1.1. ΠΠΊΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΎΠ±Π»Π΅ΠΌΡΠ ΠΠ-ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ (Π ΠΠΠΈ) ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ², ΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ
ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΈ Π²ΠΈΡΡΡΠΎΠ² Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΡΡ
ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ
Π ΠΠ (Ghildiyal and Zamore, 2009). Π Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅ΠΌΡ ΠΌΠΎΠΌΠ΅Π½ΡΡ Ρ ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡΠ½ΡΡ
Π²ΡΠ΄Π΅Π»ΡΡΡ ΡΡΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΡΡ
ΠΊΠ»Π°ΡΡΠ° ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠ²Π½ΡΡ
ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ
Π ΠΠ: siRNA (short interfering RNA), miRNA (microRNA) ΠΈ piRNA (PIWI interacting RNA). piRNA Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎ ΠΈΠ·ΡΡΠ°ΡΡΡΡ Π² ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄Π½ΠΈΠ΅ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π»Π΅Ρ, ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΡ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ piRNA ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½Ρ Π³ΠΎΡΠ°Π·Π΄ΠΎ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅, ΡΠ΅ΠΌ Π΄Π»Ρ siRNA ΠΈ miRNA. piRNA ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΡΡΡΡ Π² ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π΅ ΡΠ²ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ΡΠ²Π°ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΉ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ, ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ
ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Π² ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΡ
ΡΠΊΠ°Π½ΡΡ
ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡΠ½ΡΡ
. ΠΠ°ΡΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΠΈ piRNA ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΠ·ΠΈΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΌΡ Π²Π·ΡΡΠ²Ρ ΠΈ, ΠΊΠ°ΠΊ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΠ²ΠΈΠ΅, ΠΊ ΡΡΡΠ°ΡΠ΅ ΠΏΠ»ΠΎΠ΄ΠΎΠ²ΠΈΡΠΎΡΡΠΈ. piRNA, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠ΅ ΠΊΠ»Π°ΡΡΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ
PIIK, Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΡΡΡ Π² ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π΅ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠΎΠ² RISC (RNA induced silencing complex). Π ΡΠΎΡΡΠ°Π² ΡΡΠΈΡ
ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠΎΠ² Π²Ρ
ΠΎΠ΄ΡΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΠΉΡΡΠ²Π° Argonaute (Ago), ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΠ΅ Π ΠΠ. piRNA ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΡΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°ΠΌΠΈ Ago, ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡΠΈΠΌΡΡ ΠΊ ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΠΉΡΡΠ²Ρ PIWI. ΠΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³Π° ΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ
ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ piRNA ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ. Π‘ΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΠΊΡΠ΄Π½ΡΠ΅ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°ΡΡ Π½Π° ΡΠΎ, ΡΡΠΎ piRNA ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π²ΡΠ·ΡΠΏΠ°ΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ ΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ
ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ², ΡΠ°ΠΊ ΠΈ ΠΈΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΉ ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅ΠΏΡΠΈΠ½Π³. ΠΠ΅Π»ΠΊΠΈ ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΠΉΡΡΠ²Π° PIWI Ρ Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ (Aub, Ago3 ΠΈ Piwi) ΠΈ ΠΊΡΡΡΡ (Riwi) ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½ΠΎΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ (Gunawardane et al., 2007; Lau et al., 2006: Nishida et al., 2007; Saito et al., 2006). Π ΡΠΈΡΠ½ΠΈΠΊΠ°Ρ
ΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ Aub ΠΈ Ago3 Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·ΡΡΡΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ Π² ' ΠΏΠ΅ΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°ΡΠ½ΡΡ
Π³ΡΠ°Π½ΡΠ»Π°Ρ
(ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ°, Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΠ°Ρ «nuage», ΠΎΡ ΡΡΠ°Π½Ρ. «ΠΎΠ±Π»Π°ΠΊΠΎ»), ΡΡΠΎ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»Π°Π³Π°Π΅Ρ ΡΠΊΠΎΡΠ΅Π΅ ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ°Π½Π΅ΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΉ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³Π°. Π‘ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΉ ΡΡΠΎΡΠΎΠ½Ρ, Π² ΡΠΈΡΠ½ΠΈΠΊΠ°Ρ
Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ Piwi Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
. ΠΡΡΠ°ΡΠΈΡ Π² Π³Π΅ΠΉΠ΅ spn-E, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΠΌ Π΄Π»Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΈ/ΠΈΠ»ΠΈ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ piRNA, ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ «ΠΎΡΠΊΡΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ» Ρ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π° ΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ
ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² (Klenov et al., 2007). Π ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
ΠΌΡΡΠ΅ΠΉ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°ΠΏΠ° ΡΠΎΠ»Ρ piRNA Π² ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΠΠ ΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ
ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ². Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΠΏΠΎΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ piRNA ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΡΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΠΊΠ°ΠΊ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π½Π° ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΈΡΠΈΠΎ’Π¨ΡΠΌ ΡΡΠΎΠ²Π½Π΅, ΠΏΠΎΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ²ΠΎΠΌ ΡΠΏΠΈΠ³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ
ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΉ. piRNA Π²ΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΠ΅ Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½Ρ Π² ΠΠ°Π±ΠΎΡΠ°ΡΠΎΡΠΈΠΈ Π±ΠΈΠΎΡ
ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Π³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΠΊΠΈ ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡΠ½ΡΡ
ΠΠ½ΡΡΠΈΡΡΡΠ° ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠΉ Π³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΠΊΠΈ Π ΠΠ ΠΏΡΠΈ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊ-ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΡΡ
ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡΡΡΠΈΡ
ΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate (Aravin et al. 2001; Aravin et al. 2004). ΠΡΠΈ piRNA ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΡΠΈΡΡΡΡΡΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠ°ΠΌΠΈ Su (Ste) (Suppressor of Stellate), ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½Ρ Π½Π° Y-Ρ
ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΠ΅ ΠΈ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ 90% Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ Ρ Π³Π΅Π½Π°ΠΌΠΈ Stellate, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½Ρ Π½Π° Π₯-Ρ
ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΠ΅ ΠΈ ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ Stellate, Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ Π ΡΡΠ±ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΠ΅ ΠΊΠ°Π·Π΅ΠΈΠ½ ΠΊΠΈΠ½Π°Π·Ρ 2 (Bozzetti et al., 1995). piRNA Su (Ste) ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΡΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠΌ Aub. ΠΠ΅Π»Π΅ΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΈΠ»ΠΈ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΡ Π² Π³Π΅Π½Π΅ aub Π²Π΅Π΄ΡΡ ΠΊ ΠΈΡΡΠ΅Π·Π½ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΈΡ piRNA Su (Ste) Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
ΠΈ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΌΡ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΌΠ ΠΠ Stellate, ΡΡΠΎ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Stellate Π² ΠΊΡΠΈΡΡΠ°Π»Π»Π°Ρ
, ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄Ρ ΠΊ Π½Π°ΡΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½Π΅Π·Π° ΠΈ ΡΡΠ΅ΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ°ΠΌΡΠΎΠ². ΠΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ
ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ², ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ piRNA Su (Ste) ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ. ΠΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ piRNA Su (Ste) ΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Aub ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate in vitro (Nishida et al., 2007). ΠΠ°Π½Π½Π°Ρ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ° ΠΏΠΎΡΠ²ΡΡΠ΅Π½Π° ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Π²ΠΊΠ»Π°Π΄Π° ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ ΠΈ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ Π² Su (Ste) piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΠΉ ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate.
1.2. Π¦Π΅Π»ΠΈ ΠΈ Π·Π°Π΄Π°ΡΠΈ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡΠ¦Π΅Π»ΡΡ Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ ΡΠ²Π»ΡΠ»ΠΎΡΡ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ° ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ piRNA Su (Ste). ΠΡΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Ρ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠ΅ Π·Π°Π΄Π°ΡΠΈ:1. ΠΡΠ΅Π½ΠΈΡΡ Π²ΠΊΠ»Π°Π΄ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈ ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³Π° Π² Sa (Ste) piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate. ΠΠ»Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π»ΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΡΡ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½Ρ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΠΈ Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Stellate Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ ΠΏΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΈΠ»ΠΈ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ Π² Π³Π΅Π½Π΅ aub. ΠΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠ°Π²ΠΈΠΌΠΎΠ³ΠΎ Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΠΈ Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Π±ΡΠ΄Π΅Ρ ΡΠ²ΠΈΠ΄Π΅ΡΠ΅Π»ΡΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΎ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ, Π° Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² ΡΠΊΠ°ΠΆΠ΅Ρ Π½Π° ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate-2. Π Π°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°ΡΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ± ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² ΡΡΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate ΠΈ ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΡΡ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ ΠΈΡ
ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ piRNA Su (Ste)-3. ΠΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΠΈΡΡ, ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π»ΠΈ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Stellate Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΡ
ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ²-4. Π‘ΡΠ°Π²Π½ΠΈΡΡ ΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎΡΡΠΈ piRNAΠΈ siRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste-lacZ.
1.3. ΠΠ°ΡΡΠ½Π°Ρ Π½ΠΎΠ²ΠΈΠ·Π½Π° ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ² ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡΠΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ piRNA Su (Ste) ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΡΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate Π² ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΠΎΠΌ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ, ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΡΡΠ΅ΠΉ Π½Π΅ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅, Π½ΠΎ ΠΈ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ². ΠΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΡΡΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ Π² ΡΠ°Π²Π½ΠΎΠΉ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½ΠΈ, ΡΡΠΎ ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π° ΠΎΡΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ Π²Π»ΠΈΡΠ½ΠΈΡ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ Ρ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π° Π½Π° piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΡ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΡ. ΠΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΎ ΡΡ
ΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² piRNAΠΈ siRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste-lacZ. ΠΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΡ, ΡΠ³ΠΎ piRNA, ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΠΎ siRNA, Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π½Π΅ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ².
1.4. ΠΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΡΠ΅Π½Π½ΠΎΡΡΡΠΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ ΠΏΡΠΎΡΡΠ½ΠΈΡΡ ΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ° ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ²ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ΡΠ²Π°ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΉ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ Π ΠΠΠΈ Ρ Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ, ΡΠ³ΠΎ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΎ ΠΏΡΠΈ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ
ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΎΠ² Π² ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΡ
ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ
ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ°, Π² ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ
Π ΠΠΠΈ ΠΈΠ³ΡΠ°Π΅Ρ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ ΡΠΎΠ»Ρ.
1.5. ΠΠΏΡΠΎΠ±Π°ΡΠΈΡ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡΠ Π°Π±ΠΎΡΠ° Π°ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π° Π½Π° Π»Π°Π±ΠΎΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΌ ΡΠ΅ΠΌΠΈΠ½Π°ΡΠ΅ Π² ΠΎΡΠ΄Π΅Π»Π΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠΉ Π³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΠΊΠΈ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ ΠΠΠ Π ΠΠ. ΠΠ°Π½Π½ΡΠ΅, ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π½ΡΠ΅ Π² ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅, Π΄ΠΎΠΊΠ»Π°Π΄ΡΠ²Π°Π»ΠΈΡΡ Π½Π° ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ, ΠΏΠΎΡΠ²ΡΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ°ΠΌ Π ΠΠ-ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ (Keystone Symposia, Π‘Π¨Π, 2005), Π½Π° ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΠΈΡΡ
Π΄Π»Ρ ΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ΄ΡΡ
ΡΡΡΠ½ΡΡ
(ΠΡΡΠΈΠ½ΠΎ, 2005, 2006; ΠΠΈΠ΅Π², 2007), Π½Π° ΠΊΠΎΠ½ΠΊΡΡΡΠ΅ ΡΠ°Π±ΠΎΡ ΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ΄ΡΡ
ΡΡΡΠ½ΡΡ
Π½Π° ΡΠΎΠΈΡΠΊΠ°Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΈΠΏΠ΅Π½Π΄ΠΈΠΉ ΡΠΎΠ½Π΄Π° «ΠΡΠ΄ΡΡΠ΅Π΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠΉ Π³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΠΊΠΈ» (ΠΠΎΡΠΊΠ²Π°, 2008).
Π‘ΡΡΡΠΊΡΡΡΠ° ΠΈ ΠΎΠ±ΡΡΠΌ Π΄ΠΈΡΡΠ΅ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈΠΠΈΡΡΠ΅ΡΡΠ°ΡΠΈΠΎΠ½Π½Π°Ρ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ° ΠΈΠ·Π»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π° Π½Π° 115 ΡΡΡΠ°Π½ΠΈΡΠ°Ρ
ΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠΏΠΈΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΠΊΡΡΠ° ΠΈ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΡ Π³Π»Π°Π²Ρ: ΠΎΠ±ΡΠ°Ρ Ρ
Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΡΡΠΈΠΊΠ° ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ, ΠΎΠ±Π·ΠΎΡ Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ, ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»Ρ ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ, ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ, ΠΎΠ±ΡΡΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ², Π²ΡΠ²ΠΎΠ΄Ρ, ΡΠΏΠΈΡΠΎΠΊ Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ. ΠΠΈΡΡΠ΅ΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΡ 19 ΡΠΈΡΡΠ½ΠΊΠΎΠ², 1 ΡΠ°Π±Π»ΠΈΡΡ ΠΈ 241 Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ½ΡΡ ΡΡΡΠ»ΠΊΡ.
ΠΠ°ΠΊΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅
.
Π ΠΎΠ±Π·ΠΎΡΠ΅ Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½ΠΎ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ
Π ΠΠ Ρ Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ, ΠΌΠ»Π΅ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΠ°ΡΡΠΈΡ
ΠΈ, Π² ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅ΠΉ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½ΠΈ, Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ
ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ². ΠΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΠ΅ Π ΠΠ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ Π ΠΠ ΠΈ/ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΡ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π³Π΅Π½Π°. Π§Π°ΡΡΠΈΡΠ½Π°Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΎΠΉ Π ΠΠ ΠΈ ΠΌΠ ΠΠ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡΡ ΠΊ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ ΠΈ/ΠΈΠ»ΠΈ ΠΊ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ. ΠΠ°Π»ΠΈΡΠΈΠ΅ Π°Π»ΡΡΠ΅ΡΠ½Π°ΡΠΈΠ²Π½ΡΡ
.
ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² ΡΡΠ°Π²ΠΈΡ Π²ΠΎΠΏΡΠΎΡ ΠΎ Π²ΠΊΠ»Π°Π΄Π΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΈΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ° Π² ΡΡΠΌΠΌΠ°ΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ. ΠΠ°Π΄Π°ΡΠ΅ΠΉ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ Π΄ΠΈΡΡΠ΅ΡΡΠ°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ Π±ΡΠ»ΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π²ΠΊΠ»Π°Π΄Π° Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ Π² Su (Ste) piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate.
Π ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅ 1.4 ΠΎΠ±Π·ΠΎΡΠ° Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΡΠ°ΡΡΠΌΠΎΡΡΠ΅Π½Π° Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΎΠ² Π ΠΠΠΈ. ΠΡΠ΅Π²ΠΈΠ΄Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΏΡΠΈ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠΎΠ² RISC, Π½Π°Ρ
ΠΎΠ΄ΡΡΠΈΡ
ΡΡ Π² ΡΠ΄ΡΠ΅, Π° ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΈ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΠΈ RISC, Π½Π°Ρ
ΠΎΠ΄ΡΡΠΈΡ
ΡΡ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅. ΠΠΎ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΡ
ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ
ΠΎΡΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΎΡΠΊΡΡΡΡΠΌ Π²ΠΎΠΏΡΠΎΡ ΠΎ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ°ΡΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅, Π² ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΌ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ Π ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ. Π‘ΡΠΈΡΠ°Π΅ΡΡΡ, ΡΡΠΎ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ°Ρ ΡΠ°ΡΡΡ ΡΠ°ΠΊΠΎΠΉ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ, ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΎΠ² Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ Π ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ ΠΈ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
. Π Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ»ΠΈ Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΎΠ² Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ Stellate.
Π Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅Π΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎ ΠΈΠ·ΡΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏΡ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ
Π ΠΠ Ρ Π ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΠΌΠΈ. Π’Π°ΠΊΠΈΠ΅ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡΡΡ Π² ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΠΎΠΌ Π΄Π»Ρ miRNA (ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π» 2.2.2.). ΠΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ Π³Π»Π°Π²Π½ΡΡ ΡΠΎΠ»Ρ Π² ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Π΅ΠΉ ΠΈΠ³ΡΠ°Π΅Ρ 5' ΡΠ°ΡΡΡ miRNA. ΠΠ»Ρ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΎΠ²Π½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ°Π΄ΠΊΠΈ miRISC ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ°ΠΉΡ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Ρ Π² ΠΌΠ ΠΠ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ Π±ΡΡΡ ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ Π² Π’ΠΠ’Π ΠΈ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ½Π½ΠΎΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΏΠΎΠ΅ ΠΎΠΊΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅. Π ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅ΠΉ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½ΠΈ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½Ρ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΡ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ ΡΠ°ΠΊΠΈΡ
Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠΉ. ΠΠ·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠ΅ miRNA Ρ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΡ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΈΠ½Π³ΠΈΠ±ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡΡΡ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΡΠΌΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°ΠΌΠΈ, ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΠΈΠΌΠΈΡΡ Ρ ΠΌΠ ΠΠ Π²Π±Π»ΠΈΠ·ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΡΠ° ΠΏΠΎΡΠ°Π΄ΠΊΠΈ miRISC. Π ΡΠΎ ΠΆΠ΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ, ΠΏΠΎΡΡΠΈ ΡΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌ Π½Π΅ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½Ρ Π·Π°ΠΊΠΎΠ½ΠΎΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΎΠ² Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ
Π ΠΠ Ρ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΠΌΠΈ, ΡΠ²Π»ΡΡΡΠΈΠΌΠΈΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΊΡΠ°ΠΌΠΈ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ
ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΡΡ
ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌ. ΠΠ°ΡΠΈ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π½Π° ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ΅ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ° ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³Π° Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate ΡΠ°ΡΡΠΈΡΠ½ΠΎ Π·Π°ΠΏΠΎΠ»Π½ΡΡΡ ΡΡΠΎΡ ΠΏΡΠΎΠ±Π΅Π» ΠΈ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΡ, ΡΡΠΎ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΌΠ ΠΠ Π½Π΅ ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°ΡΡΡΡ piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ.
