Помощь в учёбе, очень быстро...
Работаем вместе до победы

Клеточная интернализация экспрессионных генноинженерных конструкций при помощи лактоферрина

Диссертация: Клеточная интернализация экспрессионных генноинженерных конструкций при помощи лактоферрина
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Успехи, достигнутые в конце 20 века в области биологических наук, в частности в области молекулярной биологии и генетики, позволили по-новому подойти к решению многих медицинских проблем. В последнее время все более отчетливо осознается перспективность нового магистрального направления — разработки способов лечения различных заболеваний при помощи направленного введения генетического материала… Читать ещё >

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
  • ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
  • Глава I. Генная терапия — универсальный способ лечения различных заболеваний
  • Глава II. Рецепторные пути переноса генетического материала
  • Глава III. Химические методы для синтеза коньюгатов на основе белков-лигандов и белоксвязывающих соединений
  • Глава IV. Невирусные способы доставки генетического материала
  • Глава V. Лактоферрин
  • ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТ
  • Глава VI. Материалы и методы исследования
    • 6. 1. Трансформация Е. col
    • 6. 2. Выделение плазмидной ДНК
    • 6. 3. Получение ЛФ
      • 6. 3. 1. Выделение и очистка ЛФ
      • 6. 3. 2. Насышение ЛФ ионами железа
    • 6. 4. Синтез производных ЛФ
      • 6. 4. 1. Получение иодуксусного ангидрида
      • 6. 4. 2. Синтез К
      • 6. 4. 3. Синтез К
    • 6. 5. Электрофорез в неденатурирующих условиях
    • 6. 6. Электрофорез в денатурирующих условиях
    • 6. 7. Получение и характеристика моноспецифических антител против ЛФ
    • 6. 8. Ракетный иммунофорез
    • 6. 9. Иммуноблоттинг
    • 6. 10. Получение препаратов ЛФ, меченных
    • 6. 11. Измерение радиоактивности органов крыс после введения 1251-[К-1]
    • 6. 12. Ретардация комплексов в агарозном геле
    • 6. 13. Определение констант диссоциации комплекса ЛФ и плазмидной ДНК
    • 6. 14. Определение влияния солей на комплексообразование ЛФ и его производных с плазмидной ДНК
    • 6. 15. Лазерная корреляционная спектроскопия
    • 6. 16. Условия трансфекции клеточных культур
      • 6. 16. 1. Приготовление трансформирующих комплексов
      • 6. 16. 2. Трансформация клеток НерС2 плазмидой рСМУЬас2 в составе комплексов с ЛФ
      • 6. 16. 3. Трансформация клеток НерС2 плазмидой рСМУСа1 в составе комплексов с ЛФ
      • 6. 16. 4. Трансформация миобластов С2С12 плазмидой рСМУЬис в составе комплексов с ЛФ
    • 6. 17. Условия трансфекции животных
      • 6. 17. 1. Условия внутривенной трансфекции крыс комплексом рСМУароА1/К
      • 6. 17. 2. Условия внутривенной трансфекции мышей комплексом рЕОЕРС-3/К
      • 6. 17. 4. Условия внутримышечной трансфекции мышей комплексами плазмидная ДНК/ЛФ
    • 6. 18. Определение накопления продуктов экспрессии после трансфекции животных
      • 6. 18. 1. ПЦР-анализ после внутривенной трансфекции крыс комплексом рСМУароА1/К
      • 6. 18. 2. Определение накопления продукта экспрессии в гомогенатах органов после внутривенной трансфекции мышей комплексами рЕОРРС-3/К
      • 6. 18. 3. Определение накопления продукта экспрессии в гомогенатах органов после внутримышечной трансфекции мышей комплексами рЕОРР-СЗ/ЛФ и рСМУЬасг/ЛФ
      • 6. 18. 4. Определение накопления (3-галактозидазы в целых мышцах после внутримышечной трансфекции мышей комплексами рСМУЬасг/ЛФ и рСМУЬас2/К
      • 6. 18. 5. Иммуноцитохимическое определение накопления дистрофина человека после внутримышечной трансфекции mdx-мышей
  • РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
  • Глава VII. Характеристика исходных препаратов
    • 7. 1. Характеристика ЛФ
    • 7. 2. Синтез производных ЛФ
    • 7. 3. Характеристика производных ЛФ
    • 7. 4. Исследование органного распределния конъюгата К
  • Глава VIII. Характеристика взаимодействия ЛФ и его производных с плазмидными ДНК
    • 8. 1. Электрофорез в агарозе комплексов плазмид с ЛФ и его производными
    • 8. 2. Анализ нуклеотидных последовательностей плазмидных ДНК
    • 8. 3. Определение констант диссоциации комплексов плазмид с немодифицированным ЛФ
    • 8. 4. Определение влияния солей на комплексообразование ЛФ с плазмидными ДНК
    • 8. 5. Определение гидродинамических размеров комплексов плазмид с ЛФ
  • Глава IX. Доставка маркерных генов в культивируемые клетки млекопитающих
    • 9. 1. Трансформация клеточных культур комплексами плазмида/ЛФ
    • 9. 2. Трансформация клеток HepG2 плазмидой pCMVCat в комплексе с К-1 или К
    • 9. 3. Трансформация клеток HepG2 плазмидой pCMVLacZ в комплексе с К
    • 9. 4. Трансформация миобластов С2С12 плазмидой pCMVLuc в комплексе с К
  • Глава X. Трансфекция лабораторных животных содержащими ЛФ комплексами
    • 10. 1. Доставка маркерных генов при помощи внутривенного введения в составе комплексов с К
      • 10. 1. 1. Доставка pCMVApo-Al при помощи внутривенного введения в составе комплексов с К
      • 10. 1. 2. Доставка pEGFPC-3, pCMVLacZ при помощи внутривенного введения в составе комплексов с К
    • 10. 2. Доставка репортерных генов в составе комплексов с ЛФ после внутримышечного введения
      • 10. 2. 1. Доставка pCMVLacZ, комплексированной с ЛФ, при внутримышечном введении
      • 10. 2. 2. Доставка рСМУЬас2 и рЕОБРС-З в составе комплексов с ЛФ после внутримышечного введения
      • 10. 2. 3. Доставка рБМВ-1 в миофибриллы мутантных по дистрофину мышей

