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² Π² Π³Π΅Π»Π΅ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΊΡΠ°ΡΠΊΠΈ «Stains-All».
2.3 ΠΡΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΡ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π²ΡΠΈΠ΅ΡΡ Π² ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅
Π’Π°Π±Π»ΠΈΡΠ° 3. Π‘ΠΎΡΡΠ°Π² Π±ΡΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΎΠ², ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π²ΡΠΈΡ ΡΡ Π² ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅.
TBE | 0,09 Π Tris; 0,087 Π H3BO3; 2 ΠΌΠ ΠΠΠ’Π, pH = 8,0 | |
ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ ΠΠΠΠ°Π·Ρ I | 10 ΠΌΠ Tris*HCl, pH = 7,0; 0,1 ΠΌΠ CaCl2; 10 ΠΌM MgCl2 | |
ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ ΠΠ’ | 50 ΠΌΠ Tris*HCl, pH = 8,3; 3 ΠΌM MgCl2; 75 ΠΌΠ KCl | |
ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ ΠΠ¦Π | 10 ΠΌΠ Tris*HCl, pH = 8,3; 1,5 Πm MgCl2; 50 ΠΌΠ KCl; 0,01% Tween-20 | |
ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠ° | 5 ΠΌΠ Tris*HCl, pH 7.8; 0.1% Nonidet P-40; 1 ΠΌM ΠΠΠ’Π | |
PBS | 10 ΠΌM Na2HPO4; 2 ΠΌΠ KH2PO4; 0,15 M KCl; 0,14 M NaCl | |
2.4 Π Π°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΠΠΠ₯
ΠΠΠΠ₯ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Π½Π° Ρ ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΎΠ³ΡΠ°ΡΠ΅ «Waters 2996», Π½Π° ΠΊΠΎΠ»ΠΎΠ½ΠΊΠ΅ Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ 150 ΠΌΠΌ Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ΅Π½ΠΎ-ΡΠ°Π·ΠΎΠ²ΡΠΌ ΡΠΎΡΠ±Π΅Π½ΡΠΎΠΌ Symmetry® C18 Ρ Π΄ΠΈΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΠΎΠΌ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠ°ΡΡΠΈΡ 5 ΠΌΠΊΠΌ, Π² Π»ΠΈΠ½Π΅ΠΉΠ½ΠΎΠΌ Π³ΡΠ°Π΄ΠΈΠ΅Π½ΡΠ΅ Π°ΡΠ΅ΡΠΎΠ½ΠΈΡΡΠΈΠ»Π° Π² Π²ΠΎΠ΄Π΅ (0 — 30%) Π² ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ 50 ΠΌΠ LiCLO4; ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎΡΠΎΠΊΠ° 1 ΠΌΠ»/ΠΌΠΈΠ½.
2.5 ΠΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ
2.5.1 ΠΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ Π² ΠΠΠΠ Π² Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ
Π ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Ρ Π΄Π»Ρ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΠ΅ΠΉ ΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ΄Π²ΠΈΠΆΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΈΠΈ Ρ Π»ΠΈΠ³Π°Π½Π΄ΠΎΠΌ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· Π² 12%, 16% ΠΈ 18% ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ°ΠΊΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ΄Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅ (GFFU) ΠΏΡΠΈ ΠΌΠ°ΡΡΠΎΠ²ΠΎΠΌ ΡΠΎΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ N, N'-ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π΅Π½Π±ΠΈΡΠ°ΠΊΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ΄ / Π°ΠΊΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ΄ 20:1 Π² ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ 8 Π ΠΌΠΎΡΠ΅Π²ΠΈΠ½Ρ ΠΈ 1-ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π±ΡΡΠ΅ΡΠ° TBE ΠΏΡΠΈ Π½Π°ΠΏΡΡΠΆΡΠ½Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠ»Ρ 15 — 45 Π/ΡΠΌ. ΠΡΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΈ ΠΈΡ ΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄Π½ΡΡ Π³Π΅Π»Ρ ΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ Π² ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ΅ «Stains-All» (0,5 Π³ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ «Stains-All» Π² 200 ΠΌΠ» 50% Π²ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΎΡΠΌΠ°ΠΌΠΈΠ΄Π°) Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 10 ΠΌΠΈΠ½ΡΡ Π² ΡΠ΅ΠΌΠ½ΠΎΡΠ΅. ΠΠ±Π΅ΡΡΠ²Π΅ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π³Π΅Π»Ρ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Π² Π²ΠΎΠ΄Π΅ Π½Π° ΡΡΠΊΠΎΠΌ ΡΠ²Π΅ΡΡ.
2.5.2 ΠΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅
Π Π°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠΠ — ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΠΠ¦Π , ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² 1,5% Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅ Π² ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ 1-ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π±ΡΡΠ΅ΡΠ° TBE ΠΈ 0,002%(ΠΎΠ±Ρ.) Π±ΡΠΎΠΌΠΈΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΡ ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠ½Π°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅ ΠΈ Π½Π°ΠΏΡΡΠΆΡΠ½Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠ»Ρ 5 — 10 Π/ΡΠΌ. ΠΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΠ¦Π ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Π½Π° ΡΡΠ°Π½ΡΠΈΠ»Π»ΡΠΌΠΈΠ½Π°ΡΠΎΡΠ΅ Π·Π° ΡΡΡΡ ΡΠ°Π·Π³ΠΎΡΠ°Π½ΠΈΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» Π±ΡΠΎΠΌΠΈΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΡ ΠΏΡΠΈ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΡΡΠΈΠΈ Π΄ΡΠΠΠ.