3. ΠΠΠ’ΠΠ ΠΠΠΠ« Π ΠΠΠ’ΠΠΠ«.
3.1. ΠΠΈΠ½ΠΈΠΈ Drosophila melanogaster ΠΈ Π³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΡΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ.
ΠΠΈΠ½ΠΈΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠ³Π΅Π½Π½ΡΡ
ΠΌΡΡ
, Π½Π΅ΡΡΡΠΈΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ΠΎΡΠ½ΡΡ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΡΠ΅Π³Π³ΠΎΡΡΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste703-lacZ ΠΈΠ»ΠΈ Stel34-lacZ Π½Π° Ρ
ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΠ°Ρ
3 ΠΈΠ»ΠΈ 2, ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ, Π±ΡΠ»ΠΈ Π»ΡΠ±Π΅Π·Π½ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΎΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Ρ Π. Π’ΡΠ»ΠΈΠ½ΡΠΌ ΠΈ Π. ΠΡΠ°Π²ΠΈΠ½ΡΠΌ. Π Π΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste703-lacZ ΠΈ Stel34-lacZ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Ρ ΡΠ΅Π»ΡΠΉ ΠΈΠ»ΠΈ 101 Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ ΠΏΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΡΠ° Stellate ΠΈ 141 ΠΈΠ»ΠΈ 33 Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈ" Π΄Π° ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠ±ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Stellate, ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ, ΡΠ»ΠΈΡΡΠ΅ Ρ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΠΌ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌ lacZ. Π ΡΠΎΡΡΠ°Π² ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste703-lacZ Π²Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ΅ΡΡΡ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate. Π ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Ρ Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΈ, Π½Π΅ΡΡΡΠΈΠ΅ ΠΎΠ΄Π½Ρ ΠΈΠ· ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΉ Π² Π³ΠΎΠΌΠΎΠ·ΠΈΠ³ΠΎΡΠ½ΠΎΠΌ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ ΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΡ Π»ΠΎΠΊΡΡΠ° Su (Ste) Π½Π° Y Ρ
ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΠ΅.
3.2. ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ.
ΠΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ Π΄Π»Ρ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΠ¦Π Π² ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ.
ΠΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ ΠΊ Stellate (ΡΠΌ. ΡΠΈΡ 8).
1 5A AGTCTG ΠΠ’ΠΠ‘ AC AGCTGG ACGG AGC G.
2 5'-CGCTTGCACTTGCAGTACCTAG.
3 5-CCTGACCAATATTCCGATATTCTTTGGC.
4 5'-GGGTCGTCCAGGGGCGATC.
5 5-GTAATTCTCCGAATATAGTC.
6 5-CGATTTGAGTTGCATCAAGGCTTTCA.
ΠΡΡΠ³ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ.
Adh-d3 5'-CGGCATCTAAGAAGTGATACTCCCAAAA Adh-r3 5-TGAGTGTGCATCGAATCAGCCTTATT.
ΠΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ Π΄Π»Ρ ΠΏΠΎΠ»ΡΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΠΠ .
ΠΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ Π΄Π»Ρ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΠ¦Π ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ°, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ Π΄Π»Ρ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·Π° Π΄Π²ΡΡ
ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ Π ΠΠ T7-DSS1 (Π΄Π»Ρ Sie ΠΈΠ»ΠΈ Su (Ste)) 5';
TAATACGACTCACTATAGGGAGACCACTCTGTGAACGAGTGAACTGGC T7-DSS2 (Π΄Π»Ρ Sie ΠΈΠ»ΠΈ Su (Ste)).
5-TAATACGACTCACTATAGGGAGACCACTTACCGTGGGTTGTCCAGG T7-DSG1 (Π΄Π»Ρ lacZ).
5'-TAATACGACTCACTATAGGGATTCCACGTGGTTATGCCGATCGCGT T7-DSG2 (Π΄Π»Ρ lacZ).
5-TAATACGACTCACTATAGGGATTCCACATATCGGTGGCCGT'GGTGT T7-GFP1 5';
TAATACGACTCACTATAGGGAGACCACGGCGAGGAGCTGTTCACC.
T7-GFP3 5';
TAATACGACTCACTATAGGGAGACCACCCGAGGTGAAGTTCGAGG.
ΠΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΡΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π΅ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠ³Π΅Π½Π½ΡΡ
ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΉ Ste-lacZ Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
.
DSG1 (Π΄Π»Ρ Ste-lacZ) 5'-GTGGTTATGCCGATCGCGT DSG2 (Π΄Π»ΡSte-lacZ) 5-ATATCGGTGGCCGTGGTGT rp49d 5'-CAGGCCCAAGATCGTGAAG.
Ρ49Π³ 5 '-TG AG AACGC AGGCGACC.
ΠΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΡΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π΅ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΡ
ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΉ hsp70-Ste-lacZ, hsp70-lacZ ΠΈ hsp70-GFP Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ DSG1 (ΡΠΌ. Π²ΡΡΠ΅).
lacZ-rev 5ACCGCC AAGACTGTTACCCAT.
T7-GFP1 (ΡΠΌ. Π²ΡΡΠ΅).
5-TAATACGACTCACTATAGGGAGACCACTGCTCAGGTAGTGGTTGTCG.
3.3. ΠΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π ΠΠ ΠΈΠ· ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ² ΠΈΠ»ΠΈ ΠΈΠ· ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΉ.
3.4. ΠΠ±ΡΠ°ΡΠ½Π°Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΡ.
ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈΡΡ Π² ΠΎΠ±ΡΡΠΌΠ΅ 30 ΠΌΠΊΠ». ΠΡΠΎΠ±Ρ +RT ΠΈRT Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΏΠ°ΡΠ°Π»Π»Π΅Π»ΡΠ½ΠΎ. ΠΠΎ Π²ΡΠ΅Ρ
ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡΡ
ΠΠ’-ΠΠ¦Π , ΠΏΡΠΈΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Π½ΡΡ
Π² ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅, Π½Π΅ Π²ΡΡΠ²Π»ΡΠ»ΠΎΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π²RT ΠΏΡΠΈ ΡΠ΅Ρ
ΠΆΠ΅ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ
.
3.5. ΠΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½Π°Ρ ΠΠ¦Π Π² ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ.
ΠΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΠ¦Π ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ Π΄Π»Ρ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΊΠΈ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΊΠΠΠ ΡΡ-ΠΈΠ»ΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ Stellate Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
ΠΈΠ»ΠΈ Π² ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΡ
, Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ
ΠΈΠ· ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ². ΠΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½Π°Ρ ΠΠ¦Π Π² ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½Π° Π½Π° ΡΠΎΠΌ, ΡΡΠΎ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΠ¦Π -ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ° Π² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΊΠ»Π° Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎ ΡΠ»ΡΠΎΡΠΈΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ SYBR green, ΠΏΠΎΡΠ²Π»ΡΡΡΠ΅ΠΉΡΡ ΠΏΡΠΈ Π΅Π³ΠΎ Π²ΡΡΡΠ°ΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Π² ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΠΈΠ΅ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ Π΄Π²ΡΡ
ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ. Π ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΡΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ Π±ΡΠ°Π»ΠΈ 3 ΠΌΠΊΠ» ΠΊΠΠΠ, ΠΏΠΎ 2 ΠΌΠΊΠ». ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ° Π² ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ 3.3 ΠΏΠ, 3 ΠΌΠΊΠ». 10Ρ
Π±ΡΡΠ΅ΡΠ° (0.67 M Tris-HCl ΡΠ 8.8, 166 ΠΌΠ (NH4)2S04, 0.1% Twcen-20), 6 ΠΌΠΊΠ». 25 ΠΌΠ MgCb. 6 ΠΌΠΊΠ». ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΡΠ΅ΡΡΡΡΡ
Π΄ΠΠ’Π€ Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠ΅ΠΉ 1 ΠΌΠ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠ³ΠΎ Π΄ΠΠ’Π€, SYBR green (1/10 000 ΠΈΠ· ΡΡΠΎΠΊΠ° ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ, Π‘ΠΈΠ½ΡΠΎΠ»), ROX (1/3000 ΠΈΠ· ΡΡΠΎΠΊΠ° Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠ΅ΠΉ 100 pmole/ΠΌΠΊΠ»., Π‘ΠΈΠ½ΡΠΎΠ») ΠΈ 0,6 ΠΌΠΊΠ». Hot Start Taq ΠΠΠ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ (5ΠΈ/ΠΌΠΊΠ»., Π‘ΠΈΠ±ΠΠ½Π·ΠΈΠΌ). ΠΠ¦Π ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Π² ΠΏΡΠΈΠ±ΠΎΡΠ΅ Chromo4 (BioRad). Π ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΌ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅ ΠΏΠ°ΡΠ°Π»Π»Π΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΡΡΠΎΠΈΠ»ΠΈ ΠΊΠ°Π»ΠΈΠ±ΡΠΎΠ²ΠΎΡΠ½ΡΡ ΠΊΡΠΈΠ²ΡΡ, ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°ΡΡΡΡ Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΊΠ»Π° Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΎΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΠΠ, Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ.
3.6. ΠΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ Drosophila.
ΠΡΡΠ΅Ρ Π’ΠΠ’: 0.1 Π Tris pH 9.1, 50 mM EDTA, 0.2% Triton Π₯-100.
3.7. Π‘ΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎ-Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ.
Π‘ΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ, ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΈ,.
ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° ΠΈ Ρ. Π΄. Π²ΡΠΏΠΎΠ»Π½ΡΠ»ΠΈ Π² ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ Ρ ΡΡΠΊΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎΠΌ (Sambrook J., 2001). ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠ²Ρ ΡΠΈΡΠΌ MBI Fermentas, Ambion, Promega, Boehringer ΠΈ Π΄Ρ.
3.8. ΠΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΉ ΠΈΠ· ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ².
Π‘Π΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΈ ΠΈΠ·Π²Π»Π΅ΠΊΠ°Π»ΠΈ ΠΈΠ· ΡΠ°ΠΌΡΠΎΠ², ΠΏΠΎΠΌΠ΅ΡΠ°Π»ΠΈ Π² ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡ Π‘39 Π½Π° Π»ΡΠ΄Ρ, ΠΎΡΠ°ΠΆΠ΄Π°Π»ΠΈ,.
ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠ°: 350 ΠΌΠ ΡΠ°Ρ
Π°ΡΠΎΠ·Ρ, 15 ΠΌΠ HEPES (pH 7.6), 10 ΠΌΠ KCl, 5 ΠΌΠ MgCl2, 0.1 ΠΌΠ ΠΠΠ’Π, 0.5 ΠΌΠ ΠΠΠ’Π, 1 ΠΌΠ DTT, protease inhibitor cocktail (Roche), 0.5 u RNasin Plus (Promega).
Π Π΅ΡΡΡΠΏΠ΅Π½Π·ΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΉ Π±ΡΡΠ΅Ρ: 290 ΠΌΠ ΡΠ°Ρ
Π°ΡΠΎΠ·Ρ, 5 ΠΌΠ Tris-HCl (pH 7.4), 1.5 ΠΌΠ KCl, 5 ΠΌΠ MgCl2, 1 ΠΌΠ ΠΠΠ’Π, Triton Π₯-100 0.04%, protease inhibitor cocktail (Roche), 0.5 u RNasin Plus (Promega).
3.9. ΠΠΎΠ·Π΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·.
ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ Π½Π°Π½Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ: 95% ΡΠΎΡΠΌΠ°ΠΌΠΈΠ΄, 0,025% Π±ΡΠΎΠΌΡΠ΅Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΠΈΠ½ΠΈΠΉ, 0,025% ΠΊΡΠΈΠ»Π΅Π½ ΡΠΈΠ°Π½ΠΎΠ», 0,025% SDS, 18 mM EDTA.
IxTBE: 89ΡΠ Tris base, 89ΡΠ Π±ΠΎΡΠ½Π°Ρ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΠ°, 2 mM EDTA (pH 8), pH 8.3.
ΠΡΡΠ΅Ρ Church: 0.5 M ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ Π±ΡΡΠ΅Ρ pH 7.5, 1 ΡΠ ΠΠΠ’Π, 7% SDS.
ΠΡΠ΅Π΄Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΉ Π±ΡΡΠ΅Ρ: 50 ΡΠ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ Π±ΡΡΠ΅Ρ pH 7.5, 0.5 M NaCl, 0.1% Π€ΠΈΠΊΠΎΠ»400, 0.1% ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ²ΠΈΠ½ΠΈΠ»ΠΏΠΈΡΠΎΠ»ΠΈΠ΄ΠΎΠ½, 0.1% ΠΏΠΈΡΠΎΡΠΎΡΡΠ°Ρ, 50 ΠΌΠΊΠ³/ΠΌΠ» Π³Π΅ΠΏΠ°ΡΠΈΠ½, 25 ΠΌΠ ΠΠΠ’Π, 1% ΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ·ΠΈΠ», 150 ΠΌΠΊΠ³/ΠΌΠ» Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΠΠ ΠΈΠ· ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΡ Π»ΠΎΡΠΎΡΡ.
ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ ΠΊΠΈΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ: 0.7 M Tris-IiCl, 0.1 M MgCl2, 50 ΠΌΠ DTT. pH 7.6.
20xSSC: 3 M NaCl, 0.3 M Na3C6H507.
ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΡΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ Π·ΠΎΠ½Π΄Ρ:
mt tRNA M 5'-GGGTATGAACCCAGTAGCTTAA-3',.
tRNA Π 5 '-AG ATTAAGAGTCTC ATGCTCTA-3.
piRNA Su (Ste)-4 5'- TCGGGCTTGTTCTACGACGATG-3'.
3.10. Π‘ΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° Π±Π΅Π»ΠΊΠ° ΠΏΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ ΠΡΠ΅Π΄ΡΠΎΡΠ΄Π°.
10 ΠΌΠΊΠ». Z-Π±ΡΡΠ΅ΡΠ° Ρ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ³Π΅Π½ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ Π² Π½ΡΠΌ ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°ΠΌΠΈ ΠΈΠ»ΠΈ 1ΠΌΠΊΠ» ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ Ρ 200 ΠΌΠΊΠ». 5Π₯ Bio-Rad Protein Assay Π±ΡΡΠ΅ΡΠ°, ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΡΠ΅Π³ΠΎ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΠ»ΠΈ 800 ΠΌΠΊΠ». Π²ΠΎΠ΄Ρ ΠΈ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ 30 ΠΌΠΈΠ½. ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠ½Π°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅. Π ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ°Ρ
ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΡΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ³Π»ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΈ Π΄Π»ΠΈΠ½Π½Π΅ Π²ΠΎΠ»Π½Ρ 595 Π½ΠΌ. Π ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΌ ΠΎΠΏΡΡΠ΅ Π±ΡΠ°Π»ΠΈ Π΄Π²ΠΎΠΉΠ½ΠΎΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠ°, ΡΡΠΎΠ±Ρ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅ΡΠΈΡΡ Π»ΠΈΠ½Π΅ΠΉΠ½ΡΡ Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΡ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎΠΌ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° ΠΈ ΠΈΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π°.
3.11. ΠΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·.
ΠΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ Π΄Π»Ρ ΠΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π°, Π±ΡΠ»ΠΎ Π²ΡΡΠΎΠ²Π½Π΅Π½ΠΎ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΠΡΠ΅Π΄ΡΠΎΡΠ΄Π°. ΠΠ»Ρ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΊΠΈ ΡΠΈΡΡΠΎΡΡ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΉ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· Ρ ΠΌΡΡΠΈΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΊΠ»ΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΊ Π»Π°ΠΌΠΈΠ½Ρ Π (DmO ADL67.10, Developmental Studies Hybridoma Bank), ΠΊΡΠΎΠ»ΠΈΡΡΠΈΠΌΠΈ ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΊΠ»ΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΊ Ρ-ΡΡΠ±ΡΠ»ΠΈΠ½Ρ (Sigma).
ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ Π½Π°Π½Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ: 2% SDS, 100 ΠΌΠ DTT, 60 ΠΌΠ Tris-HCl ΡΠ 6.8, 0.01% Π±ΡΠΎΠΌΡΠ΅Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΠΈΠ½ΠΈΠΉ, 10% Π³Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠΈΠ½.
ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π°: 48 ΠΌΠ Tris-HCl ΡΠ 9.2, 48 ΠΌΠ Π³Π»ΠΈΡΠΈΠ½, 0.15% SDS.
ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΡΠ°: Π½Π° 1 Π»ΠΈΡΡ 3 Π³. Tris, 14.4 Π³. Π³Π»ΠΈΡΠΈΠ½, 77 ΠΌΠ». 96% ΡΡΠ°Π½ΠΎΠ»Π° (Π³ΠΎΡΠΎΠ²ΠΈΡΡ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄ ΡΠΏΠΎΡΡΠ΅Π±Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ).
ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ Π·Π°Π±ΠΈΠ²ΠΊΠΈ: 90% (ΠΏΠΎ ΠΎΠ±ΡΡΠΌΡ) 0.5% ΠΌΠΎΠ»ΠΎΠΊΠ°, 0.1% Tween-20, IxPBS (1.7 ΠΌΠ ΠΠ2Π 04, 5.2 ΠΌΠ Na2HP04, 150 ΠΌΠ NaCl).
ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ ΠΏΡΠΎΠΌΡΠ²ΠΊΠΈ: IxPBS, 0.1% Tween-20.
Π©Π΅Π»ΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ Π±ΡΡΠ΅Ρ: 100 ΠΌΠ Tris ΡΠ 9.2, 100 ΠΌΠ NaCl.
3.12. ΠΠΌΠΌΡΠ½ΠΎΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ² ΠΈ ΡΠ΄Π΅Ρ
Π―Π΄Π΅ΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡ Π½Π°Π½ΠΎΡΠΈΠ»ΠΈ Π½Π° ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΡΡΠ΅ΠΊΠ»ΠΎ (SuperFrost Plus Gold, Menzel-Glaser) ΠΈ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ 15 ΠΌΠΈΠ½., ΡΡΠΎΠ±Ρ ΡΠ΄ΡΠ° ΠΎΡΠ΅Π»ΠΈ. Π―Π΄ΡΠ° ΡΠΈΠΊΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ 15 ΠΌΠΈΠ½. Π² ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ΅ 1.8% ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΎΡΠΌΠ°Π»ΡΠ΄Π΅Π³ΠΈΠ΄Π° Π² lxPBS ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠ½Π°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅, ΠΏΡΠΎΠΌΡΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΡΠΈ ΡΠ°Π·Π° Π² ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ΅ Π ΠΠ’ ΠΏΠΎ 5 ΠΌΠΈΠ½. ΠΈ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠ½Π°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ 1−2 ΡΠ°ΡΠΎΠ² Π² ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ΅ Π ΠΠ’, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠ΅ΠΌ 3% ΠΊΠΎΠ·ΡΠ΅ΠΉ Π°Π½ΡΠΈΡΡΠ²ΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈ ΠΈ 0.1% Tween-20. ΠΠ±ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ° Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»Π°ΡΡ ΡΠ°ΠΊ ΠΆΠ΅, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΏΡΠΈ ΠΈΠΌΠΌΡΠ½ΠΎΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ².
Π Π°ΡΡΠ²ΠΎΡ PBTD: lxPBS, 0.1% Tween-20, 0.3% Triton Π₯-100, 0.3% Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡ
ΠΎΠ»Π°Ρ Π½Π°ΡΡΠΈΡ.
Π Π°ΡΡΠ²ΠΎΡ Π ΠΠ’: lxPBS, 0.1% Tween 20.
3.13. ΠΠΈΡΡΠΎΡ
ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΊΠ° ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΎΠ² Π½Π° Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ß—Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ.
ΠΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΠ΅ ΠΈΠ· ΠΈΠΌΠ°Π³ΠΎ ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΈ ΠΏΠΎΠΌΠ΅ΡΠ°Π»ΠΈ Π² ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡ 0,15 M.
Π Π°ΡΡΠ²ΠΎΡ Π‘39: 3,2 mM NaH2P04, 4,2 mM NaHC03, 21 mM KCl, 69 mM NaCI.
ΠΠ°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Π½ΡΠΉ Π±ΡΡΠ΅Ρ: 0,15 Π NaCI, 10 mM NaH2P04, pH 7,5, 1 ΡΠ MgCl2, 3,1 mM K3[Fen (CN)o], 3,1 mM Π4[Π Π΅Ρ (Π‘Π«)Π±|. ΠΠΎΡΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡ Ρ
ΡΠ°Π½ΠΈΠ»ΠΈ Π² ΡΠ΅ΠΌΠ½ΠΎΡΠ΅, Π½Π΅ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΌΠ΅ΡΡΡΠ°.
3.14. ΠΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ΅ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ß—Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ.
Z-Π±ΡΡΠ΅Ρ: 60 mM Na2HP04, 40 mM NaH2P04, 10 mM KCl, 1 mM MgS04, 0,35% ΠΌΠ΅ΡΠΊΠ°ΠΏΡΠΎΡΡΠ°Π½ΠΎΠ».
3.15. ΠΠΎΠ»ΡΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½Π°Ρ ΠΠ¦Π .
3.16. ΠΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· ΠΠ¦Π -ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² Π² Π°ΠΊΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ΄Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅.
ΠΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΡ ΡΠ°Π΄ΠΈΠΎΠ°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΡ
ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΠΠ¦Π ΡΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ Ρ Π±ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΌ Π΄Π»Ρ.
Π½Π°Π½Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π² ΡΠΎΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ 3:2, Π½Π°Π½ΠΎΡΠΈΠ»ΠΈ 2/5 ΠΠ¦Π ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π½Π° 1 ΡΠΎΡΠ΅Π·. ΠΠ»Ρ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΡΡ 5% ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ°ΠΊΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ΄Π½ΡΠΉ Π³Π΅Π»Ρ.' ΠΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΡΠΈ 25V/cm, Π² 1Π₯Π’ΠΠ Π΄ΠΎ Π²ΡΡ
ΠΎΠ΄Π° Π±ΡΠΎΠΌΡΠ΅Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠ½Π΅Π³ΠΎ. ΠΠ΅Π»Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΡΠΎΡΠ΅Π·Π° ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΡΠΈΠ»ΠΈ Π½Π° Π»ΠΈΡΡ ΠΠΠ Π±ΡΠΌΠ°Π³ΠΈ, ΡΡΡΠΈΠ»ΠΈ Π΄ΠΎ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΡΡΠ΅Π·Π½ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ² Π²Π»Π°Π³ΠΈ ΠΈ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ Π½Π° ΡΠΊΡΠ°Π½ ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΠΌΠΈΠ΄ΠΆΠ΅ΡΠ°. ΠΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ
ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»ΠΎΠ² ΡΠ°ΡΡΡΠΈΡΡΠ²Π°Π»ΠΈ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΡ Image Quant.
Π‘ΠΎΡΡΠ°Π² Π±ΡΡΠ΅ΡΠ° Π΄Π»Ρ Π½Π°Π½Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ: 50% Π³Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠΈΠ½, 0,025% Π±ΡΠΎΠΌΡΠ΅Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΠΈΠ½ΠΈΠΉ, 0,025% ΠΊΡΠΈΠ»Π΅Π½ ΡΠΈΠ°Π½ΠΎΠ».
Π‘ΠΎΡΡΠ°Π² Π°ΠΊΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π³Π΅Π»Ρ: 5% ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ΄/Π±ΠΈΡΠ°ΠΊΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ΄ (Π² ΡΠΎΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ 19/1) Π½Π° Π±ΠΈΠ΄ΠΈΡΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ Π²ΠΎΠ΄Π΅, 1Π₯Π’ΠΠ (89 ΠΌΠ Tris, 89 ΠΌΠ Π±ΠΎΡΠ½Π°Ρ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΠ°, 2 ΠΌΠ ΠΠΠ’Π, ΡΠ8,3).
3.17. ΠΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΠΠ.
ΠΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΠΠ Π΄Π»Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ S2 Drosophila ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΠ»ΠΈ ΠΈΠ· 25 ΠΈΠ»ΠΈ 100 ΠΌΠ» ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΡ E. coli Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΎΠ½ΠΎΠΊ Quagen Midi ΠΈΠ»ΠΈ Maxi Π² ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ Ρ ΠΈΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΡΠΌΠΈ ΡΠΈΡΠΌΡ-ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΠΈΡΠ΅Π»Ρ.
3.18. ΠΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄ΡΠ ΠΠ.
ΠΠ»Ρ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π΄Π²ΡΡ
ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ
Π ΠΠ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΠ¦Π -ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ, ΠΎΠ³ΡΠ°Π½ΠΈΡΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ Π΄Π²ΡΠΌΡ ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ²ΠΎΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΎ ΠΎΡΠΈΠ΅Π½ΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ Π’7 ΠΏΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΡΠ°ΠΌΠΈ Π΄Π»Ρ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·Π° ΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΈ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ Π ΠΠ. ΠΠ¦Π -ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ Π΄Π»Ρ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·Π°.
Π΄ΡΠ ΠΠ Su (Sie), Ste, GFP ΠΈΠ»ΠΈ lacZ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π»ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΠ¦Π Ρ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ°ΠΌΠΈ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠΌΠΈ Π½Π° 5' ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°Ρ
ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π’7 ΠΏΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΡΠ°, Ρ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄, Π½Π΅ΡΡΡΠΈΡ
ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Su (Ste), Ste, GFP ΠΈΠ»ΠΈ lacZ, ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ.
3.19. Π ΠΠΠΈ Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ Drosophila melanogaster.
4. Π ΠΠΠ£ΠΠ¬Π’ΠΠ’Π«.
4.1. piRNA Su (Ste) Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate.
Π Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ΅ D. melanogaster Π½Π° Π₯-Ρ
ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΠ΅ Π½Π°Ρ
ΠΎΠ΄ΡΡΡΡ ΡΠ°Π½Π΄Π΅ΠΌΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡΡΡΠΈΠ΅ΡΡ Π³Π΅Π½Ρ Stellate, Π° Π½Π° Y-Ρ
ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΠ΅ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ Π³Π΅Π½Π°ΠΌ Stellate ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡ Suppressor of Stellate (Su (Ste)). ΠΠ΅Π½Ρ Stellate ΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡ Su (Ste) ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡΡΡΡΡΡ Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
. ΠΠ΅Π»ΠΎΠΊ Stellate Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅Π½ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ Ρ-ΡΡΠ±ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΠΈΠ½ΠΊΠΈΠ½Π°Π·Ρ CKII ΠΈ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅Ρ ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΡΡ Π°-ΡΡΠ±ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΡ CKII Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
, ΡΡΠΎ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π²Π»ΠΈΡΡΡ Π½Π° ΡΠΎΡΡΠΎΡΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΡΡ
Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² (Bozzetti et al., 1995; Egorova et al., 2009; Livak, 1984; Livak, 1990). ΠΠΎΠ²ΡΠΎΡΡ Su (Ste) Π² ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠΈΠ΅ ΠΎΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Ρ ΠΏΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΆΠ΄Π΅Π½Π½ΡΠ΅ ΠΎΡΠΊΡΡΡΡΠ΅ ΡΠ°ΠΌΠΊΠΈ ΡΡΠΈΡΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΈ, ΠΏΠΎ-Π²ΠΈΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΌΡ, Π½Π΅ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° (Balakireva et al., 1992; Kalmykova et al., 1998). ΠΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΌΠ ΠΠ Stellate, ΡΡΠΎ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Stellate Π² Π²ΠΈΠ΄Π΅ ΠΊΡΠΈΡΡΠ°Π»Π»ΠΎΠ² ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π² ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΈΠΌΠΎΠΉ ΡΠΎΡΠΌΠ΅ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ² (Bozzetti et al., 1995; Egorova et al., 2009). ΠΡΠΎ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠΌ ΠΌΠ΅ΠΉΠΎΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌ Π½Π°ΡΡΡΠ΅Π½ΠΈΡΠΌ Π² Ρ
ΠΎΠ΄Π΅ ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½Π΅Π·Π° Π² Π»ΠΈΠ½ΠΈΡΡ
Ρ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠΈΠΌ ΡΠΈΡΠ»ΠΎΠΌ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate ΠΈ ΠΊ ΡΡΠ΅ΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ°ΠΌΡΠΎΠ² Π² Π»ΠΈΠ½ΠΈΡΡ
Ρ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΌ ΡΠΈΡΠ»ΠΎΠΌ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate (Livak, 1984; Livak, 1990; Palumbo et al., 1994). ΠΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π² Π΄Π²ΡΡ
Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡΡ
(Aravin et al., 2001). ΠΠ½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΡ Su (Ste) Π½Π°ΡΠ΅Π·Π°ΡΡΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΌΠ°Π»ΠΎ ΠΎΡ
Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ° «ΠΏΠ΅ΡΠ²ΠΈΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΈΠ½Π³Π°» (ΡΠΌ. ΠΎΠ±Π·ΠΎΡ Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ), ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ piRNA Su (Ste) Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ 25−27 Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ². piRNA Su (Ste) ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΡΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠΌ Aub (Nishida et al., 2007). ΠΡΡΠ°ΡΠΈΡ Π² Π³Π΅Π½Π΅ Aub ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΠΈΡΡΠ΅Π·Π½ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΈΡ piRNA Su (Ste) ΠΈ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate. ΠΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ
Π ΠΠ (Π² ΡΠΎΠΌ ΡΠΈΡΠ»Π΅ piRNA) ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ Π½Π° ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΌ, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π½Π° ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΌ ΡΡΠΎΠ²Π½ΡΡ
(ΡΠΌ. ΠΎΠ±Π·ΠΎΡ Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ). ΠΠ΄Π½Π° ΠΈΠ· Π·Π°Π΄Π°Ρ Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ»Π° Π² ΠΎΡΠ΅Π½ΠΊΠ΅ Π²ΠΊΠ»Π°Π΄Π° ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈ ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² Π² Su (Ste) piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate.
ΠΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΠ’-ΠΠ¦Π Π² ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ (ΠΊΠΠ’-ΠΠ¦Π ) ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΈΠ»ΠΈ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ aubstms' Π½Π° ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ.
ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡΡ
ΠΈ Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
(Π½ΠΎΠ²ΠΎΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠ΅-ΠΌΠ ΠΠ, Π½Π΅ ΡΡΠΏΠ΅Π²ΡΠΈΠ΅ ¡-ΡΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π½ΡΡΡΡΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΠ½Π³Π°) ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Stellate Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
. Π£Π²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ Stellate ΠΏΡΠΈ Π½Π°ΡΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³Π° ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π»ΠΎ Π±Ρ Π½Π° ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ. Π£Π²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ Stellate ΡΠΊΠ°ΠΆΠ΅Ρ Π½Π° ΡΠΎ, ΡΡΠΎ piRNA Su (Ste) Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate. Π’Π°ΠΊΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠ΄Ρ
ΠΎΠ΄ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²ΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π½Π° ΡΠΎΠΌ, ΡΡΠΎ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΠ΅ Π ΠΠ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π²Π»ΠΈΡΡΡ Π½Π° ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ ΠΈΠ»ΠΈ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ. Π° Π½Π΅ Π½Π° ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΠ½Π³Π° ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ²-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Π΅ΠΉ ΠΠ΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ, Ρ ΡΠ°ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΉ, Π΄ΡΠΎΠΆΠΆΠ΅ΠΉ, Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ ΠΈ ΠΌΠ»Π΅ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΠ°ΡΡΠΈΡ
ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΡΠ°Π·Π½ΡΠ΅ ΡΠΈΠΏΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ
Π ΠΠ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΡ, ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΡ ΠΈΠ»ΠΈ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Π΅ΠΉ (ΡΠΌ, ΠΎΠ±Π·ΠΎΡ Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ), Π ΡΠΎΠΆΠ΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ, ΡΡΠ΅Π΄ΠΈ Π΄Π°Π½Π½ΡΡ
Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΎΡΡΡΡΡΡΠ²ΡΡΡ ΡΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΈΡ Π½Π° Π²Π»ΠΈΡΠ½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ
Π ΠΠ Π½Π° ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΠ½Π³Π°.
ciajH ΡΡΡΠΌΡΠΊΡΠ½ΠΏΠΈΠ½Π½.
ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ½Π°Ρ khindi Stellate.
ΠΏΠΎΠ» ΠΈ Π.
ΠΏΠΎΠ» ΠΌ Π.
Π ΠΈΡ. 8. Π‘Ρ
Π΅ΠΌΠ° ΡΡΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
ΠΠΠΠΠ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ², ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
Π΄Π»Ρ ΠΠ¦Π . ΠΠΎΠ΄ΠΎΠ±ΡΠ°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ ΠΎΠ±ΠΎΠ·Π½Π°ΡΠ΅Π½Ρ ΡΠΈΡΡΠ°ΠΌΠΈ ?-6, ΠΠ°ΡΡ Π½ΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² 1/3 ΠΈ 2/3 ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ Π΄Π»Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
ΠΠΠΠΠ Stellate, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅Ρ 3 ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ΅Π½ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ ΠΎΡΡΡΡΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ ΠΊ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΡ
. ΠΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ 1/3 (ΡΡ ΡΠΏΠ») Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠ½ΠΈΡΡΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΡ, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ Π΄Π»Ρ ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ Stellate ΠΈΡ
ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅, ΡΠ΅ΠΌ Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
. ΠΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ 2/3 (ΡΡ Π½Π΅ΡΡΠΈ) Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠ½ΡΡΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΡ. ΠΠ°ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² ¼ (Π³Π΅Ρ ΡΡΠΌ) ΠΈΠ»ΠΈ 5/6 (Π³Π΅Ρ Π½Π΅Π΅ΠΏΠΏ) ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΡΠΌΠΌΡ ΠΈΠ»ΠΈ Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΡ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ Stellate, ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ 3' ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² 4 ΠΈ 6 ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½Ρ Π΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΠ½ΡΠΌ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠΌ Π·Π°ΠΌΠ΅Π½Π°ΠΌ, ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ°ΡΡΠΈΠΌ ΠΎΠ±Π° ΡΠΈΠΏΠ° Stellate (ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½Ρ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΌΠΈ Π±ΡΠΊΠ²Π°ΠΌΠΈ). ΠΡΠΈ Π²ΡΡΠΈΡΠ°Π½ΠΈΠΈ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² ΠΈΠ· ΡΡΠΌΠΌΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π»ΠΈ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ Stellate.
Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²Π°Ρ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΌ Stellate.
ΠΠ΅Π½ΠΎΠΌ Drosophila melanogaster ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΡ Π΄Π²Π° ΠΊΠ»Π°ΡΡΠ΅ΡΠ° Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate, ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ Π² ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΠΎΠΌ ΡΠ΅Π³ΠΈΠΎΠ½Π΅ 12Π (aySte) ΠΈΠ»ΠΈ Π΄ΠΈΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π΅ X Ρ
ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΡ (reTSte) (Livak, 1990; Palumbo et al., 1994; Shevelyov, 1992; Tulin et al., 1997). ΠΠ»Π°Π³ΠΎΠ΄Π°ΡΡ Π΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΠ½ΡΠΌ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠΌ Π·Π°ΠΌΠ΅Π½Π°ΠΌ, ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ°ΡΡΠΈΠΌ ΡΡΠΈ ΠΊΠ»Π°ΡΡΠ΅ΡΡ, Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±ΡΠ°Π½Ρ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΡΡΡ Π΄Π²Π° ΡΠΈΠΏΠ° ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Stellate (ΡΠΈΡ. 8). ΠΠ¦Π Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΡ
ΡΡΠΈΠ»ΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΈ Stellate ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡ Su (Ste), ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ²Π΅ΡΠ΄ΠΈΠ» ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² (ΡΠΈΡ. 9Π). Π§ΡΠΎΠ±Ρ ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ²Π΅ΡΠ΄ΠΈΡΡ Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡΡ
ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ Stellate Π² ΡΡΠΈΠ»ΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π΅, Π±ΡΠ» ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ ΠΏΠΎΠ΄Ρ
ΠΎΠ΄, ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΉ Π½Π° ΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΠ΅ΠΏΠ»ΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΠΠ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΡΠ»ΡΠ½Π½ΡΡ
ΠΆΠ΅Π»ΡΠ· Π»ΠΈΡΠΈΠ½ΠΎΠΊ (Abramov et al., 2005). Π ΡΡΠΈΡ
ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΠΠΠ ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π° ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°Π΅ΡΡΡ ΠΌΠ½ΠΎΠΆΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ, Π² ΡΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΠΠ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π° Π½Π΅ ΡΠ΅ΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ. ΠΡΠΎΠ²Π΅Π΄ΡΠ½ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΠΉ ΠΠ¦Π Π² ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΠΠ, Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ· ΡΠ»ΡΠ½Π½ΡΡ
ΠΆΠ΅Π»ΡΠ· ΠΈΠ»ΠΈ ΠΈΠ· ΡΠ΅Π»ΡΡ
ΠΌΡΡ
, ΠΈ Ρ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ°ΠΌΠΈ ΠΊ ΡΡΠΈΠ»ΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΠΌ ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΠΌ Stellate ΠΈΠ»ΠΈ ΠΊ Π³Π΅Π½Ρ Adh, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ Π½Π°Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ Π² ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π΅ (ΠΌΠ°ΡΠΊΡΡ ΠΠΠ, ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°ΡΡΠ΅ΠΉΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ). ΠΠ»Ρ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΠΏΠ°ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² ΠΊ Stellate ΡΠ°ΡΡΡΠΈΡΡΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΠΎΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Ste/Adh, Π° Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ Π΄Π΅Π»ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠ΅ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Ste/Adh Π² ΠΠΠ ΠΈΠ· ΡΠ»ΡΠ½Π½ΡΡ
ΠΆΠ΅Π»ΡΠ· Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Ste/Adh Π² ΠΠΠ ΠΈΠ· ΡΠ΅Π»ΡΡ
ΠΌΡΡ
ΠΈ Π²ΡΡΠ°ΠΆΠ°Π»ΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π² ΠΏΡΠΎΡΠ΅Π½ΡΠ°Ρ
(ΡΠΈΡ. 9Π). ΠΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠ΅ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½Ρ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΠΠΠ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΏΠ°ΡΠΎΠΉ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ². ΠΡΠ»ΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π±Π»ΠΈΠ·ΠΊΠΎ ΠΊ 100%, ΡΠΎ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΡΡ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΈ Stellate, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ Π² ΡΠ»ΡΠ½Π½ΡΡ
ΠΆΠ΅Π»Π΅Π·Π°Ρ
ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°ΡΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Π² ΡΠΎΠΉ ΠΆΠ΅ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½ΠΈ, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈ ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΠΉ Π³Π΅Π½ Adh ΠΈ, ΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ, Π»Π΅ΠΆΠ°Ρ Π² ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π΅. ΠΡΠ»ΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π½ΠΈΠΆΠ΅ 100%, Π·Π½Π°ΡΠΈΡ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΈ Stellate Π½Π΅Π΄ΠΎΡΠ΅ΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΡΡΡΡΡ ΠΈ, ΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ, Π»Π΅ΠΆΠ°Ρ Π² Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π΅. ΠΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ²Π΅ΡΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ, ΡΡΠΎ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ Π΄Π»Ρ ΡΡΠΌΠΌΠ°ΡΠ½ΡΡ
ΠΈ Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
Stellate (Π³Π΅Ρ ΡΡΠΌ ΠΈ Π³Π΅Ρ Π½Π΅ΡΠΏΠ», ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ) Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΡΡΡ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΈ, ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ Π² Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π΅, Π° ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ Π΄Π»Ρ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΠΈ Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
Stellate (ΡΡ cm ΠΈ ΡΡ Π½Π΅ΡΠΏΠ», ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ) Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΡΡΡ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΈ, ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ Π² ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π΅.
ΠΏΠ°ΡΡ ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΎΠ².
Π³Π΅Ρ ΡΡΠΌ Π³Π΅Ρ Π½Π΅ΡΠΏΠ» ΠΠ£ Π‘ΠΠ― «>' Π½Π΅ΡΠΏΠ».
ΠΏ Π»Π°Ρ II Π» Ρ Ρ ΡΡSte + + - - + +.
|11Π―!>|1||Π― 1' 11'l'St' + + - - + +.
ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌ ΠΈΠ» ?1 Ρ SufSte) + + + - - +.
ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡ — — —.
X 2 Ρ
Ρ
S Ρ, ΠΎ.
Π» Ρ 3 =Π³ ΠΏ S.
Π° ΠΎ Π°> s.
120 100 80 60 40 20.
ΠΏΠ΅Ρ ΡΡ ΡΡ Π³Π΅Ρ Π³Π΅Ρ ΡΡ ΡΡ Π½Π΅ΡΠΏΠ» ΡΡΠΌ Π½Π΅ΡΠΏΠ» ΡΠΏΠ» Π½Π΅ΡΠΏΠΏ ΡΡΠΌ Π½Π΅ΡΠΏΠ» ΡΠΏΠ» Π±Π΅Π· ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ S rerSte.
Ste Π² ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π΅.
Π ΠΈΡ. 9. ΠΡΠΎΠ²Π΅ΡΠΊΠ° ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΏΠ°Ρ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ², Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ
ΡΡΠΈΠ»ΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate. Π. ΠΠ¦Π Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌ ΠΈΠ΄, Π½Π΅ΡΡΡΠΈΡ
ΡΡΠΈΠ»ΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡ Su (Ste), ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ²Π΅ΡΠΆΠ΄Π°Π΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² Π΄Π»Ρ Π½Π΅Ρ ΠΏΠ»Π°Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ (ΡΡ Π½Π΅ΡΠΏΠ», Π³Π΅Ρ Π½Π΅ΡΠΏΠ») ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΌΠΎΠΉ/ΡΡΠΌΠΌΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ (ΡΡ ΡΠΏΠ», Π³Π΅Ρ ΡΡΠΌ) ΠΌΠ ΠΠ Stellate. Π. ΠΡΠΎΠ²Π΅ΡΠΊΠ° Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡΡ
ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ Stellate Π² ΡΡΠΈΠ»ΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π΅. ΠΡΠΈΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Ρ ΡΠ°ΡΡΡΡΠ½ΡΠ΅ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡ Stellate/Adh Π² ΡΠ»ΡΠ½Π½ΡΡ
ΠΆΠ΅Π»Π΅Π·Π°Ρ
Π½Π° ΡΡΠΎ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π² ΡΠ΅Π»ΡΡ
ΠΌΡΡ
Π°Ρ
. ΠΡΠΎΡ ΡΠ΅ΡΡ ΠΏΠΎΠ΄ ΡΠ²Π΅ΡΠΆΠ΄Π°Π΅Ρ, ΡΡΠΎ ΠΏΠ°ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² Π³Π΅Ρ Π½Π΅ΡΠΏΠ» ΠΈ Π³Π΅Ρ ΡΡΠΌ ΠΈΠ»ΠΈ ΡΡ Π½Π΅ΡΠΏΠ» ΠΈ ΡΡ ΡΠΏΠ» Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΡΡΡ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate, ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ Π² Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠ°ΠΈΠ»ΠΈ ΡΡΡ
ΡΠΎ ΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π΅, ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ. ΠΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΈ ΠΌΡΡ
, Π½Π΅ΡΡΡΠΈΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠ³Π΅Π½ Ρ ΡΠ΅ΡΡΡΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠ°ΠΌΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate Π² ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π΅ Ρ
ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΡ 3, ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ°ΡΡΡΡΠ½ΡΡ
Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΠΉ Π΄Π»Ρ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΡΡ
ΠΊ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΠΌ ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΠΌ Stellate, ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ²Π΅ΡΠΆΠ΄Π°Π΅Ρ ΠΎΠ±ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΡΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΡΡΠ°.
ΠΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΊΠ°ΠΊ Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste), ΡΠ°ΠΊ ΠΈ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΡ auh5″ «ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΊ Π½Π΅Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΌΡ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
Π³ΡΠ°Π½ ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ², Π² ΡΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Ρ ΠΏΠ»Π°Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² ΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎ Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π΅Ρ (Π² 10−50 ΡΠ°Π·) Π΄Π»Ρ ΠΎΠ±ΠΎΠΈΡ
ΡΠΈΠΏΠΎΠ² Stellate (ΡΠΈΡ. 10).Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ.
ΠΏΠΎΡ [ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½Π°Ρ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΡΠΌ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠΌ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate. Π‘Ρ
ΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ², ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ
Π΄Π»Ρ ΡΡΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ Stellate, ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π° ΡΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ Π² Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ΅ Π½Π΅ Π²Π»ΠΈΡΠ΅Ρ Π½Π° ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ ΠΈΡ
ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ, ΡΡΠΎ Ρ
ΠΎΡΠΎΡΠΎ ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΡΠ΅ΡΡΡ Ρ ΠΈΠΎΡΠΏ’ΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΌ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠΌ ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³Π° Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate.
s ΡΡ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎ ΡΡ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎ ΡΡ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎ.
Ρ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΠ΅ 6 Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎ Ste ΡΠ½Π΄ΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΠ΅.
Sie Π² ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π΅ Sfe.
Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΡ Su (Ste) ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΡ Π°ΠΈΠ¬.
Π ΠΈΡ. 10. ΠΠ΅Π»Π΅ΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΈΠ»ΠΈ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΡ Π² Π³Π΅Π½Π΅ aub Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅Ρ ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ΅ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ, Π½ΠΎ Π½Π΅ Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠ 1 (Π Stellate Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ. ΠΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, Π²ΠΎ ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΠ°Π· ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ (ΡΡΠΌΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠΎΠ»Π±ΡΡ) ΠΈΠ»ΠΈ Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ (ΡΠ²Π΅ΡΠ»ΡΠ΅ ΡΡΠΎΠ»Π±ΡΡ) ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ (ΡΡ) ΠΈΠ»ΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ (Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎ) ΠΌΠ ΠΠ Stellate ΠΏΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) (ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΠΌΡΡ
Π°ΠΌΠΈ Π΄ΠΈΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΏΠ°) ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΡΠΈ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ Π² Π³Π΅Π½Π΅ auh (ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΡ — sling-I, ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ·ΠΈΠ³ΠΎΡ ΠΏΠΎ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ Ρ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ·ΠΈΠ³ΠΎΡΠ°ΠΌΠΈ) ΠΏΠΎ Π΄Π°Π½Π½ΡΠΌ ΠΊΠΠ’-ΠΠ¦Π .
4.2. piRNA Su (Ste)-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠ°Ρ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
.
ΠΠ΅Π»ΠΊΠΈ Ago, ΡΠ²Π»ΡΡΡΠΈΠ΅ΡΡ ΠΊΠ»ΡΡΠ΅Π²ΡΠΌΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠ°ΠΌΠΈ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° RISC, ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΡΡΠ΅Π³ΠΎ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ, ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ Ρ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ
ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² (Aravin et al., 2008; Brennecke et al., 2007; Guang et al., 2008; Liu et al., 2005bOhrt et al, 2008; Robb et al., 2005; Weinmann et al., 2009). Π ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΠΌΠ»Π΅ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΠ°ΡΡΠΈΡ
Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ Ago2 ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ Π² ΡΠ΄ΡΠΎ, Π΄Π»Ρ ΡΠ΅Π³ΠΎ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΠΌ ΡΠ΅ΡΠ΅ΠΏΡΠΎΡ ΠΈΠΌΠΏΠΎΡΡΠ° ΠΈΠΌΠΏΠΎΡΡΠΈΠ½ 8 (Weinmann et al., 2009). ΠΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌ, Ago2 ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΠΌ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠΌ ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΠΉΡΡΠ²Π° Ago Ρ ΠΌΠ»Π΅ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΠ°ΡΡΠΈΡ
, ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡΠΈΠΌ ΡΠ»Π°ΠΉΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ (Liu et al., 2004; Meister et al., 2004). Π ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ Ρ ΡΡΠΈΠΌ Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΠΌΠ»Π΅ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΠ°ΡΡΠΈΡ
siRNA ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ Π ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Π΅ΠΉ ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
(Robb et al., 2005; Zeng and Cullen, 2002). ΠΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ»ΠΎ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅Ρ Π²ΡΡΡΠ½ΠΈΡΡ, ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π»ΠΈ piRNA Su (Ste) Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
? ΠΠ»Ρ ΡΡΠΎΠΉ ΡΠ΅Π»ΠΈ Π±ΡΠ»ΠΎ ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΠΈΡΡ, ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π»ΠΈ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ Stellate Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ² ΠΏΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste).
ΠΠ· Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΎΠ² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ² ΠΌΡΡ
Ρ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠ΅ΠΉ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΈ ΠΌΡΡ
Π΄ΠΈΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΏΠ° Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Ρ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½Π°Ρ ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ. Π§ΠΈΡΡΠΎΡΠ° ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΉ Π±ΡΠ»Π° ΠΏΡΠΎΠ²Π΅ΡΠ΅Π½Π° Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ² Π»Π°ΠΌΠΈΠ½Π° ΠΈ Ρ-ΡΡΠ±ΡΠ»ΠΈΠ½Π°, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·ΡΡΡΡΡ Π² ΡΠ΄ΡΠ΅ ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅, ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ (ΡΠΈΡ. IIA). Π‘ΠΎΠ³Π»Π°ΡΠ½ΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠ΅ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½Π°Ρ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡ Π½Π΅ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Π° ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΡ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΡΡ
ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½. Π§ΡΠΎΠ±Ρ ΡΡΠΎ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡΡ, Π±ΡΠ» ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄ΡΠ½ ΠΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ² ΠΊΠ°Π»Π½Π΅ΠΊΡΠΈΠ½Π°, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Π½ΡΠΌ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠΌ ΡΠ½Π΄ΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΡΠΈΠΊΡΠ»ΡΠΌΠ° (ΡΠΈΡ. ΠΠ). Π ΡΠ΅Π»ΠΎΠΌ, ΠΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π», ΡΡΠΎ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½Π°Ρ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡ ΠΏΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ Π½Π΅ Π·Π°Π³ΡΡΠ·Π½Π΅Π½Π° Π±Π΅Π»ΠΊΠ°ΠΌΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΡ. Π§ΠΈΡΡΠΎΡΠ° ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΉ Π±ΡΠ»Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅ΡΠ΅Π½Π° Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΠΎΠ·Π΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π ΠΠ, Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ· ΠΎΠ±Π΅ΠΈΡ
ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΉ (ΡΠΈΡ. ΠΠ). ΠΡΠ» ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ Π·ΠΎΠ½Π΄, ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Π»ΠΈΠ·ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ ΠΠ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΌΠΈΡΠΎΡ
ΠΎΠ½Π΄ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ ΠΠ. ΠΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΠΈΠΌΠΎΡΡΡ ΠΠΎΠ·Π΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° Π΄Π»Ρ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠΎΠ²Π½Π΅ΠΉ ΡΠ ΠΠ Π±ΡΠ»Π° ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ²Π΅ΡΠΆΠ΄Π΅Π½Π° Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΊΠ°Π»ΠΈΠ±ΡΠΎΠ²ΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°, Π² ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΌ ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½Π° Π»ΠΈΠ½Π΅ΠΉΠ½Π°Ρ ΠΊΠΎΡΡΠ΅Π»ΡΡΠΈΡ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎΠΌ Π ΠΠ, Π²Π·ΡΡΠΎΠΉ Π΄Π»Ρ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π°, ΠΈ ΠΈΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ (ΡΠΈΡ. 11Π). Π‘ΠΎΠ³Π»Π°ΡΠ½ΠΎ Π΄Π°Π½Π½ΡΠΌ ΠΠΎΠ·Π΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½Ρ Π·Π°Π³ΡΡΠ·Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Π ΠΠ Π½Π΅ ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ°Π»Π° 10%.
ΠΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΠΊΠΠ’-ΠΠ¦Π Π² ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ»ΠΈ, Π²ΠΎ ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΠ°Π· ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ Stellate ΠΏΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste). ΠΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Stellate Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π΅Ρ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΈ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΡ
Π² 37 ΠΈ 13 ΡΠ°Π·, ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ (ΡΠΈΡ. 11Π). ΠΠ»Ρ ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
Stellate ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΈ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΡ
ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ 36 ΠΈ 17 ΡΠ°Π·, ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ (ΡΠΈΡ. ΠΠ). ΠΠ½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½Π°Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ Stellate Π² ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ Π½Π΅ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½Π΅Π½Π° ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌ Π·Π°Π³ΡΡΠ·Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΠΏΠΎ Π΄Π°Π½Π½ΡΠΌ ΠΠΎΠ·Π΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° Π·Π°Π³ΡΡΠ·Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΎΠΉ Π½Π΅ ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ°Π΅Ρ 10%. ΠΡΠΎ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ Π·Π°ΠΊΠ»ΡΡΠΈΡΡ, ΡΡΠΎ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
.
ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠΎΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π ΠΠ ((jg) 0,4 1 4 8.
Π΄ΠΈΠΊ Π½ΠΈ ΡΠΈΠΏ.
Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠ½ΠΈ Su (Ste).
ΡΠ΄ΡΠ° ΡΠΈΡ ΡΠ΄ΡΠ° ΡΠΈΡ.
ΠΎ. s 3 (Π 40.
ΠΊ X, Π° ΠΎ.
ΠΎ Π°. >. Π΅ ΠΎ ΠΎ 30.
(Π‘ ΠΎ. X X 20.
Ρ Π°Π· Ρ.
0) 5 Ρ Ρ 10.
? Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ½Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΡ.
Β¦ Π΅ΠΏΠΏΠ°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΡ.
ΡΠ΄ΡΠΎ ΡΠΈΡ.
ΡΠ΄ΡΠΎ ΡΠΈΡ aySte.
0 2 4 6 8 10 ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠΎΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π ΠΠ, Π²Π·ΡΡΠΎΠΉ Π΄Π»Ρ ΠΠΎΠ·Π΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° (ΡΠ΄).
Π ΠΈΡ. 11, ΠΠ΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate, Π²ΡΠ·Π²Π°Π½Π½Π°Ρ piRNA Su (Ste), ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
. Π. ΠΡΠ΅Π½ΠΊΠ° ΡΠΈΡΡΠΎΡΡ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΉ. ΠΠ²Π΅ΡΡ
Ρ: ΠΠΎΠ·Π΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· Ρ Π·ΠΎΠ½Π΄Π°ΠΌΠΈ, ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΌΠΈΡΠΎΡ
ΠΎΠ½Π΄ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠΎΠ½Π½Π½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ ΠΠ (mt tRNA Π) ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌ ΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Π»ΠΈΠ·ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ ΠΠ (tRNA Π). ΠΠ½ΠΈΠ·Ρ: ΠΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ² Π»Π°ΠΌ ΠΈ Π½Π° (ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΡΠΉ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ), Ρ-ΡΡΠ±ΡΠ»ΠΈΠ½Π° (ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ) ΠΈ ΠΊΠ°Π» Π½Π΅ ΠΊΡ ΠΈ Π½Π° (ΡΡΠ°ΠΈΡΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Π½ΡΠΉ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ ΡΠ½Π΄ΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌ ΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΡΠΈΠΊΡΠ»ΡΠΌΠ°). Π. ΠΠ°Π»ΠΈΠ±ΡΠΎΠ²ΠΎΡΠ½ΡΠΉ ΠΠΎΠ·Π΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· (Π·ΠΎΠ½Π΄ ΠΊ ΠΌΠΈΡΠΎΡ
ΠΎΠ½Π΄ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ ΠΠ) Π΄Π΅ΠΌΠΎΠ½ΡΡΡΠΈΡΡΠ΅Ρ, ΡΡΠΎ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π», ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ, ΠΊΠΎΡΡΠ΅Π»ΠΈΡΡΠ΅Ρ Ρ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎΠΌ Π ΠΠ, Π²Π·ΡΡΡΠΌ Π΄Π»Ρ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π°. ΠΡΠΎΡ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½Ρ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ, ΡΡΠΎ ΠΠΎΠ·Π΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ Π΄Π»Ρ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠΎΠ²Π½Π΅ΠΉ ΡΠ ΠΠ ΠΈ piRNA Su (Ste) Π² ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΡ
. Π. ΠΠ΅Π»Π΅ΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
(ΡΡ) ΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
(Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎ) ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Stellate ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΡ
, Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ
ΠΈΠ· ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ² Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ.
4.3. ΠΠ΅Π»ΠΎΠΊ Aub ΠΈ piRNA Su (Ste) ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ².
ΠΠ΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΎΡΠ½ΡΠΉ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠΉ piRNA Su (Ste) ΠΈ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ Aub. Π£ΡΠΈΡΡΠ²Π°Ρ, ΡΡΠΎ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΡΡΠ°ΠΈΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Stellate ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΠΎΠΆΠΈΠ΄Π°Π»ΠΎΡΡ ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΡΡ Su (Ste) piRNA ΠΈ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ Aub Π² ΠΎΠ±ΠΎΠΈΡ
ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ°ΡΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Ρ
. Π ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ Ρ ΡΡΠΈΠΌ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ piRNA Su (Ste) Π±ΡΠ»ΠΈ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΠΎΠ·Π΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΡΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΡ
(ΡΠΈΡ. 12Π). Π ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ² ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΠΈΠ±ΠΎΠΏΡΠΎΠ±Ρ, Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΡΡΡΡΡ ΡΡΠΌΠΌΡ Su (Ste) piRNA, ΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠΉ Π·ΠΎΠ½Π΄ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ Su (Ste)-4 piRNA, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΡΠ΅Π΄ΠΈ piRNA, ΠΈΠΌΠΌΡΠ½ΠΎΠΏΡΠ΅ΡΠΈΠΏΠΈΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ
ΡΡ Ρ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠΌ Aub (Nishida et al., 2007). Π ΡΠ΄ΡΠ΅ Su (Ste) piRNA ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π² 2 ΡΠ°Π·Π° ΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Ρ, ΡΠ΅ΠΌ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅ (ΡΠΈΡ. 12Π), ΡΡΠΎ ΠΈΡΠΊΠ»ΡΡΠ°Π΅Ρ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½ΠΈΡΡ ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ piRNA Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°ΠΌΠΈΠ½Π°ΡΠΈΠ΅ΠΉ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ Π½Π΅ ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ°Π΅Ρ 10%. Π Π΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°ΡΡ Π½Π° ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Aub Π² ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΡ
, ΠΏΡΠΈΡΡΠΌ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ Π² ΡΠ°Π²Π½ΡΡ
ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡΡ
(ΡΠΈΡ. 12Π). ΠΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΠΎΠ±ΡΠ΅Π΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°, Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ΅ ΠΈΠ· ΡΠ΄Π΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ², Π±ΡΠ»ΠΎ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ Π² 10 ΡΠ°Π· ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅, ΡΠ΅ΠΌ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°, Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ΅ ΠΈΠ· ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΡ, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π·Π°ΠΊΠ»ΡΡΠΈΡΡ, ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ 1/10 ΡΠ°ΡΡΡ ΠΎΡ ΠΎΠ±ΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Aub Π½Π°Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ², Π° 9/10 Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅.
Π»ΠΈ ΠΊΠΌ ΠΈ ΡΠΈΠΏ.
Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ Su (Ste).
ΡΠ΄ΡΠ° ΠΈΠΈΠ³ tupa ΡΠΈΠ³.
ΡΡΠΌΠΌΠ° piRNAs SufSte).
Su (Sie)-4 piRNA.
34 Π½Π³ 25 ht.
14 ht.14 ht.
1%? -fr W >5.
6- g 70 «g.
g i 5S 50 Π ?3 ffi n> q 40 Ρ.
Π =r Π² ΠΎ.
ai Π³Π° Π°. ΠΎ.
? mttRNA M Β¦ Su (Ste) piRNA.
Π΄ΠΈΠΊΠΈΠΉ Π΄Π΅Π»ΠΎΡΠΈΡ ΡΠΈΠΏ Su (Ste).
Π ΠΈΡ. 12. piRNA Su (Ste) ΠΈ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ Aub ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΡ
. Π. Π Π°ΡΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Aub ΠΈ piRNA SufSte) ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈ ΡΠ΅Ρ ΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΠΌΠΈ. ΠΠ²Π΅ΡΡ
Ρ: ΠΠΎΠ·Π΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· Ρ Π ΠΠ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌ ΡΡΠΌΠΌΠ΅ piRNA SufSte). Π ΡΠ΅ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅: ΠΠΎΠ·Π΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· Ρ ΠΠΠ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌ ΡΠ½ΠΈΠΊΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ SufSte)-4 piRNA. ΠΠ½ΠΈΠ·Ρ: ΠΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ² Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Aub. Π. Π‘ΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠΈΡΠΎΡ
ΠΎΠ½Π΄ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅Ρ ΠΈΠΎΠ½ Ρ Π½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ ΠΠ ΠΈ SufSte) piRNA (ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΠΉ ΡΠ°ΡΡΡΡ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»ΠΎΠ² ΠΈΠ· ΡΠΈΡ. ΠΠ ΠΈ 12Π) Π² ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ Π² ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠΈ Ρ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠ΅ΠΉ.
Π‘ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΈΠΌΠΌΡΠ½ΠΎΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π±ΡΠ»Π° ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½Π° Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Aub Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
(ΡΠΈΡ. 13Π). ΠΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΠΎΠΉ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π» ΠΎΡ Aub (ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌ) ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π² ΡΠ°ΠΉΠΎΠ½Π΅ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΎΠ±ΠΎΠ»ΠΎΡΠΊΠΈ ΠΈ Π½Π°ΠΏΠΎΠΌΠΈΠ½Π°Π΅Ρ ΡΠ°ΠΊ Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΡΠΉ nuage, ΡΠ²Π»ΡΡΡΠΈΠΉΡΡ ΡΠ°ΡΠΏΡΠΎΡΡΡΠ°Π½ΡΠ½Π½ΠΎΠΉ ΠΏΠ΅ΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠΎΠΉ, ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΠ²Π°Π΅ΠΌΠΎΠΉ Π²ΠΎΠΊΡΡΠ³ ΡΠ΄Π΅Ρ ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΡ
ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΡ
ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² {Eddy, 1975). ΠΡΠΈ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΏΠΎΠ΄ΡΠΎΠ±Π½ΠΎΠΌ ΡΠ°ΡΡΠΌΠΎΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ Π²ΠΈΠ΄Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ «ΠΊΠΎΠ»ΡΡΠ΅ΠΎΠ±ΡΠ°Π·Π½ΡΠΉ» ΡΠΈΠ³Π½Π°Π» ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ ΠΈΠ· Π΄ΠΈΡΡΡΠ·Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π½ Π³ΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΎΠ². ΠΡΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
ΠΌΡΡΠ°Π½ΡΠ½ΡΡ
ΠΏΠΎ Aub ΠΌΡΡ
ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ²Π΅ΡΠΆΠ΄Π°Π΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈΠΌΠΌΡΠ½ΠΎΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ (ΡΠΈΡ. 13Π). Π ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΌΠ°ΡΠΊΡΡΠ° Π³ΡΠ°Π½ΠΈΡΡ ΡΠ΄ΡΠ° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ Π»Π°ΠΌΠΈΠ½ Π (ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ Π·Π΅Π»ΡΠ½ΡΠΌ), ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΡΠΌ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠΌ, ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½Π½ΡΠΌ Ρ Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½Π΅ΠΉ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½ΠΎΠΉ. ΠΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½Π° ΠΊΠΎΠ»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ Aub ΠΈ Π»Π°ΠΌΠΈΠ½Π° Π (ΡΠΈΡ. 13Π). ΠΡΠΎ ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π° Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΡΠ°ΡΡΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Aub Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
, ΡΡΠΎ ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΡΠ΅ΡΡΡ Ρ Π΄Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ.
ΠΠ»Ρ Π΄ΠΎΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Aub Π±ΡΠ»ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΎ ΠΈΠΌΠΌΡΠ½ΠΎΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΎΠ² Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ
ΡΠ΄Π΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ² (ΡΠΈΡ. 13Π¬). Aub.
Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ Π² Π²ΠΈΠ΄Π΅ Π³ΡΠ°Π½ΡΠ», ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·ΡΡΡΡΡ Ρ Π»Π°ΠΌΠΈΠ½ΠΎΠΌ Π. ΠΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° ΠΎΡ Aub Π±ΡΠ»Π° Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠ»Π°Π±Π΅Π΅, ΡΠ΅ΠΌ Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
, ΡΡΠΎ ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΡΠ΅ΡΡΡ Ρ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΊΠ°ΠΌΠΈ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ² ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ, ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΠ½ΠΎ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΌ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Aub Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ² ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ Π½Π° ΠΏΠΎΡΡΠ΄ΠΎΠΊ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅, ΡΠ΅ΠΌ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅. Π Π΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ, ΠΊΠΠ’-ΠΠ’Π¦Π ΠΈ ΠΈΠΌΠΌΡΠ½ΠΎΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°ΡΡ Π½Π° ΡΠΎ, ΡΡΠΎ Π½Π΅Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ°Ρ ΡΠ°ΡΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠΎΠ² piRNA-Aub Π½Π°Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ² Π²Π±Π»ΠΈΠ·ΠΈ Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½Π΅ΠΉ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ, Π³Π΄Π΅ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate.
Π» Π°Π½ΡΠΈ-Aub Π°Π½ΡΠΈ-Π»Π°ΠΌΠΈΠ½ Π Π½Π°Π»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅.
Π΄ΠΈΠΊΠΈΠΉ ΡΠΈΠΏ.
Π°Π½ΡΠΈ-Aub Π°Π½ΡΠΈ-Π»Π°ΠΌΠΈΠ½ Π Π½Π°Π»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅.
Π ΠΈΡ. 13. ΠΠΌΠΌΡΠ½ΠΎΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ² ΠΈ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ
ΡΠ΄Π΅Ρ Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΊ ΠΠΈΠ¬. Π. ΠΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° ΠΠΈΠ¬ Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
. ΠΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΎ ΠΈΠΌΠΌΡΠ½ΠΎΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ² Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ² ΠΠΈΠ¬ (ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌ) ΠΈ Π»Π°ΠΌΠΈΠ½Π° (ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ Π·Π΅Π»ΡΠ½ΡΠΌ), ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΡΠΌ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠΌ. ΠΠΎΠ»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΠΈΠ¬ ΠΈ Π»Π°ΠΌΠΈΠ½Π° Π Π΄Π°ΡΡ ΠΆΡΠ»ΡΡΠΉ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π», Π²ΠΎΠ·Π½ΠΈΠΊΠ°ΡΡΠΈΠΉ ΠΏΡΠΈ Π½Π°Π»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈ Π·Π΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»ΠΎΠ². Π‘ΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π» ΠΎΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° ΠΠΈΠ¬ Π±ΡΠ» Π²ΡΡΠ²Π»Π΅Π½ ΠΏΡΡΡΠΌ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΈΠΌΠΌΡΠ½ΠΎΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ² ΠΌΡΡ
Π΄ΠΈΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΏΠ° Ρ ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°ΠΌΠΈ ΠΌΡΡ
Ρ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΠ΅ΠΉ Π² Π³Π΅Π½Π΅ ΠΈΠΈΠͺ (ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠ³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ·ΠΈΠ³ΠΎΡΡ Π°ΠΈΠ¬ΠΠ¬!/Π°ΠΈΠ¬&'43, ΠΎΠ±ΠΎΠ·Π½Π°ΡΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ -/-). Π¨ΠΊΠ°Π»Π° — 10 (ΠΈΠ». Π. ΠΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΠΈΠ¬ Π² Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ
ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
. Π―Π΄Π΅ΡΠ½Π°Ρ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡ Π±ΡΠ»Π° ΠΎΠΊΡΠ°ΡΠ΅Π½Π° Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ² ΠΠΈΠ¬ ΠΈ Π»Π°ΠΌΠΈΠ½Π°. Π‘ΠΈΠ³Π½Π°Π»Ρ ΠΎΡ ΠΠΈΠ¬ (Π² Π²ΠΈΠ΄Π΅ ΡΠΎΡΠ΅ΠΊ) ΠΊΠΎΠ»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·ΡΡΡΡΡ Ρ Π»Π°ΠΌΠΈΠ½ΠΎΠΌ.
4.4. ΠΠ·ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste-lacZ.
