Охратоксикоз. 
Ветеринарная микология

Заболевание возникает при поедании животными кормов, загрязненных охратоксинами.

Этиология. Охратоксины — группа микотоксинов, производных дегидроизокумарина, названные по виду гриба Aspergillius ochreaceus, из которого они впервые выделены. Существует ряд охратоксинов: охратоксин, А (дегидроизокумарин, связанный своей 7-карбогруппой с альфаи бета-фенилаланином), охратоксин В (дихлораналог), охратоксины С и D, соответственно этиловый и метиловый эфиры охратоксина А. Наиболее токсичен из них охратоксин А. Это бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в ацетонитриле, бензоле, хлороформе, спирте, ацетоне, растворах щелочей. В растворе с хлоридом железа окрашивается в красный цвет. Охратоксин, А обладает достаточной термостабильностью. Свойственна она и его производным.

Относят охратоксины к группе кислых микотоксинов и экстрагируют из корма при кислом pH. Для этой цели используют ортофосфорную кислоту. Со щелочами они вступают в реакцию, образуя комплексы, разрушающиеся при повторном подкислении раствора и доведении его pH до 3−4. Эти свойства необходимо учитывать при токсикологических исследованиях. При определении охратоксинов в корме на стенках посуды вместе с щелочью могут осаждаться и охратоксины. В результате возможен отрицательный результат при фактическом содержании их в исследуемом материале. При детоксикации недостаточная по времени обработка дефектного корма щелочью может привести к востановлению охратоксинов в желудке и вызвать у животных заболевание, Охратоксины (нефротоксины) вызывают дистрофические изменения в эпителиальных клетках, преимуществен-' но в проксимальных канальцах, и в меньшей степени в эпителиальных клетках петли Генли. Обладают они тератогенным действием. LD₅₀ охратоксина, А для крыс при пероральном введении равняется 22 мг/кг. Нефротоксичность охратоксина, А особенно высокая при малых концентрациях его в корме.

Грибы продуценты. Наиболее типичными в этом отношении являются грибы Aspergillius ochreaceus и Penicillium viridicatum. Кроме того, охратоксины могут продуцировать грибы A. sulphureus, A. sclerotiorum, A. alliaceus, Р. variabile, Р. cyclopium, Р. commune, Р. purpurescens. Оптимальная температура для образования охратоксинов грибами из рода Aspergillius 28‘С, грибами из рода Penicillium — 20 °C.

В природе грибы-продуценты охратоксинов широко распространены. Однако родовой и видовой состав их меняется в зависимости от климатической зоны. Так, в странах с теплым климатом охратоксины продуцируются главным образом грибами из рода Aspergillius (A. ochreaceus и др.), в северных странах, например в Дании, в основном грибами из рода Penicillium (Р. viridicatum и др.).

Большинство токсигенных штаммов A. ochreaceus кроме охратоксинов образуют пеницилловую кислоту, а штаммы Р. viridicatum — цитринин. Поэтому на практике редко корма загрязняются только охратоксинами. Как правило, наряду с ними содержится пеницилловая кислота, или цитринин, но основным токсическим агентом в этих случаях является охратоксин А.

Наиболее чувствительны к действию охратоксинов собаки и свиньи. Обнаруживают охратоксины в зерне пшеницы, ячменя, овса, кукурузы, фасоли, в земляных орехах, комбикорме. Охратоксин, А термоустойчив. После автоклавирования в течение 3 ч в овсе и рисе все еще содержится 30% введенного в них токсического вещества. Нагревание зерна в течение часа при 129 С почти не изменяет содержание охратоксина в нем.

Симптомы. Охратоксикоз у свиней может протекать остро и подостро, но в практике чаще всего встречается хроническое течение этого микотоксикоза. Острое течение наблюдают у поросят-отъемышей, называют болезнь «околопочечный отек». У больных животных отмечают полиурию, угнетенное состояние, разжижение фекалий, атаксию, отечность кожи, вздутие живота, особенно в области поясницы. Животные погибают на 1−2-е сутки от начала заболевания. Летальность достигает 40−90%.

Подострое течение микотоксикоза развивается при скармливании подсвинкам охратоксина, А в дозе 1 мг/кг массы тела. У больных отмечают жажду, полиурию. Так, подсвинки в возрасте 2 мес потребляют в сутки 2 л воды, а в возрасте 5 мес. — до 7 л. У аналогично отравленных животных прием воды резко возрастает и доходит до 12 л в сутки. Кроме того, у животных отмечают диарею, угнетение, атаксию и отечность кожи. Заболевание часто заканчивается гибелью животного.

