Помощь в учёбе, очень быстро...
Работаем вместе до победы

Молекулярная природа повреждений онкогена HRAS1 в карциномах молочной железы и легких человека

Диссертация: Молекулярная природа повреждений онкогена HRAS1 в карциномах молочной железы и легких человека
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Интересно, что морфология фокусов трансформированных' кле— ток меняется в зависимости от того, какая аминокислота находится в 12 положении онкобелка р21. Так, валин, лейцин, изо-лейцин и треонин вызывают образование рефрактильных клеток, в то время как замена лизином или глутамином индуцирует более поздно появляющиеся и менее выраженные фокусы. Следовательно, появление любой аминокислоты… Читать ещё >

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЯ
  • ГЛАВА. 1, ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Проиеховдение, локализация и структура онкогена
  • HRAS1 у человека
    • 1. 2. Идентификация мутаций б онкогене HRAS1. 1. 3. Выяснение молекулярного механизма активации онкогена HRAS1 в неоплазмах человека
    • 1. 3. 1. Структурные перестройки, амплификации и делеции аллелей
      • 1. 3. 2. Точковые мутации — возможный механизм активации протоонкогена
    • 1. 4. ' Использование полимеразной цепной реакции для анализа мутаций в кодирующих последовательностях онкогена
  • KRAS
  • ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
    • 2. 1. Опухолевый материал, химические реактивы, ферменты и оборудование
    • 2. 2. Радиоактивное мечение олигонуклеотидов
    • 2. 3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — амплификация
  • ДНК, рестрикционный анализ и электрофорез
    • 2. 4. Праймер-зависимая амплификация двух участков онкогена HRAS
    • 2. 5. Определение первичной нуклеотидной последовательности (ееквенирование) амплифицированной ДНК методом
  • Максама-Гилберта
    • 2. 5. 1. Злюция фрагментов ДНК из геля путем диффузии в буфер
  • — О
    • 2. 5. 2. Химические реакции расщепления ДНК
    • 2. 5. 2.1. Гидролиз ДНК по модифицированным основаниям
  • РТТ/шл С- p-jTOVTTWpiTU И AT^VWlTOprafl?
    • 3. 1. Рекомбинантные плазмиды рВБ-1 и pBB-2, содержащие последовательности 1 и 2 зкзонов онкогена HRAS
    • 3. 2. Выявление точковых мутаций в онкогене HRAS1 в ДНК клеток рака молочной железы (РМЖ)
    • 3. 3. Поиск точковых мутаций в онкогене HRAS1 в ДНК клеток .рака легкого (РЛ), рака толстой кишки (РТК) — рака щитовидной железы (РШД) и рака яичника (РЯ)
    • 3. 4. Анализ возможной контаминации образцов ДНЕ. из карциномы молочной железы и других опухолей плазмидами, содержащими мутантный онкоген HRAS

Молекулярная природа повреждений онкогена HRAS1 в карциномах молочной железы и легких человека (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность проблемы. Новейшие данные теоретической и экспериментальной онкологии свидетельствуют о том, что рак у человеке! и животных является молекулярно-генетическим заболеванием*- Cairns J. et al., 1981,1983; Князев ИТ. и др., 1986;). Глубинные патогенетические процессы при онкогенезе прежде всего развертываются на уровне геномной ДНК и сводятся в основном к точковым мутациям и некоторым другим типам генетических нарушений — амплмфикацмям, межи внутрихромосомным ¦ перестройкам, инсерциям, делециям и т. д. (Boveri Т. .Л929- Comings D. Е., 1973; Сгосе С. М. et aL, 1985,1987; Сейц М. Ф., Князев П. Г., 1986). Все эти генетические события (при недостаточности систем естественной репарации, регуляции экспрессии генов и межклеточных взаимодействий) необратимы, что и обуславливает необратимый характер явления малигнизации на уровне генома клетки.

Из этой посылки следует, что решение проблемы превращения нормальных клеток в злокачественные немыслимо без расшифровки указанных молекулярных событий в процессе. канцерогенеза, возможной лишь средствами и методами молекулярной онкологии, генетики и генетической инженерии. V,.

Наиболее убедительные экспериментальные данные о роли специфичных точковых мутаций в активации протоонкогенов были получены при сравнительном анализе генов семейства RAS, выявленных при трансфекции опухолевой ДНК нормальных клеток. У разных представителей этой группы генов мутации затрагивают 12-ый или 61-ый кодоны (Tabin С. J. et al., 1982; Santos Е. et al., 1983; Taparowsky E. et al., 1983). Мутация в 13, соседнем с 12, кодоне протоонкогена HRAS1 (замена глицина’аспарагином или серином) также приводит к трансформирующей активности этого гена (Fasano (X.et ai., 1984).

Интересно, что морфология фокусов трансформированных' кле— ток меняется в зависимости от того, какая аминокислота находится в 12 положении онкобелка р21. Так, валин, лейцин, изо-лейцин и треонин вызывают образование рефрактильных клеток, в то время как замена лизином или глутамином индуцирует более поздно появляющиеся и менее выраженные фокусы. Следовательно, появление любой аминокислоты (за исключением пролина) вместо глицина в 12 положении белка р21 придает ему т ране формирующие свойства. Причем уровень синтеза измененного белка р21 примерно в 5 раз превышает таковой в нормальной клетке .

Исходя из вышеизложенного, в диссертационной работе планировалось изучить частоту присутствия точковых мутаций в «горячих». кодонах онкогена HRAS1 в карциномах молочной железы и легких как в наиболее распространенных неоплазмах у человека, необходимость проведения такого исследования поякпепляется и тем обстоятельством, что в литературных источниках данный вопрос оставался малоизученным, поскольку методы выявления точковых. мутаций (трансфекция, рестрикционный анализ, секвенирова-ние) чрезвычайно сложны технически и дороги.

