Разработка биотехнологического процесса получения комплексного ферментного препарата пуллуланазы и использование его для крахмалопаточной промышленности
Диссертация
Учитывая тот факт, что в нашей стране промышленного производства пуллуланазных препаратов нет, вопрос о поиске продуцентов внеклеточной пуллуланазы, разработке условий культивирования последнего, выделении фермента из культуральной жидкости, а также о возможности использования мультиэнзимных композиций ферментных препаратов пуллуланазы при биоконверсии крахмалистого сырья с целью получения… Читать ещё >
Содержание
- 1. Введение
- 2. Обзор литературы
- 2. 1. Крахмал-запасное вещество растительной клетки
- 2. 2. Особенности строения и свойства пуллуланана 2.2.1. Пуллулан и амилопектин: сходство и различие
- 2. 3. Микробная деградация крахмалистого сырья
- 2. 3. 1. Расщепление крахмала амилолитическими ферментами
- 2. 3. 2. Механизм действия амилолитического комплекса ферментов на крахмал
- 2. 3. 3. Пуллуланаза и механизм действия внеклеточной пуллуланазы
- 2. 4. Получение высокомальтозных сиропов из крахмалосодержащего сырья
- 3. Экспериментальная часть
- 3. 1. Материалы и методы исследования
- 3. 1. 1. Материалы
- 3. 1. 2. Методы исследования
- 3. 1. 2. 1. Метод определения содержания сухих веществ в растворах с использованием рефрактометра
- 3. 1. 2. 2. 0предедление восстанавливающих Сахаров по методу Бертрана
- 3. 1. 2. 3. 0предедление количества сырой клетчатки методом Кюршнера и Ганака
- 3. 1. 2. 4. 0пределение общего азота по Неслеру
- 3. 1. 2. 5. Определение свободных минеральных кислот
- 3. 1. 2. 6. 0пределение цветности раствора
- 3. 1. 2. 7. 0пределение вязкости на капиллярном вискозиметре
- 3. 1. 2. 8. 0пределение пуллуланазной активности методом Шомодьи-Нельсона
- 3. 1. 2. 9. 0пределение а-амилазной активности колориметрическим методом
- 3. 1. 2. 10. Определение глюкоамилазной активности с применением метода Зихера-Блейера в модификации Смирновой В. А. для опреления глюкозы
- 3. 1. 2. 11. Определение (3-амилазной активности
- 3. 1. 2. 12. Методы статистической обратки результатов
- 3. 1. Материалы и методы исследования
- 3. 2. Результаты и их обсуждение
- 3. 2. 1. Скрининг микроорганизмов на их спсобность образовывать пуллуланазу
- 3. 2. 2. Идентификация видовой принадлежности перспективного штамма микроорганизмов
- 3. 2. 3. Хранение культуры Micrococcus amylofaciens в лабораторных условиях
- 3. 2. 4. Оптимизация состава питательной среды для биосинтеза пуллуланазы бактериальной культурой Micrococcus amylofaciens
- 3. 2. 5. Подбор условий культивирования бактериальной культуры Micrococcus amylofaciens
- 3. 2. 6. Выделение, очистка и физико-химичекие свойства препарата пуллуланазы
- 3. 2. 6. 1. Выделение и физико-химические свойства препарата пуллуланазы
- 3. 2. 6. 2. Очистка и физико-химические свойства препарата пуллуланазы
- 3. 2. 7. Гидролиз крахмалосодержащего сырья ферментными препаратами
- 3. 2. 7. 1. Результаты исследования процесса разжижения крахмалов
- 3. 2. 7. 2. Исследование процесса осахаривания крахмала
- 3. 2. 7. 3. Влиянии различных факторов на процесс осахаривания крахмалистых субстратов (3-амилазы и оптимизация условий
- 3. 2. 7. 4. Определение оптимальной дозы вносимого ферментного препарата (3-амилазы на стадии осахаривания
- 3. 2. 7. 5. Применение композиции, а и {3-амилазы для получения высокомальтозных сиропов
- 3. 2. 7. 6. Использование мультиэнзимной композиции ферментов для гидролиза крахмалов
- 3. 2. 8. Варианты технологии ферментативного гидролиза крахмалов
- 3. 2. 9. Некоторые свойства высокомальтозных сиропов, полученных из крахмалосодержащего сырья
Список литературы
- Балаян A.M., Маркосян J1.C. Характеристика внутриклеточной пуллуланазы термофильного штамма Bac.spp.//Биохимия, 1989, т.54, вып.1, 273−281.
