Материалы и методы исследования

Объекты исследований

В качестве объектов исследования были плоды черники обыкновенной, полученные путем сбора в местах произрастания в Карачаево-Черкесской республике, а также приобретенные в торговле в замороженном виде.

Выделение антоцианозидыов

Антоцианозиды черники обыкновенной были получены путем настаивания ягод в 0,12 моль/л HCl в 10% этаноле в течение 24 часов в соотношении 100 мл/100 г продукта и затем полученный экстракт отделяли от ягод и нейтрализовали раствором бикарбоната натрия до нейтральной среды и высушивали под вакуумом на роторном испарителе при температуре 350 С. К сухому остатку вновь приливали 25 мл 10% водного раствора этанола и вновь экстрагировали в течение 24 часов путем настаивания. Экстракт центрифугировали, вновь высушивали под вакуумом при температуре 350 С до объема 1 мл. Полученный экстракт в количестве 50 мкл вводили в жидкостный хроматограф.

ВЭЖХ анализ

Анализ антоцианозидов проводился с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии [991, Waters] с использование в качестве датчика ультрафиолетовый детектор (785A, Perkin Elmer, Франция), а регистрация осуществлялась при длине волны 524 нм. Элюирование было проведено, используя в качестве основного раствора, А — вода/H3 PO4 (99:1) и растворитель ацетонитрил в качестве раствора В. Все образцы были проанализированы как описано в (10).

Образцы, полученные при экстракции черники обыкновенной, были разделены на колонке (150×4,6 мм) Uptisphere 30DB C18−3 мкм защищенный предколонкой (Uptisphere 30DB C18−3мкм, 10×4 мм; Interchim Франция). Хроматографические условия разделения были следующие при скорости элюирования 1 мл/мин: 0−10 мин, при добавлении 9% раствора B к раствору А; 10−25 мин, линейный градиент от 9% B к 12% раствора B, 25−40 мин, линейный градиент от 12% B к 16% раствора B; 40−45 минут, 16% B; 45−50 мин, линейный градиент от 16% B к 40% B.

Идентификация хроматографических пиков в образцах была проведена по сравнению с подлинными результатами, основанными на временах удержания отдельных веществ при ВЭЖХ анализе при ультрафиолетовом детектировании.