Помощь в учёбе, очень быстро...
Работаем вместе до победы

Активаторы плазминогена урокиназного типа: кинетические свойства и повышение их тромболитической эффективности in vitro

Диссертация: Активаторы плазминогена урокиназного типа: кинетические свойства и повышение их тромболитической эффективности in vitro
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Впервые получены ацилированные по серину активного центра производные урокиназы, реактивирующиеся с различными скоростями и обладающие большей тромболитической эффективностью, чем свободная урокиназа. Показано in vitro, что со снижением скорости деацилирования повышается стабильность в плазме и длительность тромболитического эффекта и уменьшается величина побочных эффектов ацил-урокиназ на важные… Читать ещё >

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
  • ВВЕДЕНИЕ 7 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
  • Глава 1. Фибринолитическая система крови человека
    • 1. 1. Основные компоненты фибринолитической системы
      • 1. 1. 1. Плазминоген и плазмин
      • 1. 1. 2. Активаторы плазминогена
      • 1. 1. 3. Ингибиторы фибринолитической системы
    • 1. 2. Дисфункция фибринолитической системы
    • 1. 3. Механизм действия нефизиологических активаторов плазминогена
  • Глава 2. Образование и лизис фибринового сгустка
    • 2. 1. Строение фибриногена и механизм образования фибрина
    • 2. 2. Связывание компонентов фибринолитической системы с фибрином и его лизис плазмином
  • Глава 3. Строение и свойства активаторов плазминогена урокиназного типа
    • 3. 1. Структура про-урокиназы и урокиназы
    • 3. 2. Взаимодействие про-урокиназы и урокиназы с субстратами и ингибиторами
    • 3. 3. Механизм активации плазминогена про-урокиназой и урокиназой
    • 3. 4. Связывание про-урокиназы и урокиназы с рецепторами
  • Глава 4. Способы повышения тромболитической эффективности активаторов плазминогена урокиназного типа
    • 4. 1. Повышение сродства урокиназы и про-урокиназы к материалу тромба
    • 4. 2. Защита урокиназы от инактивации ингибиторами плазмы
    • 4. 3. Повышение времени циркуляции урокиназы и про-урокиназы в плазме
    • 4. 4. Комбинированное использование тромболитических агентов
  • ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТ
  • Глава 5. Исходные вещества и методы эксперимента
    • 5. 1. Исходные вещества
    • 5. 2. Методы эксперимента
      • 5. 2. 1. Выделение, очистка и характеристика исходных белковых препаратов
      • 5. 2. 2. Определение активностей урокиназы и про-урокиназы
      • 5. 2. 3. Изучение стабильности урокиназы в водных растворах
      • 5. 2. 4. Кинетика фибринолиза под действием урокиназы, про-урокиназы и их модифицированных производных
      • 5. 2. 5. Получение ацилированных производных урокиназы
      • 5. 2. 6. Кинетика деацилирования ацил-урокиназ
      • 5. 2. 7. Изучение тромболитической эффективности ацил-урокиназ
      • 5. 2. 8. Модификация про-урокиназы фенилглиоксалем
      • 5. 2. 9. Исследование тромболитической эффективности комбинаций про-урокиназы и стафилокиназы
  • РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
  • Глава 6. Свойства активаторов плазминогена урокиназного типа
    • 6. 1. Физико-химическая характеристика исходных препаратов урокиназы и про-урокиназы
    • 6. 2. Инактивация и стабилизация урокиназы в водных растворах
    • 6. 3. Кинетика фибринолиза под действием урокиназы
  • Глава 7. Обратимое ацилирование активного центра урокиназы
    • 7. 1. Получение ацилированных производных урокиназы
    • 7. 2. Кинетика деацилирования ацил-урокиназ
    • 7. 3. Стабильность ацил-урокиназ в плазме крови человека
    • 7. 4. Эффективность ацил-урокиназ в лизисе фибриновых и плазменных сгустков in vitro
    • 7. 5. Побочные эффекты урокиназы и ацил-урокиназ на важные белки плазмы крови человека in vitro
  • Глава 8. Модификация про-урокиназы фенилглиоксалем
    • 8. 1. Получение производных про-урокиназы с различным числом модифицированных остатков аргинина
    • 8. 2. Стабильность в плазме крови и тромболитическая активность модифицированных производных про-урокиназы
  • Глава 9. Тромболитическая эффективность комбинаций про-урокиназы и стафилокиназы
    • 9. 1. Фибринолитические эффекты комбинаций стафилокиназы и про-урокиназы
    • 9. 2. Влияние комбинаций стафилокиназы и про-урокиназы на уровни основных плазменных белков
  • ВЫВОДЫ

Активаторы плазминогена урокиназного типа: кинетические свойства и повышение их тромболитической эффективности in vitro (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

В современной терапии тромбозов и тромбоэмболий в качестве тромболитических агентов используются активаторы плазминогена. Принцип их действия заключается в превращении эндогенного плазминогена в плазмин, который непосредственно осуществляет лизис фибрина тромба. Идеальный тромболитический агент должен обладать: 1) высокой каталитической эффективностью в реакции активации плазминогена- 2) фибрин специфичностью действия, т. е. активировать плазминоген на сгустке более эффективно, чем в плазме- 3) способностью длительно циркулировать в кровотоке и 4) низкой антигенностью. Стрептокиназа, как чужеродный белок, антигенна. Урокиназа является высокоэффективным активатором плазминогена. Однако она, также как и стрептокиназа не имеет сродства к фибрину и вызывает системную активацию плазминогена, которая является причиной побочных эффектов. Тканевый активатор плазминогена, который эффективно активирует плазминоген только на фибрине, в клинических исследованиях не оправдал полностью надежд, связанных с фибрин-специфичностью его действия: в терапевтических дозах он вызывал геморрагические осложнения, уровень которых превосходил эффекты стрептокиназы. Общим недостатком всех активаторов плазминогена (стрептокиназы, урокиназы, тканевого активатора плазминогена и про-урокиназы), используемых в клинической практике, является быстрый клиренс их из кровотока (т-|/2 = 4−18 мин). Поэтому для поддержания терапевтического уровня высокие дозы этих дорогостоящих агентов (500−2500 $/доза) вводят в кровоток многочасовой инфузией, что вызывает активацию системного плазминогена и повышает риск осложнений (геморрагий, ретромбозов).

В связи с этим в ведущих научных центрах мира не прекращаются исследования по повышению тромболитического и снижению побочных эффектов активаторов плазминогена. Эти исследования ведутся в трех основных направлениях: 1) разработка фибрин-специфичных активаторов плазминогена с использованием новых источников и методов генной инженерии- 2) улучшение свойств известных активаторов путем их модификации или гибридизации и 3) улучшение режима тромболитической терапии путем комбинированного введения агентов.