Клеточная интернализация экспрессионных генноинженерных конструкций при помощи лактоферрина (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность проблемы.

Успехи, достигнутые в конце 20 века в области биологических наук, в частности в области молекулярной биологии и генетики, позволили по-новому подойти к решению многих медицинских проблем. В последнее время все более отчетливо осознается перспективность нового магистрального направления — разработки способов лечения различных заболеваний при помощи направленного введения генетического материала. Это направление получило название — генная терапия. Суть направления заключается в трансформации клеток больного определенным экспрессируемым геном или его фрагментом, продукт экспрессии которого обеспечивает лечебный эффект. Главной проблемой генной терапии является достижение эффективной экспрессии целевых генов в клетках-мишенях. Её основными задачами являются разработка способов тканеспецифичной доставки целевых генов и путей стабилизации и регулирования уровня экспрессии привнесенной последовательности ДНК. По мере расширения исследований в данном направлении стало ясно, что лечение практически любого заболевания может быть осуществлено методами генной терапии. Помимо вирусных или липосомных способов доставки генов, которые в большинстве случаев имеют целый ряд недостатков, генетический материал может быть введен в клетки-мишени при помощи механизма рецептор-опосредованного эндоцитоза (РЭ). Под этим подразумевается взаимодействие между различными лигандами, в первую очередь белковой природы, и интернализующими их рецепторами на клеточной поверхности с последующим проникновением лиганда в цитоплазму. На сегодняшний день, для придания генноинженерным конструкциям тканеспецифичности, используют немногим более 10 белковых или других высокомолекулярных лигандов. К сожалению, предлагаемыми способами по разным причинам не удается достичь достаточно высокого уровня трансформации клеток и экспрессии вводимых генов. Поэтому поиск новых пар лиганд-рецептор перспективен как для выявления более эффективных проводников генетических конструкций, так и для расширения списка органов, которые могут быть целенаправленно подвержены трансформации. Естественно, что поле для исследований в данной области практически безгранично, а любой вклад в развитие идей генной терапии имеет весомое теоретическое и практическое значение.

В данной работе впервые предложено в качестве лиганда использовать лактоферрин — ЛФ. Это негемовый железосодержащий гликопротеин семейства трансферринов. ЛФ синтезируется в эпителиальных секреторных клетках и в нейтрофилах. В норме его содержание в плазме составляет 0,6−4,5×10~9 М. ЛФ в большом количестве содержится в молозиве (0,67 мг%) и грудном молоке (0,26 мг%). Каждая молекула ЛФ очень прочно (Кс1 ~ лл <5 >

10' М) связывает 2 иона Бе. Из свойств ЛФ следует отметить устойчивость фрагмента, связывающегося с собственными рецепторами ЛФ, к протеолитической деградации трипсиноподобными ферментами, устойчивость к воздействию лизосомальных ферментов, наличие сигнала ядерной транслокации и способность связываться с определенными последовательностями ДНК. При этом аффинность ЛФ (К<1 = 3,8×10″ 8 М) к этим последовательностям превосходит аффинность гистонов (Кс1 = 2,5×10″ 7 М) к ДНК. Вместе с этим, для человека ЛФ из женского молока не является иммуногеном, он быстро удаляется из кровотока и белки плазмы крови не нарушают его связывания с ДНК.