- Баразненок В.А. Выделение и свойства эндоглюконаз и ксилоназ .// Диссертация кандидата химических наук, М, МГУ, 1999,175 с.
- Беликов П. С. Дмитриева Г. А. Физиология растений.//РУДН, М, 1992,248 с.
- Бендецкий К.М., Яровенко B.J1. Действие альфа-амилазы из Bac. subtilis на крахмал.//Биохимия. 1987, т.38, № 3, 568−572.
- Бородин З.М., Ладур Т. А. Исследование процесса разжижения крахмала при производстве глюкозы ферментативным способом.// Сахарная промышленность, 1974,№ 2, 53−58.6.Бутова С.Н.
- Бутова С.Н., Кривова И. А., Ладур Т. А., Воробьева И.В.
- Витол И.С., Кобелева И. Б. Драубенберг С.Е. Ферменты и их применение в пищевой промышленности. // М: Издательский комплекс МГУПП, 2000,213с.
- Гаспарян А., Абелян Р., Африкян Р. Характеристика бета-амилазы Bac.polymyxa. // Биохимия, 1992, т.57, вып.6, 356.
- Ю.Герна Р. Л. Хранение микроорганизмов. Методы общей бактериологии. // Мир, М, 1983, т. 1,512с.11 .Грачева И. М., Кривова А. Ю. Технология ферментных препаратов. // М: Элевар, 2002, 512с.
- Грачев Ю.П. Математические методы планирования эксперимента. // Пищевая промышенность, М, 1979,199с.
- З.Громов М. А. Термофизические характеристики мальтозы и ее водных растворов. // Сахарная промышленность, 1987,№ 11, 59−61.
- М.Гулюк Н. Г., Жушман А. И. и др. Крахмал и крахмалопродукты.// Агропромиздат., М, 1985,238с.
- Канбурова М. Оптимизация условий синтеза термофильной пуллуланазы Вас. stearothermophilus.// Acta Microbiol. Bulg., 1986, № 9,48−51.
- Каприлянц Т., Тарахтий С., Стынгач Р. Ферментативный гидролиз пшеничного крахмала различными амилазами.// Микробиология, 1991, № 6, с. 50.
- Квеситадзе Г. М. Грибные и бактериальные амилазы.//Тбтлиси: Мецниереба, 1990,154 с.
- Квеситадзе Г. М. Эндоглюканазы термофильных и мезофильных грибов. // Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук, Тбилиси, 1994, 40 с.
- Киселева 3.JI. Окислительно-щелочная и водно-бутанольная делигнификация растительного сырья для получения глюкозы ферментативным гидролизом.// автореферат диссертации на соискание степени кандидата химических наук, м, 1993,24 с.
- Кислухина О.В. 2002 Ферменты в производстве пищи и кормов.//М.ДеЛи принт, 2002, 336 с.
- Кондратьева Н.А., Исакова Е. П., Бирюков В. В. Выделение и изучение термофильных анаэробных бактерий, утилизирующих целлюлозосодержащие материалы.// прикладная биохимия и микробиология, 1998, т.34,№ 4, 388−398.
- Кудряшова О.А., Юрлова Н. А. Изучение естественной изменчивости Aureobasidium pullulans шт. 11 продуцента эндосахарида.// Микробиология, 1997, т.66,№ 3,354−357.
- Ладур Т.А. Временная технологическая инструкция по применению ферментного препарата «Глюкозим Л-400С+Нео» в крахмало-паточном производстве.// Коренево: ВНИИК, 2001,-сЗ.
- Ладур Т.А. Выдача рекомендаций по внедрению ферментных препаратов при производстве глюкозы. // Отчет ВНИИК,№ 3551, 1971,47с.
