Помощь в учёбе, очень быстро...
Работаем вместе до победы

Разработка методов направленного 11?-и 14?-гидроксилирования стероидов

Диссертация: Разработка методов направленного 11?-и 14?-гидроксилирования стероидов
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Интерес к реакции 14а-гидроксилирования обусловлен тем, что 14а-гидроксистероиды или сами по себе обладают физиологической активностью, или открывают путь к синтезу соединений с высокой контрацептивной и канцеролитической активностью. Однако в мировой практике используются только несколько препаратов этого ряда, что объясняется трудностью их синтеза, а конкретно — сложностью введения… Читать ещё >

Содержание

  • 1. ВВЕДЕНИЕ
  • 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 2. 1. Классы стероидов, влияние структуры стероидной молекулы на активность
    • 2. 2. Применение кортикостероидов и их синтетических аналогов в медицине и ветеринарии
    • 2. 3. Применение модифицированных стероидов для регуляции репродуктивной функции
    • 2. 4. Физиологические основы микробиологических трансформаций стероидов
    • 2. 5. Гидроксилирование стероидных соединений
    • 2. 6. Реакция 11 (3-гидроксилирования в схеме синтеза глюкокортикоидных препаратов
    • 2. 7. Реакция 14а-гидроксилирования
    • 2. 8. Зависимость направления гидроксилирования стероидов от структуры молекулы
    • 2. 9. Влияние условий роста на трансформационную способность
    • 2. 10. Повышение доступности стероидов для микроорганизмов -трансформаторов
    • 2. 11. Синтез прегнанов на основе 17-кетоандростанов
  • 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
    • 3. 1. Реактивы
    • 3. 2. Микроорганизмы и методы их культивирования
      • 3. 2. 1. Штаммы, использованные в работе
      • 3. 2. 2. Условия хранения и выращивания грибов
    • 3. 3. Получение клонов СитиШпа 1ипШа, устойчивых к солям тяжелых металлов
    • 3. 4. Получение клопов СигшШпа 1ипШа, устойчивых к генетицину «С-418»
    • 3. 5. Трансформация стероидов грибами
      • 3. 5. 1. Трансформация стероидов отмытым мицелием
      • 3. 5. 2. Трансформация стероидов растущими клетками гриба
    • 3. 6. Анализ продуктов трансформации
      • 3. 6. 1. Тонкослойная хроматография
      • 3. 6. 2. ВЭЖХ
    • 3. 7. Выделение продуктов трансформации
      • 3. 7. 1. Препаративная хроматография
        • 3. 7. 1. 1. Хроматографирование на пластинках
        • 3. 7. 1. 2. Хроматографирование на колонке
    • 3. 8. Протонный магнитный резонанс (ПМР)
  • 4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
    • 4. 1. Выбор способа 14а-гидроксилирования
    • 4. 2. Исследование гидроксилазной активности плесневых грибов
    • 4. 3. Исследование субстратной специфичности штамма
  • С. lunata ВКПМ F
    • 4. 4. Гидроксилирование АД и CN-АД с помощью
  • С. lunata ВКПМ F
    • 4. 5. Поиск путей регуляции 11р/14а-гидроксилирования с помощью мицелия С. lunata ВКПМ F
      • 4. 5. 1. Определение возраста наиболее активного мицелия
  • С. lunata ВКПМ F-981 и его оптимальное количество
    • 4. 5. 2. 11р- и 14а-Гидроксилирование в присутствии источника углерода
      • 4. 5. 2. 1. 11р- и 14а-Гидроксилирование в цитратном буфере
      • 4. 5. 2. 2. 1 ip- и 14а-Гидроксилирование в присутствии глюкозы или сахарозы
      • 4. 5. 3. Влияние растворителей на процессы 11Р- и
  • 14. а-гидроксилирования
    • 4. 5. 4. Использование МЦЦ в процессах 1 ip- и 14а-гидроксилирования
    • 4. 5. Гидроксилирование кортексолона и андростендиона при высоких нагрузках
    • 4. 6. Трансформация кортексолона мицелием С. Innata, резистентным к солям тяжелых металлов
    • 4. 7. Разработка способа 11 Р-гидроксилирования
    • 4. 7. 1. Трансформация кортексолона клоном гриба С. lunata, 93 резистентным к генетицину «G-418»
    • 4. 7. 2. 11 Р-Гидроксилирование 16а-метил-кортексолона с помощью С. lunata F
    • 4. 8. Синтез пролигестона и его аналога
    • 4. 8. 1. Получение пролигестона
    • 4. 8. 2. Синтез 21-ацетата 14а, 17а-пропилидендиоксипрегн-4-ен-21-ол-3,20-диона (21-ацетат 14а, 17а-пропилидендиокси в-ва «S»)
    • 4. 9. Исследование контрацептивной активности пролигестона и ацетата 21-гидрокси-пролигестона
  • 5. ВЫВОДЫ

Разработка методов направленного 11?-и 14?-гидроксилирования стероидов (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность работы.

Стероидные лекарственные препараты занимают важное место среди синтетических лекарственных средств. Благодаря своей уникальной биологической активности, не ограничивающейся гормональным действием, они используются при лечении свыше 100 распространенных заболеваний, проявляя противовоспалительную, антиаллергическую, противошоковую, канцеролитическую, диуретическую и многие другие виды активности, а также для решения таких важных задач, как безопасное планирование семьи у людей и регуляция рождаемости у животных.

Являясь поливалентными соединениями, стероиды оказывают влияние на широкий круг процессов жизнедеятельности, что и объясняет наличие побочных эффектов при лечении стероидными препаратами. Устранить нежелательные побочные эффекты, а также усилить биологическую активность или изменить ее направленность можно с помощью структурной модификации природных соединений.

Опыт синтеза новых стероидных соединений, являющихся структурными аналогами природных гормонов, и изучения их активности, открывает перспективу дальнейших исследований с целью создания новых эффективных препаратов для медицины. Поэтому поиск веществ, обладающих высокой и пролонгированной активностью, не отягощенной сопутствующими побочными эффектами, является актуальной задачей.