Анализ большого числа работ. показывает, что между генетическими повреждениями (в нашем случае между делениями и точковыми мутациями) возможна взаимосвязь (Князев IL Г. и др., 1990а, 1991а). К настоящему времени показана утрата специфичного участка ряда хромосом, приводящая к «потере гетерози-готности» опухолевой клеточной популяции по аллелям некоторых онкогенов, расположенных в коротком плече 11 и длинном плече 13 хромосомы. Однако при этом оставалось неясным, при потере целых аллелей присутствуют ли в оставшихся аллелях точковые мутации в специфичных кодонах. В этой связи, в данной работе также планировалось проверить ранее сформулированную гипотезу о неслучайной (направленной) элиминации дикого аллеля онкогена HRAS1 в процессе прогрессии злокачественных признаков карцином молочной железы и легких у человека. В этом случае в оставшихся аллелях онкогена, как предполагалось, должны присутствовать мутации, которые демаскируются при делеции дикого аллеля. Мы полагали, что подобные генетические события в клетке «разнесены» во времени: точковая мутация в одном из аллелей — раннее событие, возможно связанное с инициацией канцерогенеза, а де-леция дикого аллеля — позднее, ассоциированное с прогрессией злокачественных признаков., В диссертационной работе К Ф. Никифоровой (1991) было показано, что делеции аллелей онкогена HRAS1, как правило, выявляются в раках молочных желез, дающих метастазы.

Таким образом, немутантный белок p21~HRASi супрессирует злокачественный фенотип клеток, в случае его утраты (делеции аллеля, возникновения второй мутации или нарушения транскрипции.) остается лишь мутантный вариант онкобелка P21-HRAS1, выполняющий аномальную роль в переносе митогенного сигнала.

Определение точковых мутаций в оставшемся аллеле онкогена HRA5.1 при элиминации одного из его аллелей, позволило бы уета-. повить взаимосвязь между данными генетическими повреждениями и выявить первоочередность одного из них при канцерогенезе.

Кроме того, обнаруженные’мутации в горячих кодонах онкогена HRAS1 с помощью рестрикционного картирования при секвениро-вании могли показать варианты замен нуклеотидов и углубить знания по механизму архивации протоонкогенов.

Следует отметить, что данная работа является частью исследования, проводимого в лаборатории молекулярной генетики научно-исследовательского института онкологии имени Е Е Петрова, по изучению генетических повреждений в онкогенах и выявлению их роли в процессе малигнизации, которое включает в себя ряд направлений, связанных с амплификацией ДНК, различными генетическими перестройками, в том числе делениями аллеЛей онкогенов, и другими преобразованиями в геноме опухолевой клетке при различных локализациях.

Выполнение указанных направлений стало возможным в результате применения новых методик — праймер-зависимой амплификации и прямого секвенирования. Благодаря их использованию, намного упрошдется исследование: исключаются клонирование фрагментов ДНЕ, переклонирование, скрининг рекомбинантных клонов и т. д.

Реализация планируемой работы не только разрешит ряд поставленных теоретических задач, но и прояснит практическую сторону, т. к. открывает (опосредовано через указанные генетические элементы) реальные возможности целенаправленного выявления активации онкогена HRAS1 в минимальном количестве биопсийного материала онкологических больных.

Дель и задачи исследования. Целью настоящей работы является изучение молекулярной природы повреждений онкогена HRAS1 в карциномах молочной железы и легких человека.

В соответствии с поставленной целью сформулированы следующие задачи:

— осуществить широкий скрининг присутствия точковых мутаций в горячих кодонах онкогена HRAS1 в карциномах молочной железы и легких человека, а также для сравнения с другими опухолями — в раках толстой кишки, щитовидной железы и яичника;

— провести анализ наличия мутаций в 12 и 61 кодонах онкогена HRAS1 для проверки гипотезы направленной' утраты дикого аллеля в некоторых образцах ДНК, содержащих один аллель этого гена, и установить взаимосвязь между указанными генетическими повреждениями с выделением первоочередности одного из них;

— определить первичную структуру фрагментов онкогена HRAS1, имеющих точковые мутации, для выяснения характерных вариантов замены нуклеотидов в кодонах, ассоциированных с превращением протоонкогена в онкоген;

— оценить прогностическую значимость делеций и точковых мутаций в аллелях онкогена HRAS1 при развитии карцином молочной железы и легких у человека.

Научная новизна исследований. В результате выполнения диссертационной работы впервые решены следующие важные в теоретическом и практическом плане вопросы:

— получены новые плазмиды рВБ-1 и рВБ-2, несущие 12 и 51-ый кодоны онкогена HRAS1, позволяющие проанализировать указанные последовательности;

— определена частота точковых мутаций в горячих кодонах онкогена HRAS1 в карциномах молочной железы (3 гетерозиготы по мутации в 12 кодоне из 57 образцов ДНК) и яичника (1 гетерози-гота по мутации в 12 кодоне из 3 образцов ДНК) (табл. 8):

— отмечено, что делеция одного из аллелей онкогена HRAS1 в исследуемых карциномах не сопровождается демаскированием мутаций в 12, 13 и 61 кодонах протоонкогена HRAS1, следовательно утрата короткого плеча 11 хромосомы в отношении этого онкогена.

4 является случайным событием;

— установлен вариант замены нуклеотидов в 12 кодоне, ответственных за активацию онкогена HRAS1, сопровождающейся.

