Помощь в учёбе, очень быстро...
Работаем вместе до победы

Разработка системы морфометрического анализа для скрининга эффектов нестабильности генома в гигиенических исследованиях

Диссертация: Разработка системы морфометрического анализа для скрининга эффектов нестабильности генома в гигиенических исследованиях
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Динамичность развития нанотехнологий и появления новых НМ требует создания системы скрининга, которая бы позволила быстро и надежно выявлять среди них потенциально опасные вещества. Поскольку обычные для токсикологических исследований эксперименты на животных продолжительны, трудоемки и для исследования НМ требуют разработки специальных условий эксперимента, наиболее перспективными для… Читать ещё >

Содержание

  • ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ ОЦЕНКИ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ НАНОМАТЕРИАЛОВ
    • 1. 1. Токсикология НМ и НЧ
    • 1. 2. Современные методы анализа генотоксичности НМ и НЧ
    • 1. 3. Оценка асимметрии распределения ДНК между дочерними клетками методами морфометрии ядер
    • 1. 4. Применение методов морфометрии клеток и их ядер в современных биологических исследованиях
    • 1. 5. Метод микроядерного теста с цитохалазином В как референсный метод для морфометрического анализа
    • 1. 6. Обзор исследований генотоксичности наноматериалов, проведенных на культуре крови человека в микроядерном тесте с ЦХВ

Разработка системы морфометрического анализа для скрининга эффектов нестабильности генома в гигиенических исследованиях (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Активное развитие технологий способствует высоким темпам разработки новых веществ и материалов. Наиболее яркими представителями современных материалов являются наноматериалы (НМ), каждый из которых обладает специфическими свойствами [1,2], связанными с пространственной структурой его молекул. В связи с малой изученностью механизмов биологического действия НМ, оценку токсикологических свойств (в том числе генотоксичности, как одного из важнейших компонентов токсикологической характеристики) для каждого такого вещества следует выполнять индивидуально [3, 4, 5, 1].

Динамичность развития нанотехнологий и появления новых НМ требует создания системы скрининга, которая бы позволила быстро и надежно выявлять среди них потенциально опасные вещества. Поскольку обычные для токсикологических исследований эксперименты на животных продолжительны, трудоемки и для исследования НМ требуют разработки специальных условий эксперимента, наиболее перспективными для генетико-токсикологического скрининга представляются методы in vitro (входят в список рекомендованных как в РФ, так и в странах ЕС [2, 6]), основанные на культивировании клеток животных, человека, а также ряда клеточных линий. В генетической токсикологии скрининг должен быть направлен на выявление эффектов нестабильности генома, которые при этом могут проявляться в виде целого комплекса изменений: образования повреждений ДНК, асимметрии деления ядер, анеуплоидии, изменения митотической и пролиферативной активности, клеточной гибели. В настоящее время надежно и несколькими методами определяются только повреждения ДНК (в тесте на индукцию хромосомных аберраций [7, 8, 9], в микроядерном тесте [10, 11, 12], в Comet assay [13, 14, 15] и пр.). В то же время, такое серьезное повреждение генома, как асимметрия распределения генетического материала в процессе деления клетки, являющееся одной из наиболее серьезных предпосылок для опухолевой трансформации клеток [16, 17, 18], определяется только при использовании полногеномной FISH-окраски (fluorescence in situ hybridization [19]). Этот метод очень дорог, требует специального оборудования и в России практически не выполняется. Мы же предположили, что асимметрию распределения генетического материала можно определить при сравнении площадей ядер в двуядерных клетках, регулярно образующихся при блоке цитотомии. Этот эффект стандартно применяется в методе микроядерного теста [10, 20], поэтому использование последнего в комплексе с морфометрическим анализом ядер двуядерных клеток (который достаточно часто применяют в современных исследованиях одноядерных клеток [21, 18, 22]) может стать надежным и простым инструментом выявления асимметрии деления ядер.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: на примере эффектов, индуцированных наноматериалами на лимфоцитах крови человека, культивируемых в условиях блока цитотомии, разработать метод морфометрического анализа площадей клеточных ядер в двуядерных клетках, пригодный для скрининга нестабильности генома. ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Создать математическое описание и методическую базу для анализа симметрии площадей ядер в двуядерных клетках, образовавшихся при культивировании клеток крови человека в условиях цитокинетического блока.

2. Проанализировать изменения симметрии площадей ядер двуядерных клеток в культурах лимфоцитов крови человека, экспонированных стандартным мутагеном, а также нанои микроформами ряда материалов, предполагаемых к применению в различных областях техники, в частности, при водоподготовке.

3. Провести сравнительный анализ цитогенетических эффектов, индуцированных теми же веществами, с использованием расширенного протокола микроядерного теста, и сравнить полученные результаты с данными морфометрического анализа.

4. На основании полученных данных обосновать алгоритм и критерии использования морфометрического анализа площадей ядер в двуядерных клетках для экспресс-прогноза эффектов нестабильности генома на клетках крови человека, культивированных в условиях блока цитотомии. НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

1. Предложен новый подход к морфометрическому анализу, основанный на сравнении площадей ядер в двуядерных клетках, образовавшихся из одной материнской при культивировании лимфоцитов крови человека в условиях цитокинетического блокасозданы его математическое обоснование и методическая база.