Хроническое течение охратоксикоза у свиней в естественных условиях регистрируют наиболее часто. Болезнь развивается в течение 2−5 мес. при систематическом или периодическом скармливании им корма, загрязненного охратоксином, А в концентрациях 0,1−0,4 мг/кг корма. Отравление протекает без ярко выраженных симптомов, за исключением повышенной потребляемости животными воды. Наблюдают полиурию, а также снижение прироста массы тела. Так, по данным Arne Madsen и Н. Р. Mortensen (1979), в Дании за 100 дней откорма масса беконных свиней достигает 90 кг. В случае же скармливания загрязненного охратоксинами корма животные набирают эту массу за 140 дней откорма. У больных возможна анемия в результате снижения количества эритроцитов и гемоглобина. В крови отмечают лейкоцитоз, обусловленный значительным увеличением количества лимфоцитов при одновременном снижении уровня базофилов, нейтрофилов и моноцитов.

Охратоксикоз более ярко проявляется у свинок, чем у хрячков или кабанчиков, кроме того, чаще его регистрируют у молодых растущих свиней, чем у взрослых. У супоросных свиноматок возможны аборты, рождение мертвого или нежизнеспособного потомства (поросята гибнут на 1−6-й день после рождения).

У птиц при охратоксикозе отмечают депрессию, понос, обезвоживание организма, задержку роста, анемию, при сублетальных дозах токсина — снижение гемопоэза и уменьшение числа лимфоидных элементов в селезенке и фабрициевой сумке. Нефропатии, подобно наблюдающимся в полевых условиях, могут быть воспроизведены экспериментально введением в течение года охратоксина, А в дозе 0,3−1 мг/кг.

После применения 3-недельным цыплятам разовой пероральной дозы охратоксина, А (16 мг/кг) через 6 ч появляется беспокойство, нахохливание и диарея. Через несколько часов у них отмечают атаксию, мышечные судороги, потерю рефлекса выпрямления туловища, тремор ног и мышц шеи, прострацию. Через 22−25 ч цыплята погибают.

У кур-молодок, содержащихся на рационе с охратоксином с 14-недельного до однолетнего возраста, токсическое воздействие охратоксина проявляется в старшем возрасте. В результате у них замедляется половое созревание и снижается яйценоскость, масса тела, они имеют нездоровый вид. Выводимость яиц, снесенных этими курами, также была низкая, а полученное потомство имело небольшие среднесуточные приросты массы до 4 недель (Chondryry et al., 1971). Острая токсичность охратоксинов на птице хорошо изучена (табл. 9).

Пятидневные куриные эмбрионы, в желточный мешок которым вводили 50 мкг охратоксина А, в 80% случаев погибали через 48 ч, 100%-я гибель эмбрионов отмечалась через 96 ч. LD₅₀ составила 16,96 мкг/яйцо (через 48 ч). LD₅o афлатоксина Bi для эмбрионов равняется 0,23 мкг/яйцо, то есть он в 70 раз токсичнее, чем охратоксин А.

Для помесных цыплят нью-гемпшир-леггорн 7-дневного возраста LD50 охратоксина, А при пероральном введеТаблица 9

Влияние охратоксина на птиц.

нии составляет 166 мкг/цыпленка, или около 3,9 мг/кг массы тела. Для петушков породы белый леггорн летальная доза этого токсина равняется 116 мкг/цыпленка (3,3 мг/кг). Несколько более низкая токсичность установлена для суточных индюшат — LD₅₀ составляет 5,9 ± ± 0,72 мг/кг массы тела (Pior et al., 1976).

Охратоксин В менее токсичен, чем охратоксин А, и LD₆o при пероральной даче 7-дневным цыплятам составляет 1890 мкг (54 мг/кг). Этиловый эфир охратоксина (охратоксин С) имеет LD₅o при пероральном введении 7-дневным цыплятам 216 мкг/цыпленка (5,1 мг/кг). Гидролизат охратоксина А-охратоксина нетоксичен на уровне 500 мкг/цыпленка. Метиловый эфир охратоксина обладает такой же токсичностью, как и этиловый эфир.