• — i — j.1 трансверсией Г — T (ГГЦГТЦ) в ДНК опухолевых клеток карцином 1 молочной яелезы и яичника, что, в свою очередь, приводит к замене в белке p21-HRASl в 12 положении амитнокислоты глицина на валин- ¦

— учитывая низкую частоту мутаций в 12 кодоне онкогена HRAS1 в карциноме молочной железы у человека, оценить прогностическую значимость подобного генетического события для развития этого забо-ттевя.ния оказалось не реальным;

— проверены на контаминацию плазмидой pEJ 6,6, мутантной по 12 кодону онкогена HRAS1, 27 гетерозигот с генетическими повреждениями по указещной позиции, в результате — не «загрязненными» оказались 4 пробьГТв-^Ш и 1-РЯ).

Практическое значение. Диссертационная работа в целом представляет собой теоретическое исследование. Полученные результаты имеют важное значение для понимания роли точковых мутаций в канцерогенезе у человека, с одной стороны, а с другой будут способствовать разработке молекулярно-биологических основ определения прогноза, а в будущем, возможно, и диагностики злокачественных новообразований у людей. л о.

J.

выводы.

1. Получены 2 новые плазмиды: рЕБ-1, рВБ-2, несущие последовательности 1, 2 зкзонов, соответственно, содержаще 12, 61-ый'кодоны онкогена HRAS1, пригодные для анализа мутаций и метилирования указанных экзонов гена в ДНК нормальных, а также опухолевых. клеток человека.

2. Осуществлен поиск точковых мутаций в 12 кодоне онкогена HRAS1 в 57 образцах ДНК клеток карцином молочной железы, 39 -легкого, 3 — толстой кишки, 3 — щитовидной железы и 3 — яичника. Гетерозиготные точковые мутации в указанном кодоне онкогена выявлены в 3 случаях рака молочной железы, что соответствует 5,3%, и в 1 — рака яичника.

Q г" 19 уплоур {ГТТП ппп^пот-^гоиа НРДСЧ р о гтрр ~ La^Jliji. jiJ, i. ^ J. -tJ-.y — - — v—' - - ~ - —" -t ^'-iLi i iJ. —— -JJ—- • .у v паратах ДНК клеток рака молочной железы и 1 — рака яичника сопровождалась трансверсией Г — Т, что свидетельствует о его превращении в онкоген. Это, в свою очередь, — приводит к изменению в онкобелке р21 аминокислоты глицина на валин.

4. По данным амплификации ДНК in vitro, а также рестрикци-онного картирования и прямого секвенирования точковые мутации в 13 и 61 кодонах онкогена HRAS1 в изученных карциномах (50 образцах молочной железы, в 42 — легкого, в 3 — толстой кишки, в 3 — щитовидной железы и в 3 — яичника) не обнаружены.

5. Точковые мутации в 12, 13, и 61 кодонах онкогена HRAS1 не являются обязательным событием для злокачественной трансформации клеток эпителия молочной железы и легких у человека.

6. Элиминация одного из аллелей онкогена HRAS1 в ДНК клеток' карцином молочной железы и легких у человека не сопровождается демаскированием мутаций в 12, 13 или 61 кодонах протоонкогена HRASi, следовательно указанное генетическое событие не ассоциировано с механизмом его превращения в онкоген, а также прогрессией опухолевых признаков.

7. Учитывая низкую частоту мутаций в горячих кодонах онкогена HRAS1 в ДНК опухолевых клеток карцином молочной железы у человека, оценить прогностическую и диагностическую значимость подобного генетического повреждения для развития этих неоплазм не представляется возможным. Y X.

Выражаю сердечную признательность научным руководителям работы: д. м. н. IL Г. Князеву и д. м. н. Е. И. Шварцу, а также чл. -кор. АМН РФ проф. К. П. Хансону за ценные советы и критические замечания при обсуждении результатовколлегам, по отделу молекулярной онкологиид. б. н. В. А. Ланцову, О. К. Кабоеву, А. Е Алексееву и А. А. Гольцову (ЛИЯФ им. В. Е Константинова АН РФ,.

ОМРБ) т/хг-оза M" i методическую помощь в отдельных экспериментахЕ А.

Берлину и О. В. илуталову — за синтез праймеров для ЩР.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Полученные в настоящее время так теоретические, так. и экспериментальные данные однозначно свидетельствуют о том, что при канцерогенезе происходят изменения в ДНК клетки и, в первую очередь, в протоонкогенах и супрессорных генах (см. Обзор литературы). Эти изменения сопровождаются на уровне генома в виде амплификации, различных генетических перестроек, делеций и точковых мутаций указанных генов.

Из перечисленных нарушений генома, особенный интерес представляют точковые мутации в протоонкогенах, приводящие к превращению ихв онкогены и, соответственно^ к появлению белков с новыми функциональными свойствами, которые нарушают различные клеточные и внеклеточные взаимодействия, способствуя злокачественно й трансформации.

Исходя из этих посылок, была запланирована настоящая работа, реализация которой могла ответить на ряд нерешенных вопросов, а именно: о частоте точковых мутаций в горячих кодонах онкогена HRAS1 в образцах ДНК неоплазм различных локализаций, в том числе пробах, содержащих один аллель указанного генао характере вариантов замен нуклеотидов в кодонах, ассоциированных с превращением протоонкогена в онкогени, наконец, об оценке прогностической значимости делеций и точковых мутаций в аллелях онкогена HRAS1 в развитии карцином молочной железы и легких у человека.

Располагая банком геномной ДНК РМЖ, РЛ и других локализаций с делениями одного из аллелей онкогена HRAS1, нам представлялась возможность проверить оставшийся аллель этого гена на присутствие в кем мутации.

— 107.

Какследствие из вышеуказанного, важно было определить: нет ли между описываемыми повреждениями (делениями и мутациями) взаимосвязи? Если таковая имелась, то логично было попытаться установить последовательность генетических событий.

Выявленные точковые мутации в онкогене HRAS1 ДНК исследуемых карцином могли стать основанием для проведения нуклеотид-ного анализа тех образцов, в которых с помощью рестрикционного картирования удалось бы обнаружить эти мутации. Определение первичной последовательности прояснило бы характер замен нуклеотидов в горячих кодонах онкогена.

