Принцип метода — мерой каталитической активности щелочной фосфатазы путем регистрации кинетики реакции, протекающей в буферном растворе, содержащим 2-амино-2-метил-1-пропанол, является количество освобожденного р-нитрофенола. Щелочная фосфатаза катализирует гидролиз бесцветного органического эфира фосфорной кислоты, р-нитрофенилфосфата, до р-нитрофенола, окрашенного в желтый цвет, и фосфата.
Ход определения:
Точные объемы реагента и образца вносились автоматически в реакционную кювету в следующем соотношении: одна часть образца на 50 частей реагента. Измерение поглощения прямо пропорционально активности щелочной фосфатазы в образце и использовалось анализатором. Расчет производился по калибровочному графику [Анализы. Полный справочник, 2007].
Исследования костного мозга
Принцип метода: Основан на взятии костного мозга путем пункции грудины по методу Аринкина при помощи иглы Кассирского с последующим рассмотрением и подсчетом его клеточного состава под микроскопом.
Ход определения:
Производят прокол рукоятки или тела грудины на уровне 3−4 ребра по средней линии. Полученный мазок переносят на часовое стекло и сразу же готовят из него тонкие мазки. Мазки высушивают при комнатной температуре и затем фиксируют по Май-Грюнвельду (краска-фиксатор) в течение 2−3 минут. Окраска мазков поизводится по Романовскому. При этом окрашивание различных элементов клеток в разные цвета и оттенки производится в течение 20−25 минут смесью основных (азур 2) и кислых (водорастворимый желтый эозин) красок. Мы использовали готовый раствор краски Романовского. После окончания окраски краска смывалась под струей воды и мазки просушивались. Аналогично производилось окрашивание мазков периферической крови). Затем производилось морфологическое исследование мазков. При этом подсчет красного ростка происходит с дифференцировкой эритроидного и мегалобластического типов кроветворения. Отличие мегалобластического типа от нормального определяли по изменению морфологии ядра и цитоплазмы нормацитов различных стадий созревания:
Ядро теряет нормальную структуру, хроматин становится однородным.
Цвет цитоплазмы не соответствует степени созревания ядра, может наблюдаться вакуолизация цитоплазмы.
При исследовании обращалось внимание на увеличение размеров гранулоцитов (гигантские палочки и гиперсегментированные нейтрофилы).
Методы математической обработки результатов
Математическая обработка результатов проводилась стандартными методами по Г. Ф. Лакину (1980). Нами было определено средняя арифметическая величина Х показателей в каждой группе, стандартная ошибка средней арифметической (±m), достоверность различий по критерию Стьюдента (t) различия считаются достоверными при Р ?0,05.