К наиболее заметным успехам первого направления можно отнести получение: некоторых мутантов тканевого активатора с улучшенными тромболитическими свойствамибиспецифические конструкции агентов с антителами к фибринуактиватора плазминогена из слюны летучей мыши-вампир и рекомбинантной фибрин-специфичной стафилокиназы.

Второе направление привело к резкому скачку в терапии тромбозов. Разработанный и выпускаемый с 1988 года фирмой «Beecham Pharmaceutical» (Англия) обратимо ацилированный по активному центру анизоил-плазминоген-стрептокиназа активаторный комплекс (АПСАК или Eminase) быстро завоевал треть зарубежного европейского рынка. Благодаря временной блокировке активного центра АПСАК имеет ряд преимуществ перед другими агентами: более стабилен в плазме (ti/2 = 90 мин), сохраняет способность сорбироваться на фибрине, действует длительно в результате реактивации с контролируемой скоростью (к3 = 2.9*10″ 4с" 1) и может вводиться в организм путем одноразовой инъекции, что облегчает оказание помощи пациенту еще до госпитализации. Однако из-за достаточно высокой скорости реактивации АПСАК применяется лишь в неотложной терапии острого инфаркта миокарда, когда важна ранняя реперфузия кровотока и можно пренебречь осложнениями, частота которых сопоставима со стрептокиназой. Кроме того, АПСАК как и все производные стрептокиназы антигенен.

Третий подход, направленный на оптимизацию режима терапии путем комбинированного введения разных агентов, привел к открытию синергизма комбинированного тромболитического действия тканевого активатора, урокиназы или стрептокиназы с про-урокиназой. Синергичные комбинации агентов открывают возможность снижения общей дозы агентов (в 3−6 раз) для достижения терапевтического эффекта, что в свою очередь приводит к снижению уровня побочных эффектов. Весьма важным фактором является и снижение стоимости терапии при исследовании синергичных комбинаций агентов.

Целью данной диссертационной работы являлось повышение тромболитической эффективности урокиназы и про-урокиназы с использованием трех подходов: 1) обратимого ацилирования активного центра урокиназы (временная защита ее от действия ингибиторов плазмы) — 2) необратимой химической модификации ингибитор-связывающей области молекулы про-урокиназы и урокиназы (ухудшение связывания их со специфическим ингибитором ПАИ-1) и 3) комбинированного использования стафилокиназы (в качестве триггера фибринолиза) и про-урокиназы (поиск синергичных комбинаций агентов).

Для достижения целей работы были поставлены следующие задачи:

— изучить детально кинетику инактивации урокиназы в водных растворах, выяснить механизм инактивации и подобрать условия ее стабилизации при длительной инкубации;

— сравнить кинетику лизиса фибриновых и плазменных сгустков под действием урокиназы и оценить вклад плазминогена, плазмина и ингибиторов плазмы в общую фибринолитическую активность активатора;

— изучить диффузию неспецифичных к фибрину урокиназы и ее ацил-производных внутрь сгустка и оценить ее взаимосвязь с фибринолитическим ответом;

— получить ацилированные по активному центру производные урокиназы с различными скоростями реактивации и исследовать влияние ацильных заместителей на стабильность в плазме, фибринолитические и побочные эффекты урокиназы in vitro.

— исследовать кинетику лизиса плазменных сгустков под действием различных доз индивидуальных стафилокиназы и про-ур5киназы, а также их одновременных и последовательных комбинаций при широкой вариации соотношения доз агентов в комбинациях;

— подобрать оптимальные условия для необратимой модификации остатков аргинина в ингибитор-связывающей области молекулы про-урокиназы (и урокиназы) и исследовать свойства модифицированных форм активатора;

— изучить in vitro побочные эффекты комбинаций стафилокиназы и про-урокиназы на важные белки плазмы (плазминоген, фибриноген и а2-антиплазмин) и выявить наиболее эффективные синергичные или аддитивные комбинации агентов, демонстрирующие низкие уровни побочных эффектов.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

выводы.

1. Выяснен механизм инактивации двухцепочечной урокиназы (54 кД). Показано, что потеря ферментом фибринолитической активности в растворе сопровождается деградацией ее легкой А-цепи и образованием низкомолекулярной 33 кД формы. Подобраны и оптимизированы условия, стабилизирующие урокиназу в растворе.

2. Впервые получены ацилированные по серину активного центра производные урокиназы, реактивирующиеся с различными скоростями и обладающие большей тромболитической эффективностью, чем свободная урокиназа. Показано in vitro, что со снижением скорости деацилирования повышается стабильность в плазме и длительность тромболитического эффекта и уменьшается величина побочных эффектов ацил-урокиназ на важные компоненты плазмы крови человека. Медленно реактивирующаяся гуанидинбензоил-урокиназа является наиболее эффективным пролонгированным тромболитическим агентом.

3. Обнаружена способность урокиназы и ацил-урокиназы проникать внутрь фибриновых и плазменных сгустков за короткие времена контакта и активировать включенный плазминоген. Выяснен механизм повышенной тромболитической эффективности ацил-урокиназы, по сравнению с урокиназой, в присутствии плазменных ингибиторов.

4. Сочетанием ацил-урокиназы и низких доз урокиназы достигнуто повышение начальной эффективности лизиса плазменных сгустков (снятие лаг-фазы) при сохранении длительности действия и низкого уровня побочных эффектов ацил-активатора in vitro.

5. Впервые проведена модификация положительно заряженных остатков аргинина (от 4 до 12) в молекуле одноцепочечной про-урокиназы фенилглиоксалем. Показано, что производное про-урокиназы, в котором модифицировано четыре остатка аргинина, три из которых расположены в экспонированном ингибитор-связывающем участке молекулы, обладает большей стабильностью в плазме и тромболитичской эффективностью, в сравнении с нативным активатором.