2.6 ΠΡΠΈΠ³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΈΡΠ°Π²Π»ΠΎΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΡΠΎΠ»Π΅ΠΉ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ²
ΠΠ»Ρ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠΈΡΠ°Π²Π»ΠΎΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΡΠΎΠ»Π΅ΠΉ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° Π³ΠΎΡΠΎΠ²ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠΉ 1 — 6,5 ΠΎ.Π΅. ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° Π² 90 ΠΌΠΊΠ» Π²ΠΎΠ΄Ρ. Π Π°ΡΡΠ΅Ρ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΠ΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ Π² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΡ 2% Π²ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ° ΡΠΈΡΠ°Π²Π»ΠΎΠ½Π° ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Ρ ΡΡΡΡΠΎΠΌ 2,5-ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ·Π±ΡΡΠΊΠ° ΡΠΈΡΠ°Π²Π»ΠΎΠ½Π° ΠΏΠΎ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊ ΡΡΠΌΠΌΠ°ΡΠ½ΠΎΠΌΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Ρ Π°ΡΠΎΠΌΠΎΠ² ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ° Π² ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π΅ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ° ΠΈ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΠ²ΡΠ·Π΅ΠΉ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°. Π Π°ΡΡΠ²ΠΎΡ ΡΠΈΡΠ°Π²Π»ΠΎΠ½Π° Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΡΡΠΈΡΠΌΠΈ, ΠΏΡΠΈΡΡΠΌ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ Π²ΡΠΏΠ°Π΄Π°ΡΡ Π±Π΅Π»ΡΠΉ ΠΎΡΠ°Π΄ΠΎΠΊ, ΡΡΠΎ ΡΠ²ΠΈΠ΄Π΅ΡΠ΅Π»ΡΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΠΊΠ°Π½ΠΈΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ.
ΠΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΠ»ΠΈ ΡΠ½Π°ΡΠ°Π»Π° 1/3 ΡΠ°ΡΡΡΠΈΡΠ°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ±ΡΡΠΌΠ° ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ° ΡΠΈΡΠ°Π²Π»ΠΎΠ½Π° ΠΊ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°, ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΡ ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΈ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠ½Π°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 5 ΠΌΠΈΠ½ΡΡ Ρ ΠΊΡΡΠ³ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ°ΡΡΠΎΡΠΎΠΉ, ΡΠ°Π²Π½ΠΎΠΉ 12 500 ΠΎΠ±/ΠΌΠΈΠ½.
ΠΠΎΡΠ»Π΅ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ Π² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΡ Π²Π½ΠΎΡΠΈΠ»ΠΈ ¼ ΡΠ°ΡΡΡΠΈΡΠ°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ±ΡΡΠΌΠ° ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ° ΡΠΈΡΠ°Π²Π»ΠΎΠ½Π°, ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡΠ»ΠΈ ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΈ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅.
ΠΠ½Π°Π»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π²ΡΠΏΠΎΠ»Π½ΡΠ»ΠΈ ΠΈ ΠΏΡΠΈ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ 1/6 ΡΠ°ΡΡΡΠΈΡΠ°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ±ΡΡΠΌΠ° ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ° ΡΠΈΡΠ°Π²Π»ΠΎΠ½Π°.
ΠΠΎΡΠ»Π΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄Π½Π΅Π³ΠΎ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΡΠΏΠ΅ΡΠ½Π°ΡΠ°Π½Ρ ΠΎΡΠ±ΡΠ°ΡΡΠ²Π°Π»ΠΈ, Π° ΠΊ ΠΎΡΠ°Π΄ΠΊΡ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΠ»ΠΎΠΈ 100 ΠΌΠΊΠ» ΠΌΠ΅ΡΠ°Π½ΠΎΠ»Π°.
ΠΠ΅ΡΠ°Π½ΠΎΠ» Π²ΡΠΏΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ Π½Π° Π²Π°ΠΊΡΡΠΌΠ½ΠΎΠΌ ΠΈΡΠΏΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Π΅, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ ΡΠΎΠ»Ρ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° Π²ΡΡΡΡΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ Π½Π°Π΄ P2O5 Π² Π²Π°ΠΊΡΡΠΌΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΌ ΡΠΊΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΎΡΠ΅.
2.7 ΠΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π±ΠΈΡΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ»Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°
ΠΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π»ΠΈ ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΠ½ΠΎ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠ΅ [30]
ΠΠΊΡΠΈΠ²Π°ΡΠΈΡ. Π Π΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½Π°Ρ ΡΠΌΠ΅ΡΡ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Π»Π° 1 — 4 ΠΎ.Π΅. (5 — 20 Π½ΠΌΠΎΠ»Ρ) ΡΠΈΡΠ°Π²Π»ΠΎΠ½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠΎΠ»ΠΈ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠ΄Π° ΠΈ ΠΏΠΎ 10 ΠΌΠ³ Π²ΡΡΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ DMAP, PPh3 ΠΈ (PyS)2. ΠΠΊΡΠΈΠ²Π°ΡΠΈΡ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ° ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ: ΡΠ½Π°ΡΠ°Π»Π° 4 ΡΠ°Π·Π° ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡΠ»ΠΈ ΡΠ΅ΡΠΌΠΎΡΡΠ°ΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΈ 50? Π‘ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 1 — 1,5 ΠΌΠΈΠ½ ΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠ΅Π΅ ΠΈΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠ΅ ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 5 — 10 Ρ, Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΏΡΠΈ 37? Π‘ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 15 ΠΌΠΈΠ½.
ΠΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΈΡ. Π ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° Ρ Π°ΠΊΡΠΈΠ²ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠΌ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠΌ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΠ»ΠΈ ΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ»ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ½ (2 ΠΌΠ³), Π²ΡΡΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠΉ Π² ΡΠΊΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΎΡΠ΅ Π½Π°Π΄ P2O5 ΠΏΠΎΠ΄ Π²Π°ΠΊΡΡΠΌΠΎΠΌ. Π Π΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½Π°Ρ ΡΠΌΠ΅ΡΡ Π½Π΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠ²Π½ΠΎ ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 2 ΡΠ°ΡΠΎΠ² ΠΏΡΠΈ 56? Π‘.
ΠΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ°. ΠΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ ΠΎΡΠ°ΠΆΠ΄Π°Π»ΠΈ ΠΈΠ· ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ° 1,2 ΠΌΠ» Π΄ΠΈΡΡΠΈΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΈΡΠ°, ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΡΠ»ΠΈ Π² 50 ΠΌΠΊΠ» 3 Π Π²ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ° ΠΏΠ΅ΡΡ Π»ΠΎΡΠ°ΡΠ° Π»ΠΈΡΠΈΡ, ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΠΎΡΠ°ΠΆΠ΄Π°Π»ΠΈ 1,2 ΠΌΠ» ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π΄ΠΈΡΡΠΈΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΈΡΠ° ΠΈ 2% ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ° ΠΏΠ΅ΡΡ Π»ΠΎΡΠ°ΡΠ° Π»ΠΈΡΠΈΡ Π² Π°ΡΠ΅ΡΠΎΠ½Π΅ (1:1) ΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΡΠ»ΠΈ Π² 50 ΠΌΠΊΠ» Π²ΠΎΠ΄Ρ. Π‘ΠΌΠ΅ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΡΠ»ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ΅Π½ΠΎ-ΡΠ°Π·ΠΎΠ²ΠΎΠΉ Ρ ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΎΠ³ΡΠ°ΡΠΈΠΈ Π² Π³ΡΠ°Π΄ΠΈΠ΅Π½ΡΠ΅ Π°ΡΠ΅ΡΠΎΠ½ΠΈΡΡΠΈΠ»Π° (ΡΠΌ. 2.4). Π€ΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ Π·Π°Π΄Π΅ΡΠΆΠΊΠΈ Π² Π³Π΅Π»Π΅ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² ΠΠΠΠ Π² Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ .
2.8 ΠΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΌΠΌΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ Π ΠΠ ΠΈΠ· ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ
ΠΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π ΠΠ ΠΈΠ· ΡΡΡΠΏΠ΅Π½Π·ΠΈΠΈ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΠ»ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ Ρ Π»ΠΎΡΠΎΡΠΎΡΠΌ-ΡΠ΅Π½ΠΎΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΊΡΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π½Π°Π±ΠΎΡΠ° «Gen Elute™ Mammalian Total RNA Kit» ΡΠΈΡΠΌΡ «Sigma» (Π‘Π¨Π).
2.8.1 ΠΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΌΠΌΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ Π ΠΠ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ Ρ Π»ΠΎΡΠΎΡΠΎΡΠΌ-ΡΠ΅Π½ΠΎΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΊΡΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ
Π‘ΡΡΠΏΠ΅Π½Π·ΠΈΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΏΡΠΈ 4? Π‘ Ρ ΠΊΡΡΠ³ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ°ΡΡΠΎΡΠΎΠΉ 1000 ΠΎΠ±/ΠΌΠΈΠ½ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 10 ΠΌΠΈΠ½. Π‘ΡΠΏΠ΅ΡΠ½Π°ΡΠ°Π½Ρ ΠΎΡΠ±ΡΠ°ΡΡΠ²Π°Π»ΠΈ, ΠΊ ΠΎΡΠ°Π΄ΠΊΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΠ»ΠΈ 500 ΠΌΠΊΠ» Π±ΡΡΠ΅ΡΠ° PBS, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ ΡΡΡΠΏΠ΅Π½Π·ΠΈΡ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΏΡΠΈ 4? Π‘ Ρ ΠΊΡΡΠ³ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ°ΡΡΠΎΡΠΎΠΉ 1000 ΠΎΠ±/ΠΌΠΈΠ½ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 10 ΠΌΠΈΠ½. Π ΠΎΡΠ°Π΄ΠΊΡ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΠ»ΠΈ Π±ΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠ° ΠΈΠ· ΡΠ°ΡΡΠ΅ΡΠ° 200 ΠΌΠΊΠ»/106 ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΠΈ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ Π²ΠΎ Π»ΡΠ΄Ρ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 13 ΠΌΠΈΠ½. ΠΠ°ΡΠ΅ΠΌ ΡΡΡΠΏΠ΅Π½Π·ΠΈΡ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΏΡΠΈ 4? Π‘ Ρ ΠΊΡΡΠ³ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ°ΡΡΠΎΡΠΎΠΉ 13 000 ΠΎΠ±/ΠΌΠΈΠ½ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 10 ΠΌΠΈΠ½, ΠΎΡΠ°Π΄ΠΎΠΊ ΠΎΡΠ±ΡΠ°ΡΡΠ²Π°Π»ΠΈ. Π ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΌΡ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΡ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΠ»ΠΈ Π΄Π΅ΡΡΡΡΡ ΡΠ°ΡΡΡ Π΅Π³ΠΎ ΠΎΠ±ΡΡΠΌΠ° ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ° Π°ΡΠ΅ΡΠ°ΡΠ° Π½Π°ΡΡΠΈΡ Ρ pH = 4,2. ΠΠ²Π°ΠΆΠ΄Ρ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ΅Π½ΠΎΠ»ΡΠ½ΡΡ ΡΠΊΡΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡ ΠΈ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ ΡΠ°Π· — ΡΠΊΡΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡ ΡΠΌΠ΅ΡΡΡ ΡΠ΅Π½ΠΎΠ»Π° ΠΈ Ρ Π»ΠΎΡΠΎΠ²ΠΎΡΠΌΠ° Π² ΠΎΠ±ΡΡΠΌΠ½ΠΎΠΌ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ 1:1, ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΡΠΉ ΡΠ°Ρ ΠΎΡΠ±ΡΠ°ΡΡΠ²Π°Ρ ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΡΡ ΡΠ°Π·Ρ. Π ΠΠ ΠΈΠ· ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΠΎΡΠ°ΠΆΠ΄Π°Π»ΠΈ ΡΡΠΎΠΉΠ½ΡΠΌ ΠΎΠ±ΡΡΠΌΠ½ΡΠΌ ΠΈΠ·Π±ΡΡΠΊΠΎΠΌ ΡΡΠ°Π½ΠΎΠ»Π° Π² ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ 0,3 Π Π°ΡΠ΅ΡΠ°ΡΠ° Π°ΠΌΠΌΠΎΠ½ΠΈΡ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΡΠΎΠΊ ΠΏΡΠΈ — 20? Π‘. ΠΡΠ°ΠΆΠ΄ΡΠ½Π½ΡΡ Π ΠΠ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΡΠ»ΠΈ Π² 50 ΠΌΠΊΠ» Π²ΠΎΠ΄Ρ. ΠΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π ΠΠ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅ΡΡΠ»ΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΎΠΏΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΏΠ»ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ Π½Π° Π΄Π»ΠΈΠ½Π°Ρ Π²ΠΎΠ»Π½ 260 ΠΈ 280 Π½ΠΌ ΠΈ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅.
