Актуальность проблемы. Персистентные вирусные инфекции представляют собой одну из актуальных научно-медицинских проблем, что обусловлено чрезвычайно широким их распространением. Установлена способность РНК-содержащих вирусов семейства Flaviviridae, к которым относятся вирусы гепатита С и клещевого энцефалита, к формированию и поддержанию персистенции в организме хозяина и перехода инфекционного процесса в хроническую форму [Маянский А.Н. и соавт., 1998; Гавришева Н. А., Антонова Т. В., 1999; Антонов П. В., Цинзерлинг В. А, 2001; Аммосов А. Д., 2002; Жукова О. Б. и соавт., 2003; Gould Е.А. et al., 2004].
При инфицировании организма вирусом гепатита С в 80% случаев инфекция трансформируется в хроническое носительство, которое может прогрессировать с исходом в цирроз или гепатокарциному. Столь высокий процент хронизации инфекционного процесса обусловлен уникальной способностью вируса к генетической изменчивости, в результате которой иммунокомпетентные клетки оказываются не в состоянии распознать непрерывно обновляющиеся антигены [Boot J.C.L. et al., 2001; Приймяги JI.C. и соавт., 2002; Pavio N., Lai М.М., 2003; Лисукова Т. Е. и соавт., 2004; Mateescu R.B. et al., 2004; Карпов С. Ю., Крель П. Е., 2005]. По прогнозам ВОЗ, в ближайшие 10−20 лет среди больных хроническим вирусным гепатитом С заметно увеличится число пациентов с циррозом печени, гепатокарциномой, печеночной декомпенсациейсмертность от заболеваний печени может возрасти в 2 раза [Лисукова Т.Е. и соавт., 2004].
Способностью к длительной персистенции обладает вирус клещевого энцефалита, вызывающий развитие острой, субклинической и хронической форм инфекции и наделенный нейрои лимфотропностью [Жукова Н.Г. и соавт., 2000; Иерусалимский А. П., 2003; Gritsun T.S. et al., 2003]. Несмотря на проводимые профилактические мероприятия, клещевой энцефалит регистрируется во многих странах Европы и Азии, с высокой частотой встречаясь в России [Злобин В.И. и соавт., 2001; Жукова Н. Г. и соавт., 2002;
Calza L. et al., 2004]. Важность проблемы длительной персистенции вируса клещевого энцефалита обусловлена чрезвычайно широким распространением, патоморфозом клинического течения клещевого энцефалита и тяжелыми осложнениями инфекционного процесса.
В изучении патогенеза вирусных инфекций основное место занимает проблема взаимодействия между вирусом и клеткой-хозяином. Адекватный иммунный ответ обеспечивает элиминацию вирусов из организманедостаточная интенсивность иммунного воспаления, напротив, способствует персистенции вирусной инфекции. Патогенетически значимые свойства вирусов клещевого, энцефалита и гепатита С связаны с их способностью поражать лимфоциты и модулировать иммунный ответ хозяина, что приводит к развитию вторичного иммунодефицита, проявляющегося дисбалансом иммунных функций [Ратникова Л.И. и соавт., 2002; Курамшин Д. Х. и соавт., 2004; Серов В. В. и соавт., 2004].
Механизмы персистенции вирусов реализуются за счет непосредственного действия на иммунокомпетентные клеткимежклеточной передачи возбудителязаражения клеток, не подлежащих иммунному надзорувозникновения антигенных вариацийинфицирования клеток дефектными интерфирирующими частицами и нецитопатогенными клонамиблокады цитокинов и их рецепторовмодуляции эффекторных иммунных реакций, а также модуляции апоптоза [Ройт А. и соавт., 2000; Хаитов P.M., Пинегин Б. В., 2000; Ивашкин В. Т. и соавт., 2001; Дмитриева Е. В. и соавт., 2003].
На сегодняшний день нет единого мнения о влиянии вирусов на процесс программированной клеточной гибели. По мнению А. А. Ярилина [1998], при персистентных вирусных инфекциях сосуществуют факторы, ингибирующие и индуцирующие апоптоз. Дефект апоптотической гибели при вирусных инфекциях является одной из причин повышенной жизнеспособности инфицированных клеток, что в свою очередь приводит к хронизации процесса и обусловливает недостаточную эффективность терапии [Белушкина Н.Н., 2001; Райхлин Н. Т., Райхлин А. Н., 2002; Дмитриева Е. В. и соавт., 2003; Kountouras J. et al., 2003; Siavoshian S. et al., 2005]. Утверждение о том, что персистирующие в макроорганизме вирусы могут вызывать отклонения в апоптотическом каскаде, сомнений не вызывает. Однако механизмы воздействия вирусных белков на программируемую гибель лимфоцитов носят лишь гипотетический характер.