6. Впервые исследовано тромболитическое действие одновременных и последовательных комбинаций про-урокиназы и рекомбинантной стафилокиназы и обнаружен in vitro синергизм двух агентов в узком диапазоне сочетаний их доз. Продемонстрировано 2−3-кратное повышение степени тромболизиса и существенное снижение уровня побочных эффектов под действием синергичных комбинаций двух агентов в сравнении с ожидаемыми эффектами.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Bachmann F. Fibrinolysis. In: Verstraete M., Vermylen J., Lijnen R., Arnout J. (eds): Thrombosis and Haemostasis. Leuven University Press. 1987. P. 227−265.
  2. Lijnen H.R., Zamarron C., Blaber M., Winkler M.E., Collen D. Activation of plasminogen by pro-urokinase. I. Mechanism. // J. Biol. Chem. 1986. V. 261. P. 1253−1258.
  3. Fears R., Hibbs M.J., Smith R.A.G. Kinetic studies of the interaction of streptokinase and other plasminogen activators with plasminogen and fibrin. // Biochem. J. 1985. V. 229. P.555−558.
  4. Фибринолиз: Современные фундаментальные и клинические концепции. Пер. с англ. Под ред. П. Дж. Гаффни. С. Балкув-Улютина. М.: Медицина. 1982. 240 с.
  5. Vassalli J.D. The urokinase receptor. // Fibrinolysis. 1994. V. 8. P. 172−181.
  6. Lesuk A., Terminiello L., Traver J.H. Crystalline human urokinase: some properties. // Science. 1962. V.147. P. 880−882.
  7. Duffy M.G. Urokinase-type plasminogen activator and malignancy. // Fibrinolysis. 1993. V.7. P. 295−302.
  8. Castellino F.J. Plasminogen activators. // Bioscience. 1983. V. 33. P. 647−650.
  9. Novokhatny V.V., Kudinov S.A. Domains in human plasminogen. // J. Mol. Biol. 1984. V.179. P. 215−232.
  10. Verstraete M., Collen D. Thrombolytic therapy in the eighties. // Blood 1986. V. 67. P.1529−1541.1. Кудинов C.A. Лизин- и аргинин-связывающие участки доменов плазминогена. // Укр. биохим. журн. 1985. Т. 57. N5. С. 23−35.
  11. Collen D. On the regulation and control of fibrinolysis. // Tromb. Haemost. 1980. V. 43. P. 77−89.
  12. Groskopf W. R., Hsieh В., Summaria L., Robbins К. C. Studies on the active center of human plasmin. The serine and histidine residues. // J. Biol. Chem. 1969. V. 244, № 2. P. 359−365.
  13. В. В. Протеолитические ферменты. // М. Наука. 1971. С. 105.
  14. К., Kasaba Y., Kanaoka Y. «Inverse substrates» for trypsin. Efficient enzymatic hydrolysis of certain esters with a cationic center in the leaving group. //J. Amer. Chem. Soc. 1977. V. 99. P.4485−4488.
  15. Sherry S., Ajkjaersing N., Fletcher A.P. Activity of plasmin and streptokinase-activator on substituted arginine and lysine esters. // Thromb. Diath. Haemorh. 1966. V. 16. P. 18−24.
  16. Kiss I., Aurell L., Pozsgay M., Elodi P. Investigation on the substrate specificity of human plasmin using tripeptidyl-p-nitroanilide substrates. // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1985. V. 131. № 2. P. 928−934.
  17. P.В., Житкова Ю. В., Федоренко Я. Э. Казанская Н.Ф. Каталитические свойства плазмина и эквимолярного комплекса плазмин-стрептокиназа в реакциях с различными субстратами и ингибиторами. // Укр. биохим. журн. 1991. Т. 63. № 1. С. 13−20.
  18. P. Б., Попова Г. Ю., Казанская Н. Ф. Получение и свойства плазмина человека, свободного от активатора. // Вестн. Моск. Ун-та. Сер.2. Химия. 1988. Т.29. С. 88−92.
  19. Bachmann F. Fibrinolytic agents. // Fibrinolysis 1995, V.9. P. 9−15.
  20. Pannell R., Gurewich V. Activation of plasminogen by single-chain urokinase or by two-chain urokinase a demonstration that single-chain urokinase has a low catalytic activity (pro-urokinase). // Blood. 1987 V. 69. P. 22−26.
  21. Binder B. Physiology and Pathophysiology of the Fibrinolytic System. // Fibrinolysis 1995. V. 9. P. 3−8.
  22. Higgins D.L., Vehar G.A. Interaction of one-chain and two-chain tissue plasminogen activator with intact and plasmin-degraded fibrin. // Biochemistry. 1987. V. 26. P. 7786−7791.
  23. Aoki N., Harpel P. Inhibitors of the fibrinolytic enzyme system. // Semin. Thromb. Haemost. 1984. V. 10. P. 24−41.
  24. Lijnen H.R., Collen D. in Protease Inhibitors of Human Plasma. Biochemistry and Pathophysiology, Ed. G. Murano, PJD Publications Ltd, New York, 1986, 225 p.
  25. Blasi F., Vassali J.-D., Dano K. Urokinase-type plasminogen activator: proenzyme, receptor and inhibitors. // J. Cell. Biol. 1987. V. 104. P. 801−804.
  26. Davidson J., Walker J. Synthetic thrombolytic agents. // Prog. Cardiovasc. Dis. 1979. V. 21. № 5. P. 375−396.
  27. Collen D.C., Gold H.K. New developments in thrombolytic therapy. // Thromb. Res. 1990. V. 10. P. 105−131.
  28. Jackson K.W., Tang J. Complete amino acid sequence of streptokinase and its homology with serine proteases. // Biochemistry. 1982. V. 21. P. 6620−6625.
  29. Wulf R., Mertz E. Studies of plasminogen. VIII. Species specifity of streptokinase. II Canad. J. Biochem. 1969. V. 49. № 10. P. 927−931.
  30. McClintock D.K., Bell P.H. The mechanism of activation of human plasminogen by streptokinase. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1971. V. 43. P. 694−702.
  31. Buck F.F., Hummel B.C.W., De Renzo E. C. Interaction of streptokinase and human plasminogen. V. Studies on the nature and mechanism of formation of the enzymatic site of the activator complex. // J. Biol. Chem. 1968. V. 243. P. 36 483 654.
  32. Chibber B.A.K., Radek J.T., Morris J.P., Castellino F.J. Rapid formation of a anion-sensitive active site in stoichiometric complexes of streptokinase and human (Glu) plasminogen. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1986. V.83. P. 1237−41.
  33. Nihalani D., Sahni G. Streptokinase contains two independent plasminogen-binding sites. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. V. 217. P. 1245−1254.
