Новые методы исследования ДНК-белковых взаимодействий с помощью противоопухолевых антибиотиков

В Ы В О Д Ы.

1. Показано, что такие радикал-продуцирующие системы, как (ор)/си (Н)/НгОг. ,(BLM)/Fe (III)/H,>02. Fe (II)/H202.CU (II)/(AS А)/ Н^С^, МВ/с облучением гелий-неоновым лазером (длина волны 632,8 нм) и другие, кроме расщепления ДНК, индуцируют ДНК-белковое ковалентное связывание как in VitTO, так и in ViVO.

2. Связьюание белков с ДНК эффективнее проходит в анаэробной.

— Ill среде, сопровождается расщеплением ДНК, ингибируется гасителями ОН' -радикалов и не деградирует при этом белки.

3. ДНК-белковые комплексы, генерируемые при данных условиях, легко распадаются при низких значениях рН, что говорит о том, что связывание происходит через основания Шиффа. При аэробных условиях возможны также и другие типы кислото-зависимых связей, которые не стабилизируются восстановлением NaBH^.

4. С помощью метода установлено присутствие гйстона HI на новосинтезированной ДНК клеток асцитной карциномы Эрлиха через 3 минуты после начала репликации ДНК.

5. Предложена методика разделения основных белков хроматина с помощью хроматографии на оксиапатите. При этом обнаружено возрастание количества сшивок белков с ДНК у старых животных.

6. Разработанный метод может быть использован для эффективного отбора новыхпротивоопухолевых средств и обладает рядом важных преимуществ таких, как простота, доступность и потребность минимальных затрат. Для начальной идентификации противоопухолевого препарата достаточно знать, обладает ли такой препарат сшивающей способностью белков с ДНК или не обладает.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

В результате проведенных исследований в целом была достигнута основная поставленная цель работы и решены конкретные поставленные задачи, имеющие важное значение. Впервые был разработан метод ковалентного ДНК-белкового связывания in ViVO С помощью радикал-продуцирующих систем на основе антираковых препаратовблеомицина, 1−10 фенантролина и др., установлено слабое расщепление ДНК при этом и нерасщепление белков. Такие системы не работают в присутствии гасителей гидроксильных радикалов. Связывание происходит скорее всего через основания Шиффа, так как удается достичь разрушения ДНК-белкового комплекса при слабо-кислой обработке. Было показано, что при наших условиях клетки Эрлиха (и другие) в подавляющем большинстве сохраняли жизнеспособность после проведении такого связывания. Выход пришивки можно значительно увеличить, проводя ее в анаэробных условиях, однако при этом выживает всего около 70% клеток. Такой вариант пришивки лучше использовать для клеток, которые хорошо выживают при анаэробных условиях — например клеток дрожжей.

При наших условиях количество пришитых белков колебалось от 0,01 до 0,25% в зависимости от концентрации и типа противоопухолевых препаратов, их противоопухолевой активности, рН, концентрации кислорода и т. д.

Скорее всего, среди изучаемых нами систем, наиболее эффективной была система на основе блеомицина — наиболее сильнодействующего противоопухолевого антибиотика, позволяющая наиболее эффективно пришивать белки к ДНК. Этот метод имеет целый ряд преимуществ, таких как простота, мягкость и относительная вариабельность условий, способность получать пришитый материал в больших количествах и без значительной деградации и модификации белков. Разработанные методы позволили изучить присутствие белков после репликации ДНК. Стало понятным, что клетки Эрлиха содержат гистон HI уже через 3 минуты после начала репликации ДНК. Накопление ДНК-белковых сшивок при старении не проходит бесследно. Возникает иммунодефицитное состояние, тормозятся множественные клеточные процессы —репликации, рекомбинации, репарации и другие. Это может быть связано с тем" что большинство онкологических заболеваний возникает именно в старости, хотя известны и некоторые формы их, тпоражающие детей.

К сожалению, наряду с полученными результатами, должет указать на некоторые недостатки работы.' Нам не удалось получить ковалентное связывание белков с ДНК, используя многие другие радикал-продуцирующие системы, такие, как Fe (II)/As А/ НО «метиленовый зеленый/Н^О^ и др. По-видимому, эти системы не должны иметь противоопухолевой активности. При исследовании ДНК-белкового связывания в хроматине молодых и старых животных основная трудность заключалась в преодолении последствий протеолиза гистонов. которые иногда трудно отличить от изменений, происходящих при старении. Исходя из этих сложностей считаю, что в будущем, необходимо особое внимание обратить на метод ковалентного связывания белков с ДНК in ViVO с помощью блеомицина или других наиболее активных противоопухолевых антибиотиков, которые могут иметь важное прикладное значение. С его помощью в будущем-хотелось бы более глубоко исследовать интимные механизмы расщепления ДНК при действии таких антибиотиков. Познание же интимных механизмов действия противоопухолевых антибиотиков на генетический аппарат клетки может в дальнейшем дать фундаментальную основу для разработки методов лечения и профилактики многих онкологических заболеваний, а также явиться теоретической основой для создания подходов для увеличения продолжительности жизни. Полученные данные способствуют пониманию молекулярных основ нуклеосомной организации хроматина, а также биохимических механизмов старения.

1. Георгиев Г. П., Бакаев В. В. Три уровня организации хромосом эукариот.- Молекул, биол., 1978, т. 12, N6, е.* 1205−1230.

2. Бердшгев Г. Д., Василец В. А. Генетические подходы к увеличению видовой продолжительности жизни. Успехи совр. биологии, 1978, т. 7, N2, с. 103−130.

3. А. Харченко Е. П., Начиваева H.H., Кокреков В. Н. Гетерогенность гйстона HI в клетках с блокированным геномом.- Биохимия, 1980, т. 45, N3, с. 311−316.

4. Endicott К.М. Organization of cancer chemotherapy in the United States of America. ACTA, Unio internat., contra cancrum, 1957, 13, N3, p.497−199.