Одним из методологических подходов, направленных на получение новых данных фундаментального характера о роли дисфункции и нарушении межклеточной кооперации иммуноцитов в механизмах формирования хронических вирусных инфекций, является комплексная сравнительная оценка ключевых параметров, характеризующих структурно-функциональный статус лимфоцитарных клеток при инфекционном процессе, вызванном РНК-содержащими вирусами гепатита С и клещевого энцефалита с учетом клинических особенностей инфекций.
Цель исследования: установить общие закономерности и особенности нарушений структурных и функциональных свойств лимфоцитов периферической крови у больных с хроническими инфекциями, вызванными РНК-содержащими вирусами гепатита С и клещевого энцефалита.
Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:
1. Определить направленность клеточной дифференцировки и способность к бласттрансформации лимфоцитов периферической крови у больных, инфицированных вирусами гепатита С и клещевого энцефалита в зависимости от клинических особенностей инфекционного процесса.
2. Оценить морфологические изменения лимфоцитарных клеток у больных вирусным гепатитом С и пациентов с хронической антигенемией вируса клещевого энцефалита в зависимости от активности патологического процесса.
3. Выявить особенности экспрессии молекулярно-биологических маркеров апоптоза лимфоцитами периферической крови при хронических инфекциях, вызванных РНК-содержащими вирусами гепатита С и клещевого энцефалита.
4. Вскрыть общие закономерности реакции лимфоцитарного звена системы иммунитета в условиях длительного пребывания РНК-содержащих вирусов гепатита С и клещевого энцефалита в организме инфицированных пациентов.
Научная новизна. Впервые, с привлечением современных гематологических, иммунологических и молекулярно-биологических методов исследования, представлена феноменология структурного и функционального статуса лимфоцитов при формировании персистентных вирусных инфекций, вызванных РНК-содержащими вирусами гепатита С и клещевого энцефалита с учетом активности и длительности патологического процесса. Показано, что у пациентов с хроническим носительством вируса клещевого энцефалита и больных хроническим вирусным гепатитом С снижено количество CD3±, CD4±, С056±лимфоцитов и иммунорегуляторный индекс (CD4+/CD8+), повышена пролиферативная активность лимфоцитарных клеток. Получены новые данные, свидетельствующие о том, что при хронических инфекциях, вызванных РНК-содержащими вирусами клещевого энцефалита и гепатита С, нарушена поверхностная архитектоника лимфоцитов, что проявляется значительным увеличением числа лимфоцитов со складчатым микрорельефом, с пузырями и выростами на поверхности, а также снижением содержания клеток с гладкой поверхностью и появлением лимфоцитов с комбинированным микрорельефом, не выявленных у здоровых доноров.
Показано, что персистентное течение вирусных инфекций, вызванных РНК-содержищими вирусами семейства Flaviviridae, сопровождается увеличением числа С095±лимфоцитов, что свидетельствует о повышении апоптотического потенциала лимфоцитарных клеток. В то же время установлено, что реализация программируемой клеточной гибели лимфоцитов у больных хроническим вирусным гепатитом С нарушена, а у пациентов с хронической антигенемией вируса КЭ усилен спонтанный апоптоз.
Научно-практическая значимость. Полученные данные расширяют накопленные в мировой литературе сведения о механизмах хронизации вирусных инфекций, вызванных РНК-содержащими вирусами гепатита С и клещевого энцефалита. Основные положения работы могут быть использованы для дальнейшего изучения патогенетических механизмов формирования персистентных вирусных инфекций и разработки новых способов коррекции иммунных нарушений при инфекционных процессах, индуцированных РНК-содержащими вирусами.
Положения, выносимые на защиту:
1. Хронические вирусные инфекции, вызванные РНК-содержащими вирусами гепатита С и клещевого энцефалита, сопровождаются дисбалансом Т-клеточного звена (снижение относительного количества CD3±, GD4± и СБ56±лимфоцитов, иммунорегуляторного индекса (CD4+/CD8+)), дезорганизацией поверхностного микрорельефа и усилением пролиферативной активности лимфоцитов.
