Усовершенствование иммунохимических методов лабораторной диагностики классической чумы свиней
Диссертация
Апробация работы. Результаты выполненных исследований доложены и обсуждены на отчетных сессиях ВНИВИ (1998;2002) — на конференции, посвященной 125-летию КГАВМ (г. Казань, 1998) — на юбилейной конференции, посвященной 40-летию ВНИИВВиМ (г. Покров, 1998) — на юбилейной научной конференции, посвященной 70-летию НИИ микробиологии МО РФ (г. Киров, 1998) — на конференции по актуальным проблемам… Читать ещё >
Содержание
- 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
- 1. 1. Современное представление о возбудителе классической чумы свиней (КЧС)
- 1. 2. Распространение КЧС
- 1. 3. Лабораторная диагностика классической чумы свиней
- 2. УСЛОВИЯ И МЕТОДЫ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ
- 2. 1. Материалы
- 2. 2. Методы исследований
- 3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ (ОСНОВНАЯ) ЧАСТЬ ДИССЕРТАЦИИ
- 3. 1. Подбор оптимальных условий культивирования вируса
- 3. 2. Изучение антигенного состава вируса КЧС штамма «Ши-Мынь»
- 3. 2. 1. Очистка, выделение и концентрирование антигена вируса
- 3. 2. 2. Анализ полипептидного профиля возбудителя КЧС в однородной и градиентной системах ПААГ
- 3. 2. 3. Выявление и оценка специфических антигенных структур возбудителя КЧС методом иммуноблотинга
- 3. 3. Сравнительная оценка эффективности способов получения антигена вируса КЧС
- 3. 3. 1. Оптимизация метода выделения, очистки и концентрирования специфического антигена вируса КЧС
- 3. 3. 2. Определение серологической активности иммунодоминантного белка вируса КЧС
- 3. 4. Определение антигенной (иммуногенной) активности полипептида вируса КЧС на белых крысах, кроликах, овцах
- 3. 4. 1. Подбор продуцентов, наиболее подходящих для получения иммунопреципитинов
- 3. 4. 2. Оценка специфической активности иммунопреципитинов к вирусу КЧС для обнаружения антигена возбудителя в ИЭОФ
- 3. 5. Усовершенствование ИФА для индикации возбудителя
- 3. 5. 1. Сравнительная оценка методов выделения и очистки иммуноглобулина О из сыворотки крови
- 3. 5. 2. Оптимизация способа выделения — Р (аЬ/)2 фрагментов
- 3. 5. 3. Изготовление иммунопероксидазных компонентов на основе — Р (аЬ/)2 фрагментов антител и их сравнительная характеристика
- 3. 6. Применение ИФА и ИЭОФ для индикации возбудителя
- 3. 6. 1. Прижизненная индикация возбудителя КЧС
- 3. 6. 2. Индикация возбудителя КЧС в патологическом материале
Список литературы
- Авилов B.C., Мникова Л. А., Сологуб В. К., Коромылов Г. Ф., Дзаитиев Б. Б., Сорокина Н. В., Егоров Н. М. Иммуноферментный анализ // Ветеринария. 1982. — № 8. — С. 33−36.
- Авроров A.A., Акулов A.B., Бурба Л. Г. и др. // Паталогоанатомическая диагностика болезни свиней / Под ред. Шишкова В. П. и др.-М.: Колос, 1984.-217с.
- Авцын А.П., Кондакова Л. И., Халанский A.C., Полякова Г. П., Чудиновская Н. В. Новая клеточная линия невриномы Гассерового узла крысы НГУК-1 //Цитология. 1989.-Т. 31. -№ 1.-С. 97−102.
- Агейкин В.А., Артамонов Р. Г., Чакветадзе С. С., Шевченко H.H. Влияние антибиотикотерапии на течение менингитового менингита у детей грудного возраста // Медицинский научный и учебно-методический журнал. -2002. № 6.-С. 40−45.
- Аренова Н.В., Павлович Н. В. Сравнительный анализ иммуного ответа кролика на антигена живых и убитых бактерий рода Francisella // Мол.ген.микроб. и вирусол. № 2. — 2001. — С. 26−30.
- Бакулов И.А., Буткин Е. И., Ведерников В. А., Юрков Г. Г. Эпизоотология с микробиологией. -М.: Агропромиздат, 1987. С.287−291.
- Балышева В.И., Жестерев В. И., Вишняков И. Ф., и др. Суспензионный метод культивирования вируса КЧС // Тез. докл. Всеросс. научн. практич. конф. Вирусные болезни сельскохозяйственных животных.- Владимир, 1995 г. С. 82.
- Безбородова C.B., Дрыгин В. В., Перевозникова H.A., Толокнов A.C., Старов С. К., Гусев A.A. Использование метода полимеразной цепной реакции для выявления вируса КЧС // Материалы научн. практич. конф. ВНИИВВиМ. — Покров, 1995. — С. 73.
- Белоусов В.И. Конструирование тест-системы ИФА для выявления левомицитина в пищевых продуктах // Тез. докл. Всерос. научн. практ. конф., посвящ. 30-летию ин-та. Щелково, 2000. — С. 286−287.
- Березин И.В. Состояние и перспективы развития иммуноферментного анализа // Бюлл. ВИЭВ. 1985. — В. 58. — С. 3−5.
- Бибов М.Ю., Павлова Т. В. Хроматографический метод получения донорского противолептоспирозного иммуноглобулина // Материалы конференции молодых ученых северного Кавказа по физиологии и валеологии 12−13 октября 2000. Ростов-на-Дону.
- Блинковский A.M., Чечик О. С., Попинский A.C., Ярославов A.A. Полистироловые карбоксилированные латексы как носители иммуносорбентов // ЖВХО им Д. И. Менделеева. 1989. — Т.34. — №.1. — С. 122−124.
- Буерова C.B. Усовершенствовование средств диагностики и идентификации возбудителя сибирской язвы: Автор, дис.. канд. биол. наук.- Казань, 2002. 22с.
- Васильев П.Г. Актуальные проблемы сибирской язвы: биология и индикация возбудителя, клиника, патоморфология и диагностика заболевания: Автореф. дисс. .докт. биол. наук. Казань, 2001. — 36 с.
- Вербов В.Н. Принципы твердофазного иммуноферментного анализа. Твердофазный иммуноферментный анализ // Тр. ин-та. 1988. — Т. 64. — С. 3−27.
- Веселов С.Ю., Синяков М. С., Хоритоненко И. Г., Гительман А. К., Васяев А. И. Разработка иммуноферментной тест-системы для количественной индикации гемагглютинина вируса гриппа в биологических образцах // Вопр. вирусол. 1985. — № 6. — С. 627−675.
- Виджюкайте P.A., Кулис Ю. Ю., Пемкус Ю. К. Иммобилизация иммуноглобулинов на активированных полиэтиленимином полистирольных носителях // Инженерная энзимология: Тез. IV Всесоюзн. Сипмозиума. -Вильнюс, 1988. -4.11. С. 5−6.
- Вишняков И.Ф., Цыбанова Л. Я. Иммуносорбентный анализ // Ветеринария. 1983. — № 9. — С. 68−70.