5. Cleveland D., Fisher S., Kirshner M., Laemmli U.K. Peptidemapping in sodium dodecyl sulfate and analysis by gel electrophoresis.- J. Biol. Chem., 1977, v.252, p.1102−1106. ,.

6. Hirschberg E., Gellhorn A., Gump W. Laboratory evaluation of anew nitrogen mustard 2-di-(2-chloroethyl)aminomethyl. -benzimidazole, and of the 2-chloroethyl compounds. Cancer Res. 1957, 17, N9, p.904−909.

7. Eagle H., Foley G.E. Susceptibility of cultured human cells to antitumor agents. Ann.N.Y.Acad.Sci., 1958, 76, N3, p.534−542.

8. Артемьева H.C., Фарутина JI. M. О восстановительных процессах в яичнике в условиях воздействия ТиоТЭФ. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1962, 53, N1, с.98−103.

9. Karpov V.L., Preobrazhenskaya O.V., Mirzabekov A.D. Chromatinstructure of hsp? o genes activated by heat schock: selective removal of histones fromthe coding region and their absense from the 5 region.- Cell, 1984,.v.36, p.423−433.

10. Zagariya A.M., Mirzabekov A.D., Bavykin S.G. A new methods of protein-nucleic acids cross-linking in vitro and in vivo by radical-producing chemical systems. Symposium Regulation of transcription, N21, Moscow, October 1−5, 1990, p. 12−13.

11. Laemmli U.K. Cleavage of structure proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 1970, V.227, N 5259, p.680−685.

12. McGhee J.D., Wood W.I., Dolan M., Engel J.D., Felsenf eld .G.

13. A 200 base pair region at the 5' end of the chicken adult b-globin gene is accesible to nuclease digestion.- Cell, 1981, V.27, p.45−55.

14. Ebralidse K.K., Grachev S.A., Mirzabekov A.D. A highly basic hist one H4 domain bound to the sharply bent region of nucleosomal DNA.- Nature, 1988, v.331, p.365−367.

15. Mirzabekov A.D., Bavykin. S.G., Belyavsky A.V., Karpov V.L., Preobrazhenskaya О.У., Shick V.V., Ebralidze K.K. Mapping DNA-protein interaction by cross-linking.- Meth. Enzymol., 1989, V.170, p.386−408.

16. Бердышев Г. Д., Криворучко И. Ф., Загария A. M. Генная патология. Раздел: Строение и функции генетического аппарата человека. Монография, Киев 1987, Реф. журналГенетика человека, 1988, N3, реф N 340 274, Деп., 279 С.

17. Kuwahara J., Suzuki Т., Funakoshi К., Sugiura У.-Pbotosensitive DNA cleavage and phage inactivation by cooper (Il)-camptothecin.- Biochemistry, 1986, v.25, p.1216−1221.,.

18. Levina E.S., Bavykin S.G., Shick V.V.,'Mirzabekov A.D. The method of crosslinking histones to DNA partly depurinated at neutral pH.- Anal. Biochem., 1986, v.25, p.1216−1221.

19. Asheshov I.N., Hall E.A., Flon H. Action of test compounds on bacterial-viruses. Cancer Res., 1955, Suppl. N3, p.57.

20. Kornberg G.R. Structure of chromatin.- Ann. Rev. Biochem., 1977, V.46, p.931−954.

21. McGhee J.D., Felsenfeld G. Nucleosome structure.- Ann. Rev. Biochem., 1980, V.49, p.115−156.

22. Бердышев Г. Д., Загария" A.M. Структура и функции хроматина при старении. Пермь. Мединститут. 160 с. Укр. НИИНТИ N 1075-УК91'от 24. 07. 91.

23. Finch J.T., Noll N., Kornlery R.D. Electron microscopy of defined length of chromatin.- Proc. Natl. Acad. Sci^ USA, 1975, V.72, p.3320−3329. '.

24. Ванюшин Б. Ф., Бердышев Г. Д. Молекулярно-генетические механизмыстарения. М.: Медицина, 1977, 271 с. 34 .Finch J .Т., Klug A. Solenoidal model for super structure in chromatin.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1976, v.73, N.6, p. l 897−1901.

25. Richmond T.J., Finch J.T., Ruchton в., Rhodes D., Klug A. Structure of the nucleosome core particle at 7 A resolution.-Nature, 1984, v.311, N.5986, p.532−537.

26. Бердышев Г. Д. Эколого-генётические факторы старения и долголетия. JI.: Наука, 1968, 207 с.

27. Burlingame R.W., Love V.E., Wang B.C., Hamlin R., Xuong N.H., Moudrianakis E.V. Crystallographic structure of the octameric histone core of the nucleosome at a resolution of 3,3 A.-Science, 1985, V.228, p.546−553.

28. Mirzabekov A.D., San’ko D.F., Kolchinsky A.M., Melnikova A.F. Protein arrangement in the DNA grooves in chromatin and nucleoprotamine in vitro and in vivo revealed by methylation.-Eur. J. BiOChem., 1977, V.75, p.379−389.

29. Bearb P. Mobility of histories on the chromosome of simian virus 40. Cell, 1978, V.15, p.955−967.

30. Stein A., Bina-Stein M., Simpson R.T. Crosslinked histoneoctamer as a model af the nucleosome coreProc. Natl. Acad. Sci. USA, 1977, V.74, p.2780−2784. .

31. Бакаев В. Б., Исследования структурно-функциональных отношений в хроматине эукариот.- Биологическая химия, М., ВИНИТИ, 1982, T.1G, с. 128−170.

32. Bavykin S.G., Usachenko S.I., Lishanskaya AJ. .et al. Primary organization of nucleosomal core particles is invariable in repressed and active nuclei from animal, plant and yeast cells.- NUC1. Acids Res., 1985, V.13. N10, p.3439−3459.