  34. Cederholm-Williams S. A., De Cock F., Lijnen H.R., Collen D. Kinetics of the reactions between streptokinase, plasmin and a2-antiplasmin. // Eur. J. Biochem. 1979. V. 100. P. 125−132.
  35. Anonick P.K., Gonias S.L. Soluble fibrin preparations inhibit the reaction of plasmin with a2-macroglobulin. // Biochem. J. 1991. V. 275. P. 53−59.
  36. А.В. Молекулярные взаимодействия при фибринолизе. Поиск новых активаторов плазминогена. // Молек. биол. 1995. Т. 29. С. 38−60.
  37. Smith R.A.G., Dupe R.J., English P.D., Green J. Fibrinolysis with acyl-enzymes. A new approach to trombolytic therapy. // Nature. 1981. V. 290. P. 505−508.
  38. Kluft C. Advances in fibrinolysis. // Clin. Haematology. 1986. V. 15. P. 50−56.
  39. P.Б., Башков Г. В., Еремеев Н. Л., Попова Г. Ю., Казанская Н. Ф. Эффективность ацилированных тромболитических агентов в лизисе сгустков из плазмы крови человека и животных различных видов. // Укр. Биохим. Журн. 1991. Т. 63. № 2. С. 31−39.
  40. Vanderschueren S.M.F., Lijnen H.R., Collen D. Propepties of staphylokinase and its potential as a thrombolytic agent. // Fibrinolysis. 1995. V.9. Suppl. 1. P. 87−90.
  41. Collen D., Silence K., Demarsin E., De Mol M., Lijnen H.R. Isolation and characterization of natural and recombinant staphylokinase. // Fibrinolysis. 1992. V. 6. P. 203−213.
  42. Lijnen H.R., Van Hoef В., De Cock F., Okada K., Ueshima S., Matsuo O., Collen D. On the mechanism of fibrin-specific plasminogen activation by staphylokinase. //J.Biol. Chem. 1991. V. 266. P. 11 826−11 832.
  43. Lijnen H.R., Collen D. Staphylokinase, a fibrin-specific bacterial plasminogen activator. // Fibrinolysis. 1996. V. 10. P. 119−126.
  44. B.A. Домены крупные, функционально важные блоки молекул фибриногена и фибрина. //Журн.биохим.живот.чел. АН УССР 1982. С.38−57.
  45. Gaffney P.J., Dobos P. A structural aspect of human fibrinogen suggested by its plasmin degradation. // FEBS Lett. 1971. V. 15. P. 13−16.
  46. Reganon E., Arnaz J., Vila V. Degradation of human fibrinogen by plasmin: kinetic study. //Thrombos. Res. 1977. V. 10. P. 411−419.
  47. Langer B.G., Weisel J.W., Dinauer P.A., Nagaswami C. and Bell W.R. Deglycosylation of fibrinogen accelerates polymerization, increases lateral aggregation of fibrin fibers. // J. Biol. Chem. 1988. V. 263. № 29. P. 1 505 615 063.
  48. McKee P., Mattock P., Hill H. Subunit structure of human fibrinogen, fibrin and cross-linked insoluble fibrin. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1970. V. 66. P. 738−44.
  49. Gaffney P.J., Brasher M. Subunit structure of the plasmin-induced degradation products of crosslinked fibrin. // Biochim. Biophys. Acta. 1973. V. 295. P. 308−313
  50. Weisel J.W., Nagaswami C. Computer modeling of fibrin polymerization kinetics corelated with electron microscope and turbidity observations: clot structure and assembly are kinetically controlled. II Biophys. J. 1992. V. 63. P. 111−128.
  51. Weisel J.W., Francis C.W., Nagaswami C., Marder V.J. Determination of the topology of factor XII la-induced fibrin y-chain cross-links by electron microscopy of ligated fragments. // J. Biol. Chem. 1993. V.268. P. 26 618−26 624.
  52. Pisano J.J. Finlayson J.S., Peyton M.P., Nagai Y. et al. s (y-Glutamyl) lysine in fibrin: lack of cross-link formation in factor XIII deficiency. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1971. V. 68. P. 770−772.
  53. Hoylaerts M., Rijken D. C., Lijnen H. R., Collen D. Kinetics of activation of plasminogen by human tissue plasminogen activator // J. Biol. Chem., 1982, V. 257. P. 2912−2918.
  54. Iga Y., Stella S. R., Chandler A. B. Molecular exchange between blood and in vitro thrombi. // Haemostasis. 1984. V. 14. P. 361−365.
  55. Carr M. E., Hardin C. L. Fibrin has larger pores when formed in the presence of erythrocytes. //Am. J. Physiol., 1987, V. 253. H1069.
  56. Lehninger L. A., Principles of Biochemistry, Worth Publishers, Inc., New York, 1982, 957 p.
  57. Blink A., Planinsic G., Keber D., Jarh O., Lahajnar G., Zidansek A., Demsar F. Dependence of blood clot lysis on the mode of transport of urokinase into the clot a magnetic resonance imaging study in vitro.// Thromb. Haemost., 1991. V. 65. P. 549.
  58. Sakharov D. V., Nagelkerke J. F., Rijken D.C. Rearrangements of the fibrin network and spatial distribution of fibrinolytic components during plasma clot lysis. //J. Biol. Chem., 1996, V. 271, P. 2133−2138.
  59. Lukas M.A., Fretto L.J., McKee P.A. The binding of human plasminogen to fibrin and fibrinogen. //J. Biol. Chem. 1983. V.258. P. 4249−4256.
  60. Lijnen H.R., Stump D.C., Collen D.C. Single-chain urokinase-type plasminogen activator: mechanism of action and thrombolytic properties. // Seminars in Thromb. and Haemost. 1987. V.13. P. 152−159.
  61. Fleury V., Lijnen H.R., Angles-Cano E. Mechanism of the enhanced intrinsic activity of single-chain urokinase-type plasminogen activator during ongoing fibrinolysis. //J. Biol. Chem. 1993. V. 268. P.18 554−18 559.
  62. Fears R. Binding of plasminogen activators to fibrin: characterization and pharmacological consequences. // Biochem. J. 1989. V. 261, P. 313−24.
  63. Lukas M.A., Straight D.L., Fretto L.J., McKee P.A. The effects of fibrinogen and its cleavage products on the kinetics of plasminogen activation by urokinase and subsequent plasmin ability.//J. Biol. Chem. 1983. V.258. P. 12 171−12 177.
  64. Tran-Thang C., Kruithof E.K.O., Bachmann F. Tissue-type plasminogen activator increases the binding of glu-plasminogen to clots. // J. Clin. Invest. 1984. V. 74. P. 2009−2016.
  65. Husain S.S. Fibrin affinity of urokinase-type plasminogen activator. // J. Biol. Chem. 1993. V. 268. P. 8574−8579.