В начальной стадии исследования, из-за невозможности провести анализ онкогена HRAS1 в геномной ДНК опухолевой клетки по поиску мутаций (см. раздел 3.1), были сконструированы плазмиды рВБ-1 и рВВ-2, несущие 1 и 2-ой экзоны с 12 и 61 кодона-ми, позволяющею исследовать указанное генетическое повреждение. Однако — к тому времени был разработан и внедрен новый.' метод — полимеразной цепной реакции, с помощью которогонамного упрощалась работа (см. Обзор литературы) по клонированию и секвенированию конкретных участков генов.

Ври анализе мутацийв 12 кодоне онкогена HRAS1 в карциномах молочной железы и яичника человека удалось выявить ряд нуклеотидных замен. Их оказалось немного: из 57 РШ в 3 случаях один из аллелей содержал мутацию (гетерозигота по мутации в 12 кодоне), а из 3 РЯ — 1 гетерозигота (по аналогичной позиции). Секвенирование по методу Максама-Гилберта подтвердило, присутствие мутаций в ДНК неоплазий, сопровождающихся заменой нуклеотидов в 12 кодоне Г — Т. В протбонкогене 12-ый кодон ГГЦ превращался в ГТЦ. Это, в свою очередь, должно приводить к изменению аминокислотного белка р21, а именно: замене глицина на.

— 108 валин. При этом следует отметить, что выявленные варианты замен нуклеотидов в онкогене HRAS1 во всех случаях одинаковы. Кроме того, все они присутствуют в одной цени ДНК, т. е. гете-розиготы по точковым мутациям.

Результаты проведенных экспериментов показали отсутствие в 15 образцах ДНК опухолей, указанных выше локализаций-' с элиминациями аллелей, точковых. мутаций в 12 и 61 кодонах онкогена HRAS1. По этой причине оказалось невозможным установить взаимосвязь между делециями и мутациями и определить первоочередность возникновения одного из этих нарушений.

Анализ по обнаружению точковых мутаций при гидролизе амп-лифицированных фрагментов ДНК рака легкого и карцином толстой кишки и щитовидной железы, содержащих по отдельности 12 и 61-ый кодоны онкогена HRAS1, зндонуклеазами рестрикции, а также определением первичной структуры этих последовательностей замена нуклеотидов не обнаружена.

В онкогене HRAS1. РМЖ, РД и других опухолях мутации в 13 кодоне не обнаружены. тт ттягп г-т> о гЗ итЛСЯ^ТЬ" * т т О 'Л гп ^ 7″ Г^ ТА П * Ггп п m тэ тхгт г./^ГФС* Т ТТ.-ТТЛ Р '1 V iff*, TTOUCi.

J ± DLDCbJl ZlsiK^ruJ iUii-k!w J. U 1 J J. LЛ. i-ilj 1 Uoi-Sii'iJriD -i. i-vAu^wiiv онкогена HRAS1 в РМЖ, оценить их прогностическую значимость для развития карцином молочной железы и легких у человека не представляется возможным.

Таким образом, изучение молекулярной природы повреждений протоонкогена HRAS1 в. карциномах молдочной железы и легких у человека с использованием современных, методов амплификации ДНК in vitro, а также секвенирования показало, что деления одного из аллелей этого гена не демаскирует в оставшемся аллеле активирующей 'мутации в 12, 13 или 61 кодонах. Низкая •частота точковых мутаций в одном из аллелей онкогена HRAS1 встречается.