33. Lohr D" Kovacic R.T., Van Holde K.E. Quantitative analysis of the digestion of yeast chromat in by staphylococcal nuclease.-Biochem., 1977, v.16, N3, p.463−471.

34. Sandeen G., Wood W., Felsenfeld G. The interaction of hight mobility proteins HMG 14 and 17 with nucleosomes.- Nucl. Acids Res., 1980, V.8, N17, p.3757−3778.

35. Schroter H., Bode J. The binding sites for large and small hight mobility group (HMG) proteins. Studies on HMGnucleosome interaction in vitroEur. J. Biochemistry, 1982, V.127, N3, p.429−436.

36. Mirzabekov A.D., Sanko D.F., Alexander M. et al. Protein arrangement in the DNA grooves in chromatin and nucleoprotamine in vitro and in vivo revealed by rnethylation.

37. Mol. Biol. Rep., 1977, V. l, N2, p.379−389.

38. Бавыкин С. Г., Усаченко С. И., Шик В. Ви др. Первичная организация минимальных нуклеосом’активных и репрессированных ядер. Малек, биол. 1985,. т.19, N1, С. 144−161.

39. Поспелов В. А., Светликова’С.Б. ,.Воробьев В. И. Дискретные классы линкерной ДНК в хроматине. Молек. биол. 1980, т.14, N5, С. 1110−1115.

40. Zalenskaya I. A-, Pospelov V.A., Zalensky A.O., Vorob’ev V.I. Nucleosomal structure of sea urchin and starfish sperm-chromatin hist one H2B is possible inwolved determining the lengthof linker DNA.- Nucl. Acids Res., 1981, v.9, N3, p.427−473.

41. Weintraub H. The nucleosome repeat lenth increases during erythropoesis in the chick.- Nucl. Acids Res., 1979, v.5, N4, p.1179−1188.

42. Грумбокова Л. О., Бохонько А. И. Анализ структурной организации хроматина двух отделов головного мозга крыс с помощью микрококковой нуклеазы. Биохимия, 1980, т.45, N11, С.2013;2018.

43. Заленская И. А., Одинцова И. А., Заленский А. О., Воробьев В. И. Нуклеосомная организация хроматина спермиев двухстворчатого моллюска' Swifttopecten swifti. Молек. биол. 1982, т.16, N2,1. С.335−345.

44. Rtichline D., Wassarman P.M. Structural of chromatin in sea urchin embryos sperm and adult somatic cells.-Biochem., 1979, v.18, N1, p.214−219.

45. Бердьппев Г. Д. Изменения структуры и функций генной регуляторной системы в процессе развития и старения многоклеточных организмов. Цитология и генетика, 1971, т.5, N4, с.372−378.

46. Sobell Н.М., Tsai С., Gilbert S.G. et al Organization of DNAin chromatin.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1976, v.73, N9, p.3068−3072.

47. Crick F.H.C., Klug A. Kinky helix.- Nature, 1975, v.255, N5509, p.530−533.

48. Кучеренко H.E., Цудзевич Б. А., Блюм Я. Б., Бабенюк Ю. Д. Биохимическая модель регуляции активности хроматина.- Наукова думка. Киев, 1983, С. 248,.

49. Richmond Т.J., Finch J.T., Klug A. Studies of nucleosome structure.- Cold Spring Harbor Laboratory, 1983, p.493−501.

50. Бердышев Г. Д. Изменения структуры и функций генетического аппарата клеток в онтогенезе, и методы их коррекции. Молекулярная генетика и биофизика, 1985, вып. 10, с.73−82.

51. Храпунов С. Н., Чабанный В. Н. Роль белков в молекулярной организации хроматина и хромосом. В кн. Структура и генетическое значение белков хроматина эукариот. Киев. Наукова думка, 1985, с.3−15.

52. Бакаев В. В. Исследование структурно-функциональных отношений в хроматине эукариот. Изд. ВИНИТИ, Итоги науки и техники, Биол.• химия. М. 1982, т.16, с.128−170.

53. Todd R.D., Yarrard W.T. Over al: pathway of mononucleosome production.- J. Biol. Chem., 1979, V.254, N.8, p.3074−3083.

54. Zalenskaya I.A., Pospelov V.A., Zalensky A.O., Vorob’ev V.I. Nucleosomal. structure of sea urchin and starfish sperm chromatin histone H2B is possible involved determining the lenth of linker .DNA.- Nucl. Acids Res-, 1981,'v.9, N.3, p.473−427. .

55. Поспелов В.A.,. Светликова С. Б., Воробьев В. П. Распределение в хроматине участков ДНК, доступных для: эндонуклеазы Serratia Marcescens.- Молек. биол., 1978, т. 12, N5, С.1037−1049.

56. Weintraub Н. The nucleosome repeat length increases during erythropoesis, in the chick.- Nucl. Acids Res, 1978, v.5, N.4, p.1179−1188.

57. Finch J.T., Klug A. Solenoidal model for superstructure inchromatinProc. Natl. Acad. Sci. USA, 1976, v.73, N.6, p.1897−1901.

58. Lee K.Sn., Nandelkern M., Chrothers D.M. Solution structuralstudies of chromatin fibers.- Biochemistry, 1981, v.20, N6, p.1438−1445.

59. Бердышев Г. Д. Возрастные изменения структуры и функцийхроматина и их роль в механизмах старения. 1 сьезд Белорусского общества геронтологов и гериатров. Минск, 1983, с. 17−135.

60. Кирьяногв Г. И., Смирнова Г. А., Поляков В. Ю. Нуклеомернаяорганизация хроматина.- Биохимия, 1981, т. 46, N11, С. 19 231 927.

61. St rat ling W., Klingholz R. Supernucleosomal organization of chromatin digestion by Ca, Mg endonuclease proceeds via a discrete size class of particles with elevated stability.-Biochemlstry, 1981, v.20, N.5, p.1386−1392.