  66. Prasad A.S., Meftah S., Abdullah J., Kaplan J., Brewer G.J., Bach J.F., Dardenne M. Serum thymulin in human zinc deficiency. // J. Clin. Invest. 1988. V. 82. P. 1202−1210.
  67. Akluga A., Ulutin O.N. in Platelets: Recent Advances in Basic Research and Clinical Aspects. Excerpta Medica, Amsterdam. 1975. P. 185.
  68. Stepanova V., Bobik A., Bibilashvily R., Belogurov A., et.al. Urokinase plasminogen activator induces smooth muscle cell migration: key role of growth factor-like domain. // FEBS Letters 1997. V. 414. P. 471−474.
  69. Husain S.S., Hasan A.A.K., Budzinski A.Z. Differences between binding of one-chain and two chain tissue plasminogen activators to non-cross-linked and cross-linked fibrin clots. // Blood. 1989. V. 74. P. 999−1006.
  70. Lijnen H.R., Collen D. Alpha-2-Antiplasmin. // J. Medicine. 1986. V. 16. P. 225 284.
  71. Pizzo S.V., Schwartz M.L., Hill R.L., McKee P.A. The effect of plasmin on the subunit structure of human fibrin. // J. Biol. Chem. 1973. V. 248. P. 4574−4583.
  72. Gaffney P.J. D-dimer. History of the discovery, characterization and utility of this and other fibrin fragments. // Fibrinolysis. 1993. V. 7. P. 2- 8.
  73. Liu C.Y., Sobel J.H., Weitz J.I., Kaplan K.L., Nossel H.L. Immunologic identification of the cleavage products from the Aa- and Bp-chains in the early stages of plasmin digestion of fibrinogen. // Thromb. Haemost. 1986. V. 56. P. 100−106.
  74. Fleury V., Angles-Cano E. Characterization of the binding of plasminogen to fibrin surface: the role of carboxyl-terminal lysine. // Biochemistry. 1991. V. 30. P. 7630−7638.
  75. Anand S., Wu J-H., Diamond S.L. Enzyme-mediated proteolysis of fibrous biopolymers: dissolution front movement in fibrin or collagen under conditions of diffusive or convective transport. // Biotech. Bioengin. 1995. V. 48. P. 89−107.
  76. Matveyev M.Yu., Domogatsky S.P. Penetration of macromolecules into contracted blood clot. // Biophys. J. 1992. V. 63. P. 862−863.
  77. Sakharov D.V., Domogatsky S.P., Bos R., Rijken D.C. An experimental system for investigation of penetration of components of the fibrinolytic system into a plasma clot. // Fibrinolysis. 1994. V. 8. Suppl 2. P. 116−119.
  78. Wu J-H., Siddiqui K., Diamond S.L. Transport phenomena and clot dissolving therapy: an experimental investigation of diffusion-controlled and permeation-enhanced fibrinolysis. //Thromb. Haemost. 1994. V.72. № 1. P. 105−110.
  79. Bok R.A., Mangel W.F. Quantitative characterization of the binding of plasminogen to intact fibrin clots, Lysine-sepharose, and fibrin cleaved by plasmin. // Biochemistry. 1985. V. 24. P. 3279−3286.
  80. Diamond S.L., Anand S. Inner clot diffusion and permeation during fibrinolysis. // Biophys. J. 1993. V. 65. P. 2622−2643.
  81. Blomback B., Okada M. Fibrin gel structure and clotting time. // Thromb. Res. 1982. V. 25. P. 51−70.
  82. Nair C.H., Shah G.A., Dhall D.P. Effect of temperature, pH and ionic strength and composition on fibrin network structure and its development. // Thromb. Res. 1986. V. 42. P. 806−816.
  83. Bernic M.B. Increased plasminogen activator (urokinase) in tissue culture after fibrin deposition. // J. Clin. Invest. 1973. V. 52. P. 823−834.
  84. Husain S., Gurevich V., Lipinski B. Purification and partial characterization of a single-chain high-molecular weight form of urokinase from human urine. // Arch. Biochem. Biophys. 1983. V. 220. P. 31−38.
  85. Wun T.C., Scheuning W.D., Reich E. Isolation and characterization of urokinase from human plasma. //J. Biol. Chem. 1982. V. 257. P. 3276−3283.
  86. Wijngaards G., Rijken D.C., Van Wezel A.L., Grienfield E., Van der Velden C.A.M. Characterization and fibrin-binding properties of different molecular forms of pro-urokinase from a monkey kidney cell culture. // Thromb. Res. 1986. V. 42. P. 749−760.
  87. Sumi H, Tsushima H., Maruyama M., Mihara H. Fibrin-binding urokinase (or precursor form of urokinase) with a molecular weight of about 100 000 in fresh human urine. // Enzyme. 1985. V. 34. P. 201−211.
  88. White W.F., Barlow G.H., Mozen M. The isolation and characterization of plasminogen activators (urokinase) from human urine. // Biochemistry. 1966. V 5. P. 2160−2169.
  89. Hansen A.P., Petros A.M., Meadows R.P. et al. Solution structure of the amino-terminal fragment of urokinase-type plasminogen activator. // Biochem. 1994. V. 33. P. 4847−4864.
  90. Stephens R. W., Bokman A. M., Myohanen H. T., Reisberg T., Tapiovaara H., Pedersen N., Grondahl-Hansen J., Llinas M., and Vaheri A. Heparin binding to the urokinase kringle domain. // Biochemistry 1992. V. 31. P. 7572−7579.
  91. Reboud-Ravaux M., Desvages G. Inactivation of human high and low-molecular weight urokinases. Analysis of their active site. // Biochim. Biophys. Acta. 1984. V. 791. P. 333−341.
  92. Mattews B.W., Sigler P.B., Henderson R., Blow D.H. Three-dimensional structure of tosyl-a-chymotrypsin. // Nature. 1967. V. 214. P. 652−656.
  93. Nobuhara M., Sakamaki M., Ohnishi H., Suzuki Y. A comparative study of high molecular weight urokinase and low molecular weight urokinase. // J. Biochem. 1981. V. 90. P. 225−232.
  94. Kasai S., Arimura H., Nishida M., Suyama T. Primary structure of single-chain pro-urokinase. //J. Biol. Chem. 1985. V. 260. P. 12 382−12 389.
  95. Lijnen H.R., Van Hoef B., Collen D. Differential reactivity of Glu-Gly-Arg-CH2CI, a synthetic urokinase inhibitor, with single-chain and two-chain forms of urokinase-type plasminogen activator. // Eur. J. Biochem. 1987. V. 162. P. 351−356.
  96. Wun T.C., Ossowski L., Reich E. A proenzyme from of human urokinase. // J. Biol. Chem. 1982. V. 257. P. 7262−7268.
  97. Liu J.N., Gurewich V. Inactivation of the intrinsic activity of pro-urokinase by diisopropyl fluorophosphate is reversible. // J. Biol. Chem. 1995. V. 270. P. 84 088 410.