Среди различных методов трансформации стероидной молекулы, проблема селективного гидроксилирования относится к числу важнейших в химии стероидов, поскольку введение гидроксильной группы в определенные положения молекулы определяет величину и направленность терапевтического действия. Гидроксистероиды используются при лечении широкого спектра заболеваний и применяются при лечении как в различных областях медицины (акушерство, гинекология, кардиология, неврология, онкология, дерматология и др.), так и в ветеринарии (лечение, контрацепция, синхронизация охоты и др) [19].

При модификации стероидной молекулы (вследствие ее полифункциональности) предпочтение отдается микробиологическим методам, не требующим предварительной защиты функциональных групп и обладающим, при наличии соответствующих штаммов, высокой селективностью. Немаловажную роль играет в этом случае и экологическая безопасность. Как правило, гидроксилирование ¦ сопровождается образованием ряда побочных продуктов, затрудняющих выделение и очистку целевого соединения. Продолжает оставаться неизвестной физиологическая роль гидроксилирования стероидов грибами, у которых скорость, направление и ориентация трансформации зависят от вида микроорганизма, трансформируемого субстрата и ряда биологических и физико-химических факторов, тогда как у бактерий данные реакции являются промежуточными этапами расщепления стероидов до СОг и Н20 и не находятся в прямой зависимости от условий роста и трансформации. Поэтому актуален подбор условий, позволяющих осуществить процесс гидроксилирования селективно 1 с максимальным выходом целевого продукта.

Состояние вопроса.

Химический синтез стероидных соединений труден и многостадиен, и, как правило, наиболее сложным этапом этого синтеза является введение гидроксильной группы. При модификации стероидной молекулы предпочтение отдается микробиологическимспособам трансформации, имющим' ряд преимуществ перед химическими методами. Зачастую, гидроксилирование с помощью микрооргнаизмов является единственно возможным способом [68].

Однако, несмотря на полувековую историю применения микробиологических методов трансформации стероидов, процесс гидроксилирования по-прежнему остается наименее изученным. Недстаточно сведений о зависимости направленности гидроксилирования от структуры стероидного субстрата и таксономического положения микроорганизма-трансформатора. а.

Используемые в известных способах синтеза штаммы недостаточно селективны, и микробиологические процессы проводятся при низких нагрузках стероидного субстрата с низкими выходами целевых соединений, а образующиеся многочисленные побочные продукты значительно затрудняют стадии выделения и очистки. Поэтому актуален поиск новых штаммов с высокой стереои регео-специфической гидроксилазной активностью и подбор условий, позволяющих осуществлять данный процесс селективно и с максимальным выходом целевого продукта.

В настоящее время идентифицированы различные микроорганизмы, использование которых позволяет осуществить почти все возможные трансформации стероидной молекулы. Из них наибольшую практическую значимость имеют следующие реакции: гидроксилирование (7а/(3, 9a-, 11а/(3-, 14а-, 15а/р, 16а-), 1,2-дегидрирование и селективное отщепление боковой цепи стеринов и желчных кислот, получившие промышленное применение в производстве стероидных лекарственных препаратов.

Объектами настоящего исследования являются практически значимые процессы направленного lipи 14а-гидроксилирования, открывающие пути синтеза новых модифицированных стероидов с ценными фармакологическими свойствами.

Анализ фактического материала, накопленного к настоящему времени, свидетельствует о том, что, в отличие от 11а-гидроксилирования, которое осуществляет достаточное число микроорганизмов, способность к накоплению 11 (3-гидроксистероидов с удовлетворительным выходом, но в смеси с 11 а-гидроксипродуктами, присуща ограниченному количеству видов грибов (Absidia orchidis, Cunninghamella blcikesleeanci, Cimninghamella elegans, Cochliobolus lunatus). Лишь штаммы Curvularia Innata (коллекцийATCC, IFO, NRRL, BKM, ВКПМ и др.) из 35 известных видов широко распространенного в природе плесневого гриба рода Curvularia, проводят гидроксилирование Д4−3-кетостероидов преимущественно в 1lp-положение и применяются в промышленности для получения гидрокортизона и его производных.

Однако, несмотря на внушительное число исследований, выполненных с различными штаммами грибов и, главным образом с С. lunata, особого прогресса в процессе 11 p-гидроксилирования не наблюдается, используемые штаммы далеки от совершенства, а нагрузки субстратов невысоки.

Интерес к реакции 14а-гидроксилирования обусловлен тем, что 14а-гидроксистероиды или сами по себе обладают физиологической активностью, или открывают путь к синтезу соединений с высокой контрацептивной и канцеролитической активностью [158]. Однако в мировой практике используются только несколько препаратов этого ряда, что объясняется трудностью их синтеза, а конкретно — сложностью введения гидроксильной группы в стерически затрудненное 14а-положение. Кроме того, микробиологическое 14а-гидроксилирование по сравнению с 9аи 11(3-гидроксилированием менее изучено.

В целом, анализ литературных данных свидетельствует о том, что несмотря на большое количество работ, посвященных проблемам 1 ip~ и 14а-гидроксилирования, многие вопросы, имеющие ключевое значение для решения проблемы селективности и повышения эффективности этих процессов остаются недостаточно изученными.

Поэтому представлялось целесообразным разработать и оптимизировать способы направленного 11ри 14а-гидроксилирования, обеспечивающие селективность процесса, а также максимальную нагрузку исходного субстрата и выход целевого продукта. Кроме того, планировалось на основе полученных гидроксистероидов разработать схему синтеза гестагенов нового поколения (аналогов пролигестона) и изучить их биологическую активность.

Цели и задачи работы. Основной целью работы являлась разработка методов направленного lipи 14а-гидроксилирования стероидной молекулы, открывающих путь к синтезу высокоактивных аналогов стероидных лекарственных препаратов.

В ходе работы необходимо было решить следующие задачи:

1. выявить наиболее активные штаммы со способностью к 11[3- и 14а-гидроксилированию стероидов андростанового и прегнанового рядов;

2. провести селекционные работы с выбранными штаммами для разработки способов 11(3- и 14а-гидроксилирования с повышенными нагрузками стероидных субстратов;

3. исследовать взаимосвязь между строением стероидной молекулы и направлением реакций гидроксилирования с помощью выбранных микроорганизмов;

4. разработать эффективный способ 14а-гидроксилирования андростендиона как первой стадии синтеза препаратов для медицины и ветеринарии антигонадотропного и канцеролитического действия;

5. разработать эффективный способ 11 |3-гидроксилирования Д4−3-кетостероидов для синтеза высокоактивных аналогов стероидных лекарственных препаратов;

6. провести исследования по синтезу пролигестона и его аналогов из андростендиона и наработать 14а-гидроксилированные производные прегнана для изучения их биологической активности.