Цыплята более старшего возраста менее чувствительны к пероральному введению охратоксинов. Если LD₆o для суточных цыплят составляет 2,14 ± 0,37 мг/кг, то для 3-недельных— 3,65 ± 0,57 мг/кг.

При скармливании суточным петушкам породы белый леггорн кукурузы, зараженной грибом A. ochreaceus и содержащей охратоксин, А в концентрации 0,3; 0,6; 1,2; 2,4 и 4,8 ppt, смертность в опытных группах к концу третьей недели достигла 50−100% (Нуff et al., 1974). Аналогичные результаты наблюдали у бройлерных цыплят от введения до 3-недельного возраста, получавших рационы, содержащие охратоксины в концентрациях 0,5; 1; 2; 4 и 8 ppt. У цыплят, получавших 4 и 8 ppt охратоксинов, отмечали высокую смертность, а у цыплят, в рационе которых концентрация охратоксина была 0,5 ppt, отмечали подавление роста.

Среди кур-молодок породы белый леггорн, начиная с 14-недельного возраста содержавшихся на рационе с охратоксинами в концентрации 0; 1; 2 и 4 ppt, смертность составила соответственно 0; 12,5 и 35,4% после шестинедельного кормления. В течение 6 мес. в период яйцекладки из оставшихся погибло 4,2; 8,8; 17,9 и 64% птицы (Doster et al., 1971). Смертность у суточных японских перепелок, получавших охратоксин, А в концентрации 0; 4; 8 и 16 ppt, к концу 9 дня соответственно составила 11; 70; 90 и 70% (Doster et al., 1973).

Острая токсичность охратоксинов, А и его эфиров у суточных пекинских утят на уровне LD₆₀ составляет 135 ±170 мкг/утенка, или около 3 мг/кг массы тела.

При сравнении с афлатоксинами и токсином Т-2 охратоксин, А более токсичен для цыплят. Так, минимальная концентрация в рационе, подавляющая рост молодых цыплят-бройлеров, составляет 2 ppt для охратоксина, 2,5 ppt — для афлатоксина и 4 ppt — для токсина Т-2.

У взрослых кур-несушек наблюдают сильное отравление под воздействием охратоксина, А на уровне от 1 до 4 ppm (Pior and Sisodia, 1978). В дозе 0,5 ppt и ниже он снижает яйценоскость, а в концентрации 1 ppt и выше — массу тела.

Патологоанатомические изменения. В брюшной полости у свиней обнаруживают повышенное количество жидкости, слизистая желудка и тонких кишок катарально воспалена. Печень неравномерно окрашена без видимых изменений. Почки незначительно увеличины. Капсула местами соединена спайками с корковым слоем. Корковый и мозговой слои имеют ограниченные или диффузные более светлые участки. В некоторых случаях эти участки уплотнены.

Основные гистоморфологические изменения при охратоксикозе у свиней характеризуются некрозом клеток проксимальных канальцев почек и перипортальных печеночных клеток, разрастанием соединительной ткани в корковом слое почек. Однако степень проявления этих изменений зависит от дозы скормленных свиньям охратоксинов. Даже в малых дозах (около 0,1 мг/кг корма) охратоксин, А обладает значительной нефротоксичностью. При более высоких дозах токсина в корме наблюдают значительные изменения и в клетках печени. Летальные дозы ускоряют гиалиновую дегенерацию клеток не только в извилистых канальцах, но и в петле Генли. Нисходящая ветка петли Генли в таких случаях расширена.

У свиней после скармливания разных доз охратоксина, А почки были увеличены, бледные и пятнистые с поверхности, под капсулой имелись мелкие кисты диаметром 1−2 мм. На разрезе корковый слой бледный, а мозговой без видимых изменений, плотной консистенции. По мнению некоторых авторов, кисты являются расширенными лимфатическими и фиброзными тканевыми образованиями. В некоторых хозяйствах у свиней в корковом слое почек содержались кисты диаметром от 5 до 30 мм. При гистоморфологическом исследовании препаратов таких почек были отмечены дистрофические изменения не только в клетках извитых канальцев, но и в клетках петли Генли.