2. Разработана система морфометрических показателей, которые могут быть использованы для скрининга эффектов нестабильности генома человека, индуцированных действием НМ, применимая также для анализа эффектов химических соединений и других видов воздействий.

3. Впервые показано, что при экспозиции лимфоцитов крови человека в условиях цитокинетического блока НЧ магнетита в оболочке из силиката, микрои НЧ диоксида титана, нановолокнами (НВ) и микродисперсией (УД) гидроксида алюминия, а также М-метил-1чГ-нитро-]Ч-нитрозогуанидином, дающим истинный раствор, и микрочастицами латекса, наблюдаются: a. дозозависимое повышение частоты клеток с микроядрами (МЯ) и нуклеоплазменными мостами (НПМ), причем для НМ преимущественно среди клеток, прошедших 2й митотический цикл за время культивирования, а также повышение частоты апоптоза и укорочении клеточного цикла у значительного числа клеток, способных к делениюb. в клетках, прошедших 2й митотический цикл — дозозависимое повышение доли асимметричных 3-ядерных клетокc. дозозависимые изменения площадей ядер и степени их симметрии в двуядерных клетках, прошедших 1 митотический цикл.

4. Выявлены повторяющиеся высокоуровневые корреляции между морфометрическими индексами, определенными по соотношению и сумме площадей ядер в двуядерных клетках, и рядом цитогенетических показателей, характеризующих нестабильность генома в клетках, прошедших второй митоз, что доказывает релевантность разработанного подхода для выявления и прогноза эффектов нестабильности генома, включая анеуплоидию.

5. Показано, что увеличение степени асимметрии площадей ядер в двуядерных клетках ассоциировано с повышением частоты генетических повреждений в клетках, прошедших второй митоз, а увеличение суммарной площади ядер — с ускорением пролиферации клеток в культуре. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

1. Для решения задач генетико-токсикологического скрининга разработан простой и быстрый способ отбора соединений для дальнейшего углубленного изучения эффектов нестабильности генома, позволяющий в несколько раз сократить продолжительность рабочего времени на анализ по сравнению с цитогенетическим исследованием.

2. Создана минимальная система морфометрических индексов, которые могут быть использованы для скрининга эффектов нестабильности генома человека, индуцированных действием генотоксикантов, включая НМ.

3. Разработанный математический аппарат и созданная методика анализа делают метод пригодным для автоматизации.

4. Получен патент РФ № 2 467 329 «Способ экспресс-оценки степени потенциальной генотоксической активности веществ и факторов среды по наличию анеуплодии в лимфоцитах периферической крови человека, образовавшихся в результате культивирования в условиях цитокинетического блока», Патентообладатель: Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н.Сысина» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации. Приоритет изобретения: 03 марта 2011 г., Зарегистрировано в.

Гос.реестре (публикация) 20 ноября 2012 г. Срок действия — до 03 марта 2031 г.

5. Получена справка о внедрении результатов в научно практическую деятельность по изучению канцерогенной активности, подписанная заместителем председателя комисси по канцерогенным факторам при Роспотребнадзоре РФ профессором Пылевым Л.Н.

Личный вклад автора заключается в участии в работе на всех этапах ее проведения: выборе цели и постановке задач, планировании экспериментов и их проведении, разработке математического описания и методики морфометрического анализа площадей ядер в двуядерных клетках, проведении цитогенетического анализа в микроядерном тесте с использованием расширенного протокола и морфометрического анализа эффектов стандартного мутагена МННГ и микрочастиц латекса, а также НЧ магнетита в оболочке из силиката, микрои НЧ диоксида титана, НВ и УД гидроксида алюминия, разработке подходов к статистическому анализ и — по разработанной методике — статистической обработке комплекса морфометрических индексов и данных цитогенетического анализа эффектов нестабильности генома, обосновании выбора критериев и разработке алгоритма морфометрического анализа площадей ядер в двуядерных клетках. Часть исследований проведена совместно с сотрудниками лаборатории генетического мониторинга ФГБУ «НИИ ЭЧ и ГОС им. А.Н. Сысина» Минздрава России.

ПОЛОЖЕНИЯ ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Математический аппарат метода морфометрического анализа площадей ядер в двуядерных клетках, который базируется на близости формы ядра ФГА-стимулированного лимфоцита к эллипсоиду (8 < 9%) и наличии прямой слабостепенной зависимости между площадью и объемом ядра.

2. Стандартный мутаген МННГ, а также НВ и УД гидроксида алюминия, микрочастицы латекса, НЧ и микрочастицы диоксида титана и НЧ магнетита в оболочке из силиката индуцируют в лимфоцитах крови человека, культивируемых в условиях блока цитокинеза, повышение уровней нестабильности генома, причем различия в индукции генотоксических эффектов нанои микродисперсных материалов наблюдаются преимущественно в клетках, прошедших 2 и более митотических цикла. Некоторые различия в эффектах одних и тех же материалов на клетках разных доноров обусловлены, преимущественно, разницей в индивидуальных особенностях пролиферативной активности клеток каждого донора в культуре.