Таким образом, резонно предположить, что ДНК-комплексы с ЛФ или его производными могут служить эффективными посредниками для переноса в клетки-мишени чужеродного генетического материала.

Цели исследования.

В рамках большого проекта развития геннотерапевтических подходов к лечению моногенных, а также различных мультифакториальных заболеваний цель данной работы заключалась в оптимизации способов доставки генетического материала в клетки млекопитающих.

Задачи исследования.

1. Выбрать новые и перспективные для последующего всестороннего исследования пары белок-лиганд — интернализующий клеточный рецептор.

2. Синтезировать на основе этих белков-лигандов и ДНК-конденсирующих агентов конъюгаты, способные связывать и доставлять маркерные гены в клетки-мишени.

3. Определить физико-химические характеристики получаемых ДНК — белковых комплексов.

4. Изучить влияние различных факторов на характер взаимодействия белков и их конъюгатов с ДНК.

5. Исследовать возможности использования белков-лигандов и их конъюгатов для доставки маркерных генов в клетки млекопитающих.

6. Проанализировать органную специфичность доставки маркерных генов в экспериментах на лабораторных животных.

7. Проанализировать динамику накопления продукта экспрессии маркерных генов в зависимости от способа доставки.

Научно-практическая значимость результатов.

Впервые в мире удалось показать, что железосодержащий белок молока — ЛФ способен в немодифицированном состоянии или в виде конъюгатов с ДНК-связывающими соединениями доставлять экспрессируемые гены в составе плазмид в различные клетки, в частности, в мышечные волокна. Найдено, что доставляемые при помощи ЛФ гены экспрессируются в трансформированных клетках. Трансформации подвергаются как клеточные культуры, так и клетки в составе организма. Показано, что комплексы ЛФ — ДНК достаточно эффективно внедряются в мышечные волокна, направляют синтез дистрофина человека у мутантных по дистрофину мышей. Предложены новые способы синтеза белковых конъюгатов, которые исключают гомополимеризацию белков и ДНК-связываюгцих соединений. Охарактеризованы физико-химические параметры взаимодействия ЛФ с плазмидными ДНК, в частности, измерены константы диссоциации и установлены размеры образующихся комплексов. Апробация нового способа трансгеноза на линейных mdx-мышах позволяет увеличить список методов лечения тяжелого наследственного моногенного заболевания — миодистрофии Дюшенна.

Апробация работы.

Результаты исследования доложены на: Втором Съезде Биохимического Общества Российской Академии Наук, Москва, 19−23 мая, 1997 г.- на 1-ой медико-биологической конференции молодых ученых Санкт-Петербурга, Санкт-Петербург, 17−19 ноября 1997 г.- Международной конференции по медицине для молодых ученых, Люблин, Польша, 24−26 апреля, 1998 г.- конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», посвященной 240-летию ММА им. И. М. Сеченова, Москва, 1998 г.- Международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация», Пущино, 21−25 сентября, 1998 г.- 9-ой итоговой конференции «Геном человека — 99», Черноголовка, 2−5 февраля, 1999 г.- Международном Конгрессе Геном Человека, Брисбон, Австралия, 27−30 марта, 1999 г.- 10-ой Европейской конференции молодых ученых по биологии и медицине, Берлин (Charite), Германия, 20−24 октября, 1999 г.- 2-ом Международном симпозиуме по трансплантации и генной терапии,.

Идар-Оберштайн, Германия, 21−23 октябрь, 1999 г.- 7-ом заседании Европейского общества генной терапии (аббревиатура ЕУОТ), Мюнхен, Германия, 26−28 ноября, 1999 г.- конференции «Современные медицинские технологии», Новосибирск, 30 ноября, 1999 г.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Предложен способ химического синтеза межмолекулярных конъюгатов белков и ДНК-связывающих соединений для комплексирования с плазмидами.

2. Выявлены особенности взаимодействия различных плазмид, содержащих маркерные экспрессируемые гены, с очищенным ЛФ человека и с конъюгатами этого белка.

3. Впервые доказана возможность использования ЛФ человека и конъюгатов данного белка для переноса репортерных или целевых генов в клеточные культуры и в ткани лабораторных животных.