  98. Ellis V., Scully M.F., Kakkar V.V. Plasminogen activation by single-chain urokinase in functional isolation. A kinetic study. // J. Biol. Chem. 1987. V. 262. P. 14 998−15 003.
  99. Manchanda N., Schwartz B.S. Interaction of single-chain urokinase and plasminogen activator inhibitor type 1. //J. Biol. Chem. 1995. V.270. P.20 032−35.
  100. Shimizu K., Nakahara T., Kinoshita T. Plasminogen activator derivatives. // USA Patent. N4495285. 1985.
  101. J., Kjeldgaard N.O. // Biochim. Biophys. Acta. 1957. V. 24. P. 278−282.
  102. D.R., Langlinais R.P., Guest M.M. //Arch. Biochem. Biophys. 1955. V. 55. P. 286−287.
  103. Yabushita Y. Studies on the properties of immobilized urokinase: effects of pH and temperature. // Biotechnol. Appl. Biochem. 1988. V. 10. P. 294−300.
  104. Kajihara J., Shibata K., Kato K. Increased stability of PEG-PPG conjugated human urokinase against autolysis. // Biosci. Biotech.Biochem. 1997. V. 61. P. 197−198.
  105. Porter W.R., Staack H., Brandt K., Manning M.C. Thermal stability of low molecular weight urokinase during heat treatment. Effects of protein concentration, pH and ionic strength. //Thromb. Res. 1993. V. 71. P. 265−279.
  106. Christensen L.R. Quantitative determination of activity of streptococcal fibrinolysin. // Proc. Soc. Biol. Med. 1941. V. 46. P. 674−679.
  107. Astrup Т., Mullerts S. The fibrin plate method for estimating fibrinolytic activity. // Arch. Biochem. Biophys. 1952. V. 40. P. 346 351.
  108. Kline D.L., Reddy K.N. Proactivator and activator levels of plasminogen in plasma as measured by caseinolysis. //J. Lab. Clin. Med. 1977. V. 89, P. 1153−8.
  109. Г. Ю., Еремеев Н. Л., Айсина P.Б., Казанская Н. Ф. Метод определения плазмина по скорости лизиса фибринового геля. // Бюлл. эксперим. биол. мед. 1989. № 5. С. 561−564.
  110. А.А., Киберев В. К. Хромогенные и флуорогенные пептидные субстраты протеолитических ферментов. // Биоорг. Хим. 1988. Т. 14. С. 1461−1488.
  111. Butenas S., Di Lorenzo М.Е., Mann К. Ultrasensitive fluorogenic substrares for serine proteases. // Tromb. Haemost. 1997. V.78. P. 1193−1201.
  112. Kruithof E. K. Plasminogen activator inhibitors a review. // Enzyme. 1988. V. 40. P. 113−121
  113. Ellis V., Wun T-C., Behrendt N., Ronne E., Dano K. Inhibition of receptor-bound urokinase by plasminogen-activator inhibitors. // J. Biol. Chem. 1990. V. 265. P. 9904−9908.
  114. Lawrence D. A., Ginsburg D., Day D. E., Berkenpas M. B., Verhamme I. M., Kvassman J. O., Shore J. D. Serpin-protease complexes are trapped as stable acyl-enzyme intermediates. //J.Biol.Chem. 1995. V. 270. P. 25 309−25 312.
  115. Kruithof E.K., Tran-Trang C., Ransijn A., Bachmann F. Demonstration of a fast-acting inhibitor of plasminogen activators in human plasma. // Blood. 1984. V. 64. P. 907−913.
  116. Colucci M., Paramo J. A., Collen D. Generation in plasma of a fast-acting inhibitor of plasminogen activator in response to endotoxin stimulation. // J.Clin.Invest. 1985. V. 75. P. 818−824.
  117. Cubellis M.V., Wun T.C., Blasi F. Receptor-mediated internalization and degradation of urokinase is caused by its specific inhibitor PAI-1. // EMBO J. 1990. V. 9. P. 1079−1085.
  118. Adams D.S., Griffin L.A., Nachajko W.R., Reddy V.B., Wei C. A synthetic DNA encoding a modified human urokinase resistant to inhibition by serum plasminogen activator inhibitor. //J. Biol. Chem. 1991. V. 266. P. 8476−8482.
  119. Schwartz B. S. Differential inhibition of soluble and cell surface receptor-bound single-chain urokinase by plasminogen activator inhibitor type 2. A potential regulatory mechanism. //J. Biol. Chem. 1994. V. 269. P. 8319−8323.
  120. Madison E.L., Kobe A., Gething M.J.H., Sambrook J.F., Goldsmith E.J. Converting tissue plasminogen activator to a zymogen: a regulatory triad of Asp-His-Ser. // Science. 1993. V. 262. P. 419−421.
  121. Violand B.N., Castellino F.J. Mechanism of urokinase-catalysed activation of human plasminogen. //J. Biol. Chem. 1976. V. 251. P. 3906−3912.
  122. Watahiki Y., Takada Y., Takada A. Kinetic analysis of the activation of Glu-plasminogen by urokinase in the presence of fibrin, fibrinogen or its degradation products. //Thromb. Res. 1987. V. 46. P. 9−18.
  123. Urano T., de Serrano V.S., Chibber B.A.K., Castellino F.J. The control of the urokinase-catalysed activtion of human glutamic acid 1-plasminogen by positive and negative effectors. // J. Biol. Chem. 1987, V. 262. P. 15 959−15 964.
  124. Ellis V., Behrend N., Dano K. Plasminogen activation by receptor-bound urokinase. A kinetic study with both cell-associated and isolated receptor. // J. Biol. Chem. 1991. V. 266. P. 12 752−12 758.
  125. Stump D. C., Lijnen H. R., and Collen D. Purification and characterization of a novel low molecular weight form of single-chain urokinase-type plasminogen activator. //J. Biol. Chem. 1986. V. 261. P. 17 120−17 126.
  126. Lijnen H.R., Van Hoef B., Collen D. Influence of cyanogen-bromide-digested fibrinogen on the kinetics of plasminogen activation by urokinase. // Eur. J. Biochem. 1984. V. 144. P. 541−544.
  127. Lijnen H.R., Van Hoef B., De Cock F., Collen D. The mechanism of plasminogen activation and fibrin dissolution by single chain urokinase-type plasminogen activator in a plasma milieu in vitro. // Blood. 1989. V. 73. P. 1864−1872.
  128. Collen D., Zamarron C., Lijnen H.R., Hoylaerts M. Activation of plasminogen by pro-urokinase. II. Kinetics. II J. Biol. Chem. 1986. V. 261. P. 1259−1266.
  129. Wohl R. C., Summaria L., Robbins K. C. Kinetics of activation of human plasminogen by different activator species at pH 7.4 and 37 °C // J. Biol. Chem. 1980. V. 255. № 5. P. 2005−2013.