- Вишняков И.Ф. Диагностика классической чумы свиней // Ветеринария. 1986. — № 3. — С.27−30.
- Власенко С.Б., Гаврилова Е. М. Научные основы и перспективы применения в иммунохимических методах анализа хеми- и биолюминесцентных реакций // ЖВКО им. Д. И. Менделеева. 1989. — Т.34. -№ 1. — С. 24−30.
- Галиуллин А.К., Ахмеров Ж.ш., Низамов Р. Н., и др. Авторское свидетельство № 242 578, 2.10.85. М., 1985. — Фонд ВНИВИ.
- Галиуллин А.К., Гареев Р. Д., Барабанов В. И. и др. Авторское свидетельство № 307 620, 2.01.90. М., 1990. — Фонд ВНИВИ.
- Галиуллин А.К., Коксин В. П., Буерова C.B. Разработка и внедрение в ветеринарную практику иммунохимических тест-систем для диагностики и индикации возбудителя сибирской язвы // Вет. врач. Казань, 2001.-№ 2(6).-С. 31−34.
- Гизатуллин Х.Г., Юсупов Р. Х. Чума свиней и современные методы ее лабораторной диагностики. Казань,: Тат. Книжное издательство, 1973.- 120 с.
- Гмыль JI.B., Карганова Г. Г., Смирнова С. Е., Лашкевич В. А. Вирусологические белки вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки // Вопросы вирусологии. № 3. -2002. — С. 16−21.
- Горовиц Б.М., Еремин С. А., Осипов А. П., Егоров A.M., Казанская Н. Ф. Иммуноферментный анализ тироксина на полосках бумаги с визуальной детекцией // ЖВХО им. Д. И. Менделеева. 1989. — Т. 34. — №.1. — С. 124.
- Горский Б.В. Проявление чумы свиней на фоне рахита // Научн. тр. Казанского вет. ин-та. 1980. — Т. 133. — С. 33−35.
- Горский Б.В., Юсупов Р. Х. Ретроспективный анализ классической чумы свиней в крупных специализированных хозяйствах // Вет. пробл. пром. свиноводства. Киев, 1983. — С. 59−60.
- Грязева И.В., Климович В. Б., Пашкова С. Ф. Моноклональные антитела к легким цепям иммуноглобулинов человека и их применение в иммуноанализе // Иммунология. 1994. — № 3. — С. 31−37.
- Гулд Е., Клегг Дж. Культивирование и очистка тогавирусов // В кн.: Вирусология (методы). Под ред. Б.Мейхи.: «Мир», 1988. С.95−104.
- Гуненков В.В., Шарабрин О. И., Коромыслов И. Г. Диагностика иммуноферментным методом короновирусной инфекции крупного рогатого скота // Вестн. с.-х. науки. 1985. — № 11. — С. 112−124.
- Дзантиев Б.Б., Егоров A.M. Современное состояние и перспективы развития иммуноферментного анализа // Журн. Всесоюз. хим. об-ва им. Д. И. Менделеева. 1982. — Т. 27. — № 4. — С. 442−449.
- Дружинин В.В., Зубов C.B., Кнак Н. И. Прямой метод ИФА для выявления антител к поверхностному антигену вируса гепатита в (Анти-Hbs) // Инженерная энзимология: Тез. IV Всесоюзн. симпозиума Вильнус, 1988. -Ч.11.-С. 12−13.
- Дубровин В.М., Коломыцов A.A., Черятников C.JI. Ликвидация классической чумы свиней общеевропейская проблема // Вет. врач. № 3. 1997.-С. 56−57.
- Дудникова Е.К. Разработка и применение иммуноферментного анализа для выявления противоящурных антител в сыворотках крови животных: Автореф. дисс.. .канд. вет. наук. Владимир, 1997. — 25с.
- Егерева С.А., Юсупов Р. Х., Ильясова Г. Х. Чувствительность культур клеток к вирусу чумы свиней // Мат. респупл. научн. произ. конфер. «Актуальные вопр. ветер, и зоотехн.» Казань, 1992. — С.21.
- Егоров A.M. Современный иммунохимический анализ и перспективы его развития // ЖВХО им. Д. И. Менделеева. 1989. — Т. 33. -№ 5.-С. 494−502.
- Екимов А.Н., Загребина О. С., Кисина В. И., Говорун В. М. Метод генотипирования клинических изолятов Ureaplasma urealyticum биовара parvo // Мол.ген.микр. и вирусол. № 1. — 2001. — С. 28−32.
- Еремин С.А., Будавари М. И., Большакова Т. Д. Синтез пероксидазного конъюгата с помощью гетеробифункциональных сшивающих реагентов для целей иммуноферментного анализа тироксина // ЖВХО им. ДИ. Менделеева. 1989. — Т. 34. — № 1. — С. 117−119.
- Жданов В.М., Букринская А. Г., Сито А. Ф. Характеристика РНК вируса сендай при исследовании их полиакриламидных гелях // Вопрос, вирусологии 1971. — № 1. — С. 77−81.
- Жердев A.B., Резчиков A.A., Дзантиев Б. Б., Егоров A.M. Иммуноанализ ферментов // ЖВХО им Д. И. Менделеева. 1989. — Т.34. — № 1. — С. 38−46.
- Захарова И.Б., Викторов Д. В., Замараев B.C. Клнирование и экспрессия 7.55 Т.П.Н. KPNI фрагмента плазмиды РРМ1 Burkholderia pseudomallei bescherichia coli // Мол. ген. микроб, и вирусол. — № 2. — 2002. -С. 19−22.
- Ильяненко Б.И. Выделение и функционально-структурная характеристика Bacillus polymyxa // Мол.ген.микроб. и вирусол. № 2. — 2001. -С. 8−13.
- Ильясова Г. Ф., Насыров Ш. М. К вопросу оптимизации иммуноферментного анализа для контроля поствакцинального иммунитета // Тез. докл. научно-практ. конф. мол. ученных КГМА. -Казань, 1999. С. 5758.
- Ильясова Г. Ф., Цибулькин А. П., Сафин М. В., Угрюмова B.C., Матвеева Л. И. Фармаколгическая стимуляция продукции моноклональных антител к вирусу псевдобешенства // Тез. докл. Всеросс. научн. конф., посвящ. 30-летию института. Щелково, 2000. С. 230−231.
- Ильясова Г. Х., Юсупов Р. Х., Бусыгин К. Ф. и др. Способ получения иммуноспецифической сыворотки к вирусу классической чумы свиней на овцах донорах // Авторское свидетельство № 304 710. 1 декабря 1989.
- Карпенко Л.И., Игнатьев Г. М., Агафонов А. П., Порываева В. А., Лебедев Л. Р. и др. Конструирование и исследование антигенных свойств рекомбинантного штамма сальмонеллы, продуцирующего белок TBI // Вопросы вирусологии. № 2. — 2002. — С. 25−28.