4. Показано, что при внутримышечном введении мутантным по дистрофину мышам (модель миодистрофии Дюшенна) комплексов ЛФ и конъюгатов ЛФ с плазмидой, содержащей ген дистрофина человека, в мембранах мышечных волокон накапливается дистрофии человека.

Структура диссертации.

Диссертация изложена на 151 страницах и содержит: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты и обсуждение исследований, заключение и выводы. Работа иллюстрирована 17 рисунками, 6 диаграммами и 7 таблицами.

Список литературы

содержит 186 названий работ на русском и английском языках.

выводы.

1. Разработан способ химического синтеза конъюгатов, включающих белки потенциальные лиганды клеточных рецепторов и ДНК-связывающие соединения.

2. Установлены особенности распределения конъюгатов ЛФ в органах крысы после внутривенного введения.

3. Определены физико-химические параметры взаимодействия различных плазмид, содержащих маркерные гены, с ЛФ и с конъюгатами ЛФ.

4. Определено влияние солей Са2+, ЭДТА на взаимодействие ЛФ и его конъюгатов с плазмидами.

5. Впервые показано, что после внутривенного или внутримышечного введения лабораторным животным комплексов плазмидных ДНК с ЛФ и с конъюгатами ЛФ имеет место экспрессия маркерных генов в определенных тканях.

6. Найдено, что внутримышечное введение мышам с моделью миодистрофии Дюшенна комплексов ЛФ или конъюгатов этого белка с плазмидой, содержащей ген дистрофина человека, приводит к накоплению в мышечных волокнах мышей дистрофина.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Данная работа посвящена разработке нового способа комплексирования и транспорта генетического материала в клетки млекопитающих на уровне клеточных культур и целого организма. Этот способ заключается в использовании железосодержащего белка молокаЛФ в чистом виде, а также в форме конъюгатов с ДНК-связывающими агентами для транспортировки генетического материала в различные клетки животных. Результаты проведенных исследований дают основание рассматривать ЛФ как новый весьма перспективный носитель для доставки чужеродных генов ш vivo в органы млекопитающих, особенно в их мышцы. Особенно пристального внимания и всестороннего изучения заслуживает применение ЛФ-лиганда для доставки различных вариантов экспрессирующихся конструкций кДНК гена дистрофина и разработка на основе этого носителя подходов к генотерапии смертельного наследственного заболеваниямиодистрофии Дюшенна. Полученные и апробированные в работе молекулярные конъюгаты на основе ЛФ оптимизируют пути доставки генов при использовании внутривенного введения, за счет более сильного взаимодействия с ДНК, а так же придавая комплексам большую резистентность к протеолитическому или нуклеазному воздействию. Отсутствие высокой тканеспецифичности доставки генетического материала объясняется отсутствием синхронизированности работы используемых компонентов ДНК-комплексов и их высокой гетерогенностью. В дальнейшем требуется получение однотипных (по содержанию ЛФ и конденсирующего агента) конъюгатов либо подбором способа очистки препарата, либо путем оптимизации условий химического синтеза.

Факт зависимости эффективности трансформации клеток-мишеней от физико-химических параметров ДНК-комплексов на сегодняшний день не подлежит сомнениям. Многообразие таких параметров и отсутствие информации о законах по увязыванию возможных компонентов ДНК-комплексов друг с другом для достижения максимального.

133 терапевтического эффекта открывают широкое поле для исследований. Несомненно, что любой вклад в изучение таких зависимостей или прямая физико-химическая характеристика ДНК-комплексов имеет большое значение. Кроме того, результаты исследований по изучению влияния различных солей на связывание ЛФ с плазмидами или по изучению способности ЛФ декомпактизовать плазмидные ДНК могут пролить свет на биологические свойства ЛФ, которые до сих пор в полном объеме неясны.

Результаты исследований показали необходимость дальнейшего изучения эффективности трансгеноза предлагаемых транспортных систем с использованием ЛФ. Возможно, исследования будут включать оптимизацию количеств пришиваемого лиганда (в случае работы с конъюгатами), расчет не только гидродинамических радиусов, но и формы получаемых ДНК-комплексов, изучение влияния этих характеристик на тканеспецифичность доставки чужеродного генетического материала в клетки-мишени и многое другое.