- Ладур Т.А. Производство и применение низкосахаристых продуктов ферментативного гидролиза крахмала.// АгроНИИТЭИПП, 1988, сер.19, вып.2., 9−16.
- Ладур Т.А., Лукин Н. Д. Совершенствование техники и технологии сахаристых крахмалопродуктов в СССР и за рубежом.// АгроНИИТЭИПП, 1987, сер. 19, вып.9,с.7−16.
- Ладур Т.А., Лукин Н. Д. Применение биотехнологии для получения сахаристых продуктов для зернового крахмалосодержащего сырья.//Пищепромиздат, М, 2004, с.263−266.
- Ладур Т.А., Пучкова Т. С. Глюкозо-фруктозный сироп новый сахарозаменитель. // Сахарная промышленность, 1983,9, 53−54.
- Ладур Т.А., Сидорова Е. К., Лукин Н. Д. и др. Новое в технике и технологии производства сахаристых крахмалопродуктов и их применение в СССР и за рубежом. // ЦНИИТЭИ1111ищепром., 1983, сер.5,вып.6,11−16.
- Лукин Н.Д., Сидорова Е. К., Дубинская И. П. Пути совершенствования паточного производства.// АгроНИИТЭИПП, 1986, сер.19, вып.5, 1−36.
- Ленинджер А. Основы биохимии, тт.1−3- М.:Мир, 1990,-957с.
- Маркосян Л. С. Балаян A.M. Внеклеточная пуллуланаза термофильного штамма Bacillus sp.// Прикладная биохимия и микробиология, 1990, т. 26,№ 3, 313−320.
- Мазуренко А.Н., Каменский А. А., Сериченко Л. Г., Сазонова A.M., Румянцев В. М., Купцов Н. В. Штамм бактериий Bacillus subtilis продуцент осахаривающей амилазы, расщепляющей пуллулан. Патент 2 034 923, C1, RU, 1996, бюлл.13.
- Максимов В.И. Реакции трансгликозилирования в ферментативном гидролизе полисахаридов и методы их исследования // в книге «Микробиология и биохимия разложения растительных материалов», М, Наука, 2000,181−230.
- Номенклатура ферментов.//М: Изд-во ВИНИТИ, 1979−3 20с.
- Павлова И.Н., Ночарова Н. А., Захарова И. Я., Титиянова Н. З. Штамм бактерий B.lichenifor продуцент термофильных амилолитических ферментов.// Патент 5 021 951/13, опуб. 15.10.2001, бюл.37.
- Павлова И.П., Кочанова Н. А. и др. Штамм бактерий Вас. lichienifor -продуцент термостабильных амилолитических ферментов, патент 2 001 103, бюл.16,15.10.1993.
- Полыгина Г. В., Чередниченко B.C., Римарева Л. В. Определение активности ферментов.// ДеЛи принт, М,2003,372с.
- Пучкова Е.О. Методы определения содержания жизнеспособных микроорганизмов.//Биотехнология, 1996, т.4.,№ 1,142.
- Пучкова Т.С. Разработка технологии глюкозо-фруктозного сиропа из крахмала с применением глюкозоизомеризующих ферментных препаратов.// Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук, 1984, М, ВНИИК, 26с.
- Соловьева С.Ю., Ладур Т. А. Биоконверсия крахмала при производстве патоки заданного углеводного состава. // Пищепромиздат, М,2004,266−269.
- Сторневая В.В. Влияние рН на термочувствительность глюкозных сиропов.// ЦНИИТЭИПищепром., 1978, вып.4, 5−6.
- Сторневая В.В. Термическая устойчивость глюкозных сиропов при выпаривании и упаривании.// Сахарная промышленность, 1981 ,№ 1 ., 52−53.
- Рид. Д. Ферменты в пищевой промышленности. // Пищевая промышленность, М, 1971,342с.
- Рухлядева П.П., Полыггалина Г. В. методы определения гидролитических ферментов.//Легпищепром, 1981,290 с.
- Трегубов Н.Н., Костенко В. Г. Технохимический контроль крахмало -паточного производства.// Агропромиздат, 2-е изд., 1991,271 с.