ΠΠΎΠΌΠΈΠΌΠΎ piRNA, ΠΊ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΡΠΌ ΠΊΠ»Π°ΡΡΠ°ΠΌ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ
Π ΠΠ ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡΠ½ΡΡ
ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡ siRNA ΠΈ miRNA (ΡΠΌ. ΠΎΠ±Π·ΠΎΡ Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ). ΠΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΡ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Π΅ΠΉ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ siRNA ΠΈ miRNA ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½Ρ Π³ΠΎΡΠ°Π·Π΄ΠΎ Π»ΡΡΡΠ΅, ΡΠ΅ΠΌ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΡ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ piRNA. ΠΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ»ΠΎΡΡ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΌ ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΡΡ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΡ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΈ ΡΠΎΠΉ ΠΆΠ΅ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ piRNA ΠΈ siRNA. Π ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Π±ΡΠ»ΠΈ Π²ΡΠ±ΡΠ°Π½Ρ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste-lacZ, Π½Π΅ΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ°ΡΡΡ Π³Π΅Π½Π° Stellate ΡΠ»ΠΈΡΡΡ Ρ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΠΌ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌ lacZ, ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡΠΈΠΌ Ρ-Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ.
4.4.1 piRNA Su (Ste) Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π½Π΅ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΎΠ΅ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΡΡΠΎΠ²Π½Π΅ΠΌ Ρ-Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ.
Π‘ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΠ’-ΠΠ¦Π ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΊΠΈ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π -Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
ΠΈΠ·ΡΡΠ°Π»ΠΈ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠ³Π΅Π½Π½ΡΡ
ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠΎΠ² Ste703-lacZ (ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΎΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π° Π. Π’ΡΠ»ΠΈΠ½ΡΠΌ) ΠΈ Stel34-lacZ (Aravin et al., 2001) (ΡΠΈΡ. 14). ΠΠ»Ρ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅ΡΠΊΠΈ Π»ΠΈΠ½Π΅ΠΉΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΡΡΠ΅Π»ΡΡΠΈΠΈ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎΠΌ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»Π°, Π²Π·ΡΡΠΎΠ³ΠΎ-Π΄Π»Ρ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π°, ΠΈ ΠΈΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° Π² ΠΏΠΠ’-ΠΠ¦Π ΠΈ Π² ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π -Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ, Π±ΡΠ°Π»ΠΈ 2-Ρ
ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΊΠΠΠ ΠΈΠ»ΠΈ Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠ° ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ², ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ. ΠΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π² 1,5 ΡΠ°Π·Π°, Π° ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ Π -Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ Π² 4−7 ΡΠ°Π· (ΡΠΈΡ. 15Π, Π). ΠΠ΅Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ Π -Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π° ΡΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ Π½Π΅ ΠΈΠ³ΡΠ°Π΅Ρ Π²Π°ΠΆΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΎΠ»ΠΈ Π² ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΉ, ΡΡΠΎ ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΡΠ΅ΡΡΡ Ρ Π΄Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ Π΄Π»Ρ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΡ
Stellate (ΡΠΈΡ. 10). ΠΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, Π΄Π»Ρ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΡ
Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ Π½Π΅ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌΡ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° Π±Π΅Π»ΠΊΠ° ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΡΡΠΎΠ²Π½Π΅ΠΌ ΠΌΠ ΠΠ (Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Stellate Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠ΅ΠΌ Π² 200 ΡΠ°Π· (Kotelnikov et al., 2009), ΡΡΠΎ Π·Π°ΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ°Π΅Ρ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ Stellate (30−50 ΡΠ°Π·, ΡΠΈΡ. 10)). ΠΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡ
ΠΎΠ΄Π½ΡΡ
ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΎΠ² piRNA Su (Ste) Π½Π° ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ³Π΅Π½Π½ΡΡ
ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΉ Ste-lacZ ΠΈ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΡ
Stellate ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΡΠΊΡΡΡΠ°ΠΏΠΎΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΡΠΈ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΉ, Π½Π° ΡΠ½Π΄ΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΠ΅ Π³Π΅Π½Ρ. ΠΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠ»Π°Π±Π°Ρ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΉ Ste-lacZ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ Stellate ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½Π΅Π½Π° ΡΠ΅ΠΌ, ΡΡΠΎ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Π½Π΅ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Ρ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠ°ΡΡΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Stellate ΠΈ.
Π‘Ρ 11 |)T.
i pa iiCKpiuiuHii.
Π ΡΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Π² Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ΅ D.melanogaster.
Ste 703-lacZ Stel34-lacZ.
Π Π΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ Π² ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π΅ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌ ΠΈΠ΄ ΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΡΠ²ΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈΡΡ Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ S2 D.melanogaster.
hsp70-Ste-lacZ [.
hsp 70-lacZ.
niiPHK-Slft' ΠΈΠ»ΠΈ Su (StL') Π΄ΠΈΠ ΠΠ lucZ.
hsp 70 Π* lacZ.
1 —-Π ΠΉΡΠ L.
Π΄ΡΠ Π Π lacZ.
Π΄ΡΠ ΠΠ GFP.
Π ΠΈΡ. 14. Π Π΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste-lacZ. Π Π΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste703-lacZ ΠΈ Steli4-lacZ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Ρ ΠΈΠ½ΡΠ°ΠΊΡΠ½ΡΠΉ ΠΏΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΡ Stellate ΠΈΠ»ΠΈ 101 Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ ΠΏΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΡΠ° Stellate ΠΈ 141 ΠΈΠ»ΠΈ 33 Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠ±ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Stellate, ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ, ΡΠ»ΠΈΡΡΠ΅ Ρ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΠΌ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌ lacZ. ΠΠ΅Π½ lacZ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ Π½Π΅ ΠΈ ΠΌΠ°ΡΡΡΠ°Π±Π΅ (Π΅Π³ΠΎ Π΄Π»ΠΈΠ½Π° ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ 3308 Π½Ρ.). ΠΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΡ hsp70-Ste-lacZ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ hsp70 ΠΏΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΡΠ° ΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΠ΅ 585 Π½Ρ. ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠ±ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Stellate. ΠΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ hsplO-lacZ ΠΈ hsp70-GFP ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Ρ ΠΏΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΡ hsp70 ΠΈ Π³Π΅Π½Ρ lacZ ΠΈ GFP. ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ. ΠΠ²ΠΎΠΉΠ½ΠΎΠΉ Π»ΠΈΠ½ΠΈΠ΅ΠΉ ΠΎΠ±ΠΎΠ·Π½Π°ΡΠ΅Π½Ρ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ Π΄Π²ΡΡ
ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ Π ΠΠ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΡΠ΅ Π΄Π»Ρ ΠΊΠΎΠ³ΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΡΠΈΠΈ Π²ΠΌΠ΅ΡΡΠ΅ Ρ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΡΠΌΠΈ Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ S2 D.melanogaster.
Ste703-lacZ.
Stel34-lacZ.
Π΄ΠΈΠΊΠΈΠΉ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΡ ΡΠΈΠΏ Su (Ste).
? ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ.
Β¦ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ß—Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ.
Π ΠΈΡ. 15. ΠΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΡΡΠ°ΠΈΡΠ³Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste-lacZ Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
ΠΏΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² ΠΠΈ (51Π΅). Π. ΠΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π½Π° Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Π -Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ· ΠΈΠ΄ Π°Π·Ρ ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ² ΠΌΡΡ
, Π½Π΅ΡΡΡΠΈΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠ³Π΅Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠ΅Π½ΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste703-lacZ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΡ 134−1Π°Ρ2. Π. ΠΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ $ 1Π΅-1Π°Ρ2 (ΡΠ²Π΅ΡΠ»ΡΠ΅ ΡΡΠΎΠ»Π±ΡΡ) ΠΈ Π°ΠΊΡΠΈΠ²ΠΈΠΎΡΠ³ΠΈ Π -Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ (ΡΡΠΌΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠΎΠ»Π±ΡΡ) Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
ΠΌΡΡ
ΠΏΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² 8ΠΈ ($ 1Π΅).
ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ 8ΠΈ (3(Π΅) Π½Π΅ ΡΡΠ°ΡΡΠ²ΡΡΡ Π².
ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Ste-lacZ.
4.4.2 siRNA Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π½Π΅ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΎΠ΅ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΡΡΠΎΠ²Π½Π΅ΠΌ ß—Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ Drosophila.
ΠΠ»Ρ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ° ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste-lacZ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ siRNA ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ S2 Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄ΠΎΠΉ, Π½Π΅ΡΡΡΠ΅ΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΡ hsp70-Ste-lacZ, ΠΈ Π΄ΡΠ ΠΠ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΈΠ½Π³Π° Π½Π°ΡΠ΅Π·Π°Π΅ΡΡΡ Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ siRNA. ΠΠΎΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΠΊΠ¦ΠΉΠ― Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ Π΄ΡΠ ΠΠ (Su (Ste), Sie ΠΈΠ»ΠΈ lacZ) Π²Π΅Π»Π° ΠΊ 7−10 ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΌΡ ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ß—Π³Π°Π»Π°ΠΊΠ³ΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ (ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΠΊΠΎΡΡΠ°Π»ΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ΅ΠΉ, Π² ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»Π°ΡΡ Π½Π΅Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½Π°Ρ Π΄ΡΠ ΠΠ GFP), Π½ΠΎ Π»ΠΈΡΡ ΠΊ 1,5−2 ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΌΡ ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ (ΡΠΈΡ. 16Π). Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, siRNA Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ, ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈ piRNA Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
.
Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π½Π΅ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΎΠ΅ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ, Π Π΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste-lacZ Π±ΡΠ»Π° ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ²Π° ΠΏΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡΡΡ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΡΡ
Π΄ΡΠ ΠΠ Sie ΠΈ lacZ ΠΈΠ»ΠΈ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ Π½Π° 90% Π΄ΡΠ ΠΠ Su (Ste), ΡΡΠΎ ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π° ΡΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΎΡΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ Π½Π° 10% ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΎΠΉ Π ΠΠ ΠΈ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΡ Π½Π΅ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΡΠΈΡΠΈΠ½ΠΎΠΉ Π½Π΅ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ.
Π‘ΠΎΠ³Π»Π°ΡΠ½ΠΎ Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ½ΡΠΌ Π΄Π°Π½Π½ΡΠΌ, siRNA Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ, ΡΠ΅ΠΌ Π±ΡΠ»Π° ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½Π° Π² ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ (1,5−2 ΡΠ°Π·Π°) (Ghildiyal and Zamore, 2009). Π§ΡΠΎΠ±Ρ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ siRNA-ΠΈΠ½ΠΈΡΠΈΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ Π² ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΡΡ
ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ
ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ
, ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π»ΠΈ Π½ΠΎΠΊΠ΄Π°ΡΠ½ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ hsp70-GFP Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π΄ΡΠ ΠΠ GFP vi ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΠ»ΠΈ ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ GFP Π² 10 ΡΠ°Π· (ΡΠΈΡ. 16Π). Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, 90% ΠΌΠ ΠΠ GFP Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄ΠΈΡΡΠ΅Ρ Π² ΠΎΡΠ²Π΅Ρ Π½Π° Π΄ΡΠ ΠΠ GFP, ΡΠΎΠ³Π΄Π° ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ Π»ΠΈΡΡ 20−40% ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°ΡΡΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ. ΠΡΠ»ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ 60−80% ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Ste-lacZ Π·Π°ΡΠΈΡΠ΅Π½Ρ ΠΎΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π½Π΅ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ°. Π§ΡΠΎΠ±Ρ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡΡ, ΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½Π° Π»ΠΈ Π·Π° Π·Π°ΡΠΈΡΡ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ ΠΎΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ Stellate, Π±ΡΠ» ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄ΡΠ½ Π½ΠΎΠΊΠ΄Π°ΡΠ½ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ hsp70-lacZ, Π½Π΅ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠ΅ΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Stellate, Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π΄ΡΠ ΠΠ lacZ. ΠΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΎ ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ lacZ Π² 5 ΡΠ°Π· (ΡΠΈΡ. 16Π), ΡΡΠΎ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠΈΠ»ΡΠ½Π΅Π΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠ° Π΄ΡΠ ΠΠ lacZ Π½Π° ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ (ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π² ΡΡΠ΅Π΄Π½Π΅ΠΌ Π² 1,3 ΡΠ°Π·Π°). Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ Stellate ΡΠ½ΠΈΠΆΠ°Π΅Ρ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ siRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠΉ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ.
ΠΎ ΠΎ, Π° >.
? ΠΌΠ ΠΠ 51Π΅-1Π°ΡΠ³ Β¦ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ [1-Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ.
Π²Π Π ΠΠΈ^Π΅) Ste.
Π X Π€ Ρ ΠΎ.
0=Π ΠΠΈ^Π΅) Π΄ΡΠ ΠΠ.
X Π½ Π»: Π³ΠΎ.
? ΠΌΠ ΠΠ 1Π°ΡΠ³.
Β¦ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Ρ-Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ 100.
ΡΡ X Π. ?
? 40 ¡-ΠΉ Π³ΠΎ Π‘.
Π ΠΈΡ. 16. 51Π―]^Π-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠ°Ρ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠΈΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ $, 1Π΅-1Π°Ρ2 Π² ΠΊΡΠ»ΡΠ³ΡΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ 52. Π. Π£ΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ 51Π΅-1Π°Ρ2. ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΏΠΠ’-ΠΠ¦Π , (ΡΠ²Π΅ΡΠ»ΡΠ΅ ΡΡΠΎΠ»Π±ΡΡ) ΠΈ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Ρ-Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ· ΠΈΠ΄ Π°Π·Ρ (ΡΡΠΌΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠΎΠ»Π±ΡΡ) ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ½Π΄Ρ }Ρ)70−8(Π΅-1Π°Ρ2 ΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ· Π΄ΡΠ ΠΠ: Π‘Π Π (Π½Π΅Ρ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ Ρ ΠΌΠ ΠΠ Π1Π΅-1Π°Ρ2. ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΎΡΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»Ρ, ΠΏΡΠΈΠ½ΡΡ Π·Π° 100%), ΠΠΈΡΠ΅), Π―/Π΅ ΠΈΠ»ΠΈ 1Π°Ρ2. ΠΡΠΈ Π½Π°ΡΠ΅Π·Π°Π½ΠΈΠΈ Π΄ΡΠ ΠΠ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅, ΠΊΠ°ΠΊ Π²ΠΈΠ΄Π½ΠΎ ΠΠ Π¬ ΠΈ Π, Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ.
ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ. Π. Π£ΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ ΠΠΠ ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΡΡΠ°Π½ΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ ΠΠ·ΡΠ£Π-ΠΠ Π ΠΈ Π΄ΡΠ ΠΠ ΠΠΠ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΠΈ (8(Π΅). Π. Π£ΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ ¡-Π°Ρ2 (ΡΠ²Π΅ΡΠ»ΡΠ΅ ΡΡΠΎΠ»Π±ΡΡ) Π½ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Ρ-Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ (ΡΡΠΌΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠΎΠ»Π±ΡΡ) ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΡΡΠ°ΠΈΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ Π¬$Ρ70−1Π°Ρ2 ΠΈ Π΄ΡΠ ΠΠ Π‘Π Π ΠΈΠ»ΠΈ Π΄ΡΠ ΠΠ 1Π°Ρ2.
ΠΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΡ, ΡΡΠΎ Π½Π΅ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½ΡΠΉ «ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈΡΡΡΡΠΈΠΉ» Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ²ΡΠΉ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅Ρ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ½Π½ΡΠΉ ΠΌΠΎΡΠΈΠ² Π² ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Sie Π² ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠ°Ρ
Ste-lacZ ΠΈ ΡΠ΅ΠΌ ΡΠ°ΠΌΡΠΌ Π·Π°ΡΠΈΡΠ°Π΅Ρ ΠΈΡ
ΠΎΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ, Π²ΡΠ·Π²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ siRNA. ΠΈ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΠ΅Ρ ΠΈΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΡ. Π ΡΠΎ ΠΆΠ΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ, Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ ΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°ΡΡΡΡ siRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠΉ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ (ΡΠΈΡ. 17). Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΠ½ΠΎ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠΎΠ΄Π΅Π»ΠΈ ΠΏΡΠΈΡΠΈΠ½Π° Π½Π΅ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π² ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡΡ
ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ² ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² ΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Π·Π°ΠΊΠ»ΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ Π² ΡΠΎΠΌ, ΡΡΠΎ siRNA Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΡΡΡ Π»ΠΈΡΡ Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΡΡΠΈΠΌΠΈΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠ°ΠΌΠΈ.
Π‘Ρ
ΠΎΠΆΠ΅ΡΡΡ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ², ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ
ΠΏΡΠΈ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ piRNAΠΈ siRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste-lacZ, ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΡ, ΡΡΠΎ ΠΈ Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π½Π΅ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½Π°Ρ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡ ΡΠΎΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ ΠΈ Stellate ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°Π΅ΡΡΡ piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠΉ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ.
Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ.
Π½Π΅ΠΌΠ°Π΅ΠΊΠΊΡΠΎΠ²Π°Π½Π½Π°Π½ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ.
ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½Π°Ρ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ.
ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΡ.