- Карулин А.Ю., Дзантиев Б. Б. Поливалентное взаимодействие антиген-антитело: теоретические модели и роль в иммуноанализе клеток // ЖВКО им. Д. И. Менделеева. 1989. — Т. 34. — № 1. — С. 30−38.
- Кеннет Р.Г., Мак-Керн Т.Дж., Бехтол К. Б. Моноклональные антитела. Гибрид омы: новый уровень биологического анализа. Москва: Медицина, 1983. — 416с.
- Ким Б.Б., Гаврилова Е. М. Эффект ингибирования пероксидазной активности антителами к ферменту в реакции усиленной хемолюминисценции // ЖВХО им Д. И. Менделеева. 1989. — Т. 34. — №.1. -С. 116−117.
- Клестова З.С. Воздействие вируса КЧС на хромосомный аппарат клеток свиней // Тез. докл. научн. практ. конф. ВНИИВВиМ. — Покров, 1995. -С. 23.
- Клейман A.M., Сенюта Н. Б., Трякин A.A., Виноградова Т. В. и др. Экспрессия эндогенных ретровирусов семейства HERV K/HTDV у больных герминогенными опухолями яичника // Вопросы вирусологии. — № 6. — 2001. -С. 15−21.
- Кнорре Д.Г. ДНК- и РНК-зонды как альтернативы и дополнение иммунохимического анализа // ЖВКО им. Д. И. Менделеева. 1989. — Т. 34. -№ 1.-С. 52−60.
- Коксин</span> В.П., Алимов A.M., Ильясова Г. Х. и др. // Фонд НИВИ № 81 998
- Криевиня В.Я., Елигуашвили Р. К., Калнинь М. М. Разработка твердой основы для иммуноферментного метода // Вирус, гепатиты типов, А и В.-Рига, 1983.-С. 100−109.
- Кропотов B.C. Средства и методов повышения имуногенности вакцины против болезни Тешена: Атореф. дисс.. .канд. биол. наук. Покров, 2001.-28с.
- Купель JT.B., Лапидус A.M., Моторин Ю. А., Маркарен А. Н., Машко C.B. Выделение и свойства рекомбинантной бета-галактозызидазы // ЖВХО им Д. И. Менделеева. 1989. — Т. 34. -№.1. — С. 120−122.
- Куш A.A., Ворович М. Ф., Тугизов Ш. М., Тимофеева A.B. Моноклональные антитела к неструктурному белку вируса клещевого энцефалита NS 3 // Пробл. мед. иммунобиотехнол. / Матер. Всес. научн. конфер., октябрь. Л. 1988. — С. 137.
- Лобзин Ю. В. Рахманова А.Г., Антонов B.C., Усков А. Н. и др. Эпидемиология, этиология, клиника, диагностика, лечение и профилактика иксодовых клещевых боррелиозов // Рекоменд. для врачей. Санкт-Питербург. -2000.-15 С.
- Лыска В.М., Куринов В. В., Хухуров И. Ю., и др. Отработка условий получения очищенного вируса КЧС // Тез. докл. Научн. конфер. ВНИИВВиМ «Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии». Покров, 1990. — С.60−62.
- Лярски 3. Диагностика вирусных болезней животных. М.: «Колос». — 1980. — С.339−343.
- Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрун Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование // М."Мир". 1984. — С. 157−160.
- Массино Ю.С., Кизин В. А., Дмитриев А. Д. Новый подход к конструированию гибридом, основанный на использовании актиномицин-Д-резистентной линии миеломы мышей // Биол. эксперим. биол. и мед. 1991. -№ 11. — С. 511−514.
- Матюшичев В.Б., Потапенко Л. Б., Дементьев A.A., Соколов И. Н. оптимизация метода очистки антител для иммунофлюоресцентной диагностики гриппа // Вопр. вирусологии. 2001. — № 1. — С. 44−47.
- Мищенко Н.К. Разработка культуральной вирус вакцины для специфической профилактики КЧС. — Автореф. Дисс. на соиск. уч. степ. док. вет. наук. — 1981.-344 с.
- Мищенко Н.К. Чума: (классическая) свиней //В кн. Инфекцион. Болезни животных. М.: «Колос», 1987.-С. 19−20.
- Моренков О.С., Манцигин Ю. А. Выявление пролиферирующих клеток с помощью моноклональных антител к 5-брош-23-дизоксиуридину методом пероксидаза-антипероксидаза // Цитология. 1990. — Т. 32. — С. 12 251 228.
- Моренков О.С. Разработка иммуноферментных методов выявления антител к гликопротеину gB вируса болезни Ауески в сыворотке свиней // Вопросы вирусологии. 2000. — № 3. — С. 45−48.
- Непоклонов Е.А. Использование иммунопероксидазного метода для индикации антигена вируса инфекционного ронотрахеита в культуре клеток ПЭК // Пробл. вирусол. молек. биологии и гистологии с.-х. жив-х. -М., 1983.-С. 14−15.
- Непоклонов Е.А., Алипер Т. И., Ленева И. А. Методы лабораторной диагностики классической чумы свиней // Р. Ж. Вопрос. Вирусол. 1998. — № 4. — С. 152−158.
- Непоклонов Е.А. Классическая чума свиней: разработка методов лабораторной диагностики и средств специфической профилактики: Автореф. дис.. биол. наук. Москва, 2000. — 46 с.
- Непоклонова И.В. Применение метода ELISA для обнаружения антигена вируса ИРТ // Пробл. вет. иммунологии. М., 1985. — С. 152−153.
- Николаев В.П., Царькова В. А. Твердофазный иммуноферментный экспресс-анализ для обнаружения вирусных антигенов // Вопр. вирусол. -1984. Т. 29. — № 6. — С. 720−722.
- Ойвин И.А. Статистическая обработка результатов экспериментальных исследований // Патолог, физиол. и экспер. терапия. -1960. -№ 4.-С. 76−84.
- Осипов А.П., Арефьев A.A., Егоров А. И. Протчно-инфекционный иммуноанализ IgG человека в кинетическом режиме // ЖВХО им Д. И. Менделеева. 1989. — Т.34. — №.1. — С. 119−120.
- Осипов А.П., Егоров A.M., Лебедев В. А., Чечик О. С., Блинковский A.M. Одностадийный безраздельный метод радиоиммулогического определения биологически активных соединений // ЖВХО им. Д. И. Менделеева. 1989. — № 1. с. 127−129.
- Остерман JI.A. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование // М. «Наука», 1981. — С. 396.
- Падюков Jl.H., Семенов Б. Ф. перспективы развития средств иммунохимической диагностики бактериальных инфекций // ЖВХО им. Д. И. Менделеева. 1989. -Т.34. № 1. С. 11−18.
- Перадзе Т.в., Халонена П. Ф. Иммунологическая диагностика вирусных инфекций//М. «Медицина», 1985.-С. 193−228.
- Полевщиков A.B. Способ определения концентрации секреторного иммуноглобулина, А // Клиническая диагностика. 1994. — № 3. -С. 38.
- Попов В.И. Разработка и усовершенствование средств и способов специфической профилактики классической чумы свиней: Автреф. дисс.. докт. вет. наук. Покров. — 1981. — С. 109−110.