3. Для всех изученных соединений обнаружены повторяющиеся значимые корреляции: a. между частотами генетических повреждений в клетках, прошедших второй митоз, и отношением площадей ядер в двуядерных клеткахb. между показателями пролиферативной активности лимфоцитов в культуре и суммарной площадью ядер в двуядерных клетках.

4. Алгоритм морфометрического анализа в двуядерных клетках, основанный на оценке изменений средних значений соотношения (81/82) и суммы (81+82) площадей ядер, эффективен для скрининга эффектов нестабильности генома.

Работа выполнена в лаборатории генетического мониторинга ФГБУ НИИ ЭЧиГОС им А. Н. Сысина МЗ РФ в рамках следующих Государственных тем: «Исследование закономерностей регулируемой структурно-энергетической саморганизации фазоассоциированной воды для формирования питьевых вод с направленным биологическим действием», «Разработка и внедрение в практику профилактической токсикологии методов испытаний химических веществ по их влиянию на здоровье человека, гармонизированные с рекомендациями ОЭСР», «Эпидемиологическое обоснование модели оценки вклада факторов среды обитания в формирование экологически зависимых заболеваний и их причинной обусловленности».

Апробация диссертации проведена 06 июля 2012 г на совместном заседании межотдельческой комиссии по апробации докторских и кандидатских диссертаций ФГБУ «НИИ ЭЧ и ГОС им. А.Н. Сысина» Минздравсоцразвития России (протокол № 12 от 12.07.2012). Материалы диссертации доложены на: I Международном форуме по нанотехнологиям «Rusnanotech 08» (Москва, 3−5 декабря 2008) — V съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров, (Москва, 21−27 июня 2009) — VI Съезда Российского общества медицинских генетиков (Ростов-на-Дону, 14−18 мая 2010) — III Международном конкурсе научных работ молодых ученых в области нанотехнологий «Rusnanotech 2010» (Москва, 1−3 ноября 2010) — пленуме Научного совета по экологии человека и гигиене окружающей среды «Актуализированные проблемы здоровья человека и среды обитания и пути их решения» (14−15 декабря 2011) — IV Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии нанотехнологий и медицины» (Ростов-на-Дону, 22−25 сентября 2011), IV Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье. Молодые ученые за устойчивое развитие страны в глобальном мире» (Москва, 27−28 сентября 2012), а также Conference of International Society for Environmental Epidemiology (ISEE 2009), «Environmental, Food and Global Health» (Ирландия, Дублин, 25−29 августа 2009) и 42 Annual Meeting of European Environmental Mutagenic Society (EEMS) (Польша, Варшава, 16−21 сентября 2012).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ, из них 4 — в изданиях, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, описания результатов собственных исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов и списка литературы. Текст изложен на 113 страницах машинописи, включая приложения, иллюстрирован 56 таблицами и 34 рисунками. Указатель литературы содержит 106 источников.

5.2 Выводы.

1. Создан новый подход в биологической морфометрии, базирующийся на сравнительном анализе площадей ядер двуядерных клеток, образовавшихся в культуре крови человека в результате деления единого материнского ядра в условиях блока цитокинеза. Разработан математический аппарат и экспериментально-методическая база для морфометрического анализа ядер в двуядерных клетках. Показано, что форма изображений ядер в двуядерных клетках с точностью не менее 9% (р=0.90) может быть аппроксимирована эллипсом. Установлено, что площадь этого эллипсоида связана с его объемом соотношением У~8 3/2.

2. Разработан морфометрический метод количественного анализа степени симметрии распределения генетического материала между дочерними ядрами на препаратах цельной крови человека, подготовленных для анализа в микроядерном тесте с цитокинетическим блоком. Разработаны правила интерпретации морфометрических данных и обоснован минимальный комплекс морфометрических параметров, включающий соотношение и сумму площадей ядер в двуядерных клетках.

3. Обоснованы критерии и алгоритм использования морфометрического анализа ядер в двуядерных клетках с целью скрининга эффектов нестабильности генома для последующего углубленного изучения биологической активности исследуемых веществ. Критериями выбора таких веществ являются статистически значимые различия с контролем и дозозависимые изменения арифметических средних отношения и суммы площадей ядер в двуядерных клетках. Для надежного заключения требуется анализ эффектов 5−6 доз изучаемого фактора.

4. Установлено, что стандартный мутаген МННГ, а также нанои микрочастицы диоксида титана, нановолокна и ультрадисперсия гидроксида алюминия, частицы магнетита, покрытого силикатом, и микрочастицы латекса для фагоцитоза индуцируют в культивируемых лимфоцитах крови человека эффекты нестабильности генома. Различия генотоксических эффектов между нанои микроформой веществ проявляются, преимущественно, в клетках, прошедших в культуре второй митоз. Различия в эффектах нестабильности генома при действии нанои микроформ одних и тех же веществ на клетки разных доноров связаны с индивидуальными различиями в пролиферативной активности клеток в культуре.