Научная новизна работы. Методом селекции при непосредственном участии автора получен новый штамм Curvularia Innata с маркером резистентности к антибиотику генетицину «G-418», отличающийся от известных штаммов высокой селективностью в процессе 11 (3-гидроксилирования. Штамм депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под номером F-988 и защищен патентом РФ № 2 399 674 (Бюл. Изобр. № 26 от 20.09.2010).

Впервые с использованием штамма С. lunata ВКПМ F-988 разработан способ направленного 11 р-гидроксилирования Д4−3-кетостероидов, который может быть использован при разработке биотехнологических методов получения новых лекарственных препаратов противовоспалительного и антиаллергического действия.

Впервые с использованием штамма С. lunata ВКПМ F-981, полученного ранее в лаборатории биотехнологии стероидов, разработан способ направленного 14а-гидроксилирования А4−3,17-дикетоандростенов, перспективных в синтезе новых стероидных препаратов канцеролитического, контрацептивного и антигонад отропного действия. На способ 14а-гидроксилирования получен патент РФ № 2 407 800 (Бюл. Изобр. № 36 от 27.12.2010).

Оптимизированы процессы 11(3- и 14а-гидроксилирования новыми штаммами грибов, что позволило значительно увеличить нагрузку некоторых стероидных субстратов в реакциях гидроксилирования грибами.

Осуществлен синтез пролигестона из основного предшественника андростендиона с использованием на первой стадии разработанного метода направленного 14а-гидроксилирования.

Впервые показана возможность использования 14а-гидроксикортексолона в качестве интермедиата в синтезе гестагенов нового поколения.

Впервые получен новый 21-ацетокси-аналог пролигестона с высокой контрацептивной активностью.

Практическая значимость работы. Результаты работы являются основой новых биотехнологических методов получения ценных гидроксистероидов, которые или сами по себе обладают высокой биологической активностью или являются полупродуктами синтеза новых высокоэффективных аналогов стероидов.

Полученные в процессе исследования штаммы могут быть использованы в промышленном производстве стероидных лекарственных препаратов с уникальной фармакологической активностью.

Проведенная оптимизация способов направленного 11(3- и 14а-гидроксилирования стероидов позволит использовать эти методы при масштабировании процессов синтеза гидроксилсодержащих стероидных аналогов с ценными терапевтическими свойствами.

Разработан способ получения гестагенов нового поколения и показана их высокая контрацептивная активность.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК, 1 сообщение, 5 тезисов и 2 патента РФ.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на российских и международных конференциях: I Всероссийской научно-практической конференции «Питательные среды и методы культивирования клеток для биологии, медицины и биоиндустрии: фундаментальные и прикладные аспекты» (2007, Пущино), XX зимней международной молодёжной научной школе «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии» (2008, Москва), XXVIII Российской Школе «Наука и технология» (2008, Миасс), V Московском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (2009, Москва), Международной научной конференции по биоорганической химии, биотехнологии и бионанотехнологии, посвященной 75-летию со дня рождения академика Юрия Анатольевича Овчинникова. (2009, Москва) — Международной конференции «Передовые технологии российских инноваторов» (2010, Париж.).

Структура и объём диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей описание материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, выводов, списка цитируемой литературы. Работа содержит 119.

5. ВЫВОДЫ:

1. Изучена субстратная специфичность С. lunata ВКПМ F-981 и показана зависимость направленности гидроксилирования от строения стероидной молекулы.

2. Разработан метод направленного 14а-гидроксилирования стероидов с помощью штамма С. lunata ВКПМ F-981 как первой стадии синтеза высокоактивных препаратов для медицины и ветеринарии антигонадотропного, контрацептивного и канцеролитического действия. Способ позволяет достигнуть полной конверсии АД за 48 ч с нагрузкой 6.0 г/л, и выходом 14а-ОН-АД 60%. На способ получен Патент РФ № 2 407 800 (Бюл. Изобр. № 36 от 27.12.2010).

3. Разработан способ направленного 11 |3-гидроксилирования стероидов с помощью нового штамма С. lunata ВКПМ F-988. Способ позволяет проводить 11 |3-гидроксилирование кортексолона с нагрузкой до 20 г/л за 48 ч трансформации с выходом гидрокортизона 60% и может быть использован в промышленном масштабе для синтеза высокоактивных глюкокортикостероидных препаратов противовоспалительного, антиаллергического и противошокового действия. На способ получен патент РФ № 2 399 674 (Бюл. Изобр. № 26 от 20.09.2010).

4. Подобраны оптимальные условия 11 ß—гидроксилирования 16-метилсодержащих аналогов кортексолона, позволяющие получать полупродукты синтеза дексаметазона и других фторированных противовоспалительных кортикостероидов с выходом 50% при нагрузке субстрата 10 г/л, что значительно превышает мировые стандарты.

5. Разработана схема синтеза пролигестона и его аналогов из 3,17-дикетоандростенов (АД, АДД и 9а-ОН-АД) — полупродуктов синтеза стероидных лекарственных препаратов из растительного сырья.

6. Проведен синтез пролигестона из 14а-ОН-АД, полученного микробиологическим путем по разработанному способу.

7. Получен ранее не описанный в литературе аналог пролигестона -21-ацетат-14а, 17а-пропилидендиокси-4-прегнен-21-ол-3,20-диона — из 14а-OH-«S» с высокой контрацептивной активностью.