Показать весь текст

Список литературы

  1. А.Н., Киселев A.B., Иващенко Т. Э. и др. Особенности трансфекции и экспрессии кДНК гена дистрофина человека доставленного в мышцы мышей mdx с помощью синтетических микросфер MF-2 // Генетика, 1999, т. 35, № 1, стр. 22−27.
  2. А.Н., Киселев A.B., Иващенко Т. Э. и др. Особенности трансфекции и экспрессии кДНК гена дистрофина человека доставленного в мышцы мышей mdx с помощью синтетических микросфер MF-2 // Генетика, 1998, т. 34, № 12, стр. 1−6.
  3. B.C., Тарасенко О. В., Баранов А. Н. и др. Экспрессия гена дистрофина человека в мышечных волокнах мышей mdx после трансфекции с помощью липосом и синтетических олигопептидов // Генетика, 1998, т. 34, № 7, стр. 876−882.
  4. К. Высокоэффективный перенос генов в клетки млекопитающих в книге «Клонирование ДНК». Ред. Д. Гловер., М.: Мир, 1998, стр. 403−463.
  5. А. Практическая химия белка, М.: Мир, 1989, 621 стр.
  6. A.B., Тарасенко О. В., Колесников В. М. и др. Экспрессия гена дистрофина человека в скелетных мышцах мышей mdx после баллистической трансфекции // Генетика, 1998, т. 34, № 6, стр. 730−736.
  7. А.Д., Левчук Ю. Н., Ломакин A.B., Носкин В. А. Лазерная корреляционная спектроскопия в биологии. Киев.: Наук, думка, 1987, 256 стр.
  8. Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. Пер. с англ. М.: Мир, 1984, 480 стр.
  9. Г. Диск-электрофорез. Теория и практика электрофореза в полиакриламидном геле. М.: Мир, 1971.
  10. Д. Биохимия. Пер. с англ. под ред. Браунштейна А. Е. М.: Мир., 1980, том 2, стр. 270.
  11. Платэ Н. А, Васильев А. Е. Физиологически активные полимеры. М.: Химия, 1986, 296 стр.
  12. Г. И., Левинсон Л. Б. Микроскопическая техника. М.: Советская наука, 1957,137 стр.
  13. К.К., Бикташев А. Г., Дорофеюк А. В., Кузнецова И. М. Комплекс аппаратных и програмных средств для измерения спектральных, поляризационных и кинетических характеристик флуоресценции в растворе // Цитология, 1998, 40, стр. 806−817.
  14. Н., Ингильд A (Harboe N.M.G., Ingild А.). Иммунизация, выделение иммуноглобулинов, определение титра антител, руководство по количественному иммуноэлектрофорезу, VI, Получение антисывороток. Ред. Аксельсен Н., Мир. 1977, стр 200−205.
  15. Alton EWFW., Middletton P.G., Caplen N.G., et al. Noninvasive liposome-mediated gene delivery can correct the ion transport defect in cystic fibrosis mutant mice // Nat. Genetic, 1993, 5, p. 135−142.
  16. Amara J.F., Clackson Т., Rivera V.M., et al. A versatile synthetic dimerizer for the regulation of protein- protein interaction // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1997, v. 94, p. 10 618−10 623.
  17. Anderson R.G.W., Vasile R.J., Mello M.S., et al. Immunocytochemical visualization of coated pits and vesicles in human fibroblasts: relation to low density lipoprotein receptor distribution // Cell, 1978, 15, p. 919−933.
  18. Anderson B.F., Baker H.M., Dodson E.J., et al. Structure of human lactoferrin at 3,2 A resolution // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987, 84, p. 1769−1763.
  19. Ascadi G., Dickson G., Love D., et al. Cultured human myoblasts and myotubes show marcedly different transcducibility by replication-defective adenovirus recombinant // Gene Therapy, 1994 a, l, p. 338−340.
  20. Ascadi G., Walsh F.S., Wolff J.A., et al. A differential efficiency of adenovirus-mediated in vivo gene transfer into sceletal muscle cells at different maturity // Hum. Mol. Gen., 1994 6, 3, p. 579−584.
  21. Azuma N., Mori H., Kaminogawa S., Yamauchi K. Stimulatory effect of human lactoferrin on DNA synthesis in BALB/c 3T3 cells // Agric. Biol. Chem., 1989, 53, p. 31−35.
  22. Baker E.N., Rumball S.V., Anderson B.F. Transferrins: insights into structure and function from studies on lactoferrin // TIBS, 1987, 12, p. 350−353.
  23. Baranov A., Glazkov P., Kiselev A. et al. Local and distant transfection of mdx muscle fibers with dystrofin and LacZ genes delivered in vivo by synthetic microspheres // Gene Therapy, 1999, v. 6, p. 1406−1414.