- Простяков А.П., Лутошников А. Г. Фракционирование очищенных препаратов вируса ящура методами гельфильтрации и электрофореза // Ящур. Владимир, 1970. — Т. 1. — С. 40−45.
- Равилов А.З., Киршин Б. А. и др. Отчет НИР. 1989. — № 5. Фонд ВНИВИ.
- Юб.Равилов А. З., Цибулькин А. П., Юсупов Р. Х., Макаев Х. Н., Угрюмова B.C., Ильясова Г. Ф. Методическеие рекомендации по применению ксимедона в качестве иммуностимулятора при вакцинации животных против инфекционных болезней. Казань, 1999. — С.4.
- Саарма М.Ю., Ярвекюльг JI.B. Перспективные направления в иммунодиагностике вирусов растений // ЖВХО им. Д. И. Менделеева. 1989. -Т.З. — № 1. — С.77−80.
- Самойлович М.П., Климович В. Б., Пашкова С.Вф. Профили антигенсвязывающей активности моноклональных антител IgG человека // Иммунология. 1996. — № 2. — С. 38−42.
- Сатаева А.Р. Выявление инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота животных с помощью различных вариантов иммуноферментного анализа: Автореф. дисс. .канд. биол. наук. Владимир, 1999.-23с.
- П.Сергеев В. А. Вирусные вакцины. Киев, 1993. — С. 292−294.
- Сергеев О.В. Пестивирусы // воп. Вирусологии. 1997. — № 1.386 С.
- Смирнова Н.И., Челдишова Н. Б., Заднова С. П., Кутырев В. В. Молекулярно-генетические особенности штаммов Vibrio cholerae classica, вызывавших эпидемию азиатской холеры в России в 1942 г. // Мол. ген. микроб, и вирусол. 2001. — № 4 — С. 12−18.
- Сосова Р.Ф. Эпизоотология. М.: «Колос», 1974. С.382−391.
- Суслопаров И.М., Плясунов И. В., Сафронов П. Ф., и др. Разработка и получение рекомбинантного антигена gD вируса простогогерпеса 1-го типа (HSV-1) // Мол.ген.микроб. и вирусол. 2001. — № 2. — С. 3437.
- Пб.Сюрин В. Н., Фомина Н. В. Частная ветеринарная вирусология. -М.: «Колос», 1979.-215 с.
- Сюрин В.Н., Белоусова Р. В., Соловьев Б. В., Фомина Н. В. Методы лабораторной диагностики вирусных болезней животных. М.: Агропромиздат., 1986. — 351с.
- Тимофеев A.B., Кондратьева Я. Ю., Карганова Г. Г., Стефенсон Дж. Протективная активность бактериальной плазмиды, несущей ген неструктурного белка NSI вируса клещевого энцефалита // Вопросы вирусологии. 2001. -№ 1. — С. 22−24.
- Тимофеева Т.А., Голяндо П. Б., Жирнов О. П. Адсорбция синтетических мембранах и иммуногенные свойства апротина, конъюгированного с помощью глутарового альдегида // Биорг.химия. 1999. -Т. 25.-№ 4.-С. 344−346.
- Ткачев С.Е., Сигитова Е. В., Митрофанова Е. Э., Дурыманов А. Г., Шестопалов A.M. Новый изолят парвовируса норок // Вопросы вирусологии. -2002.-№ 2.-С. 35−39.
- Тугарова A.B., Плотко H.A., Чумаков М. И. Образование TRA -зависимых поверхностных структур у Agrobacterium tumefaciens и их отсутствие у мутанта RI (ATRAR) // Мол. ген. микроб, и вирусол. 2001. -№ 3 -С. 13−14.
- Тугизов Ш. М. Изучение экспрессии поверхностного антигена гепатита В в эукариотипических клетках с помощью моноклональных антител / Мон. Антитела в мед. и биотехнол.: сб. трудов НИИ вакцин и сывороток им. Н. И. Мечникова. -М., 1990. С. 166−170.
- Устаров Р.Д., Жестерев В. И. Изучение условий хранения культурального вируса КЧС // Вопрос, вет. вирусол., микроб, и эпизоотол. / Матер, науч. конф. ВНИИВВиМ. Покров, 1992. — 4.1. — С. 130−131.
- Фаизов Т.Х., Ильясова Г. Х., Юсупов Р. Х., Алимов A.M., Барсков В. Г., Егерев С. А. Использование ПЦР для обнаружения вируса КЧС // Акт. вопр. вет. вирусол. / Мат. науч. практич. конференции ВНИИВВиМ. -Покров, 1995.-С. 74.
- Фаизов Т.Х., Ильясова Г. Х., Алимов A.M., Гришкевич И. М., Шарифуллин А. И. Индикация РНК вируса КЧС при помощи ПЦР // Тез. докл. Междунар. научн. конф., посвященной 125 летию академии. — Казань, 1998. -4.1. -С. 91.
- Федорова В.А., Девдариани 3.JI. Изучение продуктов белковой и углеводной природы, синтезируемых Yersinia pestis в условиях, имитирующих внутреннюю среду фаголизосом макрофагов млекопитающих // Мол.ген.микроб. и вирусол. 2001. — № 4. — С. 22−27.
- Федорова В.А., Самелия Ж. Г., Девдариани 3.JL, Шведун Т. П. Моноклональные антитела для изучения роли антигенов белковой природы в серотипировании бактерий Yersinia pseudotuberculosis // Мол.ген.микроб. и вирусол. № 3. 2001. — С. 28−35.
- Федорова В. А., Девдариани 3.J1. Иммунологическая характеристика фракции I штаммов Yersinia pestis, деферентных по гену CAF1M // Мол.ген.микроб. и вирусол. № 1. — 2002. — С. 11−17.
- Фомина Н.В., Белоусова Р. В., Соболев В. В., Сюрин В. Н. Вирусы животных.-М., 1991.-С. 122−138.
- Фримель Г. Иммунологические методы // Пер. с нем. к.б.н. А. П. Тарасова / М.: «Медицина», 1987. С. 89−108.
- Хаитов P.M., Лиознер А. Л. Биотехнические аспекты излучения приобретенных иммунодифицитов // ЖВХО им Д. И. Менделеева. 1989. — Т. 34.-№.1.-С. 67−77.
- Цибулькин А.П., Угрюмова B.C., Ильясова Г. Ф., Насыров Ш. М. Методические указания по применению набора препаратов для оценки в ИФА эффективности вакцинопрофилактики и фармакологической коррекции иммунитета при псевдобешенстве. Казань, 1998. — 4с.
- Цыбанов С.Ж., Куринов В. В., Вишняков И. Ф., Семенихин A.JI. Современные достижения в изучении пестивирусов // Ветеринария. 1995. -№ 3. — С. 14−18.
- Чайка H.A. Устройство для постановки реакции иммунодиффузионной преципитации без предварительного вырезания лунок в геле // Лабор. дело. 1978. — № 4. — С. 206−209.
- Чайка H.A., Негряну Г. М. Иммуноэлектрофорез методические и диагностические аспекты // В кн.: Серологическая диагностика бактериальных инфекций. — М.: ВНИИМИ, 1981. — С. 47−122.