2.8.1 ΠΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΌΠΌΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ Π ΠΠ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π½Π°Π±ΠΎΡΠ° «Gen Elute™ Mammalian Total RNA Kit» ΡΠΈΡΠΌΡ «Sigma»
ΠΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π ΠΠ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΠ½ΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠ΅, ΠΏΡΠΈΠ»Π°Π³Π°Π΅ΠΌΠΎΠΉ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΡΠΈΠΊΠ°ΠΌΠΈ ΠΊ Π½Π°Π±ΠΎΡΡ.
Π‘ΡΡΠΏΠ΅Π½Π·ΠΈΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠ½Π°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅ Ρ ΠΊΡΡΠ³ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ°ΡΡΠΎΡΠΎΠΉ 800 ΠΎΠ±/ΠΌΠΈΠ½ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 3 ΠΌΠΈΠ½, ΠΊ ΠΎΡΠ°Π΄ΠΊΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΠ»ΠΈ 5 ΠΌΠΊΠ» ΠΌΠ΅ΡΠΊΠ°ΠΏΡΠΎΡΡΠ°Π½ΠΎΠ»Π° ΠΈ 245 ΠΌΠΊΠ» «Lysis Solution». Π‘ΡΡΠΏΠ΅Π½Π·ΠΈΡ ΡΠΈΠ»ΡΡΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ Π² ΠΊΠΎΠ»ΠΎΠ½ΠΊΠ΅ Π΄Π»Ρ ΡΠΈΠ»ΡΡΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ (Filtration Column), ΠΊ ΡΠΈΠ»ΡΡΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΌΡ Π»ΠΈΠ·Π°ΡΡ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΠ»ΠΈ 250 ΠΌΠΊΠ» 70% Π²ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°Π½ΠΎΠ»Π°. ΠΠΈΠ·Π°Ρ Π² ΠΊΠΎΠ»ΠΎΠ½ΠΊΠ΅ Π΄Π»Ρ ΡΠΈΠ»ΡΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΈ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΏΡΠΈ ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΡΡΠ³ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ°ΡΡΠΎΡΠ΅ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 15 Ρ, ΠΌΠ°ΡΠΎΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡ ΠΎΡΠ±ΡΠ°ΡΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ. ΠΡΠ°Π΄ΠΎΠΊ ΠΏΡΠΎΠΌΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ 500 ΠΌΠΊΠ» ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΎΠ² Π΄Π»Ρ ΠΏΡΠΎΠΌΡΠ²ΠΊΠΈ ΠΏΡΠΈ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΏΡΠΈ ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΡΡΠ³ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ°ΡΡΠΎΡΠ΅ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 15 Ρ: ΡΠ½Π°ΡΠ°Π»Π° Wash Solution 1, Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ Wash Solution 2; ΠΌΠ°ΡΠΎΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΡΠΉ ΡΠ°Π· ΠΎΡΠ±ΡΠ°ΡΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ. Π ΠΠ ΠΈΠ· ΠΊΠΎΠ»ΠΎΠ½ΠΊΠΈ ΡΠ»ΡΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ 50 ΠΌΠΊΠ» Π²ΠΎΠ΄Ρ. ΠΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π ΠΠ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅ΡΡΠ»ΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΎΠΏΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΏΠ»ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ Π½Π° Π΄Π»ΠΈΠ½Π°Ρ Π²ΠΎΠ»Π½ 260 ΠΈ 280 Π½ΠΌ (ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 1,8) ΠΈ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅. ΠΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π ΠΠ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅ΡΡΠ»ΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΎΠΏΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΏΠ»ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ Π½Π° Π΄Π»ΠΈΠ½Π°Ρ Π²ΠΎΠ»Π½ 260 ΠΈ 280 Π½ΠΌ ΠΈ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅.
2.9 ΠΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΠΠ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ
ΠΠ±ΡΠ°Π·Π΅Ρ Π ΠΠ ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°Π»ΠΈ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·Ρ ΠΠΠΠ°Π·ΠΎΠΉ I Π΄Π»Ρ ΠΎΡΠΈΡΡΠΊΠΈ ΠΎΡ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ² ΠΠΠ Π² ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ 1-ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π±ΡΡΠ΅ΡΠ° Π΄Π»Ρ ΠΠΠΠ°Π·Ρ I. Π Π΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΡ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΏΡΠΈ 37? Π‘ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 1 Ρ. Π ΠΠ ΠΎΡΠ°ΠΆΠ΄Π°Π»ΠΈ ΠΈΠ· ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΠΈΠ·Π±ΡΡΠΊΠΎΠΌ ΡΡΠ°Π½ΠΎΠ»Π° Π² ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ Π°ΡΠ΅ΡΠ°ΡΠ° Π½Π°ΡΡΠΈΡ. ΠΡΠ°Π΄ΠΎΠΊ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΡΠ»ΠΈ Π²ΠΎΠ΄Π΅. ΠΠ·ΠΌΠ΅ΡΡΠ»ΠΈ ΠΎΠΏΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΡΡ ΠΏΠ»ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π ΠΠ.