- Трегубов Н.Н., Жаров Е. Я. и др. Технология крахмала и крахмалопродуктов. //Легкая и пищевая промышленность, М, 1981,472с.
- Шапашников Г. П., Иванова Е. А. Совершенные способы производства патоки и глюкозы из крахмала и крахмалосодержащего сырья.// ЦИНТЭИПищепром., 1969,40 с.
- Уистлер Р.Л., Пашаль Э. Ф. Химия и технология крахмала.// Пищевая промышленность, М, 1975,360с.
- Яровенко В.Л., Понамарева А. Н. «11"-комплекс растений и пуллуланаза Aerobacter aerugenes. //Пищевая промышленность, М, 1970, 243с.
- Altschul S F, Gish W, Miller W, Myers E W, Lipman D L. Basic local alignment search tool.// J Mol Biol. 1990−215:403−410.
- Anderson, S. & Weber, G. The reversible acid dissociation and hybridization of lactic dehydrogenase. //Arch. Biochem. Biophys., 2002, 116,207−223.
- Antranikian, G. Microbial degradation of starch. In Microbial Degradation of Natural Products (Winkelmann, G., ed.), pp. 28−56. VCH, Weinheim, Germany.2002.
- Ara K, Igarashi K, Saeki K, Ito S. An alkaline amylopullulanase from alkalophilic Bacillus sp. KSM-1378: kinetic evidence for two independent active sites for the a-1,4 and a-1,6 hydrolytic reactions. //Biosci Biotechnol Biochem. 1995−59:662−666.
- Arnosti C., Repeta D. Extracellular enzyme activity in anaerobial culture «.Evidence of pullulanase activity among mesophilic marine bacteria.//Appl.And Environ.Microbiol., 1994, v.60,3, 840−846.
- Badal C., Saha C., Saroj P., et al. Purification and characterization of ahydric thermostable pullulanase from Clostridium sp.// Microb., 1998,453−478.
- Badal C., Saha C., et al. Novel highly thermostable pullulanase from thermophiles.//Trends Biotech., 1989, v7,1,56−64.
- Bauer M.W., Driskill L.E., Kelly R.M. Glycosylgydrolases from hyperthermophilic microorganisms.//Curr. Opin. Biotechnol., 1998, 9,141−145.
- Bentley I.S., Williams E.C. Starch conversion. In: Industrial enzymology.//L.Macmilliam Press, 1996,337−357
- Bers, D.M., Patton, C.W. & Nuccitelli, R. A practical guide’to the preparation of Ca2+ buffers.// Methods Cell Biol., 2004, 40,3−29.
- Bergmeyer, H.U. & Grassl, M. Methods for Enzymatic Analysis, Vol. 2, 3rd edn. (Bergmeyer, H.U., ed.), pp. 151−152. Verlag Chemie, Weinheim., 2001.
- Bibel M., Bretti C., Gosslar U. Et al. Isolation and analysis of genes from amylolitic enzymes of the hyperthermophilic bacterium.//FEMS Microbiol.Lett., 1998,158, 9−15.
- Bisgard-Frantzen H., Svendsen A. Amylase variants. Patent application WO 96/23 873, 2004.
- Bradford M M. A rapid sensitive method for quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.// Anal Biochem. 1999−72:248−254.
- Brown S H, Kelly R M. Characterization of amylolytic enzymes having both a-1,4 and a-1,6 hydrolytic activity from the thermophilic archaea Pyrococcus furiosus and Thermococcus litoralis.//Appl Environ Microbiol. 1999−59:2614−2621.
- Brown, S.H., Kelly. R.M. Characterization of amylolytic enzymes from the thermophilic archaea Pyrococcus furiosus and Thermococcus litoralis.// Appl. Environ. Microbiol,.2003 63, 2616−2628.
- Bryant, D.T. Quin 2: the dissociation constants of its Ca2+ and Mg2+ complexes and its use in a fluorimetric method for determining the dissociation of Ca2±protein complexes. //Biochem. J., 2005,226, 613−616.