5. Показано, что изменения уровней нестабильности генома в культуре лимфоцитов крови человека сопровождаются соответствующими изменениями суммы и отношения площадей ядер в двуядерных клетках: в зависимости от дозы сумма площадей ядер устойчиво и высоко достоверно коррелирует с пролиферативной и митотической активностью клеток, а изменение отношения площадей ядер — с частотами клеток с повреждениями, прошедших за время культивирования более одного митотического цикла.

Глава 5.

Заключение

и выводы 5.1 Заключение.

Обобщая результаты, следует заключить, что разработанные морфометрические индексы являются информативными, подходящими для оценки генотоксической активности НМ и НЧ и могут быть рекомендованы для их предварительного генетико-токсикологического скрининга. Изучение корреляционных взаимосвязей между цитогенетическими и морфометрическими индексами показывает, что существует принципиальная возможность прогнозирования эффекта анеуплоидии на основании данных о симметрии ядер двуядерных лимфоцитов. Кроме того, на основании данных об изменении размеров ядер может быть дан прогноз пролиферативной активности. Однако характер и знак корреляционных связей зависит как от состояния донора, так и от типа вещества, и данный феномен требует дополнительныхисследований. Потому дать однозначную интерпретацию морфометрическим индексам с точки зрения прогноза цитогенетических показателей на текущий момент не представляется возможным. Тем не менее, можно говорить о возможности качественного прогноза.

По результатам исследования разработан и апробирован экспериментальный метод, пригодный для оперативного выявления генотоксической активности веществ, в том числе — НМ и НЧ, в основе которого лежат количественные критерии. Метод не требует высокой квалификации исследователя и пригоден для автоматизации. Получен патент РФ № 2 467 329 «Способ экспресс-оценки степени потенциальной генотоксической активности веществ и факторов среды по наличию анеуплодии в лимфоцитах периферической крови человека, образовавшихся в результате культивирования в условиях цитокинетического блока», Патентообладатель: Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н.Сысина» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации. Приоритет изобретения:

03 марта 2011 г., Зарегистрировано в Гос. реестре (публикация) 20 ноября 2012 г. Срок действия — до 03 марта 2031 г.

Проведено параллельное изучение генотоксической активности НМ и НЧ (магнетит, покрытый силикатом (Fe304/Si02), диоксид титана, нановолокнаи ультрадисперсная форма гидроксида алюминия) разработанным методом и методом микроядерного теста с расширенным протоколом. В результате выявлено, что: 1) все изученные вещества проявляли генотоксическую активность, но степень и характер проявления были различны для разных веществ и доноров- 2) для всех веществ характерно проявление генотоксической активности на минимальных дозах воздействия- 3) результаты цитогенетического и морфометрического анализа качественно совпадают и между ними существуют сильные повторяющиеся статистически значимые корреляционные взаимосвязи.

Полученные результаты позволили создать следующий алгоритм метода морфометрического анализа площадей ядер в двуядерных клетках, согласованный с международными подходами в системах OECD и GLP:

1. Постановка культур, подготовка цитогенетических препаратов (1 контроль и 5 концентраций для каждого исследуемого вещества);

2. Фотографирование по 100 двуядерных лимфоцитов с отдельно лежащими ядрами без видимых повреждений для контроля и каждой концентрации вещества;

3. Измерение площадей ядер (Sli, S2i) каждого лимфоцита в ADOBE Photoshop (оконтуривание ядер и автоматический подсчет количества пикселей внутри контуров).

4. Расчет отношения (Sli/S2i) и суммы площадей большего (1) и меньшего (2) ядра ([SS]i = Sli+S2i) для каждого лимфоцита, формирование выборок для контроля и каждой из доз.

5. Расчет морфометрических индексов для полученных выборок (арифметическое среднее S1/S2, S1+S2).

6. Статистическое сравнение выборок Sli/S2i и [?S]i, полученных для контроля и каждой из исследуемых доз (метод Краскела-Уоллеса). Анализ зависимости симметрии и размеров ядер от дозы вещества. 7. При обнаружении дозовых зависимостей и/или статистически значимых различий с контролем изучаемое вещество следует направить на углубленное изучение нестабильности генома. Анализ данных, полученных в процессе работы, позволил нам построить сравнительную таблицу, характеризующую достоинства и недостатки примененных в ходе исследования методов (Таблица 56).