62. Zentgraf H., Franke W. Differences of supranucleosomalorganization of different kinds of chromatin: cell tyre specific globular subunits containing different numbers of nucleosomes.rJ. Cell Biol., 1984, v.99, N1, p.272−286.

63. ICiryanov G.I., Smirnova Т.Д., Polyakov V.Yu. Nucleomeric organization of chromatinEur. J. Biochem., 1982, v.124, N2, p.331−338.

64. Бердышев Г. Д., Бартошевская М. М., Говдазе Я. Г. и др.

65. Выделения и свойства хроматина из тимуса животных разного возраста. Цитология и генетика, 1971, т.5, N3, с.282−287.

66. Бердышев Г. Д., Криворучко И. Ф. Генетика человека с основамимедицинской генетики. Киев, Вища школа, 1979, с. 547.

67. Заленская И. А., Заленский.А.О., Костылева Е.И.и др. Участиегйстона Н2 В спермиев морского ежа в образовании надмолукулярных структур.- Молек. биол. 1985, т.19, N3, с.774−783.

68. Klevan L., Hogan М., Dattagupta N., Crothers D.M., Electricdichroism studies of the size and shape of nucleosomal particles.- Cold. Spring. Harbor., 1978, v.42, N1, p.207−214.

69. Ris H. Chromosomal structure as. seen by electron microscopy.1.: The structure and function of chromatin, Giba Found. Symp. Amersham, 1975, v.8, p.7−23.

70. Worcell A., Han S" Wong. M.L. Assembly of newly replicatedchromatinCell, 1978, N4, p.969−977.

71. Rather J.B., Hambalo B.A. Nucleosome packing in interphasechromatin.- J. Cell. Biol., 1979, v.81, N2, p.453−457.

72. Бердышев Г. Д., Никитин В. Н. Изменения функций хроматина и белок-синтезирующего аппарата клеток при старении. В кн.: Биология старения. Д.: Наука, 1982, с.192−212.

73. Hancock R. Topological organization of interphase DNA thenuclear metrix and other skeletal structure.- Biol. Cell.1982, V.46, N.2, р.105−122.

74. Razin S.V., Mantieva L.L., Georgiev G.P. The similarity of :

75. DNA sequences remaining bound to scaffold upon metaphase chromosomes.- Nucl. Acids Res., 1980, v.7, N6, p.1713−1735.

76. Razin S.V., Chernokhvostov V.,. Roodyn A. et 'al. Proteintightly to DNA in the regions of DNA attachment to the skeletal structures of interphase nuclei and metaphase chromosomes.- Cell, 1981, v.27, N1, p.65−73.

77. Laemmli U.K., Cheng S.M., Adolph K.W. Metaphase chromosomestructure: the role of non histone proteins.- Cold Spring Harbor, 1982, v. l, p.351−360.

78. Lewis C.D., Laemmli U.K. Higher order metaphase chromosomestructure: evidence for metalloprotein interactions.- Cell, 1982, V.29, N. l, p.171−181.

79. Харченко Е. П., Цыпленков П. В. РНК хроматина как фактор, понижающий фрагментируемость хроматина при зндонуклеолизе.-Биохимия, 1978, т.43, N11, с.2055;2057.

80. Карпенчук К. Г.-, Вашакидзе Р. П. Анализ химическогоацетилирования гистонов в нуклеосомах с помощью высокоразрешающего гельзлектрофореза.- Молек. биол. 1984, N36, с. 24−27.

81. ЮО. Бердышев Г. Д., Чабанный В. Н. Возрастные повреждения, структуры хроматина как пусковой механизм старения. Молекулярная Генетика и биофизика, 1986, вып. 2, с.46−59,.

82. Eissenberg J.C., Cartwright I.L., Thomas G.H., Elgin S.C.R. Selected topics in chromatin structure.- Ann. Rev. Genet., 1985, V.19, p.4 85−536.

83. Travers A.A., DNA bending and nucleosome positioning.- Trends Biochem. Sci., 1987m v.12, p.108−111.

84. Travers A.A., Klug A. The bending of DNA in nucleosomes andits wider implications.- Philos. Trans. R. Soc. Lorid. b., 1987, V.317, p.537−562.

85. Worcel A. Reply to Wolffer et al.- Cell, 1987, v.49, p. 302−303.

86. Worsel A., Kmiec E.B. Transcription factor IIIA and 5S DNA supercoiling in vitro.- Cell, 1988, v.54, p.919−920.

87. Maniatis Т., Fritsch E.F., Sambrook J. Molecular cloning:

88. A laboratory manual.- 1982, Cold Spring Harbor, New York: Cold Spring Harbor Laboratory, p. 347.

89. Preobrazhenskaya O.V., Karpov V.L., Belikov S.V., Nacheva:

90. G.A., Mirzabekov A.D. Dynamic aspects of chromatin structure. In abstracts of 18-th FEBS: Meeting,.Ljubljana, 1987, 290−291. lOS. Levina E.S., Bavykin S.G., Shick V.V. and Mirzabekov A.D.

91. The method of crosslinking hist ones to DNA partly depurinated — at neutral pH.- Anal. Biochem., 1981, v.110, p.93−101.

92. Straight R.C., Spikes J.D. Photosensitized oxidation ofbiomolecules, polymers and biopolymers, 1978, v.4, p.91−142.

93. Spikes J.D., Straight R.C. Sensitized photochemical. processes in biological systems.- Ann. Rev. Phys. Chem., 1967, v.18, p.409−412.

94. Spikes J.D., Livingston R. The molecular biology ofphotodynamic action: sensitized photoautoxidations in biological systems.- In Advances in Radiation Biology, v.3, Academic press, New York, 1969; p.29−32.

95. Spikes J.D., Macknight M.L. The dye-sensitized photooxidation of biological macromolecules.- In, Photochemistry of Macromolecules, Reinisch R.F., Ed., Plenum Press, New York, 1970, p.67−74.