— 109 лишь в 12 кодоке и сопровождается трансверсией Г — Т, приводящей к серьезным функциональным изменениям белка p21-RAS. Однообразие вариантов замен нуклеотидов в 12 кодоне онкогена HRAS1 в РШ позволяет утверждать, с известкой долей осторожности, о воздействии на геном клеток-мишеней одного инициирующего агента.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Альтштейн А, Д. Онкогены опухолеродных вирусов. Журн. Всесоюзн. хим. общества им. Менделеева, 1973, т. 18, с. 630−638.
  2. Бутенко 3, А. Молекулярные механизмы лейкомогенеза, Механизмы лейкозогенеза, 1975, с, 5−29.
  3. Е. Р. Онкогены ретровирусов и их клеточные протоонкогены. Моле к. биология, 1985, т. 19,1 с. 9−35.
  4. Ф. Л., Татосян А. Г,, Гудков А, В, и др. Молекулярные механизмы вирусного и невирусного канцерогенеза, Итоги науки и техники: Вирусология. М., 1983, N10, с, 169,
  5. Киселев Ф. JL, Павлиш О, А., Татосян А, Г. Молекулярные основы канцерогенеза у человека. М., 1990, с. 5−6,
  6. П. Г., Шефер Р., Виллике К., Плужникова Г. Ф., Серова 0. М., Федоров С. Е, Сейц И. Ф. Активация протоонкогенов из семейства RAS и МУС в карциноме молочной железы и нейробласто-ме человека, Mb лек, биология, 1986, N5, с. 1236−1243.
  7. Князев Е Г., Серова О. М., Бабенко В. И. и др. Молекулярная природа повреждений онкогена HRAS1 в карциномах молочнойжелезы: трансверсия G -Т в 12 кодоне одного аллеля при делецииодругого аллеля, ьиорганическая химия, 1990а, т, 16, N3, с, 4191. А9 О
  8. Князев И Г,, Серова О, М, Никифорова И, Ф., Плужникова
  9. А. С., Холлстейн М. и др. Активация онкогена HA-RAS в опухолях, индуцированных у мышей трансплацентарным воздействием 7,12-диметилбенз(а)антрацена. Вопросы онкологии, 1991, т. 37, N3, с. 297−303.
  10. Напалков Е Е, Анисимов В, Е, Князев Е Г., Лихачев А.? Современные представления о механизмах канцерогенеза. ¦ЕНИИШ: серия экспериментальной онкологии. М., 1987, с. 84.
  11. Никифорова II Ф. Распределение аллелей онкогена HRAS1 и их перестройки в карциномах у человека. Кандид, диссертация, JL, 1991.
  12. Г. Ф, Серова О. Ы, Князев Е Г. и др. Совместная амплификация онкогенов с-туе и е-На-газ в клетках рака молочной и щитовидной желез человека. Зкспер. онкология, 1987, N2, с. 15−17.
  13. Сейц Л Ф., Князев Е Г., Федоров С. Е Онкогены. Происхождение, распространение, структура и функции в канцерогенезе, Вопросы онкологии, 1982, N10, с. 95−114,
  14. И. Ф., Князев П. Г. Молекулярная онкология, Л: Медицина, 1986, с. 351−359.
  15. О. М. Амплификация и экспрессия в опухолях человека нуклеотидных последовательностей, родственных онкогену МУС. Кандид, диссертация, JL, 1987.
  16. Albino A., Le Strange R., 01 iff A. et al. Transforming RAS genes from human melanoma: a manifestation of tumor heterogenecity // Nature. 1984.- v. 308. — p. 69−72.
  17. Almoguera C., Shibata D. et al. Most human carcinomas of the exocrine pancreasfcontain mutant c-K-ras genes /7 Cell. i Q.QR v Я Я — г" Я л. О-ь^Аacuuj v л uus у.'" u-i". '
  18. Balmain А., Ramsden М., Bowden G. et al. Activation of the mouse cellular Harvey-ras gene in chemically induced benign skin papillomas // Nature. 1984.- v. 307. — p. 658−661.
  19. Barbaeid M Oncogenes and human cancer: cause ' or consequence? // Carcinogenesis. 1986.- v. 7. — p. 1037−1042.
  20. Barbae id M Ras genes // Annu. Rev. Biochem. 1987. -v. 56. — p. 779−827. .
  21. Bar-Sagi D., and Feramisco j. R. Microinjection of the ras oncogene protein on PCI2 cells induces morphological differentiation // Cell. 1985.- v. 42. — p. 841−848.
  22. Beckner С. K., Hatton S., Shih T, Y. The ras oncogene product is not a regulatory component of adenylate cyclase // Nature. 1985.- v. 317. — p. 71−72.
  23. Bell j. The polymerase chain reaction // Immunology Today. 1989. — v. 10. — p. 351−355.ог? t^-i t ь. л c'
  24. Bishop J. M. Retroviruses and cancer genes // Adv. Cancer Res. 1982a. — v. 37. — p, 1−32.
  25. Bishop j. M. Cellular oncogenes and retroviruses .// Anna. Rev, Bi ochem. 1983, — v, 52, — p, 301−354.
  26. Blair D. C., Oskarsson M., Wood I. G. et al. Activation of transforming potential of a normal cell sequence a molecular model for oncogenesis // Science. 1981.- v. 212.-p. 941−943.
  27. Bos' j. L., Verlan-de Vries M., Marshall C. j. et al.. Ahuman gastric carcinoma contains a single mutated and an amplified normal allele of the Ki-ras oncogene // Nucleic Acids Res. 1985.- v. 14. — p. 1209−1217.
  28. Bos j. L., Fearon E. R., Hamilton S. R. et al. Prevalence of ras mutations in human colorectal cancers // Mature, -10Я7 v — n oqo9Q7
  29. Bos- j. L. The ras gene family and human carcinogenesis .// Mutat. Res. 1988. — v. 195. — p. 255−271.
  30. Bos J. L. .Ras oncogenes in human cancer: a review // Cancer Reseafcch. 1989. — v. 49. — p. 4682−4689.
  31. Boveri T. The origin of malignant tumors // Baltimore. 1929.
  32. Capon D/j., Chen E. Y., LeVinson A, D. et al. Complete nucleotide sequence of the t.24 human bladder carcinoma oncogene and its normal homologue // Nature. 1983a. — v. 302.-p. 33−37.
  33. Chang E. H., Furth ME., Scolnick E. M. et al. Tumorogenic transformation of mammalian cells induced by a normal human gene homologous to the oncogene of Harvey murine sarcoma virus // Nature. 1982. — v. 297. — p. 479−483.