- Canganella F., Andrade C, Antranikian G. Characterisation of amylolytic and pullulytic enzymes from thermophilic archaea and from a new Fervidobacterium species. //Appl Microbiol Biotechnol. 1994−42:239−245.
- Cha H J., Yoon H G, Kim Y W, Lee H S, Kim J W, Kweon К S, Oh В H, Park К H. Molecular and enzymatic characterization of a maltogenic amylase that hydrolyzes and transglycosylates acarbose. Eur J Biochem. 1998−253:251−262.
- Cheoral K., Chung Y.C. et al. Enzymes involved in the processing of starch to sugars.//Appl.Environ. Microboil., 1994,57,123−128. ,
- Chung H., Yoon S, Lee M, Kim M, Kweon K, Lee I, Kim J, Oh B, Lee H-S. Characterization of a thermostable cyclodextrin glucanotransferase isolated from Bacillus stearothermophilus ET1// J. Agric Food Chem. 1998−3:952−959.
- Coleman, R.D., Yang, S.-S. & McAlister, M.P. Cloning of the debranching-enzyme gene from Thermoanaerobium brockii into Escherichia coli and Bacillus subtilis.// J. Bacterid., 1998,169,4302−4307.
- Crabb W D, Mitchinson C. Enzymes involved in the processing of starch to sugars. //Trends Biotechnol. 2004−15:349−352.
- Costanzo B., Garabed A. Starch-hydrolyzing enzymes from thermophilic archaea and bacterua,// Chemical Biplogy, 2002, 6,151−160.
- Diderichsen B, Christiansen L. Cloning of a maltogenic a-amylase from Bacillus stearothermophilus.// FEMS Microbiol Lett. 2000−56:53−60.
- Diderichsen B, Wedsted U, Hedegaard L, Jensen В R, Sjiuholm C. Cloning of aldB, which encodes a-acetolactate decarboxylase, an exoenzyme from Bacillus brevis. J Bacterid. 1990- 172:4315−4321
- Dong G., Vieille C, Zeikus J G. Cloning, sequencing, and expression of the gene encoding amylopullulanase from Pyrococcus furiosus and biochemical characterization of the recombinant enzyme. //Appl Environ Microbiol, 2000,34−78.
- Duffner F., Bertoldo C. A new thermoactive pullulanase from Desulfiirococcus mucosus: cloning, sequencing and characterization of the recombinant enzyme after expression in B.subtilis.//J.Bacteriol., 2000,182,6331−6338.
- Freer S. Purification and characterization of an extracellular a-amylase from Streptococcus bovis YB. II Appl Environ Microbiol. 2000−59:1398−1402.
- Furegon L, Curioni A, Peruffo DBA. Direct detection of pullulanase activity in electrophoretic polyacrylamide gels.// Anal Biochem. 2001 -221 -200−201,
- Gantelet H, Duchiron F. Purification and properties of a thermoactive and thermostable pullulanase from Thermococcus hydrothermalis, a hyperthermophilic archaeon isolated from a deep-sea hydrothermal vent.// Appl Microbiol Biotechnol. 2003−49:770−777.
- Gastro G. Purification and properties of a thermoactive and thermostable pullulanase from Thermococcus hydrothermalis.// Appl. Microbiol.Biotechnol., 1992, 49,770−777
- Jakovljevic D., Vrvic M. et al. Fine structural analysis oh the fungal polysaccharide pullulan elaborated by Aureobasidium pullulans CH-1 st.// J.Serb.Chem Soc., 2001,66,6,377−383/
- Henry, E.R. & Hofrichter, J. Singular value decomposition: application to analysis of experimental data.// Methods Enzymol. 2000, 210,129−192.
- Hyun, H.H. & Zeikus, J.G. General biochemical characterization of thermostable pullulanase and glucoamylase from Clostridium thermohydrosulfuricum.// Appl. Environ. Microbiol.2000,49,1168−1173.
- Kamburova A. Amylolytic enzymes and production derived from starch: a review. // Crit. Rev. Food Sci. Nutr.1986,35,373−403.
