Химико-фармацевтические аспекты тамоксифена и его Е-изомера

С момента открытия Д. Бэтсеном в 1896 году гормональной зависимости опухоли у больных раком молочной железы был пройден долгий путь в лечении рака молочной железы (РМЖ) [111]. Антиэстрогенные препараты были одними из первых гормональных препаратов, созданными на основе результатов молекулярно-биологических исследований природы опухолевых клеток. Создание первого и наиболее популярного препарата из группы антиэстрогенов — тамоксифена цитрата — стало одним из наиболее значительных этапов в развитии гормонотерапии.

Введение

его более двадцати пяти лет назад в клиническую практику позволило не только улучшить качество жизни больных РМЖ в менопаузе, но и значительно увеличить продолжительность их жизни [4,41,42,47,59].

Тамоксифен является важнейшим препаратом в истории лечения РМЖ XX века. Его применение снижает риск возникновения рецидивов и смертности, что позволяет включать в схемы химиотерапии, а также применять самостоятельно у пожилых больных с положительными рецепторами эстрогенов при РМЖ [10,4,74,84,94]. В настоящее время препарат широко применяется не только для лечения больных, а в последние годы в ряде стран и с целью гормонопрофилактики у женщин группы риска [9, 44,93,112,130,151].

Учитывая имеющиеся данные об эффективности применения тамоксифена, а также о серьёзности его побочных эффектов, частично объясняемых наличием Е-изомера, идет поиск других лекарственных средств, которые можно было бы эффективно и безопасно использовать для лечения РМЖ. К настоящему времени синтезирован ряд аналогов антиэстрогенов (торемифена цитрат и др.), которые уже присутствуют на рынке или проходят клинические испытания [11,13,42,51].

В определённых пределах частота побочных эффектов и время наступления эффекта зависят от свойств лекарственной формы, поэтому параметры фармацевтического качества являются существенным фактором при оценке лекарственных препаратов, особенно тех, которые имеют одинаковый состав, т. е. дженериков [61]. При этом фармацевтическое качество конечного продукта становится определяющим, а фармакологические свойства отступают на задний план [87,104].

Современный этап развития фармацевтического анализа характеризуется повышением требований к качеству лекарственных средств. При решении теоретических и практических задач по реализации этих требований всё- большее значение приобретают селективные, высоко чувствительные и точные физико-химические методы анализа [17,25,68,87].

Изучение отечественной и зарубежной литературы по стандартизации и анализу тамоксифена свидетельствует о несовершенстве многих применяемых способов контроля качества [75,110,120].

На фармацевтическом рынке России находится около 30 воспроизведённых тамоксифен-содержащих препаратов [21]. Решение проблемы рационального выбора препарата заключается в осуществлении эффективных мероприятий по контролю качества. Следовательно, является актуальной проблема повышения эффективности контроля качества путём разработки национальных стандартов качества, не уступающих международному уровню стандартизации.

Целью настоящего исследования является совершенствование стандартизации и контроля качества тамоксифена цитрата и торемифена цитрата, а также разработка методик для проекта нормативной документации субстанции тамоксифена цитрата и таблеток тамоксифена. Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Проведение сравнительной оценки уровня стандартизации тамоксифена путём анализа данных научной литературы и действующих нормативных документов.

2. Получение и изучение УФи ИК-спектров поглощения Е и Z изомеров тамоксифена цитрата и торемифена цитрата.

3. Изучение физико-химических свойств тамоксифена и его Е-изомера, а также аналога тамоксифена — торемифена цитрата и его Е-изомера.

4. Разработка нового, менее трудоемкого и менее дорогостоящего способа количественного определения таблеток тамоксифена цитрата с использованием спектрофотометрического метода в видимой области спектра.

5. Разработка методики разделения и количественного определения примесей в тамоксифена цитрате и торемифена цитрате методом ВЭЖХ на основе предварительного исследования хроматографического поведения Е и Z изомеров тамоксифена и торемифена.

6. Выбор оптимальных условий для качественного и количественного анализа тамоксифена цитрата и торемифена цитрата и изучение степени чистоты таблеток тамоксифена цитрата и торемифена цитрата методом ВЭЖХ.