  130. Dewerchin M., Lijnen H. R., van Hoef B., De Cock F., Collen D. Biochemical properties of conjugates of urokinase-type plasminogen activator with a monoclonal antibody specific for cross-linked fibrin. // Eur. J. Biochem. 1989. V. 185. P.141−145.
  131. Lubin T.M., Caban R., Runge M.S. The tissue plasminogen activator finger domain confers fibrin-dependent enhancement of catalytic activity to single-chain urokinase-type plasminogen activator // J. Biol. Chem. 1993. V. 268. P. 5550−56.
  132. Takada A, Urano T., Takada Y. Influence of coagulation on the activation of plasminogen by streptokinase and urokinase. // Thromb. Haemost. 1979. V. 42. P. 901−908.
  133. Takada A., Takada Y. Activation of Glu-plasminogen by urokinase in the presence of fibrinogen, fibrin and SK-potentiator. // Thromb.Res. 1981. V. 22. P. 497−501.
  134. Takada Y., Makino Y., Takada A. Glu-plasminogen I and II: their activation by urokinase and streptokinase in the presence of fibrin and fibrinogen. // Thromb. Res. 1985. V. 39. P. 289−296.
  135. Kuiper J., Rijken D. C., de Munk G. A., and van Berkel T. J. In vivo and in vitro interaction of high and low molecular weight single-chain urokinase-type plasminogen activator with rat liver cells. // J.Biol.Chem. 1992. V. 267. P. 15 891 595.
  136. Nielsen L.S., Kellerman G.M., Behrendt N., Picone R., Dano K., Blasi F. A 55,000 60,000 Mr receptor protein for urokinase-type plasminogen activator. // J. Biol. Chem. 1988. V. 263. P. 2358−2363.
  137. Ploug M., Ronne E., Behrendt N., Jensen A.L., Blasi F., Dano K. Cellular receptor for urokinase plasminogen activator. // J. Biol. Chem. 1991, V. 266, P. 1926−1933.
  138. Appella E., Robinson E. A., Ullrich S. J., Stoppelli M. P., Corti A., Cassani G., and Blasi F. The receptor-binding sequence of urokinase. A biological function for the growth-factor module of proteases. // J.Biol.Chem. 1987. V. 262. P.4437−4440.
  139. Dano K., Behrendt N., Brunner N. et al. The urokinase receptor. Proteins structure and role in plasminogen activation and cancer. // Fibrinolysis. 1994. V. 8. P. 189−203.
  140. Kounnas M. Z., Henkin J., Argraves W. S., and Strickland D. K. Low density lipoprotein receptor-related protein/alpha 2-macroglobulin receptor mediates cellular uptake of pro-urokinase. // J. Biol. Chem. 1993. V. 268. P. 21 862−21 867.
  141. Drickamer K., Mamon J.F., Binns G., Leung J.O. Primary structure of the art liver ASGPr. Structural evidence for multiple polypeptide species. // J. Biol. Chem. 1984. V. 259. P. 770−778.
  142. Henkin J., Dudlak D., Beebe DP., Sennello L. High sialic acid content slows prourokinase turnover in rabbits. //Thromb. Res. 1991. V. 63. P. 215−225.
  143. Ferres H. Preclinical pharmacological evaluation of anisolated plasminogen streptokinase activator complex. Drugs. 1987. V. 33. P. 33−50.
  144. Fears R., Ferres H., Standring R. The protective effect of acylation on the stability of anisoylated plasminogen streptokinase activator complex in human plasma. // Drugs. 1987. V. 33. P. 57−63.
  145. Bringmann P., Gruber D., Liese A., Toschi L., et.al. Structural features mediating fibrin selectivity of vampire bat plasminogen activator. // J. Biol. Chem. 1995. V. 270. P. 25 596−25 603.
  146. Collen D. Fibrin-specific thrombolytic agents. // Scheweiz. Med. Wochenschr. 1987. V. 117. P. 1791−1798.
  147. Collucci M., Gavallo L.G., Agnelli G., Mele A., Burgi R., Heim J., Semeraro N. Properties of chimeric (tissue-type/urokinase-type) plasminogen activators obtained by fusion at the plasmin cleavage site. // Thromb. Haemost. 1993. V. 69. P. 466−472.
  148. Bakker А.Н., Nieuwenbroek N.M., Verheijen J.H. Domain-domain interactions in hybrids of tissue-type plasminogen activator and urokinase-type plasminogen activator. // Protein. Eng. 1995. V. 8. P. 1295−1302.
  149. Robbins K.S., Tanaka Y. Covalent molecular weight 92 000 hybrid plasminogen activator derived from human plasmin amino-terminal and urokinase carboxyl-terminal domains. // Biochemistry. 1986. V. 25. P. 3603−3611.
  150. Haber E., Quertermous Т., Matsueda G.R., et al. Innovative approaches to plasminogen activator therapy. //Science. 1989. V. 243. P. 51−56.
  151. Haber E. New fibrinolytic agents future developments. // Fibrinolysis. 1995. V. 9. P. 100−103.
  152. Runger M.S., Quertermous Т., Zavodny P.J. et.al. A recombinant chimeric plasminogen activator with high affinity for fibrin has increased thrombolytic potency in vitro and in vivo. // Proc.Natl. Acad. Sci. USA. 1991. V. 88. P. 1 033 710 341.
  153. Puri R.N., Colman R.W. Reocclusion after thrombolytic therapy: strategies for inhibiting thrombin-induced platelet aggregation. // Blood. Coagul. Fibrin. 1993. V. 4. P. 465−478.
  154. Coller B.S. Seminars in medicine of the Beth Israel Hospital, Boston: Platelets and thrombolytic therapy. // N. Engl. J. Med. 1990. V. 322. P. 33−42.
  155. Coller B.S., Anderson K., Weisman H.F. New antiplatelet agents: platelet llb/llla antagonists. //Thromb. Haemost. 1995. V. 74. P. 302−308.
  156. Tait J.F., Engelhardt S., Smith C., Fujikawa. Pro-urokinase Annexin V Chimeras. //J. Biol. Chem. 1995. V. 270. P. 21 594−21 599.
  157. A.B. Химическая модификация белков крови для получения тромболитических препаратов направленного действия. // Журнал Всесоюз. Хим. Общества. 1987. Т. XXXII. С. 541−547.
  158. Yang W.P. Coldstain J., Procyk R., Matsueda G.R., Shaw S.Y. Desing and evaluation of a thrombin-activable plasminogen activator. // Biochemistry 1994. V. 33. P. 606−612.
  159. Sturzebecher J. Stable Acyl-derivatives of trypsin-like ensymes. // Biomed. Biochim. Acta. 1986. V. 45. P.1405−1410.
  160. Sturzebecher J., Richter M., Markwardt F. Stable-Acyl-derivatives of Tissue-type Plasminogen Activator. //Thromb. Res. 1987. V. 47. P. 699−703.
