Определение интенсивности дыхания и его сопряжения с окислительным фосфорилированием

Необходимо выделить митохондрии из печени крысы. Промыть ячейку полярографа и заправить ее реакционной средой из конической колбы, стоящей в термостате. Опустить магнитную мешалочку и вставить электрод. Выступившие излишки среды удалить фильтровальной бумагой. Включить магнитную мешалку, движение диаграммной ленты и ручкой ''чувствительность'' скорректировать положение пера самописца — за 10−15 мм до левого края разметки диаграммной ленты.

Затем необходимо записать два типа кривых, каждый из которых прописывается несколько раз. Для этого в среду последовательно делаются добавки У Кривая 1.

Сукцинат или -20 мкл, С_к=6мМ Митохондрии -50 мкл, АДФ -20 мкл, С_к=0,15 мМ Где С_к-конечная концентрация добавки в ячейке, если принимать объем ячейки равным 2 мл.

По кривой 1 потребления кислорода рассчитывается интенсивность дыхания в метаболических состояниях 3 и 4 (по Чансу), величина дыхательного контроля (ДК) и эффективность фосфорилированиякоэффициент АДФ/0У.

V₄=500*l₄/H*белок Мх в ячейке (1).

V₃=500*l₃/H*белок Мх в ячейке (2).

ДК=V₃/V₄ (3).

Примечание У объем ячейки-2 мл, концентрация кислорода в среде 500 мкА (250 мкМ O₂). Величина Н выражена в мм, lв мм/мин.