7. Проведение сравнительной оценки качества таблеток тамоксифена цитрата различных фирм на основании теста «Растворение».

8. Разработка нормативной документации для ГФ XII.

Поставленные задачи решались путём критического рассмотрения, анализа и обобщения литературных данных и результатов собственных экспериментальных исследований.

Научная новизна результатов исследований.

Впервые описаны физико-химические свойства Е и Z изомеров тамоксифена цитрата и его аналога — торемифена цитрата: представлены ИК и УФ спектры, описаны химические и физические свойства на основе структуры, показана возможность химического взаимодействия.

Разработана оригинальная, чувствительная и воспроизводимая методика количественного определения таблеток тамоксифена с помощью метода спектрофотометрии в видимой области спектра на основании изучения свойств и УФ-спектров тамоксифена.

Изучено хроматографическое поведение Е и Z изомеров тамоксифена цитрата и торемифена цитрата и выявлены оптимальные условия проведения разделения Е и Z изомеров методом ВЭЖХ с использованием внутреннего стандарта.

Проведена сравнительная оценка качества таблеток тамоксифена цитрата по показателю «Количественное определение» и «Содержание посторонних примесей» различных фирм-производителей.

Проведена оценка биоэквивалентности и качества по тесту «Растворение» таблеток тамоксифена различных фирм-производителей.

Практическое значение работы.

Предлагаемые методики количественного определения тамоксифена в таблетках методами ВЭЖХ и спектрофотометрии в видимой области спектра рекомендуются для включения в проект фармакопейной статьи на таблетки тамоксифена цитрата.

Предложенные методики определения содержания Е и Z изомеров могут быть использованы для анализа промышленных серий препарата по показателю «Посторонние примеси».

Результаты данного исследования по тесту «Растворение» представляют основу для рационального выбора тамоксифена из числа воспроизведённых препаратов этого ряда.

Разработаны проекты фармакопейный статей для ГФ XII на субстанцию и таблетки тамоксифена цитрата.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в рамках НИР кафедры фармацевтической химии ММА им. И. М. Сеченова «Совершенствование контроля качества лекарственных средств», Номер Госрегистрации 01.200.110 545.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

выводы.

1. Изучены УФи ИК-спектры Е и Z изомеров тамоксифена цитрата и торемифена цитрата. Кроме того, охарактеризованы ИК-спектры тамоксифена (основания) и торемифена (основания). Проведена интерпретация РЖ-спектров, показана возможность их использования с целью идентификации. Получены стандартные рисунки ИК-спектров.

2. На основе полученных спектральных данных разработана методика количественного определения тамоксифена цитрата методом спек-трофотометрии. Тамоксифена цитрат при взаимодействии с концентрированной серной кислотой образует комплексное соединение жёлтого цвета, обладающее способностью поглощать в видимой области спектра при длине волны 440 нм в максимуме. Торемифена цитрат так же образует комплексное соединение при взаимодействии с концентрированной серной кислотой, обладающее способностью поглощать в видимой области спектра при длине волны 443 нм в максимуме.

3. Установлена линейная зависимость между оптической плотностью двойной соли, образующейся при взаимодействии тамоксифена цитрата с концентрированной серной кислотой, и концентрацией препарата (г=0,997). Относительно невысокая ошибка определения тамоксифена цитрата, а также проведение его количественного определения достаточно низких концентраций препарата свидетельствуют о высокой чувствительности предлагаемого метода (0,001 мг/мл) и возможности его использования для количественного определения тамоксифена в его лекарственной форме.

4. Изучено хроматографическое поведение и определены оптимальные условия хроматографирования Z-изомера и Е-изомера тамоксифена цитрата и торемифена цитрата на основе теоретических и экспериментальных данных. Показано, что при соотношении компонентов подвижной фазы 70:30 происходит наибольшее разделение пиков Z и Е изомеров тамоксифена цитрата. Наибольшее разделение пиков Е и Z изомеров торемифена цитрата с наименьшими хроматографическими погрешностями происходило при соотношении компонентов подвижной фазы 60:40.