Π ΠΈΡ, 17. ΠΠΈΠΏΠΎΡΠ΅Π·Π°, ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½ΡΡΡΠ°Ρ, ΠΏΠΎΡΠ΅ΠΌΡ Π² ΠΎΡΠ²Π΅Ρ Π½Π° ptRNA ΠΈ siRNA ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅ΡΡΡ Π½Π΅ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΎ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΡΡΠΎΠ²Π½Π΅ΠΌ ß—Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ. ΠΡΡΠ΅ΠΊΡΠΎΡΠ½ΡΠΉ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ RISC Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½ Π½Π° Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΡΡΠΈΡ
ΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Ste-lacZ. ΠΡΡΠ³ΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΡ Ste-lacZ ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½Ρ Π½Π΅ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½ΡΠΌ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΎΡΠ½ΡΠΌ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠΌ (Π°ΠΌΠΈ), ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΠΈΠ½Π³ΠΈΠ±ΠΈΡΡΠ΅Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΡ ΡΡΠΈΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² ΠΈ Π·Π°ΡΠΈΡΠ°Π΅Ρ ΠΎΡ RISC-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠΉ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ.
Π‘ΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΡΡ Π°Π»ΡΡΠ΅ΡΠ½Π°Ρ"Π²Π½ΡΠ΅ Π³ΠΈΠΏΠΎΡΠ΅Π·Ρ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ³Π»ΠΈ Π±Ρ ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½ΠΈΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ, ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΎΠ½ΠΈ Ρ
ΡΠΆΠ΅ ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΡΡΡΡΡ Ρ Π΄Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ². ΠΠΎ-ΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΡ
, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π±ΡΠ»ΠΎ Π±Ρ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΡ, ΡΡΠΎ piRNA ΠΈ siRNA ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΡΡ.
ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ. ΠΠΎΠ²ΠΎΠ΄Ρ ΠΎ ΠΌΠ°Π»ΠΎΠΉ Π²Π΅ΡΠΎΡΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ°ΠΊΠΎΠΉ Π°Π»ΡΡΠ΅ΡΠ½Π°ΡΠΈΠ²Ρ ΠΏΡΠΈΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Ρ Π² ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅ ΠΎΠ±ΡΡΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ². ΠΠΎ-Π²ΡΠΎΡΡΡ
, ΡΠ°ΡΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Ste-lacZ ΠΌΠΎΠ³Π»Π° Π±Ρ ΠΈΠ·Π±Π΅Π³Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΈΠ·-Π·Π° ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΡΡΠΎ Π½Π°Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ Π² ΡΠ΄ΡΠ΅. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ, ΡΡΠ° Π³ΠΈΠΏΠΎΡΠ΅Π·Π° ΠΏΠ»ΠΎΡ
ΠΎ ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΡΠ΅ΡΡΡ Ρ Π΄Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΎ piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠΉ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠ»ΡΠΎΠ² Stellate Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
(ΡΠΌ. ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π» 4.2.). ΠΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, Π΅ΡΠ»ΠΈ ΡΡΠ° Π³ΠΈΠΏΠΎΡΠ΅Π·Π° Π²Π΅ΡΠ½Π°, ΡΠΎ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Π° ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½Π°Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ Ρ-Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ· ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ. ΠΠ°ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ², Π² Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ· ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ² Ρ ΠΈ ΡΠΎ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅Ρ ΡΠ°ΠΊΠΎΠ΅ ΠΆΠ΅ Π½Π΅ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΎΠ΅ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈ ΠΏΡΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π΅ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΠ΅Π»ΡΡ
ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ² (ΡΠΈΡ, 18), ΡΡΠΎ Π΄Π΅Π»Π°Π΅Ρ Π΄Π°Π½Π½ΡΡ Π³ΠΈΠΏΠΎΡΠ΅Π·Ρ ΠΌΠ°Π»ΠΎΠ²Π΅ΡΠΎΡΡΠ½ΠΎΠΉ.
? ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ.
Β¦ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Π-Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ.
N «Π.
" Π» ΠΎ 4.
Ste703-lacZ.
Π ΠΈΡ. 18. Π£Π²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΌΠ ΠΠ ΡΠ΅Π³ΡΡΡΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ 3! Π΅703−1Π°Ρ2 ΠΈ Ρ-Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ² ΠΏΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² 5ΠΈ ($ 1Π΅).
5. ΠΠΠ‘Π£ΠΠΠΠΠΠ Π ΠΠΠ£ΠΠ¬Π’ΠΠ’ΠΠ.
5.1. ΠΠΎΡΡΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate.
ΠΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΠ’-ΠΠ¦Π ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΈΠ»ΠΈ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΡ Π² Π³Π΅Π½Π΅ aub, ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡΠ΅ΠΌ piRNA? Ρ (57Π΅,)-ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΠΈΠΉ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ Aub, ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΊ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΌΡ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ, Π½ΠΎ Π½Π΅ Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ Stellate. ΠΡΠΎ ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π° ΡΠΎ, ΡΡΠΎ piRNA Su (Ste) ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ Stellate, Π° Π½Π΅ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ. ΠΠ°Π½Π½ΡΠΉ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡ ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½ Π΄Π»Ρ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate, ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π½ΡΡ
ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΡ-, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² Π³Π΅Π³Π΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π΅, ΡΡΠΎ ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π° ΠΎΡΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ Π²Π»ΠΈΡΠ½ΠΈΡ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ Ρ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π° Π½Π° ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΠΈ ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΡΠ΅ΡΡΡ Ρ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡΠΌΠΈ ΠΎ ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ.
Π‘ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ° Ste/Su (Ste) ΡΠ½ΠΈΠΊΠ°Π»ΡΠ½Π° Π΄Π»Ρ D. melanogaster, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ
Π²ΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΡΠΎΠ΄Π° Drosophila ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΡ
Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Π½Π΅Ρ (Usakin et al., 2005). ΠΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡΡΡΠΈΡ
ΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate ΠΈ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΡΡ
ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) Π² Ρ
ΠΎΠ΄Π΅ ΡΠ²ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΈ Π²ΠΈΠ΄Π° melanogaster ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»Π° ΠΊ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Stellate Π² ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠ°Ρ
, ΡΡΠΎ, ΠΏΠΎ-Π²ΠΈΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΌΡ, Π½Π°ΡΡΡΠ°Π»ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΡ Π³Π°ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ³Π΅Π½Π΅Π·Π°. ΠΠ΅ΡΠΎΡΡΠ½ΠΎ, ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ° Π ΠΠΠΈ, ΡΡΠ°ΡΡΠ²ΡΡΡΠ°Ρ Π² ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡΡΡΠΈΡ
ΡΡ ΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ
ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
(Kalmykova et al., 2005), Π±ΡΠ»Π° Π² Ρ
ΠΎΠ΄Π΅ ΡΠ²ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΈ Π°Π΄Π°ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π° Π΄Π»Ρ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate. ΠΠΎΠ²ΡΠΎΡΡ Su (Ste) ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠ»ΠΈ Π½Π° ΡΠ΅Π±Ρ ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΡ ΠΏΠΎ ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ
piRNA. ΠΠ»Ρ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ Aub ΠΈ Ago3, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡΡΡΡΡΡ Π² ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠ°Ρ
(Gunawardane et al., 2007; Li et al., 2009; Nishida et al., 2007). ΠΠ°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΏΡΠΎΡΡΠΎΠ΅ ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ° ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π·Π°ΠΊΠ»ΡΡΠ°ΡΡΡΡ Π² ΡΠΎΠΌ, ΡΡΠΎ ΡΡΠΎ Π΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΠΉ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ± ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³Π°, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΡΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ Aub ΠΈ Ago3.
ΠΠ»ΡΡΠ΅ΡΠ½Π°ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΉ ΠΏΡΠΈΡΠΈΠ½ΠΎΠΉ Π²ΡΠ±ΠΎΡΠ° ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ° ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΡΡΡ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate. ΠΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ, ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ Π½Π΅ ΠΌΠΎΠ³Π»ΠΎ Π±Ρ ΠΎΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΡ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ, ΠΏΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ΅, ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΎΡΠ½ΡΠΉ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΠ²Π°Π΅Ρ Π»ΠΎΠΊΡΡ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Ρ Π·Π° ΡΡΡΡ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ Ρ Π ΠΠ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠ±ΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ ΡΡΠΈΠΌ Π»ΠΎΠΊΡΡΠΎΠΌ (Moazed, 2009). ΠΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ, ΡΠ°ΠΊΠ°Ρ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅Ρ ΡΠ°ΡΡΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΠ΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ Π»ΠΎΠΊΡΡΠ° ΠΈ, Π²Π΅ΡΠΎΡΡΠ½ΠΎ, ΠΌΠ½ΠΎΠΆΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Stellate ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΡΠΎΠΌΡ, ΡΡΠΎ ΡΠ°ΠΊΠ°Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΡ.
Π΄Π°Π²Π°Π»Π° Π±Ρ ΡΠ»ΠΈΡΠΊΠΎΠΌ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΈΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ Stellate. ΠΠΎΡΡΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΠ΄ΠΈΠΎΠ½Π½Π°Ρ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate ΠΎΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π΅Ρ ΠΎΡΠ΅Π½Ρ ΡΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Stellate (ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΠ½ΠΎ ΠΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Ρ, ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄ΡΠ½Π½ΠΎΠΌΡ JI.B. ΠΠ»Π΅Π½ΠΈΠ½ΠΎΠΉ Π² Π½Π°ΡΠ΅ΠΉ Π»Π°Π±ΠΎΡΠ°ΡΠΎΡΠΈΠΈ, ΠΏΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Stellate Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π΅Ρ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠ΅ΠΌ Π² 200 ΡΠ°Π· (Kotelnikov et al., 2009)), ΡΡΠΎ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ Π΄Π»Ρ Π½ΠΎΡΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΡ
ΡΠΊΠ°Π½Π΅ΠΉ ΡΠ°ΠΌΡΠΎΠ².
5.2. ΠΠ΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Stellate Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
.
ΠΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Stellate Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π΅Ρ ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΡ
, Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ
ΠΈΠ· ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ². Π ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠΈ ΡΡΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate Π² ΡΡΠ΅Π΄Π½Π΅ΠΌ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π² 15 ΡΠ°Π·, ΡΡΠΎ Π»ΠΈΡΡ Π² 2−2,5 ΡΠ°Π·Π° ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅, ΡΠ΅ΠΌ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅. Π’Π°ΠΊΠ°Ρ Π·Π°ΠΌΠ΅ΡΠ½Π°Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ Π² ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ Π½Π΅ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π²ΠΎΠ·Π½ΠΈΠΊΠ°ΡΡ Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ Π·Π°Π³ΡΡΠ·Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΎΠΉ, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΊ Ρ-ΡΡΠ±ΡΠ»ΠΈΠ½Ρ (Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΡ) ΠΈ ΠΊΠ°Π»Π½Π΅ΠΊΡΠΈΠ½Ρ (ΡΡΠ°Π½ΡΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Π½ΡΠΉ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ ΠΠΠ ) Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΠΎΠ·Π΅ΡΠ½ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° Ρ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠΌ ΠΊ ΠΌΠΈΡΠΎΡ
ΠΎΠ½Π΄ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ ΠΠ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½Π°Ρ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡ ΠΏΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ Π½Π΅ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΡ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ
Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² ΠΈ Π ΠΠ (ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½Ρ Π·Π°Π³ΡΡΠ·Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎ Π ΠΠ Π½Π΅ ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ°Π΅Ρ 10%). Π‘Π»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ, Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ piRNA Su (Ste) ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ². ΠΠΎΠ»ΡΡΠ°Ρ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Stellate Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π° ΡΠΎ, ΡΡΠΎ ΡΠ°ΠΌ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ Stellate. Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, Π² Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ Π²ΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΠ΅ Π±ΡΠ»Π° ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½Π° ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡ piRNA Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Π΅ΠΉ Π² ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΌ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ°ΡΠ³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ.
Π Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅ΠΌΡ ΠΌΠΎΠΌΠ΅Π½ΡΡ, Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ° Π ΠΠΠΈ-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠΉ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ Π ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½Π° Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ. Π‘ΡΠΈΡΠ°Π΅ΡΡΡ, ΡΡΠΎ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½Π°Ρ ΡΠ°ΡΡΡ ΠΈΠ½ΠΈΡΠΈΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ siRNA ΠΈΠ»ΠΈ miRNA ΠΏΠΎΡΠ³ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³Π° ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅ (Carthew and Sontheimer, 2009). ΠΡΠΎΡ Π²ΡΠ²ΠΎΠ΄ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²ΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π½Π° Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΡ
Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π΅Π½ΠΈΡΡ
. ΠΠΎ-ΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΡ
, ΠΏΠΎ Π΄Π°Π½Π½ΡΠΌ ΠΈΠΌΠΌΡΠ½ΠΎΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ°Ρ ΡΠ°ΡΡΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΠΉΡΡΠ²Π° Ago Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ
Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ ΠΈ ΠΌΠ»Π΅ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΠ°ΡΡΠΈΡ
Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅ (Parker and Sheth, 2007). ΠΠΎ-Π²ΡΠΎΡΡΡ
, Π² ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π΅ siRISC Π½Π°Ρ
ΠΎΠ΄ΡΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ, Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΠ΅ Ρ ΡΠΈΠ±ΠΎΡΠΎΠΌΠΎΠΉ (Ishizuka et al., 2002). Π-ΡΡΠ΅ΡΡΠΈΡ
, miRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠ°Ρ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π° Π½Π° ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ΡΡ ΠΌΠ ΠΠ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΡ (Carthew and Sontheimer,.
2009). ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ, Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΠΉΡΡΠ²Π° Ago Π½Π°Ρ
ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΈ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
(Ohrt et al., 2008; Robb et al., 2005). ΠΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ° ΠΈΠΌΠΏΠΎΡΡΠΈΠ½ 8 Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΠΌ Π΄Π»Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡΠ° Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Ago2 Π² ΡΠ΄ΡΠ° (Weinmann et al., 2009). Π’ΠΎΡ ΡΠ°ΠΊΡ, ΡΡΠΎ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΉ Π°ΠΏΠΏΠ°ΡΠ°Ρ Π΄Π»Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡΠ° Ago2 Π² ΡΠ΄ΡΠ° ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π° Π²Π°ΠΆΠ½ΡΡ ΡΠΎΠ»Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Π² ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΌ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ°ΡΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅. ΠΡΠ° ΡΠΎΠ»Ρ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π·Π°ΠΊΠ»ΡΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ (Janowski et al., 2006), ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Π΅ΠΉ Π² ΡΠ΄ΡΠ΅ (Robb et al., 2005). ΠΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½Π½Π°Ρ Π² Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ² ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π° ΡΡ
ΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² piRNAΠΈ siRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ, ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΡΡΠΈΡ
Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Π΅ΠΉ ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΌ, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΌ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ°ΡΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Ρ
.
5.3. ΠΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Aub Π² ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠ°Ρ
.
ΠΠ΅Π»ΠΎΠΊ Aub, ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΠΈΠΉ piRNA Su (Ste), Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΡΠ°ΠΌΠΈ piRNA Su (Ste) ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½Ρ ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΡ
Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΎΠ² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ². ΠΠΌΠΌΡΠ½ΠΎΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΊ Aub ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π»ΠΎ Π΅Π³ΠΎ Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΠ΅ Π² Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ
ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ² Π²Π±Π»ΠΈΠ·ΠΈ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ. ΠΡΠ°Π½ΠΈΡΡ ΡΠ΄ΡΠ° Π²ΡΡΠ²Π»ΡΠ»ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΈΠΌΠΌΡΠ½ΠΎΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ ΠΊ Π»Π°ΠΌΠΈΠ½Ρ Π, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΡΠΌ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠΌ, Π°ΡΡΠΎΡΠΈΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌ Ρ Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½Π΅ΠΉ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½ΠΎΠΉ. Π‘ΠΈΠ³Π½Π°Π»Ρ ΠΎΡ Aub ΠΈ Π»Π°ΠΌΠΈΠ½Π° Π ΡΠ°ΡΡΠΈΡΠ½ΠΎ ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΠΊΡΡΠ²Π°ΡΡΡΡ, ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Ρ Π½Π° ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ Aub Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
Π²Π±Π»ΠΈΠ·ΠΈ Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½Π΅ΠΉ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ. ΠΠ°ΠΊΠΈΡ
-Π»ΠΈΠ±ΠΎ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ
Π»ΠΎΠΊΡΡΠΎΠ² Π²Π½ΡΡΡΠΈΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Aub Π½Π΅ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΎ. Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Aub Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ² ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΡΠ΅ΡΡΡ Ρ Π΄Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΎ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ Stellate Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
.
ΠΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ Aub Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
, ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½Π½Π°Ρ Π² Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅, Π½Π°ΠΏΠΎΠΌΠΈΠ½Π°Π΅Ρ ΠΎΠΏΡΠ±Π»ΠΈΠΊΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΡΠ°Π½Π΅Π΅ (Snee and Macdonald, 2004). ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ Π² ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ Snee Ρ ΡΠΎΠ°Π²ΡΠΎΡΠ°ΠΌΠΈ Π½Π΅ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΡΡ ΠΌΠ°ΡΠΊΡΡ, ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°ΡΡΠΈΠΉ Π³ΡΠ°Π½ΠΈΡΡ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ, ΡΡΠΎ Π½Π΅ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΠ»ΠΎ ΡΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΈΡΡ Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΠ΅ Aub Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
.