- Kashiwabara S, Ogawa S, Myyoshi N, Oda M, Suzuki Y. Three domains comprised in thermostable molecular weight 54,000 pullulanase of type I from Bacillus flavocaldarius KP 1228.//Biosci Biotechnol Biochem. 2000−63:1736−1748. «
- Kelkar H.S., Despande M. Purification and kinetic studies of wheat bran J3-amylase and pullulan-hydrolysing glucoamylase from Selerotium rolfsii.// Starch., 1993,45, 361−368.
- Koch, R., Zablowski, P., Spreinat, A. & Antranikian, G. Extremely thermostable amylolytic enzyme from the archaebacterium Pyrococcus furiosus. //FEMS Microbiol. Lett., 1990, 71,21−26.
- Koch, R., Spreinat, A., Lemke, K. & Antranikian, G. Purification and properties of a hyperthermoactive a-amylase from the archaebacterium Pyrococcus woesei.// Arch. Microbiol., 2000,155, 572−578.
- Johnson, W.C. Jr Analysis of circular dichroism spectra.// Methods Enzymol. 2003, 210,426−447.
- Lehrer, S.S. Solute perturbation of protein fluorescence. The quenching of the tryptophyl fluorescence of model compounds and of lysozyme by iodide ion.// Biochemistry, 2001, 10,3254−3263.
- Leuschner, C. & Antranikian, G. Heat-stable enzymes from extremely thermophilic and hyperthermophilic microorganisms.// World J. Microbiol. Biotechnol. 1999,11, 95−114.
- Linse, S., Johansson, C., Brodin, P., Grundstroem, Т., Drakenberg, T. & Forsen, S. Electrostatic contributions to the binding of Ca2+ in calbindin D9k.// Biochemistry, 2001, 30, 154−162.
- Lowry, O.H., Rosenbrough, N.J., Farr, A.L. & Randall, J.R. Protein measurement with the Folin phenol reagent. //J. Biol. Chem., 1951,193, 265−275 .
- Madi, E. & Antranikian, G. Identification of a starch degrading anaerobic thermophile producing thermostable a-amylase and pullulanase.// Appl. Microbiol. Biotechnol., 1999,30,422−425.
- Marc J. Van der Maarel et al. Properties and applications of starch-converting enzymes of the a-amylase family.//J. Biotechnol., 2002,94,137−155.
- Mathupala, S.P. & Zeikus, J.G. Improved purification and biochemical characterization of extracellular amylopullulanase from Thermoanaerobacter ethanolicus 39E. //Appl. Microbiol. Biotechnol., 2003,39,487−493.
- Melasniemi H. Effect of carbon source on production of thermostable a-amylase, pyllulanase and a-glucosidase by clost thermohydrosuturicum.// J. Ben Microb., 1997,133,4,883−890.
- Melasniemi, H. Purification and some properties of the extracellular alpha-amylase-pullulanase produced by Clostridium thermohydrosulfuricum. //Biochem. J., 2001,250,813−818.
- Myers, J.K., Pace, N.C. & Scholtz, M.J. Denaturant m values and heat capacity changes: relation to changes in accessible surface areas of protein unfolding. // Protein Sci., 2005, 4, 2138−2148.
- Myers, J.K., James M.G. et al Recent progress towards under-standing biosynthesis of the amylopectin crystal.// Plant Physiol., 2000,122,1989−1997.
- Nakamura, N., Sashihara, N., Nagayama, H. & Horikoshi, K. Characterization of pullulanase and a-amylase activities of a Thermus sp. AMD33.// Starch/Starke, 2000,41,112−117.
- H.Pace, C.N. & McGrath, T. Substrate stabilization of lysozyme to thermal and guanidine hydrochloride denaturation.// J. Biol. Chem, 2000,. 255,3862−3865.
- PattT. Microbiology degradation of chemical pullulans.// Appl.Biochem. Biotechnol., 1993,43, 6, 567−575.
- Permyakov, E.A., Yarmolenko, V.V., Emelyanenko, V.I., Burstein, E.A., Closset, J. & Gerday, C. Fluorescence studies of the calcium binding to whiting (Gadus merlangus) parvalbumin. //Eur. J. Biochem.2001,109,307−315.