- Чайка H.A., Негряну Г. М. Встречный иммуноэлектрофорез // В кн.: Современные методы иммунологической диагностики вирусных инфекций. М.: ВНИИМИ. — 1981. — С. 63−72.
- Чепулис Г. К., Жданов В. М., Нас И., Черба И., Рожа К. Выявление клеточных антигенов у миксовирусов и парамиксовирусов методами иммунодиффузии //Вопр. вирусологии. 1971. — № 1. — С. 62−70.
- Шубина Н.Г., Луговцев В. Ю., Ющенко Ю. А., Колонцов A.A. Прокоагулятивная активность клеток крови при пестивирусных инфекциях // Вопросы вирусологии. 2002. — № 2. — С. 16−18.
- Эрнст Л.К., Коромыслов Г. Ф., Газдаров А. К. Иммуноферментная диагностика в животноводстве и ветеринарии // ЖВХО им Д. И. Менделеева. -1989. Т. 34. — № 1. — С. 86−90.
- Юсупова Г. Р., Угрюмова B.C., Ильясова Г. Х. О патогенных и иммунобиологических свойствах вируса КЧС, хранившегося в разных температурных режимах // Вирусные болезни с-х. животных / Тез. докл. -Владимир, 1995. С. 209.
- Юсупов Р.Х. Об условиях хранения патоматериала для диагностики чумы свиней методом иммунофлуорисценции И Матер, конф. молодых ученых, посвящ. 100 летию со дня рождения В. И. Ленина. -Казань, 1970.-С. 92−93.
- Юсупов Р.Х. Ускоренная лабораторная диагностика классической чумы свиней, болезни Ауески и гриппа в обычных условиях и при комбинированном поражении животных: Дисс.. докт. вет. наук. Казань, 1981.-374 с.
- Юсупов Р.Х. Изучение иммуного фона при некоторых вирусных заболеваниях свиней // Вет. пробл. пром. свиноводства. Киев, 1983. С. 61−62.
- Юсупов Р.Х. Профилактика и ликвидация классической чумы свиней // Ветеринария. 2001. — № 3(7). — С. 53−55.
- Юрков С.Г., Чермашенцев В. И., Курносов В. В. и др. Накопление вируса КЧС в культуре лейкоцитов // Тез. докл. Всеросс. научн. практич. конф. Вирусные болезни сельскохозяйственных животных. Владимир, 17−21 апреля 1995 г.-С. 27−30.
- Ющук Н.Д., Климова Е. А. Острые вирусные гепатиты // Русский мед.журнал. 2000. — Т. 8. — № 17. — С. 467.
- Adly I. Elimination of host tissue reactions in immunodiffusion and immunoelectrophoretic studies of arboviruses // Proc. Soc. Exp. Boil. Med. 1969. — 130.-№ 3.-P. 784−787.
- Anderson L.J., Rowe L.W. The use of on enzyme-labelled assay as an to reading micro virus-neutralization test // J. Immunol. Meth. 1982. — Y.53. N.2. -P. 183−186.
- Anderson L.J. Use of monoclonal antibody in a blocking ELISA to detect group specific antibodies to blietongue virus // J. Immunol. Meth. 1984. -74.-N1.-P. 139−149.
- Anderson L.J., Hierholzer J.C., Tsou C., Hendry M.R., Fernie B.F., Stone Y., Mcintosh K. Antigenic characterization of respiratory syncytial virus strains with monoclonal antibodies // Infek. Distase. 1985. — V. 151. — N4. — P. 626−633.
- Aynaud J.M., Corthier G. Recot developments in classical swine fever vaccination // World Animal Review. 1976. — № 20. — P. 16−21.
- Bartoszeze M., Larski J. Lastoswanie methody immunoenzymatycz nej do wykrywania virusa choroby Newcastle (NDV) hodowly Komorec // Med. dosw. imikrobiol. 1981.-V. 33.-N.2.-P. 141−145.
- Bode Liv, Beutin Lothar, Kohler Hartwich. Nitrocelluloseenzime-linked immunosorbent assay (NC- ELISA) a sensitive technique for the rapid visual detection of both viral antigens and antibodies // J. Virol. Meth. — 1984. -V. 8.-N. 1−2.- P. 111−121.
- Bon W., Swanborn P. Immuno-osmoforese, een zeersnelte methode van immunoelektroforesse // Chemich Weekblad. 1963. — 59. — P. 72−73.
- Bon W., Swanborn P. Electro- osmofores // Anal. Biochem. 1965. -№ 11.-P. 16−22.
- Boyer J.C., Haenni A.L. Infectious transcripts and cDNA clones of RNA Viruses // Virology. 1994. — V. 198. — P. 415−426.
- Brinton M.A. Non arbo togaviruses // In: The Togaviruses, Biology, Structure, Replication, Ed., R.W. Shlesinger, Academic Press, New York, London, Toronto, Sydney, San Francisco. — 1980. — P. 623−666.
- Campos J.M. Manual of Clinical Microbiology // 7th ed ASM Press: 1999.-P. 13−604.
- Cantarero L.A., Buller J.H., Osborne J.W. The adsorptive characteristics of protein for polystyrene and there significance in solid-phase immunoassays // Anal. Biochem. 1980. — V. 105. — № 2. — P. 375−382.
- Carbrey E.A., Stewart W.S., Kresse J.T. and Snyder M.L. Persistent hog cholera infection detected during virulence typing of 135 field solates // Am. J. Vet. Res. 1980. — № 41. — P. 946−949.
- Castro Ana R. Comparacion antigenica de una cera atevada y una cepa virulenta clel virus del colere porcino // Rev. invest.pecuar. 1972. — № 1. — P. 8590.
- Catalan F., Khoury B., Ouizman E., Mimic V., Doule D., Margeray M. Nouvelles methods de diagnostic de infection a Chlamydia // Rev. fr. Gynecol et obster. 1984. — 79. -№ 10. — P. 617−623.
- Coor D., Zbitnev A., Dempster G. et al. Detection of antibody to rotavirus by CIEP in human serum, colostrums, and milk // J. Pediatr. 1978. -V.93.-P. 967−970.
- Cox J.C., Moloney M.B., Herrington R.W., Hampson A.W., Hurrell J.G.R. Enzyme immunoassay for antibodies to membrane associated antigen of varicella zoster virus // J. Virol. Meth. 1984. — V. 8. — P. 137−145.
- Dahle J., Liess B., Frey H.R. Neutralizing antibody development following sequential inoculation of pig with strains of bovine viral diarrheae viral and hog cholera virus // J. Vet. Med. Ser. B. 1987. — V. 34. — P. 729−739.
- Dales S. Early events in cell animal virus interactions // Bact. Rev. -1973.-V. 37.-P. 103−135.
- Diaz A., Myers D. Determination of serum neutralization antibodies to rabies virus by a modified CIEP test // J. Microbiol. 1980. — V. 12. — P. 175−179.
