Материал и методы

Исследование проведено у 15 пациентов с СН II-III функционального класса по классификации Нью-Йоркской ассоциации сердца (NYHA), проходивших лечение в условиях кардиологического отделения московской ГКБ № 59. Все пациенты, в соответствии с рекомендациями по ведению пациентов с СН [6], получали ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента, бетаадреноблокаторы, петлевые диуретики, 9 из этих пациентов получали антагонисты альдостерона.

В исследование включали пациентов в стабильном состоянии (отсутствие изменения в состоянии или терапии в течение 7 дней, предшествующих исследованию), подписавших информированное согласие на проведение терапии и взятие крови для производства анализов.

В исследование не включали:

• * пациентов, имевших клинические или лабораторные признаки острого воспаления или признаки хронических воспалительных заболеваний — хронический бронхит, пиелонефрит, артрит, системные заболевания соединительной ткани;
• * получавших индапамид в качестве антигипертензивной терапии;
• * имевших значимые изменения функционального состояния печени и почек;
• * имевших повышение уровня лейкоцитов крови более 9· 109/л, АСТ или АЛТ, превышающих в два раза уровень верхней границы нормы, повышение уровня креатинина более 30% от верхней границы нормального уровня (для женщин — 97 мкмоль/л, для мужчин — 115 мкмоль/л);
• * пациентов с привычными интоксикациями (наркомания, алкоголизм).

В работе использовали реактивы фирмы Sigma: люцигенин, люминол, форбол-миристат ацетат (РМА), формил пептид (FMLP), индапамид, диметилсульфоксид, гемоглобин, пероксид водорода, двухступенчатый градиент фиколл-гипака, а также раствор гепарина (Гедеон Рихтер).

Влияние индапамида на уровень радикалов кислорода было изучено на образцах цельной крови, в суспензиях изолированных нейтрофилов и в бесклеточной среде, генерирующей радикалы кислорода. Эффект оценивали по степени снижения (в %) радикалов кислорода по сравнению с максимальным действием стандартных стимуляторов. Кровь забирали из локтевой вены утром натощак до очередного приема лекарственных препаратов в пластиковые пробирки, содержание гепарина 30 МЕ/мл.

К исследуемым образцам добавляли люминофор люцигенин (конечная концентрация 30 мкМ). Измерение хемилюминисценции проводили на пробах цельной крови объемом 50 мкл и пробах суспензий нейтрофилов — 100 мкл. Нейтрофилы выделяли из периферической крови пациентов на двухступенчатом градиенте плотности фиколл/гипак. Клетки отмывали и затем культивировали в бесцветной среде Хенкса. Жизнеспособность изолированных нейтрофилов определяли в тесте с витальным красителем — трипановым синим. В опытах использовали суспензии нейтрофилов (1 млн клеток на мл) (не менее 95% живых клеток). Для исследований в бесклеточной системе к раствору Хенкса (100 мкл) последовательно добавляли люминол (30 мкМ), затем раствор гемоглобина и на их фоне — пероксид водорода (100 мкМ).

Спонтанное и индуцированное стандартными стимуляторами (бактериальный трипептид — FMLP, 3 мкМ и форбол меристат-ацетат-PMA, 1 мкМ), образование радикалов кислорода (супероксид-анионов О2 и гидроксил-радикалов) регистрировали при 25оС на хемилюминометре «Биотокс"-7 (Россия) в непрерывном режиме.

Хемилюминесценцию измеряли в количестве импульсов в сек и оценивали по интегральным значениям светосуммы за 10 минут. Каждое воздействие изучалось не менее чем в 4−6 отдельных опытах. Статистическую обработку результатов проводили с использованием программы SigmaPlot. Данные представлены в виде среднего арифметического значения стандартного отклонения. Достоверными считали различия при р<0,05).