Технология получения пробиотиков

Технология производства бифидумбактерина

Бифидумбактерин представляет собой лиофилизированную микробную массу живых бифидобактерий. Бифидумбактерин предназначен для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней у человека и животных. По внешнему виду препарат представляет собой кристаллическую или пористую массу бежевого или беловато-серого цвета. В состав препарата входят сахароза и желатин, которые являются компонентами стабилизирующей среды высушивания. Препарат выпускают в виде сухой биомассы. Лиофилизированной в ампулах или флаконах. Массовая доля влаги сухого препарата должна быть не более 3,5%.

Все работы, связанные с пересевом, разведением, определением физико-химических характеристик бифидумбактерина, требуют соблюдения стерильности и проводятся в вытяжных шкафах или на лабораторных столах над кюветами, на дно которых помещены коврики, смоченные 10%-ным раствором перекиси водорода. Технология производства бифидумбактерина включает следующие стадии: приготовление питательных сред, выращивание посевного материала, культивирование, сублимационное высушивание, приготовление лекарственных форм, контроль готового препарата.

Приготовление питательных сред. Для культивирования бифидобактерий используют среду Блоурокка или среду на основе гидролизата казеина.

В состав среды Блоурокка входят агар микробиологический, натрий хлористый, пептон сухой, лактоза, печёночный бульон, цистин. Срок хранения питательной среды не более 7 суток при температуре 20±5°С.

Стадия выращивания посевного материала. Посевы бифидобактерий инкубируют при температуре 38±1°С в течение 60±12 ч. Контрольные посевы инкубируют при температуре 22±2°С в течение 8 сут. При этом получают бифидобактерии 1-ой генерации.

Следующий этап — получение бифидобактерий 2-ой генерации. Засев культуры проводят из расчёта 10% от объёма среды. Культура бифидобактерий и контрольные посевы инкубируют при той же температуре, что и для посева 1-ой генерации. Общее время также аналогично времени для посевов 1-ой генерации. Контроль посевной культуры проводится при высевании бифидобактерий 2-ой генерации в пробирки с глюкозой, средой Сабура и приготовлении мазка, окрашенного по Грамму.

При отсутствии роста в контрольных пробирках и наличии типичного роста бифидобактерий в виде рыхлого зернистого осадка, полученную культуру используют для посева в биореактор.

Культивирование. Культивирование бифидобактерий проводят в биореакторах марки БИОР. После проверки на герметичность и обработки фильтров биореактор стерилизуют при 130 °C в течение 90 мин. Затем в него вводят гидролизатно-молочную или казеиноводрожжевую среду. Засев питательной среды проводят бифидобактериями 2 — 3-ей генерации.

После культивирования проводят контроль биомассы. Биологическая концентрация бифидобактерий должна быть не менее 108 клеток/мл, посторонняя микрофлора должна отсутствовать, рН = 7,1 ± 0,1. Затем готовят среду высушивания и вводят в биореактор. Биомассу со средой высушивания перемешивают 3±0,5 мин механической мешалкой, разливают в стерильные ёмкости аппарата «Магнолия» и передают на участок розлива в ампулы.

Сублимационное высушивание биомассы. Розлив биомассы в ампулы производится при постоянном перемешивании. В начале, середине и конце розлива отбирают пробы для определения посторонней микрофлоры и жизнеспособности бифидобактерий, равномерности и точности розлива. Заполненную ампулами кассету прикрывают несколькими слоями стерильной марли, металлической крышкой и передают для замораживания в низкотемпературную установку Масс-5, где выдерживают препарат при температуре минус 40±2°С в течение 48 ± 2 ч. Высушивание проводят при давлении 13,3 ± 0,13 Па и температуре минус 30 ± 4 °C в течение 24 ± 2 ч, далее температуру повышают до + 28 ± 2 °C в течение 16 ± 2 ч и выдерживают 20 ± 2 ч.

Запайка ампул. Герметизацию ампул осуществляют не позднее 72 ч после окончания лиофилизации на автомате для запайки ампул в атмосфере азота.

Получение готовой лекарственной формы. Пятой стадией производства бифидумбактерина является маркировка и упаковка препарата. В помещении контроль производят проверку герметичности ампул и визуальный контроль.

Ампулы, прошедшие контроль и осмотр, отправляют на маркировочную машину, затем укладывают по 10 штук в пачки из картона. В каждую пачку вкладывается инструкция по применению препарата.

Контроль готового препарата осуществляется по следующим показателям:

• · физические свойства;
• · внешний вид;
• · отсутствие посторонней микрофлоры;
• · количество живых бифидобактерий в одной дозе препарата;
• · активность кислотообразования;
• · остаточная влажность, рН;
• · герметичность.