Показать весь текст

Список литературы

  1. В.А., Савинова Т. С., Гриненко T.C.II 1997. Патент РФ № 2 091 019.
  2. В.А., Савинова Т. С., Скрябин К. Г., Зейналов O.A.// 1998. Патент РФ № 2 101 013.
  3. В. А. Савинова Т. С., Скрябин К. Г. Способ получения прегнанов.// 2000. Патент РФ № 2 156 255.
  4. .А., Суходольская Г. В., Кощеенко К. А. Микробиологическое 11? гидроксилирование стероидных соединений грибами Cunninghamella и Смгга/агш.//Микробиология. 1985. Т. 54. № 5. С. 704−709.
  5. К.Д., Медведев Г. Ф. Акушерство, гинекология и биотехника размножения животных. Минск: Урожай. 1997. 718 с.
  6. A.A., Быков A.C., Пашков Е. П., Рыбакова A.M. Микробиология. — М.: Медицина. 1996. 288 с.
  7. Н.Е., Андрюшина В. А., Савинова Т. С., Стыценко Т. С., Трансформация андростендиона и андростадиендиона бактериями, деградирующими стерины.//Прикл. Биохим. Микробиол. 2004. Т. 40. № 5. С.: 536- 543.
  8. И.М., Кривова А. Ю. Технология ферментных препаратов, 3-е изд., перераб. и доп. М.: Колос. 2000. — 512 с.
  9. A.B., Ядерец В. В., Войшвилло Н. Е., Стыценко Т. С., Андрюшина В.А.//Тезисы докладов VII Международного форума Биотехнология и современность.2006. С.: 30−31.
  10. Н. П. Химическая микробиология. С-Пб.: Наука. 1995.- 600 с.
  11. O.A., Андрюшина B.A., Скрябин К. Г. «Новые гестагенные препараты для ветеринарии». //Российский ветеринарный журнал. 2005. № 1. С.: 16−20.
  12. В.А. Акушерство и гинекология мелких домашних животных. 1990 г. 268 270 с.
  13. Ю.Д., Жирков Г. Ф., Гриненко Г. С. Авт. свид. СССР № 572 248. 1977. Т. 54. № 34. 6 С.
  14. В.В., Бойкова В. В., Гриненко Г.С.// Хим.-фарм. ж. 1983. Т. 17. № 12. С.: 1454—1457.
  15. В.В. Вопросы онкологии. 1997. Т. 43. № 3. С.: 317—320.
  16. А.Г. Бюл. Всес. НИИ физиологии и биохим. питания сельскохозяйственных животных. 1981. Т. 15. № 2. С.: 11—14.
  17. Лекарственный справочник врача-офтальмолога. Под ред. Астахова Ю. С. С-Пб.: Сага. 2002. — 175 с.
  18. М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, 1993.- 688 с.
  19. В. Я. Студенцов А.П. Шипилов B.C. Акушерство, гинекология и биотехника размножения животных.- М.: Колос. 2005. 512 с.
  20. Г. Д. Суманова И.А. Акушерство, гинекология и биотехника воспроизводства животных.- М.: Форум. 2009. 176 с.
  21. М.И., Кадатский Г. М., Сабиров Т. К. Регуляция воспроизводительной функции у коров прогестагенами.//Зоотехния. 1994. № 12. С.: 21−24.
  22. .Н. Основы эндокринологии. — М.: Высшая школа. 1980.-336 с.
  23. М.И., Гриненко Г. С. Синтез прегнанов на основе 17-кетоандростанов.//Хим.-фарм. Журнал. 1992. № 9−10. С.: 97−106.
  24. Дж. Руководство по репродукции неонатологии собак и кошек. М.: Софион. 2005. — 207 с.
  25. В.А., Ермолина С. А. Современные лекарственные средства для лечения собак и кошек. М.: Аквариум-Принт. 2004.- 496 с.
  26. Т.С. История медицины: — М.:Академия, 2004. 368 с.
  27. Г. В., Ангелова Б., Кощеенко К. А., Басовская И. М., Скрябин Г.К.//Патент РФ № 1 411 336.
  28. Г. В., Ангелова Б. А., Кощеенко К. А. Физиолого-биохимические особенности культуры Curvularia lunata ВКМ F-644, осуществляющей 11 ß--гидроксилирование стероидных субстратов. //Прикладная биохимия и микробиология. Т. 22. № 2. С.: 226−237.
  29. А. М., Н.Е. Войшвилло, A.B. Камерницкий. Микробиологическое гидроксилирование 5а-Н-стероидов.//Успехи химии, 1992. Т. 61 № 10. С.: 1883−1932.
  30. Физер JL, Физер М.Стероиды. -М.: Мир. 1964. 983 с.
  31. С.Б., Суходольская Г. В., Баклашова Т. Г., Кощеенко К. А. Особенности процесса 11 ß--гидроксилирования стероидных соединениймицелием Curvularia lunata BKM F-644 в присутствие ß--циклодекстрина.// Прикл. Биохим. Микробиол. 1992. Т. 28. С.: 685−693.
  32. Alexander D.L., Fisher J.E., A convenient synthesis of 7 alpha-hydroxycholest-4-en-3-one by the hydroxypropyl-beta-cyclodextrin-facilitated cholesterol oxidase oxidation of 3 beta, 7alpha-cholest-5-ene-3,7- diol.//Steroids. V. 60. № 3. 1995. P.: 290−294.
  33. Arinbasarova A.Y., Karpov A.V., Fokina V.V., Medentsev A.G., Koscheyenko K.A. Kenetic characteristics of 1-en-dehydrogenaiton of 6a-methylhydrocortison by cell of Arthrobacter globiformis-93.//EnzyQ Microb Technol. 1996. V. 19. № 7. P.: 501−506.
  34. Asada S. Microbial manufacture of 14a-hydroxy-4-androstene-3,17-dione.//Japanese Patent. 1994. № 6 225 791.
  35. Atrat P, Hosel P, Richter W, Meyer HW, Horhold С. Interactions of Mycobacterium fortuitum with solid sterol substrate particles.//J Basic Microbiol. 1991. V. 34. № 6. P.: 413−423.
  36. Bayunova V. I., Gabinskaya К. N., Kolyvanova T. S, Korobova Yu. N., Grinenko G. S.. Transformation of androst-4-ene-3,17-dione and androsta-l, 4-diene-3,17-dione by means of Beauveria sp. II.//Pharm. Chem. J. 1989. V. 33. №. 4. P.: 352−355.
  37. Beck D. M., Gilbert I. G., Whitw M. J. Microbial process for preparation of 7-lceto dehydroepiandrosterone and related analogs.//WO Patent № 3 148. 2005.
  38. Bensasson C.M., Hanson J.R., Hunter A.C. The hydroxylation of A5-androstanes by Cephalosporium aphidicolaJiPhytochomestry. 1998. V. 49. № 8. P.: 2355−2358.