ΠΠΎΡΠΎΠ²ΠΈΠ»ΠΈ Π²ΠΎΠ΄Π½ΡΠΉ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π ΠΠ ΠΈ «Π³Π΅ΠΊΡΠ°ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ°» ΠΈ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ Π΅Π³ΠΎ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 3 ΠΌΠΈΠ½ ΠΏΡΠΈ 70? Π‘, Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ 1,5 ΠΌΠΈΠ½ Π²ΠΎ Π»ΡΠ΄Ρ. ΠΠΎΡΠ»Π΅ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΊ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΠ»ΠΈ ΠΎΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΡ (Π±ΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ ΠΠ’, dNTP, DTT, ΡΠ΅Π²Π΅ΡΡΠ°Π·Π° MuMLV). ΠΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΎΠ² Π² Π Π‘ ΠΏΡΠΈΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Ρ Π² ΡΠ°Π±Π». 4.
Π’Π°Π±Π»ΠΈΡΠ° 4. Π‘ΠΎΡΡΠ°Π² Π Π‘ Π΄Π»Ρ ΠΠ’.
ΠΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½Ρ | ΠΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π² Π Π‘ | |
ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ ΠΠ’ | 1 Ρ | |
dNTP | 1 ΠΌΠ | |
DTT | 5 ΠΌΠ | |
«ΠΠ΅ΠΊΡΠ°ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅Ρ» | 25 ΠΌΠΊΠ | |
MuML-V | 40 Π΅.Π°. | |
Π ΠΠ | 2 ΠΌΠΊΠ³ | |
Π Π‘ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ 10 ΠΌΠΈΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠ½Π°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅, Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ 1 ΡΠ°Ρ ΠΏΡΠΈ 42? Π‘, Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ, Π΄Π»Ρ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·Π° ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ² Π ΠΠ, 10 ΠΌΠΈΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΈ 70? Π‘. ΠΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΊΠΠΠ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΠΠ¦Π Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΏΠ°Ρ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ².
2.10 ΠΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ
ΠΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΊΠΠΠ-ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΊ Π½Π΅ΠΉ ΠΏΠ°ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ². ΠΠΎΡΠΎΠ²ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΡ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΡΡ dNTP, ΠΏΡΡΠΌΠΎΠΉ ΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ, Taq-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ ΠΈ ΠΠΠ-ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ Π² ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ 1-ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π±ΡΡΠ΅ΡΠ° Π΄Π»Ρ ΠΠ¦Π . Π Π΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΡ ΠΏΠΎΠΌΠ΅ΡΠ°Π»ΠΈ Π² ΡΠ΅ΡΠΌΠΎΡΠΈΠΊΠ»Π΅Ρ «Π’Π΅ΡΡΠΈΠΊ» ΡΠΈΡΠΌΡ «ΠΠΠ-Π’Π΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡ» (Π ΠΎΡΡΠΈΡ) Ρ ΡΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΠΎΠΉ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ: 1 ΡΠΈΠΊΠ»: 94? Π‘, 3 ΠΌΠΈΠ½, Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ 27 ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ²: 94? Π‘, 45 Ρ, Π’ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π° (Π²Π°ΡΡΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ Π² ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Ρ ), 30 Ρ, 72? Π‘, 30 Ρ, ΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄Π½ΠΈΠΉ ΡΠΈΠΊΠ»: 72? Π‘, 2 ΠΌΠΈΠ½. ΠΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅.
2.11 ΠΠΎΠ΄Π±ΠΎΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΉ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ ΠΠ¦Π Ρ ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠΈ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² EGFP-1,2, EGFP-3,2 ΠΈ EGFP-5,6
2.11.1 Π‘ΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΏΠ°Ρ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² EGFP-1,2, EGFP-3,2 ΠΈ EGFP-5,6
ΠΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ EGFP-1,2,3,5,6 Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±ΡΠ°Π½Ρ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΡ Primer 3.
ΠΡΠΈ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠΈ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΏΠ°Ρ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² EGFP-1,2, EGFP-3,2 ΠΈ EGFP-5,6 Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΠΠ-ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΊΠΠΠ BHK, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½Π°Ρ ΠΏΡΡΡΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ ΡΡΠΌΠΌΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ Π ΠΠ, Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ· ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΈ BHK ΠΈ ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π½Π½Π°Ρ ΠΎΡ ΠΠΠ ΠΠΠΠ°Π·ΠΎΠΉ I. ΠΠ°ΠΊ ΠΎΡΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»Ρ Π±ΡΠ°Π»Π°ΡΡ Π²ΠΎΠ΄Π°. ΠΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΡΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π° 57? Π‘ ΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠ΅ΠΉ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΎΠ²:
Π’Π°Π±Π»ΠΈΡΠ° 5. Π‘ΠΎΡΡΠ°Π² Π Π‘ Π΄Π»Ρ ΠΠ¦Π .
ΠΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½Ρ | ΠΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π² Π Π‘ | |
ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ ΠΠ¦Π | 1 Ρ | |
dNTP | 0,3 ΠΌΠ | |
ΠΡΡΠΌΠΎΠΉ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅Ρ | 5 ΠΌΠΊΠ | |
ΠΠ±ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅Ρ | 5 ΠΌΠΊΠ | |
Taq-pol | 0,1 Π΅.Π°./ΠΌΠΊΠ» | |
ΠΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΠΠ¦Π ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅. ΠΠΎ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π±Π΅Π½Π΄ΠΎΠ² ΡΡΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΠ± ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ.
2.11.2 ΠΠΎΠ΄Π±ΠΎΡ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π° ΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ Ρ Π»ΠΎΡΠΈΠ΄Π° ΠΌΠ°Π³Π½ΠΈΡ
ΠΠΎΡΠΎΠ²ΠΈΠ»ΠΈ 24 ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠ΅ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ, ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΠΈΠ· ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π΄Π»Ρ ΡΠ΄ΠΎΠ±ΡΡΠ²Π° ΠΈ Π½Π°Π³Π»ΡΠ΄Π½ΠΎΡΡΠΈ Π±ΡΠ»ΠΎ ΠΏΡΠΈΡΠ²ΠΎΠ΅Π½ΠΎ ΡΡΠ»ΠΎΠ²Π½ΠΎΠ΅ Π½Π°Π·Π²Π°Π½ΠΈΠ΅. ΠΠ°Π·Π²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΠ΅ΠΉ ΠΏΡΠΈΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Ρ Π² ΡΠ°Π±Π»ΠΈΡΠ΅ 6.