- Duca M., Colev A., Caraman D. et al. Incidenta HbsAg si anti-HBs masurata prin reactia imunoelectroforeza discontinue contracurent // Rev. Med.-Chir. 1977. — V. 81. — P. 59−63.
- Edevay G., Gradien M., Mares J. An enzimelinked immunosorbent assay, ELISA, for SV-40 antigen detection // J. Virol. Meth. 1985. — V. 11. — № 4. -P. 347−355.
- Edwards S., Moennig V., Wensvoort G. The development of an international panel of monocljnal antibodies for the differentiation of hog cholera virus from other persiviruses // Vet. Microbiol. 1991. — Vol29. — P. 101−108.
- Einzmann P.J., Rehbeig H. The structural components of hog cholera virus // Z. Naturforsch. 1977. — P. 456−458.
- Enzmann PJ., Weiland F. Structural similarities of Hog virus with Togaviruses // Arch. Virol. 1978. — V.57. — P.339−348.
- Einzmann P.J. In vivo labeling of viral proteins with selenomethionin //J. Virol Meth. 1982. — № 5. — P. 243−246.
- Enzmann P.J. Molecular biology of the virus //In: Classical swine Fever and Related viral Infection. Liess B. (Ed). Martinus Nijhoff Publishing, Boston. 1988.-P. 81−97.
- Ericson G.A. Hog Cholera (Swine Fever) // Vet. Diagn. Virology / Eds A.E. Castro, W.P. Heushele. St Louis, 1992. — P. 228−230.
- Gerhard W., Karpowsky H. Monoclonal Antibodies // Cone. Viral. Pathol., New York c.a. 1984. — P. 376−381.
- European patent specification 0 051 096. FRG. 01.04.87. Method for the determination of antigens and antibodies using site-deactivating media / Stout Robert See (FRG).
- Fleischmann J.B., Pain R.H., Porter R.R. Reduction of Globulins // Arch. Biochem. Biophisics, Suppl. 1963. — P. 174−180.
- Forsgren M. Studies of echo virus type 6 antigens in immunodiffusion. 1. Antigen composition of native and heated virus preparations // Acta pathol. et microbial. Scand. 1968. -V. 74. — № 4. — P. 591−602.
- Grzybowski J., Trafny E.A. Immunoenzymatyc test ELISA: Klassyfikacja i nomenklatura // Post. hig. i med. Dosm. 1985. — V. 39. — № 4. -P. 440−463.
- Kamijo Y., Ohkuma S., Shimizu M. and Shimizu Y. Differenced in pfthogenucity and antigenicity among hog cholera virus strains // Nat. Inst. Anum. Hith. Quart.- 1977.-V. 17.-P. 133−140.
- Kemeny D.M., Challacombe S.J. Advances in ELISA and other solid phase-immunoassays // Immunol. Today. 1986. — V. 7. — № 3. — P. 67−68.
- Kohler G, Milstein C. Fusion between immunoglobulin secreting and nonsecreting myeloma cell lines // Eur. J. Immunol. 1975. — V.6. — P. 292−295.
- Koneman E.W., Allen S.D., Janda W.C., et.al. Color Atlas and Texbook of Diagnostic Microbiology // 5 ed Lippincott. Philadelphia- 1997. -P. 94−363.
- Koning M., Lengsfeld T., Pauly T., Stark R., Theil H.J. Classical swine fever virus: independent induction of protective immunity by two structural glycoproteins // J. Virol. 1995. — V. 69. — P. 6479−6481.
- Konishi E., Yamaoka H. Enzyme-linked immunosorbent assay detection of antibodies to Japanese encephalitis virus swine sera // Kobe J. med. Sci. 1982. — V. 28. — № 1. — P. 7−17.
- Kramer S.M., Gremer N.E. Detection of IgG antibodies to measies virus using monoclonal antibodies for antigen-capture in enzyme immunoassay // J. Virol. Meth. 1984. — 8. — № 3. — P. 255−263.
- Harkness J.W. Classical swine fever and its diagnosis: A current view // The Veter. Record. 1985. — V. 116. № 11. — P. 288−293.
- Horzinek M.C. Comparative aspects of togaviruses // J. gen. Virol. -1973.- V.20.-P. 87−103.
- Leforban Y., Cariolet R. Characterization and pathogenicity for pigs of a hog cholera virus strain isolstion from wild boars // Ann. Reac. Vet. 1992. -V. 23.-N1.-P. 93−100.
- Laude H. Improved method for the purification of hog cholera virus grown in tissue culture // Arch. Virol. 1977. — V.54 — №½. — P. 41−51.
- Liess B. Hog cholera. In: virus Diseases of Food Animals (Ed. EPJ GibbsO. Academic Press.) London. — 1981. — P. 627−650.
- Liess B. Description of the virus infection // In: Classical swine ferer and related viral infection. Martinus Nijhoff Publishing, Boston: 1988. part. 4. -P. 28−48.
- Lowings P., Ibata G., Needham J and Paton D. Classical Swine Fever Virus diversity and evolution. // J.Gen. Virology 1996.-V. 77.-P. 1311−1321.
- Mattehaeus W. Das elektrophoretische Verhalten Des Virus der Schweinepest in agargel und dessen Nachweismittels der Heic-Methode // Arch. Ges. Virusforsch. 1964. — V. 15. -№ 1. -P. 50−57.
- Mattehaeus W. Proteinveranderungen und immunoelektrophoretische Untersuchungen bei der Schweinepester Krankung // Zbl. Veterinarmed. 1967. -V. 14. -№ 5. -P. 467−482.
- Mattehaeus W. Isollierung eines in monomerer und dimeer for vorliegenden prazipitierenden Antigens ans Schweinepestinfiziertem Pankreas und der Nachweis enzymatisher Aktivitat in den Immunopazipitaten // Zbl. Vet. Med. -1971.-V. 18.-P. 729−736.
- Mattehaeus W., Korn G. Das verhalten von prazipitierenden Substenzen ans normalen zu den der prazipitierenden pankreasanti-gene mit Schweinepest infizierter Schweine // Zbl. Vet. Med. 1975. 3. — P. 239−253.
- Matthews R.E. Classification and Nomenclature of Viruses. Karger. Basel: 1982.-P. 97−101.
- Meyer H., Liess B., Hermanns W., Trautwein G. Experimentalle, diaplazentar infection vou Schweinefeteu mit duu Virus der Europaischen Schweinepest // Fortscher. Vet. Med. 1980. — V. 30. — P. 140−144.
- Moenning V. Characteristics of Hog virus // In: Classical swine Fever and Related viral infection, Liess B. (ed) Martinus Nijhoff Publishing, Boston. -1988.-P. 66−80.
- Moenning V. Pestiviruses: review // Vet. Microbiol. 1990. — V. 23. -P. 35−54.
- Moenning V. The hog cholera virus // Comp. Immunol. Microbiol. Inf. Dis. 1992. — V. 15.-P. 189−201.
- Moenning V. The hog cholera virus // Comp. Immunol. Microbiol. Inf. Dis. 1992.-V. 41.-P. 53−98.
- Morgan C., Howe C. Structure and development of viruses as observed in the electron microscope. IX. Entry of parainfluenza (Sendai) virus // J. Virol. -1968.-V. 2.-P. 1122−1132.