5. Проведён анализ качества субстанции тамоксифена цитрата по показателям «Количественное определение» и «Посторонние примеси». Показано, что она удовлетворяет требованиям Британской, Европейской и Фармакопеи США на субстанцию тамоксифена цитрата.

6. Проведён анализ качества таблеток тамоксифена цитрата по показателям «Количественное определение» и «Посторонние примеси» различных фирм-производителей. Показано, что препараты Тамифен (Кипр), Тамоксифен-ЭБЕВЕ (Австрия), Тамоксифен («Брынцалов», Россия), Та-моксифен-ТЕВА (Израиль), Тамоксифен-ЛЭНС (Россия) отвечают предъявляемым требованиям Британской Фармакопеи и Фармакопеи США по этим показателям. Так же результаты проведённого анализа качества таблеток Фарестон (Финляндия) соответствуют требованию по показателям «Количественное определение» и «Посторонние примеси».

7. Изучено высвобождение тамоксифена цитрата из таблеток Тамифен (Кипр), Тамоксифен-ЭБЕВЕ (Австрия), Тамоксифен («Брынцалов», Россия), Тамоксифен-ТЕВА (Израиль), Тамоксифен-ЛЭНС (Россия). Установлено, что профили кривых растворения для таблеток Тамоксифен-ЭБЕВЕ и Тамоксифен-ТЕВА практически совпадают. Результаты данного исследования представляют основу для рационального выбора тамоксифена из числа воспроизведённых препаратов этого ряда.

8. Исследование качества таблеток тамоксифена цитрата пяти фирм-производителей с помощью теста «Растворение» показало, что оно соответствует предъявляемым требованиям частной статьи на таблетки тамоксифена цитрата Фармакопеи США и общей статьи «Таблетки» Британской и Европейской Фармакопей. Для количественного контроля при проведении исследования по данному показателю использован метод ВЭЖХ.

9. На основании проведённых исследований разработаны проекты фармакопейных статей для ГФ XII на таблетки и субстанцию тамоксифена цитрата.

6.5.

Заключение

.

Согласно частной статье USP «Таблетки тамоксифен цитрата» и общим статьям Британской и Европейской Фармакопей «Таблетки» из лекарственной формы таблетки тамоксифена цитрата за 30 минут должно высвобождаться не менее 75% действующего вещества. Полученные и представленные в результате исследования данные показали, что таблетки Тамифен (Кипр), Тамоксифен-ЭБЕВЕ (Австрия), Тамоксифен-Ферейн (Россия), Тамоксифен-ТЕВА (Израиль) и Тамоксифен-ЛЭНС (Россия) соответствуют предъявляемым зарубежными фармакопеями требованиям к качеству таблеток по тесту «Растворение».

В точке «25 мин» высвобождение превышает 75% для всех препаратов, но, при этом, скорость растворения у образцов несколько отличается (рис. 46).

Как следует из рисунка 46, профили кривых растворения для таблеток Тамоксифен-ЭБЕВЕ и Тамоксифен-ТЕВА практически совпадают.

Концентрация,%.

-¦-Тамоксифен-ЛЭНС -«-Тамоксифен-ТЕВА й.

Тамоксифен-Ферейн -«-Тамоксифен-ЕБЕВЕ время, мин.

-*-Тамифен.

Рис. 46. Кривые высвобождения (%) тамоксифена из таблеток Тами-фен, Тамоксифен-ЭБЕВЕ, Тамоксифен-Ферейн, Тамокси-фен-ТЕВА и Тамоксифен-ЛЭНС.

Очень близким к ним по профилю является Тамоксифен-Ферейн, однако, за счёт использования поверхностно-активных веществ за первые 5 минут высвобождается около 70% действующего вещества. Высвобождение же действующего вещества из таблеток Тамифен в первые 10 минут происходит достаточно медленно (за 5 минут высвобождается около 5%), но к 30 минутам высвобождение составляет около 80%. Довольно равномерное высвобождение наблюдалось из таблеток Тамоксифен-ЛЭНС.

Результаты данного исследования представляют основу для рационального выбора тамоксифена из числа воспроизведённых препаратов этого ряда.