Контроль качества доксорубицина гидрохлорида по ГФ РБ

Доксорубицина гидрохлорид (лат. Doxorubicini hydrochloridum, англ. Doxorubicin hydrochloride).

(8S, 10S)-10-[(3-амино-2,3,6-тридезокси-б-L-ликсо-гексопиранозил)окси]-6,8,11-тригидрокси-8-(гидроксиацетил)-1-метокси-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион гидрохлорид.

C27H29NO11. НСI М. м 580,0.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ Доксирубицина гидрохлорид содержит не менее 98,0% и не более 102,0% (8S, 10S)-10-[(3-амино-2,3,6-тридезокси-б-L-ликсогексопиранозил)окси]-6,8,11-тригидрокси-8-(гидроксиацетил)-1-метокси-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-диона гидрохлорида в пересчёте на безводное и свободное от этанола вещество.

Получают с использованием отдельных штаммов Streptomyces coeruleorubidus или Streptomyces peucetius либо любым другим способом.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА) Внешний вид: кристаллический, оранжево-красный порошок, гигроскопичен.

Растворимость: легко растворим в воде и метаноле, слабо растворим в спирте, практически нерастворим в ацетоне.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ).

А. Абсорбционная спектрофотометрия в инфракрасной области поглощения.

Сравнение: ФСО даунорубицина гидрохлорида или спектр, представленный на рисунке 2.

Волновое число (см -1).

Рисунок 2. Инфракрасный спектр пропускания ФСО доксорубицина гидрохлорида.

В. 10 мг испытуемого образца растворяют в 0,5 мл. кислоты азотной, прибавляют 0,5 мл воды и нагревают над открытым пламенем в течение 2 мин. Охлаждают и прибавляют 0,5 мл. раствора серебра нитрата. Образуется белый осадок.

ИСПЫТАНИЯ.

рН: от 4,5 до 6,5. 50 мг испытуемого образца растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, и доводят до объема 10 мл этим же растворителем.

Сопутствующие примеси. Жидкостная хроматография.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Испытуемый раствор (а). 50,0 мг испытуемого образца растворяют в подвижной фазе и доводят до объёма 50,0 мл этим же растворителем.

Испытуемый раствор (b). 10,0 мл испытуемого раствора (а) доводят до объема 100,0 мл.

Раствор сравнения (а). 10,0 мг ФСО доксорубицина гидрохлорида и 10 мг ФСО эпирубицина гидрохлорида растворяют в подвижной фазе и доводят до объема 50,0 мл этим же растворителем. 10,0 мл полученного раствора доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл.

Раствор сравнения (b).5,0 мл раствора сравнения (а) доводят подвижной фазой до объема 20,0 мл.

Раствор сравнения (с). 50,0 мг ФСО доксирубицина гидрохлорида растворяют в подвижной фазе и доводят до объема 50,0 мл этим же растворителем. 10,0 мл полученного раствора доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл.

Условия хроматографирования:

• — колонка длиной 0,25 м и внутренним диаметром 4,0 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным эндкепированным для хромотографии с размером частиц 5 мкм;
• — подвижная фаза: смешивают равные объемы ацетонитрила и раствора, содержащего 2,88 г/л натрия лаурилсульфата и 2,25 г/л кислоты фосфорной;
• — скорость подвижной фазы: 1 мл/мин;
• — спектрофотометрический детектор, длина волны 254 нм;
• — объем видимой пробы: по 5 мкл испытуемого раствора (а) и растворов (а) и (b);
• — время хроматографирования: 3,5-кратное время удерживания доксорубицина.

Время удерживания: доксорубицин — около 8 мин.

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (а):

— разрешение: не менее 2,0 между пиками доксорубицина и эпирубицина.

Предельное содержание примесей:

— любая примесь (не более 0,5%): на хроматограмме испытуемого раствора площадь любого пика, кроме основного, не должна превышать площадь пика доксорубицина на хроматограмме раствора сравнения (b).

На хроматограмме испытуемого раствора не учитывают пики с площадью менее 0,1 площади пика доксорубицина на хроматограмме раствора сравнения (b) (0,05).

Этанол. Не более 1,0%.

Вода. Не более 4,0%. Определение проводят из 0,100 г испытуемого образца.

Бактериальные эндотоксины. Менее 2,2 МЕ/мг, если субстанция предназначена для производства лекарственных средств для парентерального применения без последующей процедуры удаления бактериальных эндотоксинов.

Остаточные количества органических растворителей. Испытуемый образец должен выдерживать требования статьи.

Микробиологическая чистота. Доксорубицина гидрохлорид в условиях испытания обладает антимикробным действием. Посев на питательные среды провдят методом мембранной фильтрации.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ Жидкостная хроматография, как указано в испытании «Сопутствующие примеси» со следующими изменениями.

Объем вводимой пробы: по 5 мкл испытуемого раствора (b) и раствора сравнения ©.

ХРАНЕНИЕ В воздухонепроницаемом контейнере. Стерильная субстанция — в стерильном воздухонепроницаемом контейнере с контролем первого вскрытия.

ПРИМЕСИ.

А. Даунорубицин.

В. R = OCH3: (8S, 10S)-8-ацетил-10-[(3-амино-2, 3,6-тридезокси-б-L;

ликсо-гексопиранозил)окси]-8-(2-бром-1,1-диметоксиэтил)-6,8,11;

тригидрокси-1-метокси-7, 8,9,10 — тетрагидротетрацен-5, 12-дион.

С. R+R=O: (8S, 10S)-8-ацетил-10-[(3-амино-2,3,6-тридезокси-б-L-ликсо-гексопиранозил)окси]-8-(бромацетил)-6,8,11-тригидрокси-1-метокси-7, 8,9,10 — тетрагидротетрацен-5, 12-дион.

D. (8S, 10S)-6,8,10,11-тетрагидрокси-8-(гидроксиацетил)-1-метокси-7, 8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион (агликон доксорубицина, доксорубицинон) [15].