  24. Barinaga M. Step taken toward improved vectors for gene transfer // Science, 1994, 266, p. 1326.
  25. Beguinot L., Lyall R.M., Willingham M.C., Pastan I. Down-regulation of the epidermal growth factor receptor in KB cells is due to receptor internalization and subsequent degradation in lisosomes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1984, v. 81, p. 2384−2388.
  26. Behr J.-P. Synthethic gene transfer vectors // Pure & Appl. Chem., 1994, v. 66, № 4, p. 827 835.
  27. Behr J.-P. The proton sponge, a means to enter cells viruses never thought of // M/S-Med. Sci., 1996,12, p. 56−58.
  28. Bennett R.M., Mohla C. A solid phase radioimmunoassay for the measurement of lactoferrin in human plasma: variations with age, sex and disease // J. Lab. Clin. Med., 1976, 88, p. 156−165.
  29. Benvenisty N., Reshef L. Direct introduction of genes into rats and expression of the genes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1986, v. 83, p. 9551−9555.
  30. Bi B.Y., Liu J.L., Legrand D., et al. Internzlization of human lactoferrin by the Jurkat human lymphoblastic T-cell line // Eur. J. Cell Biol., 1996, 69, № 3, p. 288−296.
  31. Birnboim H.C., Doly J. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA//Nucl. Acid. Res., 1979, v.6, p. 1513−1524.
  32. Boussif O., Lezoualc’h F., Zanta M.A., et al. A versatile vector for gene and oligonucleotide transfer into cells in culture and in vivo: polyethylenimine // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, v. 92, p. 7297−7301.
  33. Boxer L.A., Haak R.A., Yang H-H. et.al. Membrane-bound lactoferrin alters the surface properties of polymorphonuclear leukocytes // J. Clin. Invest., 1980, 70, p. 1049−1057.
  34. Brown M.S., Anderson R.G.W., Goldstein J.L. Recicling receptors: the round-trip itinerary of migrant membrane proteins // Cell, 1983, 32, p. 663−667.
  35. Brown V.I., Greene M.I. Molecular and cellular mechanisms of receptor-mediated endocytosis // DNA and Cell Biology, 1991,10, № 6, p. 399−409.
  36. Capecchi M. High efficiency transformation by direct microinjection of DNA into cultured mammalian cells // Cell, 1980,22, (2 Pt 2), p. 479−488.
  37. Carpenter G., Cohen S. Epidermal growth factor // Annu. Rev. Biochem., 1979, 48, p. 193−216.
  38. Chan C.K., Htibner S., Hu W., Jans D.A. Mutual exclusivity of DNA binding and nuclear localization signal recognition by the yeast transcription factor GAL4: implication for nonviral DNA delivery // Gene Therapy, 1998, 5, p. 1204−1212.
  39. Chen J. Stickles R.J. Daichendent K.A. Galactosylated histone-mediated gene transfer and expression // Hum. Gene Ther., 1994, 5, p. 429−435.
  40. Clemens P.R., Kochanek S., Sumada Y.S. et al. In vivo muscle gene transfer of full-length dystrophin with adenovirus vector that lacks all viral genes // Gene Therapy, 1996, v. 3, № 11, p. 965−972.
  41. Cotten M., Wagner E., Zatloukal K., et al. Chicken adenovirus (CELO virus) particles augment receptor-mediated DNA delivery to mammalian cells and yield exceptional levels of stable transformants // J. Virology, 1993, 67, p. 3777−3785.
  42. Courtoy P. J., Moguilevski N., Retegui L., et al. Uptake of lactoferrin by the liver. II. Endocytosis by sinusoidal cells // Lab. Invest, 1984, 50, № 3, p. 329−334.
  43. Cristiano P., Iovene M.R., Simioli F. et.al. Clinical evaluation of the imipenem/cilastatin combination in the therapy of severe infections in patients with malignant diseases//Drugs Exp. Clin. Res., 1990,16, № 6, p. 293−297.
  44. Cristiano R.J., Roth J.A. Molecular conjugates: a targeted gene delivery vector for molecular medicine // J Mol Med., 1995, 73, № 10, p. 479−486.
  45. Crystal R.G., MaElvaney N.G., Rosenfeld M. Administration of an adenovirus containing the human CFTR cDNA to the respiratory tract of individuals with cystic fibrosis // Nature Genet., 1994, 8, p. 42−51.
  46. Culver K.W. Gene Therapy. A handbook for physicians. New York.: Mary Ann Liebert Inc. Publ., 1994., p. 117.