96. Knowles A. The due-sensitized degradation of nucleotides. Inresearch progress inorganic, biological and medicinalchemistry, v.3 (part 1), Gallo U. and Santamaria L. Eds., American elsevier, New York, 19T2, p.183−196.

97. Lochman E.R., Micheler A. Binding of organic dyes to nucleicacids and the photodynamic effects. -In Physici-Chemical Properties of Nucleic Acids, v. l, Duchene J., Eds., Academic ¦ Press, New York, 1973, chap.8., p. 274−279.

98. Lober G., Kittler L. Selected topics in photochemistry ofnucleic acids. Recent results and perspectives.- Photochem. Photobiol., 1977, V.25, p.215−219.

99. Meyer K. On catalytic oxidation. Photochemical oxidation ofsome ethylenic double bonds.- J. Biol. Chem., 1983, v.103, p.597−60i.

100. Murray R.W., Jindal S.L. The photosensitized oxidation ofdisulfides related to cystine.- Photochem. Photobiol, 1972, v.16, p.147−154.

101. Helene C., Photosensitized cross-linking of proteins tonucleic acids in aging. Carcinogenesis and Radiation Biology, Smith K.C., Eds., Plenum Press: New York, 1976, p.149−154.. ,.

102. Sigman D.S., Graham D.R., D’Aurora. V., Stern A.M. Oxygendependent cleavage of DNA by the 1,10-Phenanthroline-cuprous complex.- J. Biol. Chem., 1979, v.78, p.12 269−12 272.

103. D’Aurora V., Stern A.M., Sigman D.S. Inhibition of .E.coli DNApolymerase I by 1,10-Phenanthroline.- Biochem. Biophys. Res. Commun. 1977, v.78, p.170−176.

104. D’Aurora V., Stern A.M., Sigman D.S. 1,10-Phenanthrolinecuprous ion complex, a potent inhibitor of DNA and RNA-polymerases.- Biochem. Biophys. Res. Commun., 1978, v.80,. p.1025−1032.

105. Graham D.R., Sigman D.S. Inorg. Chem., 1984, v.23,p.4188−4101.

106. Kobashi К., Нсгескег B.L. Reversible inactivation of rabbitmuscle albolase by O-PhenanthrolineArch. Biochem. Biophys., 1967, v.121, p. l78−186.

107. Marshall L., Graham D.R., Reich K.A., Sigman D.S. Cleavageof deoxyribonucleic acid by the 1,10-Phenanthroline-cuprous complex. Hydrohen peroxide requirement and primary and secondary structure specificity.- Biochemistry, 1981, v.20, p.244−250.

108. Kuwabara M., Yoon C., Goyne T.,. Thederahn Т., Sigman D.S.-Biochemistry, 1991, in press.

109. Drew H., Travers A. DNA structure variation in the E. coli tyr T promoter.- Cell, 1984, v.37, p.491−502.

110. Корка M.L., Yoon C., Goodsell D., Pjura P., Dickerson R.E. Binding of an antitumor drug to DNA netropsin and C-G-C-G.

111. A-A-T-TBrC-G-C-G.- J. Mol. Biol., 1985, V.183, p.553−563.

112. Kopka M.L., Yoon C., Goodsell D., Pjura P., Dickerson R.E. The molecular origin of DNA drug specificity in netropsin and distamycinProc. Natl. Acad. Sci. USA., .1985, v.82,p.l376−1380.

113. Chen В., Sigman D.S.- Proc. Natl. Acad. Sci., USA., 1991, in press.

114. Lippard S.J. The chemistry of an old molecule: cis-Pt (NH3)2: C^. Science, 1982, V.218, p.1075−1082.

115. Hecht S.M. The chemistry of activated bleomycin, Acc. Chem Res. 1986, V.19, p.383−392.

116. Takita Т., Umezawa Y., Saito S., Morishima H., Nagar H., Umezava H., Tsuchiya Т., Miyake Т., Umezava S., Mraoka Y., Suzuki M., Otsuka M., Kobayashi S., Ohno M.© Tetrahedron Lett. 1982, V.23, p.520−529.

117. Aoyagi Y., Suguna H., Katano K., Primeau J., Chang H., Hecht.

118. S.M. Total synthesis of Bleomycin.- J. Am. Chem. Soc. 1982, V. l04, p.5537−5538.. .

119. Fisher L.M., Kuroda R., Sakai T. Interaction of Bleomycin A2 with deoxyribonucleic acid: DNA unwinding and inhibition of bleomycin-induced DNA breakage by cat ionic t hi azole amides related to bleomycin.- Biochemistry, 1985, v.24, p.3199−3207.

120. Dabroviak J.C. Adv. Inorg. Chem., 1982, v.4, N70, p. 371−377.

121. Chien M., Groilman A.P., Horwitz S.B. Bleomycin-DNA interactions: fluorescence and proton magnetic resonancestudies.- Biochemistry, 1977, v.16, p.3641−3647.

122. Waring M.J. DNA modification and cancer.- J. Ann. Rev. Biochem., 1981, v.50, p.159−192.

123. Sausville E.A., Stein R.W., Peisach J., Horwitz S.B.

124. Reich K.A., Marshall L.E., Graham D.R., Sigman D.S. Cleavage of DNA by the 1,10-phenanthroline-copper ion complex. Superoxide mediated the reaction dependent on NADH and hydrogen peroxide.- J. Am. Chem. Soc.: 1981, v.103, p.3852−3884.

125. Kuwabara M., Youn C., Goyne Т., Thederahn Т., Sigman D.S. Nuclease activity of 1,10-Phenanthroline-copper ion: reaction with CGCGAATTCGCG and complexes with netropsin and E.coRI.-BiOChem., 1986, V.25, p.7401−7408.