- Royer, C.A., Mann, C.J. & Matthews, C.R. Resolution of the fluorescence equilibrium unfolding profile of trp aporepressor using single tryptophan mutants.// Protein Sci., 2002, 2,1844−1852.
- Saha B., Leikus J. Biotechnology of maltose syrup production.// Process Biochem., 1989,22,3,78−81.
- Salva G., Iracema.O. Effect of the carbon source of a-amylase production by B.subtilis.// Rev.Microbiol., 2001,26,1,46−51.
- Santoro, M.M. & Bolen, D.W. Unfolding free energy changes determined by the linear extrapolation method. 1. Unfolding of phenylmethanesulfonyl alpha-chymotrypsin using different denaturants. //Biochemistry, 2000, 27, 8063−8068.
- Schultes, V. & Jaenicke, R. Folding intermediates of hyperthermophilic D-glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase from Thermotoga maritima are trapped at low temperature.// FEBS Lett.2002,290,235−238.
- Spreinat, A. & Antranikian, G. Analysis of the amylolytic enzyme system of Clostridium thermosulfurogenes EMI.// Starch, 2002, 8,305−312.
- Sunna, A., Moracci, M., Rossi, M. & Antranikian, G. Glycosyl hydrolases from hyperthermophiles.// Extremophiles, 2002,1,2−13.
- Takasaki J. Production and utilization of P-amylasa and pullulanase. // Agricult. and Biolog.Chem., 1976, v40, 8,1551−1522.
- Takasaki J. Production of pullulanase. // Biolog.Chem., 1993, 5,8, 551−522.
- Tanford, C. Physical Chemistry of Macromolecules. -John Wiley, New York., 2000,672 p.
- Tomimura E. Action of neopullulanase. Neopullulanase catalyzes both hydrolysis and transglycosilation at a-1−4 and a-1−6 glucosidic linkages. // J. Biol.Chem., 1991, 267,18 447−18 452.
- TeggeG. Action of pullulanase.//J. Biol. Chem, 1980, 128, 786−897.
- Tegge G. Pullulanase.//J. Biol. Chem, 1986, 228,186−197.
- Tsou, C.L. Conformational flexibility of enzyme active sites. //Science, 2003, 262,380−381.
- Директор МентраН’Бйа^нженёрия» РАН академик. ГРА'СХН Скряби! К.Г. Ч:' ''' «2 $Йшваря 2006 г. 1. АКТ
- Опытно-промышленных испытаний ферментного препарата пуллуланазы, полученного из фильтрата культуральной жидкости Micrococcus amylofaciens.
- Процесс осахаривания крахмала осуществляли с использованием амилазы из B. polymyxa и препарата пуллуланазы из Micrococcus amylofaciens, без инактивации а-амилазы.
- Разжиженный продукт без изменения рН охлаждали до температуры 57 °C и в него задавали ферментные препараты в количестве 1,5 ед/г крахмала каждого. Процесс осахаривания осуществлялся в течение'60 часов.
- Затем осахаренный сироп подвергали механической фильтрации на лабораторном вакуум-фильтре и обесцвечиванию с использованием в качестве адсорбента порошкообразного активного угля в количестве 0,5% к СВ сиропа.
- Далее сироп уваривали на вакуум-аппарате до содержания СВ 47%.
- В результате получили высокомальтозный сироп в количестве 9,5 кг с содержанием сухих веществ 47%, редуцирующих веществ 98,5%, мальтозы 79,4%, глюкозы 10,2%, золы 0,45%.1. Заключение.
- Сокращается также продолжительность осахаривания до 60 часов вместо 72 часов для получения высокомальтозного сиропа при использовании пуллуланазы вместо традиционных ферментных препаратов.
- Подписи членов комиссии: зав. лабораторией инженерии ферментов Центра «Биоинженерия» РАН, jIri —Jд.х.н., профессор ^ Варламов В.П.старший научный сотрудник1. Лопатин С.А.
- Центра «Биоинженерия» РАН, к.х.н. ^у/ профессор кафедры «Биотехнология» МГУПП, д.б.н., профессор Бутова С.Н.соискатель кафедры «Биотехнология» МГУПП- Кривова И.А.