Показать весь текст

Список литературы

  1. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Токсиколого-гигиеническая оценка безопасности наноматериалов. Методические указания МУ 1.2.2520−09. Москва: б.н., 05 июнь 2009
  2. Luther Wolfgang Industrial applications of nanomaterial chances and risk. Technology analysis. — Dusseldorf: Future Technologies Division of VDI Technologiezentrum GmbH, August 2004.
  3. The Royal Society & The Royal Academy of Engineering Nanoscience and nanotechnologies: opportunities and uncertainties Report. Cardiff: Nanoscience and nanotechnologies, 2004.
  4. Tran C. L., Donaldson K., Stones V. et al. A scoping study to identify hazard data needs for addressing the risks presented by nanoparticles and nanotubes [Report]. Edinburgh: Institute of Occupational Medicine, 2005.
  5. Agence Internationale de l’Energie Atomique Biological dosimetry: chromosome aberration analysis for dose assessment Journal. / Technical report series. 1984. — p. 260.
  6. M. Т., Malarbet J. L., Guedeney G. et al. Use of unstable chromosome aberration for biological dosimetry after the first post irradiation mitosis [Journal] / Radiat. Res. 125. 1991. — pp. 141−151.
  7. Fenech M. and Morley A. A. Measurement of micronuclei in human lymphocytes Journal. 1985. — Vol. 148. — pp. 29−36.
  8. Pascoe S. A. and Stemp G. A modified method and staining technique for the in vitro micronucleus test in human lymphocytes using cytochalasin В Journal. / Mutation Research. 1990. — Vol. 234. — pp. 253−255.
  9. Singh N. P., McCoy M. Т., Tice R. R. и др. A simple technique for quantitation of low levels of DNA damage in individual cells [Журнал] / Experimental Cell Research. 1988 — 175. — стр. 184−191.
  10. McKelvey-Martin V. J., Green M. H., Schmezer P. и др. The single cell gel electrophoresis assay (comet assay): a European review [Журнал]. July 1993 — 1: T. 288. — стр. 47−63.
  11. D. W., Olive P. L. и O’Neill K. L. The comet assay: a comprehensive review Журнал. / Mutation Research. February 1995 — 1: T. 339. — стр. 37−59.
  12. Wolfe Pamela, Murphy James, McGinley John et al. Using Nuclear Morphometry to Discriminate the Tumorigenic Potential of Cells: A Comparison of Statistical Methods [Journal] / Cancer Epidemiology Biomarkers. June 2004. — 13: Vol. 6. — pp. 976−988.
  13. Zink D., Fischer A. H. and Nickerson J. A. Nuclear structure in cancer cells Journal. / Nature reviews. September 2004. — Vol. 4. — pp. 677−687.
  14. He Yin-Cheng, Peng Wei, Qiao Jian-Guo et al. Relationship between nuclear morphometry, DNA content and resectability of pancreatic cancer [Journal] / World Journal of Gastroenterology. 2003. — 9: Vol. 8. — pp. 1863−1865.
  15. Y. В., Vorsanova S. G., Iourov I. Y. и др. Unexplained autism is frequently associated with low-level mosaic aneuploidy [Журнал] / Journal of Medical Genetics. [б.м.]: British Medical Association, 2007 — 8: T. 44. — стр. 521−525.
  16. Fenech M. The in vitro micronuclei test technique Journal. / Mut. Res., vol. 455.-2000.-pp. 81−95.
  17. Korchev Yuri E., Gorelik Julia, Lab Max J. et al. Cell Volume Measurement Using Scanning Ion Conductance Microscopy [Article] / Biophysical Journal. January 2000. — Vol. 78. — pp. 451−457.
  18. Simeonov Radostin Nuclear morphometry in relation to tumor grade in canine spontaneous cutaneous squamous cell carcinomas Журнал. / Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences. 2009 — 33: T. 5. — стр. 439−442.
  19. Hussain S. M., Hess K. L., Gearhart J. M. et al. In vitro toxicity of nanoparticles in BRL ЗА rat liver cells [Journal] / Toxicology in vitro, 19(7), Oct. -2005.-pp. 975−983.
  20. Pisanic I. I., Thomas R., Blackwell Jennifer, D. et al. Nanotoxicity of iron oxide nanoparticle internalization in growing neurons [Journal] / Biomaterials 28. -2007.-pp. 2572−2581.
  21. Waters K.M., Masiello L.M., Zangar R.C. et al. Macrophage responses to silica nanoparticles are highly conserved across particle sizes [Journal] / Toxicol Sciences, 107(2), February. 2009. — pp. 553−569.
  22. Choi S.J., Oh J.M. and Choy J.H. Toxicological effects of inorganic nanoparticles on human lung cancer A549 cells Journal. / Journal of inorganic biochemistry, Mar- 103(3). 2009. — pp. 463−471.
  23. JI. В. Применение цитогенетических методов исследования хромосом в радиологии Журнал. / Молекулярная биология. июнь 2007 — Т. 9.
