Биохимические методы исследования

Определение содержания общего белка в сыворотке крови.

Принцип метода заключается в том, что ионы меди в щелочной среде взаимодействуют с пептидными связями белков сыворотки крови с образованием комплекса фиолетового цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации общего белка. Определение экстинкции на ФЭК (кювета десять мм, красный светофильтр 750 нм) против контроля.

Референтные значения содержания общего белка в сыворотке крови составляют 65 — 84г/л.

Определение содержания белковых фракций в сыворотке крови.

Принцип метода заключается в том, что под влиянием постоянного электрического поля белки сыворотки, имеющие отрицательный заряд, движутся на ацетатцеллюлозных пленках по направлению к положительному электроду со скоростью, зависящей от величины заряда и молекулярной массы частиц. Референтные значения содержания белковых фракций в сыворотке крови для альбуминов 52 — 65%, для альфа1-глобулинов 2,5 — 5%, для альфа2-глобулинов 7 — 13%, для бета-глобулинов 8 — 14%, для гамма-глобулинов 12 — 22%.

Определение содержания С — реактивного белка в сыворотке крови.

Принцип метода заключается в том, что анти СРБ латекс реагент представляет собой суспензию латексных частиц покрытых антителами против СРБ человека. При смешивании данного реагента с сывороткой, содержащей СРБ в концентрации превышающей шесть мг/л, в результате реакции между антителами к СРБ и СРБ развивается агглютинация латексных частиц, что свидетельствует о положительной реакции пробы. Референтные значения СРБ в сыворотке крови, содержание до шести мг/л.

Определение количества фибриногена в плазме крови.

Принцип метода заключается в том, что образовавшийся после свертывания плазмы крови фибрин быстро высушивается, и по весу определяют содержание фибриногена в плазме. Фибриноген в г/л равен одному мг фибрина умноженного на 0,222.

Референтные значения фибриногена в плазме крови составляют от двух до четырех г/л.

Определение конценртации мочевины в сыворотке крови.

Принцип метода заключается в том, что уреаза катализирует гидролиз мочевины с образованием аммиака и углекислого газа. При взаимодействии аммиака с альфа-кетоглутаром в присутствии глутаматдегидрогеназы происходит окисление НАДН. Скорость окисления НАДН прямо пропорциональна концентрации мочевины.

Референтные значения содержания мочевины в сыворотке крови 2,5 — 8,3 ммоль/л.

Определение концентрации креатинина в сыворотке крови.

Принцип метода заключается в том, что креатинин в щелочном растворе с пикратом образует окрашенный комплекс. Изменение оптической плотности образующегося комплекса пропорционально концентрации креатинина в пробе. Референтные значения креатинина в сыворотке крови у мужчин 44 — 100мкмоль/л, у женщин 44 — 88 мкмоль/л.

Определение активности аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови.

Принцип метода заключается в том, что аспартатаминотрансферазы катализирует в присутствии альфа-кетоглутарата переаминирование L-аспартата с образованием оксалоацетата. В присутствии малатдегидрогеназы и оксалоацета происходит окисление НАДН. Скорость окисления НАДН прямо пропорциональна активности АСТ.

Референтные значения для мужчин до 40Ед/л, для женщин до 32Ед/л.

Определение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови.

Принцип метода заключается в том, что аланинаминотрансфераза катализирует в присутствии альфа-кетоглутарата переаминирование L-аланина с образованием пирувата. В присутствии лактатдегидрогеназы происходит окисление НАДН. Скорость окисления НАДН прямо пропорциональна активности АЛТ.

Референтные значения для мужчин до 40Ед/л, для женщин до 32Ед/л.

Статистическая обработка результатов

Для получения правомерного заключения по материалам исследований была проведена статистическая обработка результатов. Математическая обработка данных проводилась с помощью методов вариационной статистики. Определялась средняя арифметическая величина (X) показателей в каждой группе, равная сумме вариантов, деленной на число наблюдений (+m) стандартная ошибка проводилась программой Microsoft office Excel 2007, показатель достоверности (р), достоверность различий по критерию Стьюдента (t) для одноименных показателей. Различия считались достоверными при уровне значимости меньше или равном ноль целых пяти десятых.