  34. Chard in P., Travitian A. The rol gene: a new ras related gene isolated by the use a synthetic probe .// EMBO j. 1986.- v. 5. — p. 2203−2207.
  35. j. B. " and Levinson A. D. A point mutation in the last intron responsible for increased expression and transforming activity of the с-Ha-ras oncogene // Nature.-1988.- v. 334. p. 119−124.
  36. Comings D. E. A general theory of carcinogenesis // Proa Nat. Acad. Sci. USA. 1973.- v. 70. — p. 3324−3328.
  37. R.P., Ruddle F. H. // Cytogenet, Cell Genet. -1975. v. 14. — p. 282−286.
  38. Croce 0. R, Klein G. Chromosome translocations and human cancer // Sci. Am. 1985. — v. 250. — p. 44−62,
  39. Croce С. M. Rote of chromosome translocations, in human neoplasia/7 Cell. 1987.- v. 49. — p. 155−156.
  40. Прг П T k'-rnnr T ^ fW-srv^ p. мi л -i J 4 4 i ii UliU’ii i 1 л wU 4 t.*" iVi"
  41. Ellis R. W., DeFeo D., Maryak J. M. et al. Dual evolutionary origin for the rat. genetic sequences of Harvey murine sarcoma virus // j. Virol. 1980.- v. 34. — p. 408−420.
  42. Ellis R. W., DeFeo D., Shin I. Y. et al. The p21 ras genes of Harvey and Kirsten sarcoma viruses originate from divergent members of a family of normal vertebrate genes // Nature. 1981. — v, 292. — p. 506−510,
  43. Eva A. Aaronson S. A. Frequent activation of c-ki-ras a transforming gene in fibrosarcomas induced by methylcholantrene // Science.- 1983. v. 200. — p. 995−996.
  44. Fasano 0., Birnbaum D., Edlund L. et al. // Molec. Cell, Biol, 1984, — v, 4. — p. 1695−1705.
  45. A. P. } Vogelstein B. Hypomethylation distinguishes ras genes of the same human cancer from their normal counterparts // Nature. 1983. — v. 301. — p. 89−92.
  46. Feinberg A, P., Vogelstein В., Droller M. j. et al. Mutation affecting the 12th amino acid of the с-Ha-ras oncogene product occurs infrequently in, human cancer // Science. 1983a. — v. 220. — p. 1175−1177.
  47. Feramisco j. R., Clark R., Wong G. et al. Transient, reversion of ras oncogene induced cell transformation by- 118 antibodies specific for amino acid 12 of ras protein // Nature. 1985. — v. 314. — p. 639−642.
  48. Fujita j., Srivastava S. K., Kraus M. H. et al. Frequency of molecular alterations affecting ras protooncogenes in human urinary tract tumors // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1985.- v. 82. — p. 3849−3853.
  49. Gazdar A. F., Carney D.N., and Minna j. D. The biology of non-small cell lung cancer // Semin. Oncol. 1983.- v. 10. -p. 3−19.
  50. Gibbs V. B., Ellis R. W., Scolnik E. M. Aytophosphorу 1 ation. of v-Ha-ras p21 is modulated by amino acid residue 12 // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1984.- v. 81. — p. 2674−2678.
  51. Gilbert F. Chromosomal aberrations and oncogenes // Nature. 1983. — v. 303. — p. 475.
  52. M., «Shimisu K., Perucho M. et al. Isolation and preliminary characterisation of a human transforming gene from T24 bladder carcinoma ceils // Nature. 1982. — v. 296. -p. 404−409.
  53. G., Goldman D. » Nice j. et al. Molecular cloning and nucleotide sequence of a transforming gene detected by transfection of chicken B-cell lymphoma DNA // Nature. 1983.- v. 302. — p. 314−319.
  54. D. A., Kinsella A. R. с-Ha-ras not c-Ki-ras activation in three colon tumour cell lines // Carcinogenesis. 1985. — v. 6. — p. 1533−1535.
  55. Grunewald K., Lyons j. et al. High frequency of Ki-ras codon 12 mutations in pancreatic adenocarcinomas // j. Cancer.-1989.- v. 43. p. 1037−1041.
  56. Hall A., Marshall C., Spurr N. et al. Identification- 119 of transforming: genes in two human sarcoma cell lines as a’new member of the ras gene family located on chromosome 1 // Mature/- 19−83. v. 303. — p. 396−400.
  57. Hall A. The ras gene family // In Oxford Surveys on EuKaryotio Genes, ed. MacLean M. Oxford Univ. Press. 1984. -v. 1, — p. 111−114.
  58. Hunter T. The" proteins of oncogenes // Sci. Am. -1984. v. 251.- p. 60−69.
  59. Kasid A., Lippman RE-, Parageorge A.G. et al. Transfeotion of v-Ha-ras DMA into MCF-7 human breast cancer ceils bypasses dependence on estrogen for tumorigenicity // Science. 1985.- v. 228. — p. 725−728.
  60. Kohl M. E., Geo С. E., Alt F. W. Activated expression of the N-myc gene in human neuroblastoma and related tитоге // Science. 1984.- v. 226. — p.'1335−1337.
  61. Kosbor D., Crou С. M. Amplification of the c-myc oncogene on one of five human breast carcinoma cell lines // Cancer Res.- 1984.-- v. 44. p. 438−441.
  62. Kozma S. C., Bogaard M. E., Buser K. et al. The human c-Kirsten ras gene is activated by a novel mutation in codon 13 in the breast carcinoma cell line MDA-MB231 // Mucleic Acid Res. 1987. — v. 15. — p. 5963−5971,
  63. Kraus M. H., Yuasa Y., Aaronson S. A position 12- 120 activated Ha-ras oncogene in ail HS578t mammary carcinosarcoma cells but not normal mammary cells of the same patient // p-rnfv-4 wat о-н нча 1 qp-4 — v я1 — rj р>яяя
  64. TO Hi— tiisr’i' i ПЛ Ы Л M p.
  65. Til m x, O, j L-'i ivlri. L-iJiU if, -Н", u-uij ivl. t? ai.
  66. Unique allelic restriction fragments of the human Ha-ras locus in leukocyte and tumor DNAs of cancer patients // Nature. -1985. v. 313. — p. 369−374.