  24. Ames Bruce N., Lee Frank D. and Durston E. William An Improved Bacterial Test System for the Detection and Classification of Mutagens and Carcinogens Journal. / PNAS. 1973. — 3: Vol. 70. — pp. 782−786.
  25. Comet assay interest group Online. 2011. — http://cometassay.com.
  26. S. J., Singh N. P. и Natarajan A. T. Fluorescence in situ hybridization with comets Журнал. / Experimental cells research. 1997 — 232. — стр. 407−411.
  27. I. E., Hnida C., Cruger D. G. и др. Nuclei size in relation to nuclear status and aneuploidy rate for 13 chromosomes in donated four cells embryos [Журнал] / Assist Reprod Genet. March 2008 — (2−3): T. 25. — стр. 95 102.
  28. Adams Niall M. и Freemont Paul S. Advances in Nuclear Architecture Книга. [б.м.]: Springer Science+Business Media B.V., 2011.
  29. JI. С., Алексеенко О. И. и Туганова Т. Н. Цитологические и морфометрические особенности лимфоидных клеток вилочковой железы в норме и при лимфоидной тимоме Журнал. / Онкология. 2002 — 4: Т. 4. — стр. 252−255.
  30. Radwan Mamdouh М., Amer Kawther A., Mokhtar Nadia M. et al.
  31. Nuclear Morphometry in Ductal Breast Carcinoma with Correlation to Cell
  32. Proliferative Activity and Prognosis Journal. / Journal of the Egyptian National Cancer Institute. September 2003. — 3: Vol. 15. — pp. 169−182.
  33. Ozer E., Yorukoglu K., Sagol O. et al. Prognostic significance of nuclear morphometry in renal cell carcinoma [Journal] / BJU International. 2002. — 90. -pp. 22−25.
  34. Ф. И. Перспективы использования микроядрного теста на лимфоцитах крови человека, культивируемых в условиях цитокинетического блока Журнал. / Экологическая генетика. 2006 — 3: Т. IV. — стр. 7−19.
  35. Fenech М., Chang W.P. and Kirsch-Volders М. HUMN project: detailed description of the scoring criteria for the cytokinesis-block micronucleus assay using isolated human lymphocyte cultures Journal. / Mut. Res., vol. 534, № 1. -2003.-pp. 65−75.
  36. Gonzalez L., Sanderson B.J. S. and Kirsch-Volders M. Adaptations of the in vitro MN assay for the genotoxicity assessment of nanomaterials Journal. / Mutagenesis. -2011. 1: Vol. 26. — pp. 185−191.
  37. Ponti J., Sabbioni E., Munaro B. et al. Genotoxicity and morphological transformation induced by cobalt nanoparticles and cobalt chloride: an in vitro study in Balb/3T3 mouse fibroblasts. [Journal] / Mutagenesis. 2009. — 24. — pp. 439−445.
  38. Colognato R., Bonelli A., Ponti J. et al. Comparative genotoxicity of cobalt nanoparticles and ions on human peripheral leukocytes in vitro. [Journal] / Mutagenesis. 2008. — 23. — pp. 377−382.
  39. Papageorgiou I., Brown C., Schins R. et al. The effect of nano- and micron-sized particles of cobalt-chromium alloy on human fibroblasts in vitro. [Journal] / Biomaterials. 2007. — 28. — pp. 2946−2958.
  40. Doak S. H., Griffiths S. M., Manshian B. et al. Confounding experimental considerations in nanogenotoxicology. [Journal] / Mutagenesis. 2009. — 24. — pp. 285−293.
  41. Wang J. J., Sanderson B. J. and Wang H. Cytotoxicity and genotoxicity of ultrafine crystalline Si02 particulate in cultured human lymphoblastoid cells Journal. / Environmental and molecular mutagenesis. 2007. — 48. — pp. 151−157.
  42. AshaRani P. V., Low Kah Mun G., Handle M. P. et al. Cytotoxicity and genotoxicity of silver nanoparticles in human cells [Journal] / ACS Nano. 2009. -3.-pp. 279−290.
  43. Wang J. J., Sanderson B. J. and Wang H. Cyto- and genotoxicity of ultrafine Ti02 particles in cultured human lymphoblastoid cells Journal. / Mutation Research. 2007. — 628. — pp. 99−106.
  44. Huang S., Chueh P. J., Lin Y. W. et al. Disturbed mitotic progression and genome segregation are involved in cell transformation mediated by nano-Ti02 long-term exposure. [Journal] / Toxicology and applied pharmacology. 2009. -241.-pp. 182−194.
  45. Gurr J. R., Wang A. S., Chen C. H. et al. Ultrafine titanium dioxide particles in the absence of photoactivation can induce oxidative damage to human bronchial epithelial cells. [Journal] / Toxicology. 2005. — 213. — pp. 66−73.
  46. Vevers W. F. and Jha A. N. Genotoxic and cytotoxic potential of titanium dioxide (ТЮ2) nanoparticles on fish cells in vitro. Journal. / Ecotoxicology. -2008.- 17.-pp. 410−420.
  47. S. J., Ют В. M., Lee Y. J. и др. Titanium dioxide nanoparticles trigger p53-mediated damage response in peripheral blood lymphocytes. [Журнал] / Environmental and molecular mutagenesis. 2008 — 49. — стр. 399−405.