  39. Bensasson C., Hanson J. R. The microbiological hydroxylation of des-ring D androstanes by Cephalosporium aphidicola.Ui. Chem. Research. 2003. V. 2003. № 3. P.: 124−125.
  40. Borrego S., Niubo E., Ancheta O., Espinosa M. E. Study of the microbial aggregation in Mycobacterium using image analysis and electron microscopy.// Tissue & Cell. 2000. V. 32. № 6. P.: 494−500.
  41. Boynton J., Hanson J. R., Hunter A. C. The hydroxylation of some 13a-methylsteroids by Cephalosporium aphidicola.//Phyiochemlstvy. 1997. V. 45. № 5. P.: 951−956.
  42. Breiter S., Schlosser D., Weiss D., Schmauder H.P. Microbial hydroxylation of androsta-1, 4-diene-3, 17-dione.//Nat. Prod. Res. 1995. V. 6. № 1. P.: 7- 14.
  43. Breslcvar K. Ferencak Z, Hudnik-Plevnik T. The role of cytochrome P450 (11 alpha) in detoxification of steroids in the filamentous fungus Rhizopus nigricans J/J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 1995 V. 52. № 3. P.: 271−275.
  44. Chen K-C, Wey H-C. Dissolution-enzyme kinetics of lip-hydroxylation of cortexolone by Curvularia lunata. llEnzyme Microb Technol. 1990. V. 12. № 8. P.: 616−621.
  45. Chiang J.Y. Regulation of bile acid synthesis.//Front Biosci. 1998. V. 15. № 3. P.:176−193.
  46. Chincholkar S.B., Seeta Laxman R., Wakharlcar R.D. Hydroxylation of progesterone by Cunninghamella blakesleeana NCIM 687.//World Journal of Microbiology & Biotechnology. 1995. V. 11. № 3. P.: 357−358.
  47. P., Vidal H., Aumelas A., Couderc F. 11 P-Hydroxy lation of norethisterone acetate by Curvularia lunata.llMicrobiol. Lett. 1991. V. 83. №. I.P.: 17−22.
  48. Choudhary MI, Sultan S, Khan M. T, Rahman A.U. Microbial transformation of 17alpha-ethyny 1- and 17alpha-ethylsteroids, and tyrosinase inhibitory activity of transformed products.// Steroids. 2005 Nov-70(12):798−802.
  49. Cotillon AC, Morfin R. Fusarium moniliforme 7a-hydroxylase: a new tool for the production of iminunostimulating steroids. Biotrans 97, La Grande Motte, France: Abstract Book- 1997. p. 126.
  50. Cotillon A.C., Doostzaech J., Morfin R. The inducible and cytochrome P-450 containing of Fusarium moniliforme.//L Steroid Biochem Mol Biol. 1997. V. 62. № 5−6. P.: 465−475.
  51. Cruz A., Fernandes P., Cabral J. M. S., H. M. Pinheiro. Whole-cell bioconversion of P-sitosterol in aqueous-organic two-phase systems.//J Mol Catal B: Enzymatic. 2001. V. 11. № 4−6. P.:579−85.
  52. Das S., Dutta T. K., Samanta T. B. Influence of substituents at Cn on hydroxylation of progesterone analogs by Bacillus sp.//J. Steroid Biochem. Mol. Biology. 2002. V. 82. № 2−3. P.: 257−261.
  53. Dlugonski J., K. Paraszkiewicz, L. Sedlaczelc. Maintenance of steroid 11-hydroxylation activity in immobilized Cunninghamella elegans protoplasts// J. Microbiology & Biotechnology, 1997 (13). P. 469−473-
  54. F.J., Cotillon A.C. 7a-Hydroxylation of dehydroepiandrosterone and pregnenolone by bioconversion using Fusarium moniliforme.//Fr Patent. 1999. № 2 771 105.
  55. Draygan C.A., Zearo S., Hannemann F., Bernhardt R., Bureik M. Efficient conversion of 11-deoxycortisol to Cortisol (hydrocortisone) byrecombinant fission yeast Schizosaccharomyces pombe.//FEMS Yeast Research. 2005. V. 5. P.: 621−625.
  56. Dutta T.K., Samanta T.B. Byconversion of Progesterone by the Activated immobilized conidia of Aspergillus ochraceus TS.//Curr Microbiol. 1999. V. 39. № 6. P.: 309−0312.
  57. Evans J.M., Sutton D.J. The use of hormones, especially progestagens, to control oestrus in bitches.//J Reprod Fertil. 1989. V.39. P.: 163 173.-
  58. Faramarzi M.A., Tabatabaei M. Y., Amini M., Zarrini G, Shafiee A. Microbial hydroxylation of progesterone with Acremonium striatum J/FEMS Microbiol Lett, 2003. V. 222. № 2. P.: 183−186-
  59. Faramarzi M.A., Badiee M., Tabatabaei Yazdi M., Amini M., Torshabi M., Formation of hydroxysteroid derivatives from androst-4-en-3,17-dione by the filamentous fungus Mucor racemosus./U Mol Catal B: Enzymatic. 2008. V. 50. № 1. P.: 7−12.
  60. Faramarzi M. A, Aghelnejad M., Tabatabaei Y. M, Amini M., Hajarolasvadi N. Metabolism of androst-4-en-3,17-dione by the filamentous fungus Neurospora crassa./lSteroids. 2008. V. 73. № 1. P.: 13−18.
  61. Farooq A., Hanson J. R, Iqbal Z. Flydroxylation of progesterone by Cephalosporium aphidicola.//Phytochemistry. 1994. V. 37. № 3. P.: 723−726.
  62. Farooq A., Hanson J.R. Oxidation of two pregnane steroids catalyzed by the fungus Cephalosporium aphidicola.// Biosci. Biotechnol. Biochem. 1999. V. 63. № 10. P.: 1798−1799.
  63. Felig P., Frohman L. A. Endocrinology and metabolism.//NY: McGraw-Hill. 2001.- 1562 P.
  64. Fernandes P., Cruz A., Angelova B., Pinheiro H.M. Microbial conversion of steroid compound: recent development.//Enzyme Microb Technol. 2003. V. 32. P. 688−705.
  65. Gallimore W. A., Reese P. B., Wilsonl M. R. Steroid transformations with Fusarium oxyspomm var. cubense and Colletotrichum musae.//Steroids. 1999. V. 64. № 12. P.: 834−843.