  67. Krontiris I. G., Di-Martino N. A. ,' Colb M. et al. Human rectriction fragment length polymorphism and cancer risk assesment // j. Cell. Biochem. — 1986, — v. 30. — p. 319−329.
  68. Land H., Parada L., Weinberg R. A. lumorigemc conversion of primary embryo fibroblasts requires at least two cooperating oncogenes // Nature.- 1983.- v. 304. p. 596−602.
  69. Land H., Chen A, C,, Morgenstern j, P. et al. Behavior of myc and ras oncogenes in transformation of rat embriof i Kj^hl // Х&О ПлЗ 1 D-i г-%1 -i ПОЯ ir P. •iQ-l^-'iOOC.x iLu ОШаэю .•' / iVi-'-L, rfii ljxQI. iduu. V, p. xs±t iiiivu.
  70. Larie M. A., Sainten A., Cooper G. M. Stage specific transforming genes of human and mouse B-and T-lymphocyte neoplasms-//'Cell.- 1982. v. 28. — p. 873−880.
  71. Lee W. H., Murphree A. L,, Benedict W. F. Expression and amplification of the N-myc gene in primary retinoblastoma // Nature, 1984. — v. 309, — p. 458−460.
  72. Lidereau R., Eacot C., Theillet C. et al. High frequency of rare alleles of the human с-Ha-ras protooncogene in breast cancer patients // j. Nat, Cancer Inst. 1986. — v. 77. -p. 697−701.
  73. Lowe D. G., Capon D. J., Del wart E. et al. Structure ofo, the numan and murine R-ras genes, novel genes closely releted to ras protein oncogenes // Cell. 1987, — v. 48. — p. 137−146.
  74. Mai on P. R., Yisvanathan К. V., Ponder R A. et al. Oncogene and bladder cancer // Br. J. Urol.- 1985.- v. 57. p. 664 667.
  75. Marshall 0. j. Functions of ras oncogenes // Nature. -1984.- v. 310. p. 448−449.
  76. Marshal 1 C. j. Human oncogenes // In: R. Weiss, N. Teich, H. Varmus, j. Coffin (Eds), RNA Tumor Viruses, second edition. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor. 1985,-no. 4, — p. 487−558.
  77. Marshall C. j. The ras gene family /7 In: Oncogenes and Growth Control, ed. KahnP., Graf T.: Springer-Verlag. 1986.-p. 192−199.
  78. Murray M. j., Cunningham J. M., Parada L. F. et al, The HL-60 transforming sequence: a ras oncogene coexisting with altered my с genes in. hematopoietic tumors // Cell, 1983, -v. 33. — p. 749−757.
  79. Neubauer A., Shannon K,, Liu E. Mutations of the ras proto-oncogenes in childhood monosomy 7 // Blood, 1991,-v, 77, — p. 594−598,
  80. Newbold R. F,, 0verell R, W. Fibroblast immortality is a prerequisite for transformation by Ej с-Ha-ras oncogene // Nature. 1983.- v. 304. — p. 648−651.j. ic-ic
  81. Newmark P. The ras mat ass of cancer genes // Nat-игё. -1983. v. 305. — p. 470−471.
  82. Parada L.F., Tabin C.J., Shin C. et. al. Human EJ bladder carcinoma oncogene is homologue of Harvey sarcoma virus ras gene // Nature. 1982. — v. 297. — p. 474−478.
  83. Pawson T. Growth factors, oncogenes, and breast, cancer // In: A. H. G. Paterson and А. V/. Lees (eds). Fundamental Problems in Breast. Cancer. 1,987.- p. 155−171.
  84. Pulciani S., Santos E., Long L. K. et al. Ras gene amplification and malignant transformation // Mol. Cell Biol.-1985. v. 5. — p. 2836−2841.
  85. Quintan ill a M., Brown K., Ramsden M. et al. Carcinogen-specifiс mutation and amplification of Ha-ras during mouse skin carcinogenesis // Nature. 1986.- v. 322. -p. 78−80.
  86. Rochlitz C. F., Scott G. K., Dodson j. M. et al. Incidence of activating ras oncogene mutations associated with primary and metastatic human breast cancer // Cancer Res. -1989.- v. 49. p. 357−360.
  87. Rodenhuis S. et al. Mutational activation of the K-ras oncogene: a possible pathogenetic factor in adenocarcinoma of the lung // N. Eng. j. Med. 1987.- v. 317.-p. 929−935.
  88. Rodenhuis S., Slebos R. J. C., Boot A. j. M. et al. K-ras oncogene activation in adenocarcinoma of the lung: incidence and possible clinical significance // Cancer Res.- 1988. -v. 48, p. 5738−5741. .
  89. Rowley j. D. Human oncogene locations and chromosome aberrations // Nature, 1983. — v, 301, — p, 290−291,
  90. Ruiey E. H. Adenovirus early region E1A enables viral and cellular transforming genes to transform primary ceils in culture // Nature, 1983. — v, 304, — p, 602−606,
  91. Saiki R,, Scharf S., Faloona F. et al. Enzymatic amplification of B-globin genomic sequence and restriction site analysis- for diagnos' is of sickle cell anemia // Science. 1985.- v. 230. — p. 1350−1354.
  92. Saiki R. K., Bugavan T. L., Horn G. T. et al. Analysis of enzymatically amplified B-globin gene and HLA-DQL DNA with allele-specifiс oligonucleotide probes // Mature.- 1986.-v. 324. p. 163−166.
  93. Saiki R. K., Self and D. H., Stoffel S. et al. Primer-directed enzymatic amplification .of DNA with a1. J. (Сthermostable DNA ' polymerase /7 Science, — 1988.- v. 239. -p. 487−500.
  94. Santos E., Tronick S. R., Aaronson S. et al. T24 human bladder carcinoma oncogene is an activated form of the normal human homologue of BALB and Harvey-MSV transforming genes // Nature. 1982. — v. 298. — p. 343−347.
  95. Santos E., Reddy E., Pulciani S. et al. /7 Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1983.- v. 80. — p. 4679−4683.
  96. Santos E., Martin-Zanca D., Reddy E. P. et. al.1. Ql