  48. Shi Y., Zhang J. H., Jiang M. et al. Synergistic genotoxicity caused by low concentration of titanium dioxide nanoparticles and p, p'-DDT in human hepatocytes. [Journal] / Environmental and molecular mutagenesis. 2010. — 51. -pp. 192−204.
  49. Г. И. и Левинсон JI. Б. Микроскопическая техника Книга. / ред. Роскин Г. И. Москва: Советская наука, 1957. — третье издание.
  50. Whitehead R. A., Chagnon S., Groman Е. V. et al. [Patent]: 4 554 088. -U.S., 1985.
  51. О. Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. Книга. Москва: МедиаСфера, 2002.
  52. А. И. Прикладная статистика Книга. Москва: «Экзамен», 2004.
  53. Aillon К. L., Xie Y., El-Gendy N. et al. Effects of nanomaterial physicochemical properties on in vivo toxicity [Journal] / Advanced Drug Delivery Reviews. 2009. — 6: Vol. 61. — pp. 457−466.
  54. Buzea C., Pacheco 1.1. и Robbie K. Nanomaterials and nanoparticles: sources and toxicity Журнал. / Biointerphases. 2007 — 4: T. 2.
  55. Howard V. Statement of Evidence: Particulate Emissions and Health (An Bord Plenala, on Proposed Ringaskiddy Waste-to-Energy Facility). Отчет. 2009, Retrieved 2011−04−26.
  56. De Stefano D., Carnuccio R. и Maiuri M.C. Nanomaterials Toxicity and Cell Death Modalities Журнал. / Journal of Drug Delivery. 2012 — T. 2012.
  57. Li N., Sioutas C., Cho А. и др. Ultrafine particulate pollutants induce oxidative stress and mitochondrial damage [Журнал] / Environ Health Perspect. -2003 -T. 111. стр. 455−460.
  58. Cui Y., Gong X., Duan Y. и др. Hepatocyte apoptosis and its molecular mechanisms in mice caused by titanium dioxide nanoparticles [Журнал] / J Hazard Mater. 15 Nov 2010 — 1−3: T. 183. — стр. 874−880.
  59. Mahmoudi M., Saeedi-Eslami S. N., Shokrgozar M. A. et al. Cell «vision»: complementary factor of protein corona in nanotoxicology [Journal] / Nanoscale. -Sep 7, 2012. 17: Vol. 4. — pp. 5461−5468.
  60. Hoet P. H., Bruske-Hohlfeld I. and Salata О. V. Nanoparticles-known and unknown health risks Journal. / J Nanobiotechnol. 2004. — 2: Vol. 12.
  61. Г. H., Рахманин Ю. А. и Егорова Н. А. Экстраполяция токсикологических данных с животных на человека Книга. Москва: Медицина, 2009. — стр. 208.
  62. Жолдакова 3. И. и Харчевникова Н. В. Механизмы процессов биоактивации чужеродных химических веществ под действием ферментных систем организма Журнал. / Вестник Российской академии медицинских наук. 2002 — 8. — стр. 44−49.
  63. Жолдакова 3. И. и Харчевникова Н. В. Прогноз опасности веществ в рамках зависимостей структура-активность с учетом биотрансформации Журнал. / Гигиена и санитария. 2000 — 1. — стр. 26−29.
  64. Abbott Chalew Т. Е. и Schwab К. J. Toxicity of commercially available engineered nanoparticles to Caco-2 and SW480 human intestinal epithelial cells Журнал. / Cell Biol Toxicol. 2013
  65. Liu С. Y., Tsai Т. H., Huang Y. С. et al. Differential immunomodulating effects of pegylated liposomal doxorubicin nanoparticles on human macrophages [Journal] / JNanosci Nanotechnol. 2012. — 10: Vol. 12. — pp. 7739−7746.
  66. Kirsch-Volders M., Decordier I., Elhajouji А. и др. In vitro genotoxicity testing using the micronucleus assay in cell lines, human lymphocytes and 3D human skin models [Журнал] / Mutagenesis. 2011 — 1: T. 26. — стр. 177−184.
  67. МУ 1.2.2743−10. «Порядок отбора проб для выявления и идентификации наноматериалов в водных объектах» Методические указания. Утверждены руководителем Роспотребнадзора, Главным государственным санитарным врачом РФ Г. Г.ОНИЩЕНКО. 17 октября 2011
  68. МР 1.2.0018−11. 1.2. «Порядок отбора проб и методы определения содержания наночастиц в составе продукции бытовой химии, дезинфекционных и парфюмерно-косметических средств». Методические рекомендации. Утверждены Г. Г. Онищенко. 2 марта 2011
  69. MP 1.2. 2640−10 «Методы отбора проб, выявления и определения содержания наночастиц и наноматериалов в составе сельскохозяйственной, пищевой продукции и упаковочных материалов». Методические рекомендации. Утверждены Г. Г. Онищенко. 2 марта 2011
  70. МР 1.2.0016−10 «Методика классифицирования нанотехнологий и продукции наноиндустрии по степени их потенциальной опасности» Методические рекомендации. Утверждены Г. Г. Онищенко и введены в действие с 27.12.2010.