У птицы на вскрытии при остром отравлении охратоксином в основном отмечают поражения в печени и почках. У цыплят после перорального введения охратоксина, А регистрируют истощение, обезвоживание, сухость и плотность поверхности слизистой мышечного желудка. Отмечаются кровоизлияния в слизистой оболочке и сгустки крови во внутренних органах с белыми хлопьеподобными отложениями на почках, мочеиспускательном канале, а также на сердце, перикарде, печени и селезенке. Относительная масса зоба, мышечного желудка, печени, почек значительно увеличена, в то время как фабрициевой сумки уменьшена. Размеры сердца, селезенки и поджелудочной железы без изменений. Наблюдают кровоизлияния в печени и почках, а также энтериты. Характерными патологоанатомическими изменениями у кур-молодок и кур-несушек являются бледность и желтушность печени с очаговыми геморрагиями.

В пораженной печени у цыплят-перепелок находили вздутие ядер, пролиферацию желчных протоков и диффузную вакуолизацию клеток.

Под электронным микроскопом обнаруживали следующие характерные изменения: повышенную жировую вакуолизацию в гепатоцитах, митохондриальные поражения, уменьшение количества эндоплазматического ретикулума, образование изолированных растянутых пузырьков, очаговую потерю рибосом из эргостаплазматических мембран и повышенное число свободных рибосом в цитоплазме.

Диагноз при охратоксикозе ставят на основании клинических признаков (в случае острого или подострого течения микотоксикоза), макроскопических, патологоанатомических изменений в почках, желудочно-кишечном тракте, результатов гистологических исследований почек, микотоксикологических анализов кормов и патологического материала. При остром течении болезни учитывают диарею, отек подкожной клетчатки в области поясницы, увеличение почек, застойные участки в селезенке. В корме, а также печени, почках, мышечной ткани обнаруживают охратоксин А. При хроническом течении болезни учитывают изменение окраски коркового слоя почек, наличие в нем кист или соединительнотканных спаек между капсулой почки и корковым слоем, а также образование рубцов в корковом слое как следствие рассосавшихся кист. При гистологическом исследовании препаратов почек отмечают распад отдельных проксимальных канальцев, сморщивание, разрыв или лизис ядра подоцитов, утолщение базальной мембраны, диффузное разрастание соединительной ткани в корковом слое.

Микотоксикологическим исследованием образцов кормов обнаруживают охратоксин, А или его грибы-продуценты. В почках охратоксин, А можно и не выявить, так как концентрация его в них в 40 раз ниже, чем в корме. Так, при даче свиньям корма, содержащего в 1 кг 200 мкг охратоксина А, в почках его было 5 мкг/кг. При содержании в корме 4000 мкг/кг концентрация охратоксина, А в почках возрастала до 15 мкг/кг. Метод определения охратоксина, А в почках позволяет определить не менее 2 мкг/кг, то есть концентрация охратоксина, А в скармливаемом корме будет составлять около 100 мкг/кг.

Лечение при охратоксикозе свиней не разработано. Животные выздоравливают при скармливании им в течение месяца вволю зеленой массы или повышенных доз витамина Е. Сгерру с соавт. (1980) предупреждали развитие острого отравления охратоксина, А у мышей введением им фенилаланина. Охратоксин, А в дозе 0,8 мг (LD50 40 мг/кг) вызывали развитие острого процесса и гибель всех мышей в контрольной группе. В двух опытных группах вместе с охратоксином, А животным вводили по 0,8 мг фенилаланина (выживаемость 97%) и по 1,0 мг (выживаемость 100%). Если фенилаланин вводится через 30 мин после охратоксина А, то при дозе 10 мг на животное выживало 85% мышей, а при дозе 20 мг — 92%. Делается вывод, что рацион кормов, богатых фенилаланином, позволяет свести к минимуму заболевание охратоксикозом.

Лечение у птиц симптоматическое и направлено в основном против нефроза. Быстрое исключение из рациона корма, пораженного грибом, позволит ускорить выделение токсина из организма и улучшить обмен веществ птицы. Степень охратоксикоза у цыплят-бройлеров снижается при использовании богатых протеином кормов и применение антибиотика ауромицина.

Профилактика и меры борьбы. Необходимо постоянно контролировать ветеринарно-санитарное состояние кормосмесей, создавать оптимальные условия их хранения. При исследовании кормов следует применять быстрые и эффективные химические методы для выявления и идентификации охратоксинов в загрязненных кормовых ингредиентах или кормосмесях. Требуется также тщательно следить за потреблением корма и состоянием здоровья животных.