  97. Malignent activation of a K-ras oncogene in lung carcinoma but not in normal tussue of the same patient /7 Science.- 1984.-v. 223. p. 661−664.
  98. Schwab M., Alitalo K., Varmus H. E. et al. A second oncogene (c-Ki-ras) is amplified, overexpressed and located within karyotypic abnormalities in mouse adenocortical tumor cells // Nature. 1983.- v. 303. — p. 497−501.'
  99. Sekiya T., Fushimi N., Hori H. et al. Molecular cloning and the total nucleotide sequence of the human c-Ha-ras-1 gene activated in melanoma from Japanese patient // Proc. Nat. Acad. Sci. USA.- 1984.- v. 81. p. 4771−4775.
  100. Shimisu K., Birnbaum D., Ruley MA. et al. Structure of the Ki-ras of the human lung carcinoma cell line Celu-1 // Nature. 1983. — v. 304. — p. 497−500.
  101. SI anion D., Shimotohno K., Cline M. et al. Identification of the putative transforming protein of the human T-cell leukemia viruses HTLV-1 and HTLV-II // Science.-1984.- v. 226. p. 61−65.
  102. Slamon D. j., deKernion j. B., Verma J. M. et al. Expression of cellular oncogenes in human malignancies ././ Science. 1984a. — v. 224. — p. 256−262.
  103. Spandidos D. A., Vilkie N. M. ifolignant transformationof early passage rodent cells by a single mutated human oncogene /V Nature. 1984.- v. 310. — p. 469−475.
  104. Stacey D. V., Kung H. F. Transformation of NLH 3T3 cells by microinjection of Ha-ras p21 protein // Nature. -1984. v. 310. — p. 508−511.
  105. Stark G. R., Wahl G. M // Ann. Rev, Biochem. 1984.- v. 53. — p. 447−491.
  106. А. С. M., Janssen j. W. G. et al. RAS mutations in Hodgkin’s disease // Leukemia (Baltimore). 1988.- v.1. С * ~ p л LJ **" oS w! *
  107. Stehelin D., Varmus H., Vogt P. K. DMA related to the transforming gene (s) of avian sarcoma viruses is present invv^y^yvy^ 1 н .^y--. пк? a / / klor y--?j — 'i qr.-! a — 9кп -1 r-sf"* -i r-j0
  108. J iUA jiiCS-j. i-tr? j. La-A д Lri4J-i J iW-l-Lii ч?* j. s V «LUw'i p. ± - W J- /
  109. S., • Notario V., Martin-Zanca D, et al. Induction of mammary carcinomas in rats by nitrosomethylurea involves malignant activation of Ha-ras-1 locus by single point, mutation // Nature. 1983.- v. 306. — p. 658−661.
  110. Sukumar S., Carney W., and Barbae id M. Independent molecular pathways in initiation and loss of hormone responsiveness of breast carcinomas // Science (wash. DC).1988. v. 240. — p. 524−526.
  111. Sutherland B., Bennet P. Transformation of humancells by DNA transfections // Cancer. Kes. 1984.p. f→ i iw / / л.-.
  112. Tabin C. j., Bradley S. M., Bargmann С. I. et Nature. 1982.- v. 300. — p. 143−149.
  113. Tada M., Omata M., and Ohto M. Analysis of ras gene. mutations in human hepatic malignant, tumors by polymerase chain reaction and direct sequencing // Cane. Res. 1990. -v. 50. — p. 1121−1124.
  114. Taparowsky E., Evard Y., Fasano 0. et al. Activation of T24 bladder carcinoma transforming gene is linked to asingle amino acid change // Nature. 1982. — v. 300. — p. 762−765.
  115. Taparowsky E., Shimisu K., Goldfarb M, et al. //
  116. Пл1 1 -1 QOO «. Г 0.-1 P. Q-i UviJ., J. Zj V.
  117. Taya Y., Hosogoi K., Hirohashi S. et al. A novel combination of Ki-ras and myc amplification accompanied by point mutational activation of Ki-ras in human lung cancer // EMBO j. 1984.- v. 3. — p. 2943−2946.
  118. Theillet C. f Lidereau R., Escot C. et al. Frequent loss of a Ha-ras allele correlates with agressive primary breast carcinoma // Cancer Res.-1986. v. 46. — p. 4776−4781.
  119. Their S. L., Osoier D. G., Flint, j. et al. Harashyper-variable alleles in myedisplasia // Nature. 1986.- v. 321.-p. 84−85.
  120. Topal M. D, DNA repair, oncogenes and carcinogenesis/ {"^o"*"4'"4 •» ^Л'^й^йс ^ с —¦ ч Q&Q — <""> — АП-i —••• w’b-sri j. X A wi b→ -i i—-4 J. t' V д tJ л ./* Z3 L wл
  121. Vonsden K., Marshall C. Three different activated газ genes in mouse tumors: evidence for oncogene activation during progression of mouse lymphoma // EMBO j. 1984.- v. 3. — p. 913 917.al. //
  122. Vosberg Н-Р. The polymerase chain reaction anmproved method for the analysis of nucleic acids // Hum. Genet. 1989.-v. 83. — p. 1−15.
  123. Walter IvL, Clark S. G., Levinson A. D. The oncogenic activation of human p21 ras by novel mechanism /7 Science.-1986. v. 233. — p. 649−552.
  124. Weinberg R. A. Oncogenes of spontaneous and chemically induced tumors // Adv. Cancer Res. 1982.- v. 36. — p. 149−163.. ,
  125. Weinberg R. A. A molecular basis of cancer //' Sci. Am.-1983. v. 248. — p. 126−142.
  126. White T. j,, Arnheim N,, and Erlich H, A. The polymerase chain reaction // Tig.- 1989, — v, 5. p. 185−189.
  127. Willumsen В. M., Christensen A., Hubbert N. L. et al. The p21 ras C-terminus is required for transformation and membrane association // Nature. 1984.- v. 310, — p, 583−586,
  128. Wong C,, Douwling С, E., Saiki R. K. et al. Characterization of B-thalassaemic mutations using direct genomic seque-nsing of amplified single copy DNA // Nature. 198?'.- v. 330.-p. 384−386. «
  129. Yamamoto F., Perucho E Activation of a human c-Ki-ras oncogene //' Nucl. Acid Res, 1984, — v.» 12. — p. 8873−8886.
  130. Yuasa Y. Sri vastava S. K., Dunn C, Y, et al. Acquisi
Заполнить форму текущей работой

Пора сдавать?