  66. Greenberg-Ofrath N., Terespolosky Y., Kahane I., Bar R. Cyclodextrins as carries of cholesterol and fatty acids in cultivation of Mycoplasmas.//Appl Environ Microbiol. 1993. V. 59. № 2. P.: 547−551.
  67. Griffiths D.A., Brown D.E., Jezequel S.G. Biotransformation of warfarin by the fungus Beauveria bassiana. HAppl Microbiol Biotechnol. 1992. V.37. P.- 169−175.
  68. Goetschel R, Bar R. Formation of mixed crystals in microbial conversion of sterols and steroids.// Enzyme Microb Technol. 1992. V. 14. № 6. P.:462−469.
  69. Grogan G.J., Holland H. L. The biocatalytic reactions of Beauveria spp./tt Mol Catalysis B: Enzymatic. 2000. V. 9. № 1−3. P.: 1−32.
  70. R., Lapcik O., Hill M., Klak J., Kasal A., Novacek A., Sterzl I., Sterzl J., Starka L. 7-Hydroxydehydroepiandrosterone a natural antiglu-cocorticoid and a candidate for steroid replacement therapy?//Physiol. Res. 2000. 49. Suppl. 1. P.: 107−112.
  71. Halmos G, Janzso B, Olasz K. Optimization of the 11-hydroxylation of levodione by Aspergillus awamori. ll Acta-Microbiol Immunol Hung. 1996. V. 43. P.:262−263.
  72. Hanson J.R., Nasir PL, Parvez A. The hydroxylation of testosterone and some relatives by Cephalosporium aphidicola. l'/Phytochemistry. 1996. V. 42. № 2. P.: 411−415.
  73. Holland H., Poddar S., Tripet B. Effect of cell immobilization and organic solvents on sulfoxidation and steroid hydroxylation by Mortierella isabellina. ilJ of Ind Microbiol. 1992. V. 10. P.: 195−197.
  74. Holland H., Morris T., Nava P., Zabic M. A new paradigm for biohydroxylation by Beauveria bassiana ATCC 7159//Tetrahedron. 1999. V. 55. p.: 7441−7460.
  75. Holland H. L., Brown F. M., Barrett F., French J., Johnson D. V. Biotransformation of beta-lcetosulfides to produce chiral beta-hydroxysulfoxides.//J Ind Microbiol Biotechnol. 2003. V. 30. № 5. P.: 292−301.
  76. Huszcza E., Dmochowska-Gladysz J. Transformations of testosterone and related steroids in Absidia glauca culture.//J. Basic Microbiol. 43 (2003) 2, 113−120
  77. Houng J-Y, Chiang W-P, Chen IC-C, Tiu C. 1 la-Hydroxylation of progesterone using alginate entrapped Aspergillus ochraceus gel beads coated with polyurea.// Enzyme Microb Technol. 1994. V. 16. № 6. P.: 485−491.
  78. Hu S-H, Genain G., Azerad R. Microbial transformation of steroids: Contribution to 14a hydroxylations.// Steroids. 1995. V. 60. № 4. P.: 337−352.
  79. Huang S.H., Xu S.W., Fa Y.H. 11 ?-hydroxylation of 16a-methyl-Reichstein's compound S 21-acetate by Curvularia lunata. ll Wei Sheng Wu Xue Bao. 1989. V. 29. № 1. P.: 68−71.
  80. Iqbal Choudhary M., Adnan Ali Shah S., Ghulam Musharraf S., Shaheen Farzana, Atta-Ur-Rahman. Microbial transformation of dehydroepiandrosterone.//Nat Prod Res. 2003. Vol. 17. № 3. P.: 215−220
  81. Irrgang S., Schlosser D., Schmauder H.-P. The steroid 15-hydroxylase of Penicillium raistrickii is inducibIe.//Biotechnology Letters Vol 14 No 1 33−38 (1992)
  82. Jekkel A, Ilkoy E, Horvath G, Pallagi I, Suto J, Ambrus G. Microbial hydroxylation of 13p-ethyl-4-gonene-3,17-dione. J Mol Catal B: Enzymatic 1998−5:385−7.
  83. Jackson, S.L., Heath, I.B. 1993 Roles of calcium ions in hyphal tip growth.//Microbiol. Rev. V. 57io № 2. P.: 367−382.
  84. Jones E. R. H. Microbiological hydroxylation of steroids and related compounds.// Pure Appl. Chem. V. 33. № 1. P. 39−52.
  85. Keith B. D. Systematic review of the clinical effect of glucocorticoids on nonhematologic malignancy.//BMC Cancer. 2008. V. 8. P.: 84 102.
  86. Knottenbelt C.M., Heritage M.E. Use of proligestone in the management of three German shepherd dogs with pituitary dwarfism.//J Small AnimPract. 2002. V. 43. № 4. P.:164−170.
  87. Kolek T. Biotransformation XLVII: transformations of 5-ene steroids in Fusarium culmorum culture//J Steroid Biochem Mol Biol. 1999. V. 71. № 1−2. P.: 83−90.
  88. Kolek T., Swizdor A. Biotransformation XLV. Transformations of 4-ene-3-oxo steroids in Fusarium culmorum culture.//J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 1998, vol. 67, no. 1, pp. 63−69.
  89. Kollerov V. V, Shutov A.A., Fokina V.V., Sukhodol’skaya G.V., Donova M.V. Biotransformation of 3-keto-androstanes by Gongronella butleri VKM F-1033.// J Mol Catalysis B: Enzymatic. 2008. V. 55. № 1−2. P.: 61−68.
  90. Korycka-Machala M., Ziolkowski A., Rumijowska-Galewicz A., Lisowska K., Sedlaczek L. Polycations increase the permeability of Mycobacterium vaccae cell envelopes to hydrophobic compounds.//Microbiology. 2001. V. 147/P.: 2769−2781.
  91. Kumar R., Dahiya J. S., Singh D., Nigam P. Biotransformation of cholesterol using Lactobacillus bulgaricus in a glucose-controlled bioreactor.// Bioresour Technol. 2001. V. 78. № 2. P.: 209−211-
  92. Kutney J. P., Milanova R. K., Vassilev C. D., Stefanov S. S., Nedelcheva N. V. Process for the microbial conversion of phytosterols to androstendione and androstadienedione.// US Patent. 2000. № 6 071 714.
  93. Kutzler M., Wood A. Non-surgical methods of contraception and sterilization.//Theriogenology. 2006. V. 66. P.: 514−525.