126. Pope L.E., Sigman D.S. Secondary structure spesificity of thenuclease activity of the 1,10-Phenanthroline-copper complex.-Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1984, v.81, p.3−7.

127. Graham D.R., Marshall L.E., Reich K.A., Sigman D.S. A model for a molecular mechanism of anticoagylant activity of 3-substituted 4-hydroxycoumarins.- J. Am.Chem. Soc., 1980,. V.102, p.54 21−54 23.

128. Kopka M.L., Youn C., Goodsell D., Pjura D., Dickerson R.E. Binding of an antitumor drug to DNA netropsin and CGCGAATT CGCG.- J. Mol. Biol., 1985, V.183, p.553−563.

129. McClarin J.A., Frederick C.A., Vang B.C., Greene P., Bayer. H.W., Grable J., Rosenberg J.M. Structure of the DNA-EcoRI endonuclease recognition complex at ЗА resolution.- Science (Washington, D.C.), 1986, V.234, p.1526−1543.

130. Hertzberg R.P., Dervan P.B. Cleavage of DMA with methidiumpropyl-EDTA-Iron (II)-reaction.- Biochemistry., 1984, V.23, p.3934−3945.

131. Henner W.D., Rodrigues L.O., Hecht S.M., Haseltine W.A.

132. X-ray induced deoxyribonucleic acid strand breaksJ. Biol. Chem., 1983, V.258, p.711−713.

133. Uesugi S., Shida Т., Ikehara M., Kobayashi Y., Kyogoku Y.J. Identification of degradation products of dtC-G) by a 1,10-Phenanthriline-copper ion complex.- J. Am. Chem. Soc., 1982, V. l04, p.5494−5498. '.

134. Goyne Т.Е., Sigman D.S. Nuclease activity of 1,10-Phenanthroline-copper ion. Chemistry of deoxyribose oxidation.-J. Am. Chem. Soc., 1987, v.109, p.2846−2852.

135. Stubbe J., Kozarich J.W. Mechanisms of bleomycin-induced DNA degradation.- Chem. Rev., 1987, v.87? p.1107−1136.

136. Gajewski E., Dizdarogiy M. Hydroxyl radical innduced cross-linking of cytosine and tyrosine in nucleohistone.-Biochem., 1990, v.29, p.977−980.157.van Sonntag C. The chemical basis of radiation biology. Taylor and Francis, 1987, London, p.27−32.

137. Mee L.K., Adelstein S.J. Predominance of core histones in formation of DNA-protein cross-linking in irradiated chromatinProc. Natl. Acad. Sci., USA, 1981, v.78, p.2194−2198.

138. Dizdarogly M., Gajewski E., Reddy P., Margolis S.A. Structure of a hydroxyl induced DNA-protein cross-link involving thymine and tyrosine in nucleohistone.- Biochemistry,. 1989, V.28, p:3625−3628.

139. Hendry L.B., Bransome E.D., Hutson M.S., Campbell L.K.

140. First approximation of a stereochemical rationale for the genetic code based on the topography and physicochemical properties of «cavities» constructed from models of DNA.-Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1981, V.78, p.7440−7444.

141. Margolis S.A., Coxon в., Gajewski E., Dizdarogly M. Structure of a hydroxyl radical induced cross-links of thymine and thyrosine.- Biochemmistry, 1981, v.27,p.6353−6359.

142. Setlow R.W. Cyclobutane-Type pyrimidine dimers inpolynucleotides. Science, Washington, D.S., 1966, v.153, p.379−386.

143. Summerfield F.W., Tappel A.L. Determination by fluorescence of the environmental of DNA cross-links made by malondialdehyde.- Biochim. Biophys. Acta, 1983, v.740, p.185−189.

144. Simic M.G., Dizdarogly M. Formation of radiation inducedcross-linking between tnymine and tyrosine: Possible Model for cross-linking of DNA and proteins by ionizing radiation.-Biochemistry, 1985, v.24, p.233−236.

145. Helene C. Specific recognition of guanine bases inprotein-nucleic acid complexes.- FEBS Lett., 1977, v.74, p.10−13.

146. Sperling J. Sperling R. Photochemical cross-linking ofhistones to DNA in nucleosomes.- -Nucl. Acids Res., 1978, V.5, p.2755−2773.

147. Kunkel G.R., Martinson H.G. Histone-DNA interactions within chromatin. Isolation of histones from DNA-histone adducts induced in nuclei by UV light.- Nucl. Acids Res., 1978, v.5, p.4 263−4 272.

148. Mandel R., Kolomijtseva G., Brahms J.G. DNA-proteininteractions in nucleosomes and in chromatin (Structural studies of, chromatin stabilized by ultraviolet light induced cross-linking.- Eur. J. Biochem., 1979, v.96, p.257−265.

149. Repine J.E., Pfenninger O.W., Talmage D.W., Berger E.M., Pettijohn D.E. Dimethyl sulfoxide prevents DNA nicking mediated by ionizing radiation or iron/hydrcgen peroxide-generated hydroxyl radicalProc. Natl. Acad. Sci. USA, v.78, p.1001−1003.

150. Massie H.R., Samis H.V., Baird M.B. The kinetics of degradation of DNA and RNA by 9? 2- Biochim. Biophys Acta, 1972, V.272, p.539−54 8.

151. Burnotte J., Verley W.G. Cross-linking of methylated DNA by moderate heating at neutral pH.- Biochim. Biophys Acta, 1972, V.262, p.449−452.

152. Mirzabekov A.D., Shick V.V., Belyavsky A.V., Bavykin S.G.

153. Primary organization of nucleosome core particle of chromatin: sequence of histone arrangement along DNA.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1978, V.75, p.4184−4188.

154. Bradley M.O., Ericson L.C. Comparison of the effects ofhydrogene peroxide and x-ray irradiation toxicity, mutation, and DNA damage/repair in mammalian cells (v-79).- Biochem. et Biophys. Acta, 1981, V.654, p.135−141.