Π’Π°Π±Π»ΠΈΡΠ° 6. ΠΠ±ΠΎΠ·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΠ΅ΠΉ
ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ | ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ° | Π‘Mg2+, ΠΌΠ | Π’Π΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ° ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π°, ?Π‘ | ||||
55,5 | 59,5 | ||||||
EGFP-3,2 | H2O | «11» | «21» | «31» | «41» | ||
ΠΊΠΠΠ BHK | 1,5 | «12» | «22» | «32» | «42» | ||
«13» | «23» | «33» | «43» | ||||
«14» | «24» | «34» | «44» | ||||
EGFP-5,6 | H2O | «15» | «25» | «35» | «45» | ||
ΠΊΠΠΠ BHK | 1,5 | «16» | «26» | «36» | «46» | ||
«17» | «27» | «37» | «47» | ||||
«18» | «28» | «38» | «48» | ||||
ΠΠ»Ρ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΠ¦Π . ΠΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΠΠ¦Π ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅. ΠΠΎ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π±Π΅Π½Π΄ΠΎΠ² ΡΡΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΠ± ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ.
2.11.3 ΠΠΎΠ΄Π±ΠΎΡ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΉ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΠ·ΠΈΠ΄ΡΡΠΈΡΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠ² ΠΈ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ²
ΠΠΎΡΠΎΠ²ΠΈΠ»ΠΈ 10 ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΠ΅ΠΉ Ρ ΡΠ°Π·Π½ΡΠΌΠΈ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΠΌΠΈ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ. ΠΠ»Ρ ΡΠ΄ΠΎΠ±ΡΡΠ²Π° ΠΈ Π½Π°Π³Π»ΡΠ΄Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΠΏΡΠΈΡΠ²Π°ΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΡΠ»ΠΎΠ²Π½ΠΎΠ΅ Π½Π°Π·Π²Π°Π½ΠΈΠ΅. ΠΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½Ρ (ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½Π°Ρ ΡΠΌΠ΅ΡΡ «0») ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΡΠΈ ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² (0,5 ΠΌΠΊΠ) ΠΈ dNTP (1 ΠΌΠ) Π² ΠΎΡΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΠΠΠ-ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ. ΠΠ°Π·Π²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΠ΅ΠΉ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΡ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ ΠΏΡΠΈΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Ρ Π² ΡΠ°Π±Π»ΠΈΡΠ΅ 7.
Π’Π°Π±Π»ΠΈΡΠ° 7. ΠΠ±ΠΎΠ·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΠ΅ΠΉ.
Π‘dNTP, ΠΌΠΊΠ Π‘ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ², ΠΌΠΊΠ | ||||
0,15 | «1» | «2» | «3» | |
0,3 | «4» | «5» | «6» | |
0,5 | «7» | «8» | «9» | |
ΠΠ»Ρ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΠ¦Π . ΠΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΠΠ¦Π ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅. ΠΠΎ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π±Π΅Π½Π΄ΠΎΠ² ΡΡΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΠ± ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ.
3. Π Π΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΈ ΠΎΠ±ΡΡΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΡ
ΠΠ΅ΡΠΎΠ΄ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½Π°, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ, ΠΏΡΠ΅Π΄Π»ΠΎΠΆΠ΅Π½ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ 15 Π»Π΅Ρ Π½Π°Π·Π°Π΄ [], ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ Π½Π°Π΄ Π΅Π³ΠΎ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠ΅ΠΉ ΠΎΡΡΠ°ΡΡΡΡ Π°ΠΊΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΈ Π² Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅Π΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ. ΠΠ½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΠΏΠΎΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΡΠ΅ΡΠ°ΠΏΠ΅Π²ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌΠΈ Π°Π³Π΅Π½ΡΠ°ΠΌΠΈ, ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΡΡΠΈΠΌΠΈ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΠΏΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ². ΠΠ° ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄Π½ΠΈΠ΅ 15 Π»Π΅Ρ ΡΠ°Π·Π²ΠΈΡΠΈΠ΅ Π±ΠΈΠΎΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Ρ ΠΈΠΌΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΠ»ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠΈΡΡ ΡΡΠ΄ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ², ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡΠΈΡ ΡΠ»ΡΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌΠΈ ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡΠ²Π°ΠΌΠΈ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ Π½Π΅ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠΌΠΈ ODN: Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ΠΉ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΡΡ ΠΊ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·, ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠΎΠ², ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡΡ ΠΏΡΠΎΠ½ΠΈΠΊΠ°ΡΡ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ.
ΠΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½Ρ ΠΏΠΎ «Π²ΡΠΊΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ» Π³Π΅Π½Π° Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠΌΠΈ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°ΠΌΠΈ Π²ΠΊΠ»ΡΡΠ°Π΅Ρ Π² ΡΠ΅Π±Ρ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΡΠ°ΠΏΠΎΠ²:
1. ΠΡΠ±ΠΎΡ ΠΈ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡΡ Π΄Π»Ρ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΉ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°.
2. ΠΠΏΡΠΈΠΌΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΉ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ ΠΠ’ ΠΠ¦Π ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π°, ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΡΡΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» Π ΠΠ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΡ Π³Π΅Π½-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Ρ.
3. ΠΠΎΡΡΠ°Π²ΠΊΠ° Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ.
4. ΠΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½Π°Ρ Ρ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΡΡΠΈΠΊΠ° Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ: ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ , ΠΎΠ±ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½Π½ΡΡ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌ ΠΈ Π½Π΅ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°ΠΌΠΈ, ΠΈ Π² ΠΈΠ½ΡΠ°ΠΊΡΠ½ΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ .
ΠΡΠ»ΠΈ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ , ΠΎΠ±ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½Π½ΡΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠΌΠΈ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°ΠΌΠΈ, ΠΌΠ°Π»ΠΎ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎΠΌ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Π² ΠΈΠ½ΡΠ°ΠΊΡΠ½ΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ , ΡΠΎ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ Π³Π΅Π½Π°-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ. ΠΠ΄Π΅ΠΊΠ²Π°ΡΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±ΡΠ°Π½Π½ΡΠΉ ΡΡΠ΄ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΉ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ ΡΡΠΈΠ»ΠΈΠ²Π°ΡΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡ.
ΠΠ½ΡΠΈΡΠΌΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠΉ Π°Π³Π΅Π½Ρ, ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎ ΠΈΠ½Π³ΠΈΠ±ΠΈΡΡΡΡΠΈΠΉ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΈΡ ΠΏΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°, Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ ΠΏΡΠΎΠΉΡΠΈ Π΅ΡΡ ΡΡΠ΄ Π΄ΠΎΠΊΠ»ΠΈΠ½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΈ ΠΊΠ»ΠΈΠ½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΈΡΠΏΡΡΠ°Π½ΠΈΠΉ, ΠΏΡΠ΅ΠΆΠ΄Π΅ ΡΠ΅ΠΌ ΡΡΠ°ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄Π°ΠΆΠ½ΡΠΌ ΠΌΠ΅Π΄ΠΈΠΊΠ°ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠΌ.
Π Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΌΠΎΠ΄Π΅Π»ΠΈ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π±ΡΠ» Π²ΡΠ±ΡΠ°Π½ Π³Π΅Π½ EGFP, ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΡΠΈΡΡΡΡΠΈΠΉ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΈΡΡΡΡΠΈΠΉ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ. ΠΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎΠΌ Π²ΡΠ±ΡΠ°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠΎΠ΄Π΅Π»ΠΈ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½Π°-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Π΄Π²ΡΠΌΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π°ΠΌΠΈ: ΠΠ’ ΠΠ¦Π ΠΈ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΈΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ, ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΉ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡΠΌ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΡ.
ΠΡΠ» ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄ΡΠ½ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π· 5'-ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΎΠ² Π΄Π²ΡΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ODN, Π°Π΄ΡΠ΅ΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΠΊ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ (EGFP-A, EGFP-B), ΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ «ΡΠΌΠ΅ΡΠ°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ» (scrambled) ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° (Scr-1), ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠ΅Π³ΠΎ ΡΠ°Π·Π±ΡΠΎΡΠ°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΈ ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΡΠ°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠΈ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ. Π’Π°ΠΊΠΆΠ΅ Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ ΠΠ’ ΠΠ¦Π ΠΊΠ°ΠΊ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠΈ Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² EGFP Π² ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ°Ρ Π ΠΠ, Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΈΠ· ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ.
3.1 Π‘ΠΈΠ½ΡΠ΅Π· ΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄Π½ΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ²
Π‘ΠΈΠ½ΡΠ΅Π· ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠ΅, ΠΎΠΏΠΈΡΠ°Π½Π½ΠΎΠΉ Π² ΠΏ. 2.7. ΠΡΠΎΡΠ΅Π΄ΡΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΠΈΡΡ Π½Π° 2 ΡΡΠ°ΠΏΠ°: Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π°ΡΠΈΡ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ° (ΡΠΈΡ. 15, Π°, Π±) ΠΈ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΈΡΠ΅Π½Π° (ΡΠΈΡ 15, Π²). ΠΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²ΠΈΡΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠ΅ΠΉ ΡΡ Π΅ΠΌΠΎΠΉ:
Π ΠΈΡ.
Π ΠΈΡ. 15. ΠΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ»-1-ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ½Π° ΠΊ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΠΎΠΌΡ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°.
Π ΠΈΡ. 16. Π° — Ρ ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΠ° ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ODN EGFP-B; Π± — Π£Π€ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡΡΡ ΠΏΠΎΠ³Π»ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ², ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΡ ΡΡ Π² ΠΏΠΈΠΊΠ°Ρ (1) ΠΈ (2).
ΠΡΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Ρ ΠΈ ΠΎΡ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ Π·Π°Π΄Π΅ΡΠΆΠΊΠΈ Π² Π³Π΅Π»Π΅ ΠΈ Π£Π€-ΡΠΏΠ΅ΠΊΡΡΠΎΠΌΠ΅ΡΡΠΈΠ΅ΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΡ ODN ΠΈ ΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ»-1-ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ½Π°. ΠΠ°Π΄Π΅ΡΠΆΠΊΠ° Π² Π³Π΅Π»Π΅, Π£Π€ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡΡΡ ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡΡΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΡΠ²ΠΈΠ΄Π΅ΡΠ΅Π»ΡΡΡΠ²ΡΡΡ ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄Π½ΡΡ .
Π£Π€ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ° ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ, ΡΠ½ΡΡΡΠ΅ Ρ ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΎΠ³ΡΠ°ΡΠΎΠΌ Waters, ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΡΠΌΡ Π² ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡΠΈ 260 Π½ΠΌ, Ρ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΉ Π΄Π»Ρ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΡΠ°ΡΡΠΈ, ΠΈ 350 Π½ΠΌ, Ρ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΉ Π΄Π»Ρ Π°ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ° ΠΏΠΈΡΠ΅Π½Π°. Π‘ΠΏΠ΅ΠΊΡΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΎΠ² ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ODN Π°Π½Π°Π»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½Ρ (ΡΠΌ. ΡΠΈΡ. 14)
ΠΠ½Π°Π»ΠΈΠ· ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² ΠΠΠΠ Π² Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π» Π·Π΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΡΠ²Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π±Π΅Π½Π΄Π° Π² Π³Π΅Π»Π΅, Ρ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠ΅ Π΄Π»Ρ ΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΎΠ², ΠΈ Π½Π΅Π±ΠΎΠ»ΡΡΡΡ Π·Π°Π΄Π΅ΡΠΆΠΊΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΎΠ² Π² Π³Π΅Π»Π΅ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΡΠΌΠΈ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°ΠΌΠΈ, ΡΡΠΎ Ρ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠ½ΠΎ Π΄Π»Ρ ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄Π½ΡΡ (ΡΠΌ. ΡΠΈΡ. 17).