  71. МУ 1.2. 2635−10. «Медико-биологическая оценка безопасности наноматериалов» Методические указания, Москва 2010 Утверждены Г. Г. Онищенко 2 марта 2011 года.
  72. МУ 1.2.2520−09 «Токсиколого-гигиеническая оценка безопасности наноматериалов». Методические указания. Утверждены Г. Г. Онищенко 5 июня2009 года.
  73. МУ 1.2.2634−10. 1.2. «Микробиологическая и молекулярно-генетическая оценка воздействия наноматериалов на представителей микробиоценоза». Методические указания. Утверждены Г. Г. Онищенко 24 мая 2010 года.
  74. МР 1.2.2566−09 «Оценка безопасности наноматериалов in vitro и в модельных системах in vivo», Утверждены Г. Г. Онищенко 29 декабря 2009 года.
  75. МР 1.2.0042−11 «Контроль наноматериалов, применяемых в сельском хозяйстве методические рекомендации Утверждены Г. Г. Онищенко 17 октября 2011 года.
  76. МР. 1.2.2522−09. «Выявление наноматериалов, представляющих потенциальную опасность для здоровья человека». Методические рекомендации. Утверждены Г. Г. Онищенко 2 июля 2009 года.
  77. МУ 1.2.2637−10. «Порядок и методы проведения контроля миграции наночастиц из упаковочных материалов». Утверждены Г. Г. Онищенко 24 мая2010 года.
  78. МР 1.2.0054−11. «Порядок и методы оценки воздействия искусственных наночастиц и наноматериалов на токсическое действие химических веществ» Методические рекомендации, Москва 2011. Утверждены Г. Г. Онищенко 29 декабря 2012 года.
  79. . А. О нанотехнологии и связанных с нею токсикологических проблемах Журнал. / Токсикологический вестник. -2007 6. — стр. 2−3.
  80. В. H. Морфологические методы верификации и количественной оценки апоптоза Журнал. / Бюллетень сибирской медицины. 2004 — 1.
  81. В. А., Крамаренко И. И., Смирнова Т. Д. и др. Сравнение гено-и цитотоксического эффектов метилнитрозомочевины на линиях клеток, профицитных и дефицитных по коррекционной репарации ДНК (MMR) [Журнал] / Цитология. 2006 — 1: Т. 48.
  82. Korkina L. G., Durnev A. D., Suslova Т. B. et al. Oxygen Radical -Mediated Mutagenic Effect of Asbestos on Human Lymphocytes: Suppression by Oxygen Radical Scavengers [Journal] / Mutation Research. 1992. — 265. — pp. 245 253.
  83. X. X. и Давыдова Ю. О. Международные подходы к оценке токсичности и опасности наночастиц и наноматериалов Журнал. / Токсилогический вестник. 2011 — http://www^ohv.ru/security/20 120 210/.
  84. Ю. А. и Сычева JI. П. Полиорганный микроядерный тест в эколого-гигиенических исследованиях Книга. Москва: Гениус, 2007.
  85. Moshkov Nikolay E Micronuclei test and morphometry of cellular nuclei upon relative evaluation of cytogenetic activity of aluminum hydroxide nanofibers Journal. / EEMS conference. 2010.
  86. Ф. И., Юрченко В. В. и Гуськов А. С. Показатели пролиферативной активности и их связь с генетическими повреждениями лимфоцитов крови при культивировании в условиях цитокинетического блока Статья. / Вестник РАМН. 2006 — 4. — стр. 41−46.
  87. А. А. и Яковлева Г. В. Структурированная вода. Нелинейные эффекты. Книга. Москва: ЛКИ, 2008.
  88. Дж. Введение в теорию ошибок Книга. Москва: «Мир», 1985.
  89. ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗАЩИТЫ ПРАВ ПОТРЕБИТЕЛЕЙ И БЛАГОПОЛУЧИЯ ЧЕЛОВЕКА
  90. КОМИССИЯ ПО КАНЦЕРОГЕННЫМ ФАКТОРАМ115 478, Москва, Каширское шоссе, 24 Тел.(499)323−50−10, 323−59−55, 324−16−64, 324−22−54. Факс (499) 323−50−10, 323−59−556 «M
  91. Комиссия считает целесообразным рекомендовать автору продолжить исследования в направлении автоматизации метода.1. Заместитель председателя
  92. Комиссии, д.м.н., профессор LIA Л.Н.Пылев1. Г&- if* «} <31. Г I- r' 11. J:.l .rlf>%""""Д1. T’iL vV, -.""¿--Г W"-*-•у} & 'i «4*11. Я p /s I5 jg gi’si? ч ! i ! ! i> 1 1 < I? ? '2 467 329г i СПОСОБ ЖСПРЕСС-ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ
  93. J ПОТЕНЦИАЛЬНОЙ ГЕНОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИi.' ВЕЩЕСТВ И ФАКТОРОВ СРЕДЫ ПО НАЛИЧИЮ
  94. S-I АНЕУПЛОИДИИ В ЛИМФОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ
  95. КРОВИ ЧЕЛОВЕКА, ОБРАЗОВАВШИХСЯ В РЕЗУЛЬТАТЕл' КУЛЬТИВИРОНАНИЯВ УСЛОВИЯХ ЦИТОКИНЕТИЧЕСКОГО! БЛОКАу i
  96. Заявка X» 2 011 108 037 Приоритет ичобретсния 03 марта 20 111. Зариш грирована в Fou. upt гш шито растрс «ioopntmm Российской Ф (ириши 20ноябри2012г. Срак кйс гнпя патента исгс к к т 03 марта 2031 г.
  97. Руководитель Ф< d<¡-шьпои < и/ж бы по иитепгктца: ыти cofit wet иношиh II Симонов1. РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯО1. Ф см соь. ф
Заполнить форму текущей работой

Пора сдавать?