155. Stubbe J.Z., Kozarich J.W. Mechanisms of bleomycin-induced DNA-degradationChem. Rev., 1987, v.87, p.1107−1136.

156. Poop R., Beerman T.A., Goldberg I.H. Characterization of D^ strand breakage шт ишекщ by the antitumor protein nebcarcinostatinBiochemistry, 1977, v.16, p.486−493.

157. Ueda K., Morita J., Komano T. Sequence specificity of heat-l^Dile sites in DNA induced by Mitomycin C.-Biochemistry, 1984, v.23, p. i634-i640.

158. Eliot H., Gianni L., Myers C. Oxidative destruction of DNA by the adriamycim-iron complex.- Biochemistry, 1984, v. 23, p.928−936.

159. Cone R., Hasan S.K., Lown J.W., Morgan A.R. The mechanism of the degradation of DNA by streptonigrinCan. J. Biochem., 1976, V.54, p.219−223.

160. Kuwahara J., Suzuki Т., Funakoshi K., Sugiura Y. Photosencitive DNA cleavage and phage inactivation by copper (Il)-camptothecin.- Biochemistry, 1986, v.25, p.1216−1221.

161. Levina E.S., Bavykin S.G., Shick V.V., Mirzabekov A.D. The • method of cross-linking histones to DNA partly depurinated at neutral pH.- Anal. Biochem., 1981, v.110, p.93−101.

162. Ebralidse K.K., Grachev S.A., Mirzabekov A.D. A highly basic histone H4 domain bond to the sharply bent region of nucleosomal DNANature, 1988, v.331, p.365−367.

163. Cohen G., Pierre M.S. In «Chemical and Biochemical Aspects of Superoxide and Superoxide Dismutase», J.V.Bannister and H.A.O.Hill, Eds, Elsevier/North-Holland, New York, Amsterdam, Oxford 1980, 27−37.

164. Hertzberg R.P., Dervan P.B. Cleavage of DNA with methidiumpropyl-EDTA-iron (II): reaction conditions and products analyses.- Biochemistry, 1984, v.23, p.3934−3945.

165. Johnson G.R.A., Nazhat N.B. Kinetics and mechanisms of the reaction of the Bis (1,10-phenanthroline) copper (I) ion with hydrogen peroxide.- J. Am. Chem. Soc., 1987, v.109, p.1990;1994.

166. Saito J., Morii Т., Matsuura T. The chemistry of4'-hydroperoxy nucleosides as a model for the intermediate in bleomycin-induced degradation of DNA.- J. Org. Chem., 1987, V.52, p.1008−1012.

167. Giloni L., Takeshita M., Johnson F., Iden C., Glorman A.P. Bleomycin-induced strand scission of DNAJ. Biol. Chem., 1987, V.256, p.8608−8615.

168. Levinson G.W., Desostoa-A., Liebes L.F., Mccormick J.J. Fluorescent labeling of. DNA in solution with covalently bound acriflavin.- Biochem. Biophys. Acta, 1976, v.447, p.260−273. •.

169. Budowsky E.I., Abdurashidova G.G. Polynucleotide-protein cross-links induced by ultraviolet light and their use for structural investigation of nucleoproteinProg. Nucl. Acid. Res. Mol. Biol., 1989, V.37, p.1−65.

170. Saito I., Sugiyata H., Matsuura T. Isolation andcharacterization of. a thymine-lysine adducts in ITV-irradiated nuclei. The role of thymine-lysine photoaddition in photo cross-linking of proteins to DNAJ. Am. Chem. Soc., 1983, v. l05, p.6989−6991.

171. Hutchinson F. Chemical changes induced in DNA by ionizing radiation.- Prog. Nucl. Acids Res. molec. Biol., 1985, v.32, p.115−152.

172. Burger R.M., Reisach J., Horwitz S.B. Activated bleomycin (a transient complex of drug, iron and oxygen that degrades DNA) J. Biol: Chem., — 1981, v.256, p.11 636−11 644.

173. Russev G., Vassilev L. Isolation of a DNA fraction from.

174. Eearlich ascites tumor cells containing the putative original of replication.- J. Molec. Biol., 1982, v.161, p.77−87.

175. Lohr D., Van Holde K.E. Organization of spacer DNA in chromatin.- Proc. Natn. Acad. Sci. USA, 1979, v.76, p.6326−6330.

176. Doan T.L., Perrouault L., Chassignol M., Thuong N.T., Helene.

177. G. Sequence-targeted chemical modifications of nucleic acids by complementary oligonucleotides covalently linked to porphyrins.- Nucl. Acids Res., 1987, v.15, p.8643−8659.

178. Francois J.C., Behmoaras T.S., Chassignol M., Thuong N.T., Sun J.S., Helene C. Periodic cleavage of poly (dA) byoligotymidilates covalently linked to the 1−10 phenanthroline-copper complex.- Biochemistry., 1988, v.27, p.2272−2276.

179. Patierno S.R., Sugiyama M., Basilion J.P., Costa M. Preferential DNA-protein cross-linking by NiCl^in magnesium-isoluble regions of fractionated Chinese hamster ovary cell chromatin.- Cancer Res., 1985, v.45, p.5787−5794.

180. Wedrychowski A., Ward W.S., Schmidt W.N., Hnilica L.S. Chromium-induced cross-linking of nuclear proteins and DNA.-J. Biol. Chem., 1985, V.260, N. ll, p.7150−7155.

181. Burger R.M., Projan S.J., Horwitz S.B., Peisach J. the DNA• cleavage mechanism of iron-bleomycin.- J. Biol. Chem., 1986, V.261, N.34, p. l5955−15 959.

182. WU J.G., Kozarich J.W. Mechanism of bleomycin: evidence for a rate-determining 4'hydrogen abstraction from poly (dA-dU) associated with the formation of both free base and base propenals.-Biochem., 1985, v.24, N26, p.7566−7568.