  161. Madison E.L., Goldsmith E.J., Gerard R.D., Gething M.J.H., Sambrook J.F. Serpin-resistant mutants of human tissue-type plasminogen activator. // Nature (London). 1989. V. 339. P. 721−724.
  162. Ueshima S., Holvoet P., Lijnen H.R., Nelles L., Serhers V., Collen D. Expression and characterization of clustered charge-to-alanine mutants of low Mr single-chain urokinase-type plasminogen activator. //Thromb. Haemost. 1994. V. 71. P. 134−140.
  163. Hiramatsu R., Kasai S., Amatsuji Y. et al. Effect of deletion of epidermal growth factor-like domain on plasma clearance of pro-urokinase. // Fibrinolysis 1989. V. 3. P. 147−151.
  164. Li X-K., Lijnen H.R., Nelles L., Hu M.-H., Collen D. Biochemical properties of recombinant mutants of nonglycosylated single chain urokinase-type plasminogen activator. // Biochim. Biophys Acta 1992. V. 1159. P.37−43.
  165. Abuchowski A., Davis F.F. Enzymes as Drugs 1981. New York, Wiley, P. 367.
  166. J.M. // Rev. Macromol. Chem. Phys. 1985. V. 25. P. 325.
  167. Koide S., Suzuki, and S. Kobayashi. Preparation of polyethylene glycol-modified streptokinase with disappearance of binding ability towards anti-serum and retention of activity. // FEBS Lett. 1982. V. 143. P. 73−76.
  168. Sakuragawa N., Shimizu K., Kondo K., Kondo S., and Niwa M. Studies on the effect of PEG-modified urokinase on coagulation-fibrinolysis using beagles. // Thromb. Res. 1986. V. 41. P. 627−635.
  169. Berger H.Jr., Pizzo S.V. Preparation of polyethylene glycol-tissue plasminogen activator adducts that retain functional activity: characteristics and behavior in three animal species.//Blood 1988 71: 1641−1647.
  170. Sim A.K., Mc Grow A.P., Cleland M.E., Nakano Y., Kato K. // Thromb. Haemost. 1993. V.69. P. 1083.
  171. Gurewich V. and Pannell R. A comparative study of the efficacy and specificity of tissue plasminogen activator and pro-urokinase: demonstration of synergism and of different thresholds of non-selectivity. //Thromb. Res. 1986. V. 44. P. 217−228.
  172. Pannell R., Black J. and Gurewich V. Complementary modes of action of tissue-type plasminogen activator and pro-urokinase by which their synergistic effect on clot lysis may be explained. //J. Clin. Invest. 1988. V. 81. P. 853−859.
  173. Fry E.T.A., Mack D.L., Sobel B.E. The nature of synergy between tissue-type and single-chain urokinase-type plasminogen activators. //Thromb. Haemost. 1989. V. 62. P. 909−916.
  174. Gurewich V., Liu J-N., Pannel R. The intrinsic concept. //Ann. N.Y. Acad. Sci. 1992. V. 667. P. 224−232.
  175. Flury V., Gurewich V., Angles-Cano E. // A study of the activation of fibrin-bound plasminogen by tissue-type plasminogen activator, single-chain urokinase and sequential combination of the activators. // Fibrinolysis 1993. V. 7. P. 87−96.
  176. Bashkov G.V., Jitkova J.B. A combination of recombinant single-chain urokinase-type plasminogen activator and streptokinase has a synergistic non-fibrin specific action on in vitro clot lysis. // Fibrinolysis 1995, V. 9. P. 356−362.
  177. Knowles J.R., Preston J.M. Convenient titrant for a-chymotrypsin and trypsin. // Biochim. Biophys. Acta. 1968. V. 151. P. 290−295
  178. Schonbaum G.R., Zerner В., Bender M.L. The spectrophotometric determination of the operational normality of an a-chimotrypsin solution. // J. Biol. Chem. 1961. V. 236. P. 2930−2935.
  179. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. // Nature. 1970. V. 227. P. 680−685.
  180. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurment with folin phenol reagent. // J. Biol. Chem. 1951. V. 193. P. 265−275.
  181. Wiman В., Wallen P. Activation of human plasminogen by an insoluble derivative of urokinase. // Eur. J. Biochem. 1973, V.36, p. 25−31.
  182. Методы исследования фибринолитической системы крови (под ред. Андреенко Г. В.). М&bdquo- МГУ. 1981. С. 5−31.
  183. Teger-Nilsson А.С., Friberger P., Gyzander E. // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1977. V. 37. P. 402.
  184. Steinbuch M., Friess A., Druet J., Amouch P: in «Proc. of the Vth Congress on Thrombosis and Haemostasis». 1975. Paris, Abst. 405.
  185. Clason S.B., Meijer P., Kluft C., Ersdal E. A novel method for the specific determination of plasmin inhibitor activity in plasma. // Fibrinolysis. 1996. V. 10. P. 165−167.
  186. Tomlinson G., Viswanata T. Determination of the arginine content of proteins by the Sakaguchi procedure. //Anal. Biochem. 1974. V. 60. P. 15−24.
  187. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Anal. Biochem. 1976. V. 72. P. 248−254.
  188. Okada K., Ueshima S., Takaishi Т., Fukao H., Matsuo O. Molecular analysis for stabilisation of plasmin activity by lisine derivatives. // Fibrinolysis. 1996. V. 10. Suppl. 3. P. 27.
  189. P.В., Гайсарян E.C., Снитко Я. Э., Варфоломеев С. Д. Ингибирование L-лизином эстеразной, активаторной и фибринолитической активности активаторного комплекса плазминоген*стрептокиназа. // Биоорг. химия. 1994, Т. 20. С. 182−189.
  190. S., Mullerts S. // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1974. V. 34. P. 167−176.
  191. Ю.В. Эффективность действия ацил-производных активаторного комплекса плазминоген-стрептокиназа как новых тромболитических агентов. // Кандидатская диссертация. М. МГУ. 1995.
  192. К. // The chemistry of heterocyclic compounds, imidazole and its derivatives, Part 1. Interscience Publishers, Inc., New York. 1953. P. 93.
  193. Takahashi K. The reaction of phenylglyoxal with arginine residues in proteins. // J. Biol. Chem. 1968. V. 243. P. 6171−6179.
  194. Berenbaum M.C. The expected effect of a combination of agents: the general solution. // J. Theor. Biol. 1985. V. 114. P. 413−431.
Заполнить форму текущей работой

Пора сдавать?