- Movrmann R.D., Warmerdam D.A., et al. Molecular cloning and nucleotide sequence of hog cholera virus strain Breseva and mapping of the genomic region encoding envelope protein El// Virology. 1990. — V. 177. — № 1. -P. 184−198.
- Neukirch M., Moenning V., Liess B. A simple procedure for the concentration and purification of hog cholera virus (HCV) using the Lectin of Ricinus communis // Arch. Virol. 1981. — V. 69. — №¾. — P. 287−290.
- Paton D.J. Pestivirus diversity // J. Сотр. Path. 1995. — V. 112.-P. 215−236.
- Pensaert M., Van Reeth K. Vaccine for swine // In: Veter. Vaccin. Ed. P.P. Pastoret, J. Blancon, P. Vaannier, Verschueren С Elsivier. 1997. — P. 372 394.
- Perrin P., Rollin P.E., Sureau P. A rapid rabies enzyme immunodiagnosis (RREID): a useful and simple technique for the routine diagnosis of rabies // J. Biol. Stand. 1996. -№ 14. — P. 217−222.
- Pustowoit В., Herrmann F., Макарова H.E., Кущ A.A. Динамика иммуного ответа при первичной цитомегаловирусной инфекции и при реактивации цитомегаловируса у больных после амотрансплантации органов // Вопросы вирусологии. 2001. — № 2. — С. 24−29.
- Recttenberg E.J. Monoclonal antibodies for therapy, prevention and in vivo diagnisis of human disease // Pr. Symp. Utrecht. May 17−19, 1989. Int. Assoc. Biol. Standard., Basel ect: Rarger. 1990. — KIV. — 284 p.
- Roehe P.M., Eduards S. Comparison of pestivirus multication in cells of different species // Research in Veter. Sci. 1994. — V. 57. — № 2. — P. 210−214.
- Rumenapf T., Stark R., Meyers G., Theil H.-J. Structural proteins of hog cholera virus expressed by vaccinia virus: further characterization and induction of protective immunity // J. Virol. 1991. -V. 65. — P. 589−597.
- Rumenapf T., Stark R., Meyers G., Thiel H.J. Structural proteins of hog holera virus expressed by vaccinia virus: father characterization and induction of protective immunity // J.Virol. 1991. -V. 65. — P. 589−597.
- Rumenapf T., Unger G., Strauss J.H., Theil H.-J. Processing of the envelope glycoproteins of Pestiviruses // Ibid. 1993. — V. 67. — P. 3288−3294.
- Sam G., Galetti P. Estudio de antigenos intracellulars relacionados con la replication del colera porcino // Rev. infest. Pecuar. 1973. — V. 2. — № 2. -P. 173−181.
- Sarkar Manju, Mandal Chitra Immobilization of-antibodies on anew solid phase for use in ELISA // J. Immunol. Meth. 1985. — V. 83. — № 1. — P. 5560.
- Scott E. Nat., Muchmore Harold G. Immunoblot analysis of antibody responses to sporotrix schenckii // J. Clin. Microbiol. 1989. — V. 27. — № 2. -P. 300−304.
- Sergeev V.A., Pudnicov L., Gruzdev K., Grebennikov E. Some aspect of Hog Cholera Virus Cultivation proceedings of the Third ESW symposium on pestivirus infections, ID-Dlo, Lelystad, The Netherlands. 1996. — P. 132.
- Shakid F. The IgG4 subclass. Basic and Clin. Aspects IgG Subclasses. -Basel, 1986.-P. 223−226.
- Terpstra C., Wensvoort G., Natural infections of pigs with bovine viral diarrhoea virus associated with signs resembling swine fever // Res. Vet., Sc. -1988.-N2.-P. 137−142.
- Thiel H.J., Stark R., Weiland E. et al. Hog cholera virus: molecular composition of virions from a pestivirus // J. Virol. 1991. — V. 65. — P. 47 054 712.
- Tomanaga Susumi, Fujikura Yaschinisa, Sawada Tomoo, Kukiki Hiromichi, Ito Kazuo. Monoclonal antibodies may recognize highly evolutionary conserved molecule. An immunocytochemical study // Bull. Yamaguchi Med. Sch. 1990. — V. 37. — № 3−4. — P. 89−93.
- Tsotsos A. Identification and typing of viruses and detection of antiviral antibodies by CIEP // Pathol. Microbiol. 1974. — V. 41. — P. 297−310.
- Van Oirschot J.T., Terpsta C. A congenital persistent swine fever infections. I. Clinical and virological observations // Veter. Microbial. 1977/ -V. 2.-№ 2.-P. 121−142.
- Van Oirschot J.T. Experimental production of congenital persistent swine fever infections. II. Effect on functions of the immune system // Vet. Microbiol. 1979. — 4. — P. 133−147.
- Van Oirschot G. Hog Cholera // Diseases of Swine. Ames, Iowa, 1994.-P. 274−285.
- Van Rijn P.A., Bossers A., Wensvoort G., Moormann R.J.M. Classical swine fever virus (CSFV) envelope protein E2 containing one structural antigenic unit protects pigs from lethal CSFV infection // Virology. 1996. — V. 77. — P. 2737−2745.
- Voller A., Bidwell D.E. The microenzymelinked immunosorbent assay (micro ELISA) as a new serological tool in virology // Int. Virol., Barcelona. -1975. N.3.-P. 220−227.
- Vullo V., Mastroianni C.M., Paoletti, Falciano M. et. al. Detection of Salmonella typhi lipopolysaccharide (LPS) in typhoid sera by dot immunobinding (DIB) assay // Microbios Let. 1988. — V. 38. — № 15. — P. 79−83.
- Warford A.Z., Levy R.A., Rekrut K.A., Steiberg E. Herpes simplex virus testing of an obstetric population with an antigen enzyme-linked immunosorbent assay // Amer. J. Obstet. and Gynecol. 1986. — V. 154. — № 1. -P. 21−28.
- Wensvoort G., Terpstra C., Blocmroad M. Detection of antibodies // The Veterinary Record. 1988. — V. 122. — № 2. — P. 536−539.126
- Wensvoort G. Topographical and functional mapping of epitopes on hog cholera virus with monoclonal antibodies // J. Gen. Virol. 1989. — V. 70. — P. 2865−2876.
- Wensvoort G., Terpspra C., De Kluijver E.P., Kregten C., Warnaar J.C. Antigenic differentiation of pestivirus stains with monoclonal antibodies againts hog cholera virus // Vet. Microbiol. 1989. — V. 21. — P. 9−20.
- Xiao Ze Shuai, Jia Li-Li, Qu Xiag-Su, Ziag-Su, Zhang Yong-He. Применение иммуноферментного анализа на зараженных клетках (ИФА-ЗК) для выявления арбовирусов // Acta scand. 1986. — V. 34. — P. 487−495.
- МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Департамент ветеринарии Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт1. УТВЕРЖДАЮ
- МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИЗУЧЕНИЮ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИХ И АНТИГЕННЫХ СВОЙСТВ ВИРУСА КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ МЕТОДАМИ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА В ПААГ-8Б8 И ИММУНОБЛОТИНГА1. Казань-2002
- Классическая чума свиней вызывается одним из членов семейства Togaviridae большой группы РНК содержащих вирусов, имеющих липидную оболочку. Возбудитель КЧС относится к роду Pestivirus (Мищенко
- H.К., 1987- Moenning V., 1992).
- Электродный буфер: 30 г глицина (аминоуксусная кислота), 2 г триса, 2 г ДСН и растворяют, доводя до двух литров дистиллированной водой, рН 8,3−8,5.
- Перед окрашиванием серебром гель вымачивают в 10% глютаровом альдегиде (водном растворе), затем споласкивают 10 минут в 0,5−1 л воды с двумя сменами.
- Если ПААГ превышает 10% то гель фиксируют: • 50% метанолом и 10% уксусной кислотой в течение 30 мин. Промывают в 7% уксусной кислоте с 5% метанолом в течение ночи.
- После окрашивания гель проявляют: в растворе содержащей 0,005% лимонной кислоты и 0,019% формальдегида (разбавляют продажный 38% формальдегид в 10%-ом метаноле). После проявления промывают водой в течение 1 часа с тремя сменами.
- Для окраски проб готовят красящий раствор, содержащий: 10 мл глицерина, 0,1 г бромфенолового синего
- Раствор для промывания геля: к 100 мл уксусной кислоты добавляется 100 мл изопропанола и доводят до одного литра дистиллированной водой.
- ЛизирукУщая смесь состоит из: 0,757 г триса, 2,5 г ДСН, 2,5 мл меркаэптанола, 0,4 мл НС1 доводят водой до 50 мл, рН 6,7−6,8.
- Перед электрофорезом в пробы досадить раствор глицерина, с бромфеноловым синим до конечной конц^нтрцщ^ 0,001%.
- В камеру для электрофореза вставить форму с гелем и заливают электродным буфером до половины формы, затем в лунки концентрирующего геля наносят пробы и заливают электродным буфером, избегая смешивания его с пробами.
- Окраску фиксированных в ПААГ полипептидов нитратом серебра проводится по методу описанному Остерманом JI.A. (1981) с использованием раствора формальдегида или 0,25% Кумасси R-250 в смеси метанол: уксусная кислота: вода (5:1:5 по объему).
- Окрашенные данными методами полиакриламидный гель фотографируют, либо сразу сканируют.1. ИММУНОБЛОТИНГ
- Оборудование: прибор для электрофоретического переноса с системой для охлаждения (Bio-Rad Labs), нитроцеллюлозная мембрана («Schleicher», Германия) с размером пор 0,45 мкм, фильтровальная бумага
- Schuell", Германия), листы тонкого полиэтилена, ротационный встряхиватель, кюветы для отмывания и окрашивания («Bio-RAD Labs»).
- Растворы. Буфер для переноса: 0,025 М Трис, 0,193 М глицин, 20%-ный метанол, рН 7,8−8,4. Сразу готовится 6 л такого раствора и хранить его при температуре 4 °C.
- Раствор ФСБ-твин. К фосфатно-солевому буферу (ФСБ, 0,01 М Na2HP04, 0,15 М NaCl, рН 7,2) добавляют при осторожном перемешивании 0,3%-ный твин-20 из расчета 3 мл на 1 л непосредственно перед использованием.
- Раствор субстрата. Смешивают 50 мг 3,3 диаминобензидина (3,3- 4,4-тетрааминобифенилтетрагидрохлорида с содержанием основного вещества 97−99%, «Sigma») и 10 мкл Н202 (30%), добавляется ФСБ, рН 7,2 до 100 мл. Этот раствор готовят ежедневно.
- В кювету заливают 300 мл буфера для переноса и помещают листок фильтровальной бумаги размером 15 на 20 см, таким образом, чтобы она находилась на дне и у края кюветы. Затем перенести гель на поверхность бумаги и аккуратно перемещают вдоль листа.
- Лист нитроцеллюлозы (блот) промывают 4 раза по 5 минут раствором ФСБ-твин при 37 °C. Объем раствора для каждой промывки составляет 250 мл.
- После промывки блот помещают на 5−10 минут в раствор субстрата. Полосы проявляют в течение 10 минут. Реакцию останавливают, промыванием блот водой.
- Методом электрофореза в SDS-ЛААГ достигнуто: фракционирование, а методом иммуноблота определена специфическая фракция с мМ 55−57 кД.
- Бакулов И.А., Буткин Е. И., Ведерников В. А., Юрков Г. Г. Эпизоотология с микробиологией. М.: Агропромиздат. — 1987. С.287−291.
- Коксин</span> В.П., Алимов A.M., Ильясова Г. Х. и др. // Фонд НИВИ № 8 1998
- Мищенко Н.К. Чума: (классическая) свиней //В кн. Инфекцион. болезни животных. М.: «Колос».-1987.-С. 19−20.
- Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование // М."Наука". 1981. — С. 3−96.
- Сосова Р.Ф. Эпизоотология. М.: «Колос». 1974. С.382−391.
- Юсупов Р.Х. Изучение иммуного фона при некоторых вирусных заболеваниях свиней // Вет. пробл. пром. свиноводства. Киев, 1983. С. 6162.
- Moenning V. The hog cholera virus // Сотр. Immunol. Microbiol. Inf. Dis. 1992. — V.15. — P. 189−201.
- МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Департамент ветеринарии Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт1. УТВЕРЖДАЮ1. ВНИВИ1. РАВИЛОВ аЛ 2002 г.
- МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ИНДИКАЦИИ ВИРУСА КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ МЕТОДОМ ИММУНОЭЛЕКТРООСМОФОРЕЗА1. Казань-20 021. Общие положения
- Иммуноэлектроосмофорез применяют для исследования биологического материала (лизат эритроцитов, дефибринированная кровь, пробы мочи, сыворотки крови и патологический материал) только от невакцинированных против вируса классической чумы свиней.
- Диагноз на КЧС устанавливается на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных с учетом результатов лабораторного исследования.
- Индикация и идентификацации вирусного антигена вирусаклассической чумы свиней
- Оборудование: камера (горизонтальная для электрофореза) из плексиглаза, пробирки, стекла обезжиренные размером 9−12 см, металлический штамп, водяная баня, источник питания УИП-1 или ПАФ-3, центрифуги.
- Реактивы: веронал, мединал, мол очно-кислый кальций, агар Дифко.
- Буфер. Веронал 1,66 г, мединал — 10,51 г, молочно-кислый кальций -1,536 г, дистиллированная вода — 1л. рН 8,6 (готовят на водяной бане I не более 80° С).
- Приготовление агаровой среды. Для постановки реакции готовят 1,5%-ный гель из агара Дифко на веронал-мединаловом буфере, на водяной (кипящей) бане до полного растворения агара (приготовленный агар хранят в холодильнике при 4°С).4. Постановка реакции
- Результаты иммуноэлектроосмофореза учитывают через 1,5−2 часа с момента включения камеры в сеть.