  94. Lanisnik R. T., Wheeler M.H. Melanin biosynthesis in the fungus Curvularia lunata (teleomorph: Cochliobolus lunatus)./ICan J Microbiol. 2003 V. 49. № 2. P.: 110−119.
  95. Lathe R, Rose KA, Seckl JR, Best R, Yau JL, Leckie CM. Use of 7a-substituted steroids to treat neuropsychiatric immune or endocrine disordes.//World Patent № 37 664. 1997.
  96. Lathe R. Steroid and sterol 7-hydroxylation: ancient pathways.//Steroids. 2002. V. 67. № 12. P.: 967−977.
  97. Leon R., Femandes P., Pinheiro H. M., Cabral J. M. S. Whole-cell biocatalysis in organic media.//Enzyme Microb. Technol. 1998. № 23. P.: 483 500.
  98. Li X.-x., Wew Z., Kiao Kesheng, Wang M., Effect of P-cyclodextrin on growing characteristic of steroid biotransformation microorganisms.//Tianjin Keji Daxhle Xuebao. 2006. V. 21. № 3. P.: 1−4.
  99. Lisowska K., Dlugonski J. Concurrent corticosteroid and phenanthrene transformation by filamentous fungus Cunninghamella elegans./fi. Steroid Biochem Mol Biol. 2003. № 85. № 3. P.: 63−69.
  100. Lobastova T.G., Gulevslcaya S. A., Sukhodolskaya G. V., Turchin K. F., Donova M. V. Screening of mycelial fungi for 7a- and 7p-hydroxylase activity towards dehydroepiandrosterone.//Biocatal Biotransformation. 2007. V. 25. № 6. P.: 434 -442.
  101. Lu W.-Y., Du L.-X., Wang M., Wen J.-P., Sun B., Guo Y.-W. Effect of two-steps substrate addition on steroids 11 (3-hydroxylation by Curvularia lunata CL-114.// Biochem. Eng. J. 2006. V. 32. P. 233−238.
  102. Lu W., Du L., Wang M., Jia X., Wen J., Huang Y., Guo Y., Gong W., Bao H., Yang J., Sun B. Optimisation of hydrocortisone production by Curvularia lunata. I/Appl Biochem Biotechnol. 2007. V. 142. P.: 17−28.
  103. LuW, Du L., Wang M., Guo Y., Lu F., Sun B., Wen J., Jia X. A novel substrate addition method in the 11 P-hydroxylation of steroids bu Curvularia lunata.//FoodBioprodProces. 2007. V. 85. № Cl. P.: 63−72.
  104. Madiastha K.M., Joseph T. Studies on the 14a-hydroxylation of progesterone in Mucor piriformis ./'/J Steroid Biochem. 1993. V. 45. № 6. P.: 563 569.
  105. Madyastha K. M. Preparatively useful transformations of steroids and morphine alkaloids by Mucor piriformis ./'/J Chem Sci. 1994. V. 106. № 5. P.: 1203−1212.
  106. Madyastha K. M., Joseph T. Transformation of 16-dehydroprogesterone and 17a-hydroxyprogesterone by Mucor piriformis.//Appl Microbial Biotechnol. 1994. V. 41. № 2. P.: 170−177.
  107. Madyastha K.M., Joseph T. Transformation of dehydroepiandrosterone and pregnenolone by Mucor piriformis.//Appl Microbiol Biotechnol. 1995. V. 44. № 3−4. P.: 339−343.
  108. Mahato S.B., Mukherjee A. Steroid transformations by microorgamisms. //Phytochemestry. 1984. V. 23. № 10. P.: 2134−2154.
  109. Mahato S.B. et al. Metabolism of progesterone and testosterone by a Bacillus ?-^.//Steroids. 1984. V. 43. № 5. P.: 545−558.
  110. Mahato S.B., Mazumder I. Current trends in microbial steroidtransformation.//Phytochemistry. 1995. V. 51. № 34. P.: 131−140.
  111. Mahato S.B., Garai S. Advances in microbial steroid biotransformation. //Steroids. 1997. V. 62. № 4. P.: 332−345.
  112. Manosroi J., Chisti Y., Manosroi A. Biotransformation of cortexolone to hydrocortisone by molds using a rapid color-development assay.//Appl. Biochem. Microbiol. 2006. V. 42. № 5. P.: 479−483.
  113. Manosroi J., Saowakhon S., Manosroi A. A novel one-step biotrans-formation of cortexolone-21-acetate to hydrocortisone acetate using Cunninghamella blakesleeana ATCC 8688a.//Enzyme Microbal Technology. 2007. V. 41. № 3. P.: 322−325.
  114. McMaster A., Ray David William. Modelling the glucocorticoid receptor and producing therapeutic agents with anti-inflammatory effects but reduced side-effects.// Exp Physiol. V. 92. № 2. P.: 299−309.
  115. Mori H., Shibata K., Tsuneda K., Savvai M. Synthesis of ecdysone 3. A novel synthesis of 14alpha-hydroxy-7-en-6-oxo steroids.//Chem. Pharm. Bull. 1968. V. 16. № 8. P.: 1593−1634.
  116. H. Peterson D. 14a-hydroxy-androstenediones and process.//US Patent. 1953. № 2 662 089
  117. Njar V. C. O., Shapiro S., Arunachalam T., Caspi E. Biotransformation of progesterone to 14a-hydroxypregna-l, 4-diene-3,20-dione, a novel fungal metabolite, by Colletotrichum antirrhini. il J. Steroid Biochem. 1985. V. 22. № 3. P.: 399−400.
  118. Novaka I., Kovac B. Electronic structure and biological activity of steroids.//Biophys Chem. 1999. V. 78. № 3. P.: 233−240.
  119. Paraszkiewicz K., Dlugorislci J. Cortexolone 11 (3-hydroxylation in protoplasts of Curvularia lunata,//J. Biotechnology. 1998. № 65. P.: 217−224.
  120. Pavko A., Komel R., Znidarsic P. Studies of a pelleted growth form of Rhizopus nigricans as a biocatalyst for progesterone 1 la-hydroxylation.//J Biotech. 1998. V. 60. № 3. P.: 207−216.
  121. Phase N., Patil S. Natural oils are better than organic solvents for the conversion of soybean sterols to 17-ketosteroids by Mycobacterium fortuitum. //World J Microbiol Biotechnol. 1994. V. 10. № 3. P.: 228−229.