  47. Curiel D.T., Agarwal S., Wagner E., et al. Adenovirus enhancement of transferrin-polylysine-mediated gene delivery // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, v. 88, p. 8850−8854.
  48. Dagert V., Ehrlich S.D. Prolonged incubation in calcium chloride improves the competence of E. coli cells // Gene, 1979, v. 6, № 1, p. 23−28.
  49. Damke H. Dynamin and receptor-mediated endocytosis // FEBS Letters, 1996, 389, p. 48−51.
  50. Dunlap D.D., Maggi A., Soria M.R., Monaco L. Nanoscopic structure of DNA condensed for gene delivery // Nucleic Acids Research, 1997,25, № 15, p. 3095−3101.
  51. Dautry-Varsat A. Receptor-mediated endocytosis of transferrin // Biochimie, 1986, 68, p. 375 381.
  52. Davis C.G., Van Driel I.R., Russell D.W., et al. The low density lipoprotein receptor: identification of amino acids in cytoplasmic domain required for rapid endocytosis // J. Biol. Chem., 1987,262, p. 4075−4082.
  53. Davis C.G., Lehrman M.A., Russell D.W., et al. The J.D. mutation in familial hypercholesterolemia: amino acid substitution in cytoplasmic domain impedes internalization of LDL receptors // Cell, 1986,45, p. 15−24.
  54. Deshmukh H.M., Huang L. Liposome and polylysine mediated gene transfer // New J. Chem., 1997,21, p. 113−124.
  55. Davidson L.A., Lonnerdal B. Specific binding of lactoferrin to brush-border membrane: ontogeny and effect of glycan chain // Am. J. Physiol. 1987, 254. p. G580-G585.
  56. Dzau V.J., Mann M.J., Morishita R., Kaneda Y. Fusigenic viral liposome for gene therapy in cardiovascular diseases // Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1996, v. 93, p. 11 421−11 425.
  57. M.A. & Anderson W.F. Retroviral vectors for introduction of genes into mammalian cells // Biotechniques, 1988, 6, p. 608−614.
  58. Ellison R.T., Laforce F.M., Giehl T.J., et al. Lactoferrin and transferrin damage of the gramnegative outer membrane is modulated by Ca and Mg // J. Gen. Microbiol., 1990, 136, p. 1437−1446.
  59. Ellison R.T., Giehl T.J., Laforce F.M. Damage of the outer membrane of enteric gram-negative bacteria by lactoferrin and transferrin // Infect. Immun., 1988, 56, p. 2774−2781.
  60. Erbacher P., Remy J.-S., Behr J.-P. Gene transfer with synthetic virus-like particles via the integrin-mediated endocytosis pathway // Gene therapy, 1999, 6, p. 138−145.
  61. Erbacher P., Bousser M.-T., Raimond J., et.al. Gene transfer by DNA/glycosylated polylysine complexes into human blood monocyte-derived macrophages // Human gene therapy, 1996, 7, p. 721−729.
  62. Feigner P.L. Discovery, development, and application of synthetic gene delivery system. Gene Therapy. Series editors: G. Stock, U-F. Habenicht. Springer-Verlag Berlin Heidelberg 1998.
  63. Fercol Th., Perales J.C., Mularo F., Hanson R.W. Receptor-mediated gene transfer into macrophages // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, v. 93, p. 101−105.
  64. Fleet J.C. A new role for lactoferrin: DNA binding and transcription activation // Nutr. Rev., 1995,53, № 8, p. 226−227.
  65. Fominaya J., Wels W. Target cell-specific DNA transfer mediated by a chimeric multidomain protein//J. Biol. Chem., 1996, 271, p. 10 560−10 568.
  66. Fraley R., Subramani S., Berg P. Introduction of liposome-encapsulated SV40 DNA into cells // J. Biol. Chem., 1980, 255, p. 10 431−10 435.
  67. Fransson G.B., Lonnerdal B. Iron in human milk // J. Pediatr., 1980, 2, p. 693−701.
  68. Gao X., Huang L. Cationic liposome-mediated gene transfer // Gene Ther., 1995, 2, p. 710−722.
  69. Gao X., Huang L. A novel cationic liposome reagent for efficient transfection of mammalian cells // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1991,179, p. 280−285.
  70. Garcia-Ramirez M., Subirana J. A. Condensation of DNA by basic proteins does not depend on protein composition // Biopolymers, 1994, 34, p. 285−292.
  71. Geuze H.J., Slot J.W., Strous GJ.A.M. Intracellular site of asialoglycoprotein receptor-ligand uncoupling // Cell, 1983, 32, p. 277−287.