Π ΠΈΡ. 17. ΠΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ΄Π²ΠΈΠΆΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π² ΠΠΠΠ ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΎΠ² ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ²: 1 — ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΡΠΉ ODN, 2 — ODN Π±Π΅Π· 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ°, 3 — ΠΏΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°Ρ
3.2 Π‘ΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π ΠΠ ΠΈΠ· ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ Ρ Π»ΠΎΡΠΎΡΠΎΡΠΌ-ΡΠ΅Π½ΠΎΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΊΡΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π½Π°Π±ΠΎΡΠ° Gen Elute™ Mammalian Total RNA Kit" ΡΠΈΡΠΌΡ «Sigma»
ΠΡΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Ρ ΡΡΡΠΏΠ΅Π½Π·ΠΈΠΈ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΈ R1198, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠ΅ ΠΏΠΎ 3,6*106 ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ. ΠΠ· ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΡΡΡΠΏΠ΅Π½Π·ΠΈΠΈ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ Π²ΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ»ΠΈ «ΡΡΠΌΠΌΠ°ΡΠ½Π°Ρ» Π ΠΠ ΠΎΠ±ΠΎΠΈΠΌΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π°ΠΌΠΈ ΠΈ ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ. ΠΡΠΈΡΠ΅ΡΠΈΡΠΌΠΈ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ»ΡΠΆΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ³Π»ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π½Π° Π΄Π»ΠΈΠ½Π΅ Π²ΠΎΠ»Π½Ρ 260 Π½ΠΌ (ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½Π°Ρ Ρ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΡΡΠΈΠΊΠ°) ΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΠΏΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΏΠ»ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ Π½Π° Π΄Π»ΠΈΠ½Π°Ρ Π²ΠΎΠ»Π½ 260 Π½ΠΌ ΠΈ 280 Π½ΠΌ (Π΄Π»Ρ ΡΠΈΡΡΠΎΠΉ Π ΠΠ ΠΎΠ½ΠΎ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½ΠΎ Π±ΡΡΡ Π±Π»ΠΈΠ·ΠΊΠΎ ΠΊ 1,8).
Π ΠΎΠ±ΠΎΠΈΡ ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ Π½Π° Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ Π² Π½ΡΠΌ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π±ΡΠ»Π° ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π° ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½Π°Ρ ΠΊΠ°ΡΡΠΈΠ½Π° (ΡΠΌ. ΡΠΈΡ. 19), Ρ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠ½Π°Ρ Π΄Π»Ρ «ΡΡΠΌΠΌΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ» Π ΠΠ:
Π ΠΈΡ. 19. Π Π°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ «ΡΡΠΌΠΌΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ» Π ΠΠ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·ΠΎΠΌ Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅: 1 — 28 S ΡΠ ΠΠ, 2 — ΠΌΠ ΠΠ, 3 — 18 S ΡΠ ΠΠ.
Π‘ΠΏΠ΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠΎΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π»ΠΈ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠ΅ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π ΠΠ Π½Π°Π±ΠΎΡΠΎΠΌ Gen Elute™ Mammalian Total RNA Kit" ΡΠΈΡΠΌΡ «Sigma» ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΠΊΠ»Π°ΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ Ρ Π»ΠΎΡΠΎΡΠΎΡΠΌ-ΡΠ΅Π½ΠΎΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΊΡΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ:
Π’Π°Π±Π»ΠΈΡΠ° 8. Π‘ΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ² Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π ΠΠ ΠΈΠ· ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ.
ΠΠ΅ΡΠΎΠ΄ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ | A260, ΠΎ.Π΅./ΠΌΠ» | A260/A280 | |
Π₯Π»ΠΎΡΠΎΡΠΎΡΠΌ-ΡΠ΅Π½ΠΎΠ»ΡΠ½Π°Ρ ΡΠΊΡΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡ | 2,2 | 1,909 | |
ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π½Π°Π±ΠΎΡΠ° Π΄Π»Ρ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π ΠΠ | 9,9 | 1,800 | |
Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ Ρ Π»ΠΎΡΠΎΡΠΎΡΠΌ-ΡΠ΅Π½ΠΎΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΊΡΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΠΈΠ³ΡΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π°Π±ΠΎΡΡ Π΄Π»Ρ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π ΠΠ ΡΠΈΡΠΌΡ «Sigma» Π² ΠΏΠ»Π°Π½Π΅ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ΅ΠΉ ΠΠΠ, Π² 4,5 ΡΠ°Π·Π° ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π ΠΠ ΠΈ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΡ Π·Π°ΡΡΠ°Ρ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ Π½Π° ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ.
3.3 ΠΠΎΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΊΠ° ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΠΠ¦Π Π΄Π»Ρ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Π³Π΅Π½Π° EGFP
ΠΡΠ»Π° ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Π° ΠΠ¦Π Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΏΠ°Ρ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² EGFP-1,2, EGFP-3,2 ΠΈ EGFP-5,6, Π°Π΄ΡΠ΅ΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΠΊ Π³Π΅Π½Ρ EGFP. ΠΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΌ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»Π΅ΠΌ (ΠΏΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ Π΄ΠΎΡΡΠΎΠ²Π΅ΡΠ½ΠΎ ΠΈΠ΄ΡΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ) ΡΠ²Π»ΡΠ»Π°ΡΡ ΠΏΠ°ΡΠ° ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² AE-7,6, Π°Π΄ΡΠ΅ΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΠΊ Π³Π΅Π½Ρ AML-ETO. Π ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΠΠ-ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΊΠΠΠ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ ΠΈΠ· ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΈ R1198 ΠΈ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΡΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΠΊΠΎΠ½Ρ ΠΎΠ±ΠΎΠΈΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ². ΠΠ° ΡΠΈΡ. 20 ΠΏΡΠΈΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Π° ΡΠΎΡΠΎΠ³ΡΠ°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠΊΡΠ°ΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π±ΡΠΎΠΌΠΈΡΡΡΠΌ ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΠ΅ΠΌ Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π³Π΅Π»Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½Ρ Π² Π½ΡΠΌ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΠΠ¦Π .