183. Burger R.M., Horwitz S.B., Peisach J., Wittenberg J.B. Oxygenated iron bleomycinJ. Biol. Chem., 1979, v.254,p.12 299−12 302.

184. D’Andrea A.D., Haseltine W.A. Sequence^specific cleavage of DNA by the antitumor antibiotics neocarzinostatin and bleomycin.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1978, v.75,p .3608−3612.

185. Kappen L.S., Goldberg I.H., Liesch J.M. Identification of thymidine-S'-aldehyde at DNA strand breacs induced by. neocarzinostatin chromophore, — Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, V.79, p.744−748.

186. Ueda K., Marita J., Momano T. Sequence specificity of heat labile sites in DNA induced by Mitomycin C.- Biochemistry, 1984, V.23, p. l634−1640.

187. Eliot H., Gianni L., Myers C. Oxidative destruction of DNA by the adriamycin-iron complex.- Biochem., 1984, v.23, p.928−936.

188. Tullius T.D., Dombrowski B.A. Iron (II) EDTA used to measure to helical twist along any DNA molecule.- Science, 1985, V.230, N4726, p.679−681.

189. Eisinger J., Shulman R.G. Relaxation euhancement by paramagnetic ion binding in deoxyribonucleic acid solutions.4-Nat иге, 1961, V.192, N4806: p.963−964. ?,.

190. Kabayashi S., Ueda K., Morita J!, Komano T. DNA damage induced by ascorbate in the presence of Cu (II).- Biochem. Biophys. Acta, 1988, N1, p.143−147.

191. Fioyd R. DNA-ferrous iron catalysed hydroxyl free radical formation from hydrogen peroxide.- Biochem. Biophys. Res. Com., 1981,. V.99, p.1209−1215.

192. Davies K.J.A., Delsignore M.E. Protein damage and degradation by oxygen radicalsJ. Biol.-Chem., 1987, v.260, p.99 089 913.

193. Cartwright L.L., Hertzberg R.P., Dervan P.B., Elgin S.C.R.

194. Cleavage of chromatin with methidiumpropyl-EDTA iron (II).-Prpc., Natl. Acad. Sci. USA, 1983, v.80, p.3213−3217.

195. Van’Dyke M.W., Hertzberg R. R, Dertfan P.B. Map at distamysin, netropsin and actinomycin binding sites on heterogenous DNA: л '.. ,... :

196. DNA cleavage-ingibition patterns with methidiumpropyl-EDTA-II).- Proc. Natl. Acad. Csi, USA, 1982, V.79, p.5470−5474.

197. Gopne Т.Е., Sigman D.S. Nuclease activity of 1,10-phenanthroline-copper ion. Chemistry of deoxyribose oxidation.- J. Am.,.

198. Chem. SOC., 1987, V.109, p.2846−2848.

199. Marshall L.E., Graham D.R., Reich K.A., Sigman D.S.

200. Hertzberg R.P., Dervan P.B. Cleavage of DNA with methidium-EDTA-Iron (II): reaction conditions and product analyses.- Biochem., 1984, v.23, p.3934−3945.

201. Fenton H.J.H. J. Chem. Soc., 1894, v.65, p.89−93.

202. Haber F., Weiss J.J. Proc. Roy. Soc. London, Ser. A., 1934, V.147, p.332−34l.

203. Walling С. Fenton’s reagent revisited.- Acc. СПеш. Res., 197S, V.8, p.125−131.

204. Cohen G., Sinet P.M. Fenton’s reagent once more revisited. In: Chemical and biochemical aspects of superoxide dismyinase., Proc. Fed. Europ. Biochem Soc., Symp. N62, Elsevier/North-Holland, New York, Amsterdam, Oxford, 1980.

205. Лыоин Б. Гены., M., Мир, 1987, с. 544.

206. Hansen J.C., van Holde K.E., Lohr D. The mechanism of nucleosome assembly onto oligomers of the sea urchin 5S DNA positioning sequence.- J. Biol. Chem., v.266, N7, p.4276−4282.

207. Миронов H. H., Лобаненков В. В., Шапот B.C. Выход нуклеосом из ядер печени крыс в условиях низкой ионной силы. Доклады АН СССР, 1980, т.250, N4, С. 1008−1010.

208. Мозжухина Т. Г. Возрастные изменения белков хроматина. Всесоюзный симпозиум Молекулярные и клеточные механизмы старения, (Киев, апрель 1982 г.). Тезисы и реф. докл. Киев: Из-во Ин-т Геронтологии АМН СССР, 1982, С.116−117.

209. Мозжухина Т. Г. Возрастные особенности хроматина тканейс различной нитотической активностью: автореф. дисс. канд. бил. наук. Киев, 1985. 25с.

210. Никитин В. Н., Клименко А. И., МаковозР.К. Биохимические и эндокринные изменения при экспериментальном продлении жизни. Успехи совр. биол. 1984, т.98, N3, С.464−479.

211. Хилобок И. Ю., Мозжухина Т. Г. Возрастные особенности структуры хроматина тканей с различной нитоиической активностью. В кн. Всес. симп.молек.и клет. мех.старения. 21−24 апр. 1981, Киев, 1981, с.85−86.

212. Бердышев Г. Д., Процесс транскрипции и его изменения на поздних этапах индивидуального развития животных. Успехи совр. биологии, 1970, т. 70, N6, с. 624−634.

213. Клименко А. И. Белки ядер и хроматина клеток в возрастном развитии животных: автореф. дис. докт. биол. наук. Киев, 1983, 41 с.

214. Liew C.G., Gornail A.G. Covalent modification of nuclear protein during ageing, Federation Proceeding, 1975, V-34, N2, p.186−187.

215. Lennox R.W. Differences in evolutionary stability among mammalian HI subtypes. J.Biol.Chem., 1984, v.259, Nl, p.669−672.i.