  72. Goavec M., Mazurier J., Montreuil J., Spik G. Role des gliycannes dans la fixation de la serotransferrine et de la lactotransferrine sur les macrophages alveolaires humains // C.R. Acad. Sc. Paris, 1985,16, p. 689−694.
  73. Goldman A.S., Garza C., Schanler R.J., Goldblum R.M. Molecular forms of lactoferrin in the stool and urine from infants fed human milk // Pediatr. Res., 1990, 27, p. 252−255.
  74. Goldsmith S.J., Eitenmiller R.R., Barnhart H.M. et.al. Unsaturated iron-binding capacity of human milk//J. Fd. Sci., 1982, 47, p. 1298−1304.
  75. Goldstein J.L., Brown M.S., Anderson R.G.W., et al. Receptor-mediated endocytosis: concepts emerging from the LDL receptor system // Annu. Rev. Cell Biol., 1985, 1, p. 1−39.
  76. Gottschalk U., Chan S. Somatic Gene Therapy (present situation and future perspective) // Drug Res., 1998, 48 (II), Nr. 11, p. 1111−1120.
  77. Gottschalk S., Cristiano R.J., Smith L., Woo SLC. Folate-mediated gene delivery and expression in vitro // Gene Therapy, 1994,1,185−191.
  78. Gottschalk S., Sparrow J.T., Hauer J. et. al. A novel DNA-peptide complex for efficient gene transfer and expression in mammalian cells // Gene Therapy, 1996, 3, № 5, p. 48−51.
  79. Graham F.L., Van Der Eb A.J. A new technique for the assay of infectivity of humanadenovirus 5 DNA//Virology, 1973, 52, p. 429−438.
  80. Greber U., Willetts M., Webster P., Helenius A. Stepwise dismantling of adenovirus 2 during entry into cells // Cell, 1993, 75, p. 477−486.
  81. He J., Furmanski Ph. Sequence specificity and transcriptional activation in the binding of lactoferrin to DNA //Nature, 1995, 373, p. 721−724.
  82. Heldin C.-H., Wasteson A., Westermark B. Interaction of platelet-derived growth factor with its fibroblast receptor // J. Biol. Chem., 1982,257, p. 4216−4221.
  83. Herbomel Ph., Bourachot B., Yaniv M. Two distinct enhancers with different cell specificities coexist in the regulatory region of polyoma // Cell, 1984 (part 2), 39, p. 653−662.
  84. Hara T. Aramaki Y., Takada Sh., et al. Receptor-mediated transfer of pSV2CAT DNA to a human hepatoblastoma cell line HepG2 using asialofetuin-labeled cationic liposomes // Gene, 1995,159, p. 167−174.
  85. Hodgson S.P. The vector void in gene therapy // Biotechnology, 1995, 13, p. 222−225.
  86. Hoffman E.P., Kunkel L.M. Dystrophin abnormalities in Duchenne/Becker muscular dystrophy //Neuron, 1989, v. 2, p. 1019−1029.
  87. Honegger A.M., Dull T.J., Felder S., et al. Point mutation at the ATP binding site of EGF receptor abolishes protein-tyrosine kinase activity and alters cellular routing // Cell, 1987, 51, p. 199−209.
  88. Hopkins C.R. The appearance and internalization of transferrin receptors at the margins of spreading tumor cells // Cell, 1985, 40, p. 199−208.
  89. Hopkins C.R., Trowbridge I.S. Internalisation and processing of transferrin and the transferrin receptor in human carcinoma A431 cells // J. Cell Biol., 1983, 97, p. 508−521.
  90. Huckett B., Ariatti M., Hawtrey A. Increased affinity of insulin for its receptor following conjugation to a second protein // Med Hypotheses, 1991, 36, № 2, p. 135−139.
  91. Huckett B., Ariatti M., Hawtrey A.O. Evidence for targeted gene transfer by receptor-mediated endocytosis. Stable expression following insulin-directed entry of NEO into HepG2 cells // Biochem. Pharmacol, 1990, 15, 40, № 2, p. 253−263.
  92. Huettinger M., Retzek H., Hermann M., Goldenberg H. Lactoferrin specifically inhibits endocytosis of chylomicron remnants but not a-macroglobulin // J. Biol. Chem., 1992, 267, № 26, p. 18 551−18 557.
  93. Nutrition, 1993, 47, p. 232−241. 103 Jans D.A. The regulation of protein transport to the nucleus by phosphorylation // Biochem. J., 1995,311, p. 127−137.104Johansson B.G. Isolation of an iron-containing red protein from human milk // Acta Chem.
  94. IKing G.L., Johnson S.M. Receptor-mediated transport of insulin across endothelial cells //
Заполнить форму текущей работой

Пора сдавать?