2. Изменения структурно-функциональных свойств лимфоцитов у больных хроническим вирусным гепатитом С слабовыраженной и умеренной степеней активности и у пациентов с хронической антигенемией вируса клещевого энцефалита носят однотипный характер независимо от степени активности и длительности течения инфекционного процесса.
3. Повышение количества СВ95±клеток при хронических инфекциях, вызванных РНК-содержащими вирусами, свидетельствует об усиленной апоптотической предуготовленности лимфоцитов. Однако, если при хронической антигенемии вируса клещевого энцефалита количество лимфоцитарных клеток, подвергшихся спонтанному апоптозу повышено, то при хроническом вирусном гепатите С число апоптотических лимфоцитов снижено.
Апробация и реализация работы. Результаты проведенных исследований докладывались и обсуждались на научной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения академика АМН СССР С. П. Карпова (Томск,.
2003), VI-м Всероссийском съезде «Врачей инфекционистов» (Санкт-Петербург, 2003), V-м Международном конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2004), Межгородской конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 2004), Ш-м Всероссийском конгрессе по патофизиологии «Дизрегуляционная патология органов и систем (экспериментальная и клиническая патофизиология)» (Москва, 2004), П-й Всероссийской научно-практической конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные, экологические и клинические аспекты» (Новосибирск, Результаты исследования используются в лекционном курсе по патологической физиологии (разделы «Патофизиология инфекционного процесса», «Патофизиология иммунной системы») и микробиологии (раздел «Вирусы семейства Flaviviridae») для студентов лечебного и педиатрического факультетов ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава.
В работе приводятся результаты исследований, поддержанных Советом по грантам при Президенте РФ для ведущих научных школ РФ (НШ-1051.2003.4) «Молекулярные механизмы нарушений структуры, метаболизма и функций клеток крови при патологии» и Администрацией Томской области (договор № 136 от 23.09.2004) «Создание и внедрение панели молекулярно-генетических маркеров для прогнозирования течения и исхода вирусных гепатитов».
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 20 печатных работ: 7 статей в центральных рецензируемых журналах «Перечня .» ВАК,.
1 статья в зарубежной печати, 12 статей и тезисов в материалах конгрессов, конференций, съездов.
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырёх глав, выводов и списка литературы. Библиографический указатель включает 271 источник, из них 164 отечественных и 107 иностранных. Работа иллюстрирована 13 рисунками и 34 таблицами.
ВЫВОДЫ.
1. Развитие хронических инфекций, вызванных РНК-содержащими вирусами гепатита С и клещевого энцефалита, сопровождается нарушением иммунного ответа, модуляцией структурных и функциональных свойств лимфоцитов и апоптоза лимфоцитарных клеток.
2. У больных хроническим вирусным гепатитом С слабовыраженной и умеренной степеней активности, у пациентов с хронической антигенемией вируса клещевого энцефалита развиваются однонаправленные изменения субпопуляционного состава лимфоцитов (снижение относительного количества CD3±, CD4± и СБ56±лимфоцитов, иммунорегуляторного индекса (CD4+/CD8+)), сочетающиеся с усилением их пролиферативной активности.
3. Дезорганизация поверхностной архитектоники лимфоцитов при хронических инфекциях, вызванных РНК-содержащими вирусами гепатита С и клещевого энцефалита, проявляется снижением числа гладких клеток и повышением количества лимфоцитов со складками, пузыревидными образованиями и выростами на поверхности, появлением в периферической крови клеток с комбинированной поверхностью.
4. Изменения иммунофенотипа, поверхностного микрорельефа и способности лимфоцитов к пролиферации при хронических инфекциях, вызванных РНК-содержащими вирусами гепатита С и клещевого энцефалита, не зависят от клинических проявлений и длительности течения инфекционного процесса.
5. Повышение экспрессии лимфоцитами С095±молекул при персистенции вирусов клещевого энцефалита и гепатита С свидетельствует об усилении апоптотического потенциала лимфоцитарных клеток. Несмотря на апоптотическую предуготовленность лимфоцитов, число их апоптотических форм при хроническом вирусном гепатите С снижаетсяпри клещевом энцефалите содержание лимфоцитарных клеток, подвергшихся спонтанному апоптозу, повышается.