  122. Preisig C. L, Laakso J. A., Mocek U. M, Wang P.T., Baez J., Byng G. Biotransformations of the cardiovascular drugs mexrenone and canrenone.//J. Nat. Prod. 2003. V. 66. № 3. P.: 350−356.
  123. Rolland G.J., Mantica L., Ciceri R.// Italian Pat. 1971. № 513 843.
  124. Rumijowslca A., Lisowska K., Ziolkowski A., Sedlaczek L. Transformation of sterols by Mycobacterium vaccae: effects of lecithin on the permeability of cell envelopes to sterols.// World J Microbiol-Biotechnol. 1997. V. 13. № 1. P.: 89−95.
  125. Schaaf O., Dettner K. Transformation of steroids by Bacillus strains isolated from the foregut of water beetles (Coleoptera:Dytiscidae): I. Metabolism of androst-4-en-3,17-dione (AD).//J.Steroid Biochem. Mol. Biol. 1998. V. 67. № 5−6. P.: 451−465.
  126. Schlosser D., Irrgang S., Shmauder H. P. Steroid hydroxylation with free and immobilized cells of Penicillium raistrickii in the presence of beta-cyclodextrin.//Appl Microbiol Biotechnol. 1993. V. 39. № 1. P.: 16−20.
  127. Shuvalova S. D., Gabinskaya K. N., Popova E. V., Savinova T. S., Andryushinal V. A. Hydroxylation of androst-4-ene-3,17-dione with the aid of Curvularia lanata fungus.//Pharm. Chem. J. 2002. V. 36. № 12. P.: 664−666.
  128. Sedlaczek L., Smith L. Biotransformations of steroids.//Crit. Rev. Biotechnol. 1988. V. 7. №. 3. P.: 187−236.
  129. Slijkhuis H., Marx A. F. Preparation of 9a-hydroxy-17-keto steroids using Mycobacterium species CBS 482 86.// 1994. Patent US. № 5.298.398.
  130. H. K., Shreve G. S. 1994. Solvent selection and productivity in multiphase biotransformation systems. Biotechnology progress. V.10. № 2. pp. 187−92.
  131. Smith K. E. Latif S., Kirk D. N. Microbial transformations of steroids-II. Transformations of progesterone, testosterone and androstenedione by Phycomyces blakesleeanus. il J Steroid Biochem. 1989. V. 32. № 3. P.: 445−451.
  132. Smith K. E., Latif S., Kirk D. N. Microbial transformations of steroids-V. Transformations of progesterone by whole cells and extracts of Botryosphaericaobtusa. ilJ Steroid Biochem. 1989. V. 32. № 1. P.: 445−451.
  133. Smith K. E., White K. A., Kirk D. N. Microbial transformations of steroids-III. Transformations of progesterone by Sepedonium ampullosporum. l'/J Steroid Biochem. 1989. V. 33. № 1. P.: 81−87.
  134. Smith M., Zahnley J., Pfeifer D., Goff D. Growth and cholesterol oxidation by Mycobacterium species in Tween 80 medium.//Appl Environ Microbiol. 1993. V. 59. № 5. P.: 1425−1429.
  135. Smith K. E., Ahmed F., Williams R. A.D., Kelly S. L. Microbial transformations of steroids—VIII. Transformation of progesterone by whole cells and microsomes of Aspergillus fumigatus./H Steroid Biochem Mol Biol. 1994. V. 49. № 1. P.: 93−100.
  136. P. Somal and C. L. Chopra Microbial conversion of steroids III: lla-hydroxylation by fungal mycelium.//Appl. Microbiol.Biotechnol. V. 21. P.: 267 269.
  137. Swizdor A., Kolelc T. Transformations of 4- and 17a-substituted testosteroneanalogues by Fusarium culmorum. il Steroids. 2005. V. 70. № 12. P.: 817−824.
  138. Tsellcas K. Y., Saratsis P. H. Study of the efficacy and safety of proligestone administration for the control of the ovarian cycle in thebitch.//Journal of the Hellenic Veterinary Medical Society. 1998 V. 49. № 1. P.: 44−47.
  139. Vasudevan P. T., Zhou T. Enzymatic assay of cholesterol by reaction rate measurements.//Biotechnol Bioeng. 1997. V. 53. № 4. P.: 391−396.
  140. Vitas M., Smith K., Rozman D., Komel R. Progesterone metabolism by the filamentous fungus Cochliobolus lunatus. ll^ Steroid Biochem Mol Biol. 1994. V. 49. № 1. P.: 87−92.
  141. Vitas M, Rozman D., Komel R., Kelly S.L. P450-mediated progesterone hydroxylation in Cochliobolus lunatus.llJ. Biotechnology. 1995. № 42. № 2. P.: 145−150.
  142. Wang J., Chen C., Li B., Zhang J., Yu Y. Production of hydrocortisone from cortexolone-21-acetate by immobilized Absidia orchidis in co-solvent containing media.//Enzyme Microb Technol. 1998. V. 22. № 5. P.: 368 373.
  143. M., Wuts P., Guillaume M., Beck D. 5-Androsten-3p-ol steroid intermediates and processes for their preparation.// 2006. US Patent. № 7 002 028.
  144. Williams David A., Foye William O. Lemke., Thomas L. Foye’s principles of medicinal chemistry. 6th edition. — Lippincott Williams & Wilkins, 2008. —C. 464. — 1377 c
  145. Yoshioka H., Asada H., Fujita S. Process for production of 6?, 14a-dihydroxy-4-androstene-3,17-dione.// 1994. European Patent. № 599 658.
  146. Znidarsic P., Komel R., Pavkol A. Infuence of some environmental factors on Rhizopus nigricans submerged growth in the form of pellets.//J Microbiol Biotech. 2000. V. 16. № 7. P.: 589−593.
  147. УТВЕРЖДАЮ Директор Центра «Биоинженерия» РАН1. Ака-4 марта 2010 года1. АКТ
  148. О наработке 14а-гидроксиандростендиона — ключевого промежуточного продукта для синтеза ветеринаринарных препаратов.
  149. В.В. Ядерец Н. Е. Войшвилло1. Т.С. Стыценко
Заполнить форму текущей работой

Пора сдавать?