Π ΡΠΈΡΠ½ΠΈΠΊΠ°Ρ
Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½Π°Ρ ΡΠ°ΡΡΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Aub Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ Π² ΠΏΠ΅ΡΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ΅ nuage (ΡΠΌ. ΠΎΠ±Π·ΠΎΡ Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ). Nuage ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΠ½Π½ΠΎΠΏΠ»ΠΎΡΠ½ΡΡ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ, Π²ΠΈΠ΄ΠΈΠΌΡΡ Π² ΡΠ²Π΅ΡΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΠ½Π½ΡΠΉ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΊΠΎΠΏΡ Π²ΠΎΠΊΡΡΠ³ ΡΠ΄Π΅Ρ ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΡ
ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΡ
ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡΠ½ΡΡ
. ΠΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠ΅ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π ΠΠΠΈ, ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΡ piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³Π° ΡΡΠ°Π»ΠΈ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Ρ nuage, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ Ρ ΡΡΠΎΠΉ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΡΠ΄ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ², Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡΡ
Π΄Π»Ρ ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ piRNA. ΠΠ΅Π»ΠΎΠΊ Vasa, ΡΠ²Π»ΡΡΡΠΈΠΉΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΎΠΌ nua^e,.
ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΠΏΠΈΡΠ°ΡΡΠΈΡ
ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΡΠΉΡΠ΅Π²ΠΎΠΉ ΠΊΠ°ΠΌΠ΅ΡΡ (Findley et al., 2003). ΠΡΡΠ³ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½Ρ nuage Π² ΡΠΈΡΠ½ΠΈΠΊΠ°Ρ
, Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ Maelstrom, ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΡΡΠ΅Ρ ΠΊΠ°ΠΊ ΡΠ°ΡΠ», ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΡΠ°ΡΡΠΈΠΉΡΡ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ nuage ΠΈ ΡΠ΄ΡΠΎΠΌ ΠΏΠΈΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΉ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ (Findley et al., 2003). Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
Ρ
Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠ½ΠΎ, ΠΏΠΎ ΠΊΡΠ°ΠΉΠ½Π΅ΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠ΅, Π΄Π»Ρ Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ
ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΎΠ² nuage, ΠΈ ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½Π½Π°Ρ Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Aub Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ² Π½Π΅ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ½ΠΈΠΊΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ. ΠΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ°ΡΠΊΡΡΠΎΠ², ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°ΡΡΠΈΡ
ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ, ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΡ ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΡΡ ΠΈ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΡ nuage Π½Π° Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½Π΅ΠΉ ΠΏΠΎΠ²Π΅ΡΡ
Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ΄Π΅Ρ.
ΠΠ΅ΡΠΎΡΡΠ½Π°Ρ ΠΏΡΠΈΡΠΈΠ½Π° Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ² Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Aub ΠΈ ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½Π½ΡΡ
Ρ Π½ΠΈΠΌ piRNA Su (Ste) Π·Π°ΠΊΠ»ΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ Π² Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ Stellate Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅ ΠΈ, ΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ, Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ Π΄ΠΎΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΡΡΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ, ΠΌΠΎΠ»Π΅Π½ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΡ ΠΈ Π°Π»ΡΡΠ΅ΡΠ½Π°ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠ΅ ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅. ΠΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ, ΠΏΡΠΈΡΠΈΠ½ΠΎΠΉ Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Aub Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠΎ, ΡΡΠΎ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π² ΡΡΠΎΠΌ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ°ΡΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ piRNA Su (Ste) (ΡΡΠΎ ΡΠΎΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠΆΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π·Π°Π³ΡΡΠ·ΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠΈΡ
ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ
Π ΠΠ Π² Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ Aub). ΠΡΠΎ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΠΏΠΎΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° Aub/piRNA Su (Ste), ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ Stellate. Π’ΠΎ Π΅ΡΡΡ, Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΡΠΎΠΏΡΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΠΌ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ Π½Π΅ Π²Π½ΠΎΡΠΈΡ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π²ΠΊΠ»Π°Π΄Π° Π² ΠΎΠ±ΡΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ Stellate'. ΠΠ΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ, Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΡ Su (Ste), ΡΠ²Π»ΡΡΡΠΈΠ΅ΡΡ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°ΠΌΠΈ piRNA, ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ² (Aravin et al. 2004). ΠΠ½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΡ Su (Ste) Π½Ρ ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°ΡΡΡΡ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΠ½Π³Ρ ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ°Π΄Π΅Π½ΠΈΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ, Ρ. Π΅. ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ°ΠΌ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΠ²Π°ΡΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΡΠΊΡΠΏΠΎΡΡΠ° ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² ΠΈΠ· ΡΠ΄ΡΠ°. ΠΠΎΡΡΠΎΠΌΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΈΠ· ΡΠ΄Π΅Ρ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ Π·Π°ΡΡΡΠ΄Π½ΡΠ½. ΠΡΡ
ΠΎΠ΄Ρ ΠΈΠ· ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΡ, ΡΡΠΎ Π½Π°ΡΠ΅Π·Π°Π½ΠΈΠ΅ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠΉ Π ΠΠ SufStej ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π½Π΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ². Π Π΄Π°Π»ΡΠ½Π΅ΠΉΡΠΈΡ
ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡΡ
Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΠΈΡΡ Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ° Π±ΠΈΠΎΠ³Π΅Π½Π΅Π·Π° piRNA Su (Ste).
5.4. ΠΠ·Π±ΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ, Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ piRNA Su (Ste).
ΠΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΌΠ ΠΠ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste-lacZ Π² ΠΎΡΠ²Π΅Ρ Π½Π° Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ piRNA ΠΈΠ»ΠΈ siRNA ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠ»Π°Π±Π΅Π΅,.ΡΠ΅ΠΌ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΡΡΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠ΅ΠΉ Ρ-Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ. Π ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ,.
Π³Π΄Π΅ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½Π° ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½Π°Ρ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ lacZ Π² ΠΎΡΠ²Π΅Ρ Π½Π° siRNA, Π½Π΅ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΡΡΠΎΠ»Ρ ΠΆΠ΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΉ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ, ΡΡΠΎ ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π° ΡΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ Stellate Π·Π°ΡΠΈΡΠ°Π΅Ρ ΠΌΠ ΠΠ ΠΎΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ. Π‘Ρ
ΠΎΠΆΠ΅ΡΡΡ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ², ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ
ΠΏΡΠΈ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΡ
ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΉ Ste-lacZ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ piRNA ΠΈ siRNA, ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΡ, ΡΡΠΎ ΠΎΠ±Π° ΡΠΈΠΏΠ° ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ
Π ΠΠ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΡΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΉ ΠΏΠΎ Π΅Π΄ΠΈΠ½ΠΎΠΌΡ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΡ. ΠΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»Π°Π³Π°Π΅ΡΡΡ, ΡΡΠΎ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π° Π»ΠΈΡΡ Π½Π° ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΡ Ste-lacZ ΠΈ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠ» Π·Π°ΡΠΈΡΠ΅Π½Π½ΡΡ
ΠΎΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ, Π½Π΅ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΡΡΠΈΡ
ΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Ste-lacZ («ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΡ»), ΡΡΠΎ ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠΈΡΠΈΠ½Ρ Π½Π΅ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠΌ (ΡΠΈΡ. 19).
Π‘ΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΡΡ Π΄Π²Π΅ Π΄ΠΎΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΏΡΠ΅ΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ
Π΄Π°Π½Π½ΡΡ
. ΠΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π±ΡΠ»ΠΎ Π±Ρ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΡ, ΡΡΠΎ ΠΎΡΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ, ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ΅ΠΌ, ΡΡΠΎ piRNA ΠΈ siRNA ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΡ ΡΡΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ, «ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½Π°Ρ» Π³ΠΈΠΏΠΎΡΠ΅Π·Π° Ρ
ΡΠΆΠ΅ ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΡΠ΅ΡΡΡ Ρ Π΄Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ. ΠΠΎ-ΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΡ
, ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡ piRNA ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΡ ΠΊ Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅ΠΌΡ ΠΌΠΎΠΌΠ΅Π½ΡΡ Π½Π΅ Π±ΡΠ»Π° ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½Π°, Π½ΠΎ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΠ΅ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΡΠ²ΠΈΠ΄Π΅ΡΠ΅Π»ΡΡΡΠ²ΡΡΡ ΠΎ ΡΠΎΠΌ, ΡΡΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΠΉΡΡΠ²Π° Piwi, ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΠΈΠ΅ piRNA, ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ (Gunawardane et al., 2007; Nishida et al., 2007; Saito et al., 2006). ΠΠΎ-Π²ΡΠΎΡΡΡ
, Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½Ρ Π±ΡΠ» ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄ΡΠ½ ΡΠ°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΡΡΠΎΠ±Ρ siRNA Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π±ΡΠ»Π° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Π° Π΄ΡΠ ΠΠ, ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡΡΡ (100%) ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½Π°Ρ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ (Π΄ΡΠ ΠΠ Ste ΠΈ lacZ) (Forstemann et al., 2007; Tomari et al., 2007).
ΠΡΠΎΡΠ°Ρ Π°Π»ΡΡΠ΅ΡΠ½Π°ΡΠΈΠ²Π½Π°Ρ Π³ΠΈΠΏΠΎΡΠ΅Π·Π° Π·Π°ΠΊΠ»ΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ Π² ΡΠΎΠΌ, ΡΡΠΎ ΡΠ°ΡΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Ste-lacZ Π·Π°Π΄Π΅ΡΠΆΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π² ΡΠ΄ΡΠ΅ ΠΈ ΡΠ°ΠΊΠΈΠΌ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±ΠΎΠΌ ΠΈΠ·Π±Π΅Π³Π°Π΅Ρ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ piRNA ΠΈΠ»ΠΈ siRNA. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ, Π½Π°ΠΌΠΈ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ² piRNA Su (Ste) ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate. ΠΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΡΡΠ° Π³ΠΈΠΏΠΎΡΠ΅Π·Π° ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»Π°Π³Π°Π΅Ρ, ΡΡΠΎ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΡΠΌΠ°ΡΠΎΡΠΈΡΠΎΠ² ΠΏΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ Π±ΡΠ΄Π΅Ρ ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»Π΅Π½ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½ΠΈ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π -Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ, Π² Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ· ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅ ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½Π° ΡΠ°ΠΊΠ°Ρ ΠΆΠ΅ Π½Π΅ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠ°Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈ ΠΏΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΡΠ΅Π»ΡΡ
ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ². Π ΡΠ΅Π»ΠΎΠΌ, ΠΏΡΠΈΠ²Π΅Π΄ΡΠ½Π½ΡΠ΅ Π²ΡΡΠ΅ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°ΡΡ Π½Π° ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΡΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π΄Π»Ρ ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ² Π³ΠΈΠΏΠΎΡΠ΅Π·Ρ ΠΎ ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ, Ρ
ΠΎΡΡ Π΄Π΅ΡΠ°Π»ΠΈ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ° ΠΈ, Π² ΡΠ°ΡΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ (ΠΊΠΈ), ΡΡΠ°ΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΠ΅ Π² ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ, Π΅ΡΡ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠΎΠΈΡ Π²ΡΡΠ²ΠΈΡΡ.
ΠΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ ΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ° ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΡ
ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΉ Ste-lacZ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½Ρ ΠΈ Π΄Π»Ρ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΡ
Stellate. ΠΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΌΠ ΠΠ Stellate Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π΅Ρ Π² 30−50 ΡΠ°Π· (ΡΠΈΡ. 10), Π° ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Stellate Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅, ΡΠ΅ΠΌ Π² 200 ΡΠ°Π· (Kotelnikov et al., 2009). ΠΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠ»Π°Π±ΡΠΉ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) Π½Π° ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΉ Ste-lacZ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ Stellate ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½ΡΠ½ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅ΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Stellate Π² ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ. ΠΡΠΎ ΡΡΠΆΠ°Π΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΎΡΠ½ΡΡ
ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠΎΠ² Aub/piRNA Sn (Ste), ΡΡΠ°ΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΡ
Π² ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ. Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, Π³ΠΈΠΏΠΎΡΠ΅Π·Π° ΠΎ ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΡΠ°ΡΠΏΡΠΎΡΡΡΠ°Π½Π΅Π½Π° ΠΈ Π½Π° ΡΠ½Π΄ΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΠ΅ Stellate. Π‘ΠΎΠ³Π»Π°ΡΠ½ΠΎ ΡΡΠΎΠΉ Π³ΠΈΠΏΠΎΡΠ΅Π·Π΅, ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΡ
Stellate ΠΈ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΡ
ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΉ Ste-lacZ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π½Π΅ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ piRNA Su (Ste) -Π· Π°Π²ΠΈ Ρ ΠΈ ΠΌ ΠΎ ΠΉ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ Π² ΡΠ΄ΡΠ΅ ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅, Π½ΠΎ ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π½Π΅ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° (ΠΎΠ²), ΠΈΠ½Π³ΠΈΠ±ΠΈΡΡΡΡΠ΅Π³ΠΎ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΡ (ΡΠΈΡ. 19).
ΠΠΎ-Π²ΠΈΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΌΡ, ΡΡΠ΅Π΄ΠΈ ΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Sa (Ste) Π΄ΠΎΠ»Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΡΡΠΈΡ
ΡΡ ΠΌΠ ΠΠ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅, ΡΠ΅ΠΌ ΡΡΠ΅Π΄ΠΈ ΠΌΠ ΠΠ Stellate. ΠΡΠΎ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½Π΅Π½ΠΎ ΡΠ΅ΠΌ, ΡΡΠΎ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ Π·Π°ΠΌΠ΅Π½Ρ Π² ΠΌΠ ΠΠ Sn (Ste), ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠ°ΡΡΠΈΠ΅ ΡΡΡ ΠΌΠ ΠΠ ΠΎΡ Stellate, ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΊ Π²ΠΎΠ·Π½ΠΈΠΊΠ½ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ°ΠΉΡΠΎΠ² Π°Π»ΡΡΠ΅ΡΠ½Π°ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΠ½Π³Π° ΠΈ ΠΏΡΠ΅ΠΆΠ΄Π΅Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΡΠΌ ΡΡΠΎΠΏ ΠΊΠΎΠ΄ΠΎΠ½Π°ΠΌ (Balakireva et al., 1992). Π ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ Ρ ΡΡΠΈΠΌ, ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΏΡΠΈ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ Π² Π³Π΅Π½Π΅ Π°ΠΈΠͺ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π² 5 ΡΠ°Π· ΡΠ»Π°Π±Π΅Π΅, ΡΠ΅ΠΌ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΌΠ ΠΠ Stellate, Π½Π΅ΡΠΌΠΎΡΡΡ Π½Π° ΡΠΎ, ΡΡΠΎ piRNA Su (Ste) ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π²ΡΡΠΎΠΊΡΡ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Ρ ΠΌΠ ΠΠ Su (Ste) (Vagin et al., 2006). ΠΠ΅ΡΠΎΡΡΠ½ΠΎ, piRNA Sn (Ste) ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΡΡΠ΅ΠΉΡΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate.
ΠΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»Π°Π³Π°Π΅ΠΌΡΠ΅ ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡΠ²Π° piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅ΠΈΡΠΈΠ½Π³Π° Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π±ΡΡΡ ΡΠ°ΡΠΏΡΠΎΡΡΡΠ°Π½Π΅Π½Ρ ΠΈ Π½Π° ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ
ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ². ΠΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΠΈΠ½ΠΈΠΊΠ°Ρ
Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΡ Π² Π³Π΅Π½Π΅ piwi ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠΌΡ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΠ·ΠΈΡΠΈΠΉ ΡΠ΅ΡΡΠΎΡΡΠ°ΠΈΡΠΏΠΎΠ·ΠΎΠ½Π° mdgl ΠΏΡΠΈ Π½Π΅Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΌΠ ΠΠ mdgl (Kalmykova et al., 2005). ΠΠ΅ΡΠΎΡΡΠ½ΠΎ, piRNA Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΠ·ΠΎΠ½ΠΎΠ².
ΠΏ ΠΎ Ρ Π»Π΅ Π΄ΠΎ Π²Π° Ρ Π΅ Π» Ρ-Π½ΠΎΡΡΡ.
Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½Π°Ρ Stellate.
ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΠ·ΠΎΠ½ hoppel.
ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡ St/fSfe).
Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡ Su (Ste).
ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°.
Π³Π΅Π½Ρ Stellate.
ΠΌΠ ΠΠ Stellate.
Π ΠΈΡ. 19. ΠΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»Π°Π³Π°Π΅ΠΌΡΠΉ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ ΠΏΠΎΡΠ³Π³ΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΎΠ½ΠΏΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste). Π’ΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste), ΠΈΠ½ΠΈΠΈΠΈΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ°Ρ ΠΏΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΡΠΎΠΌ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΠ·ΠΎΠ½Π° hoppel, ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Su (St Π΅), ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ Π½Π°ΡΠ΅Π·Π°ΡΡΡΡ Π² ΡΠ΄ΡΠ΅ ΠΈΠ»ΠΈ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅ (Π² Π΄Π°Π½Π½ΡΠΉ ΠΌΠΎΠΌΠ΅Π½Ρ ΡΡΠΎ Π½Π΅ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½ΠΎ) Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ piRNA Su (Ste). ΠΠ΅Π»ΠΎΠΊ Aub ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅Ρ piRNA Su (Ste) ΠΈ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate Π² ΡΠ΄ΡΠ΅ (1) ΠΈΠ»ΠΈ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅ (2), ΠΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»Π°Π³Π°Π΅ΡΡΡ, ΡΡΠΎ Π½Π΅ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΎΡΠ½ΡΠΉ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ (ΠΊΠΈ) ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅Ρ ΠΎΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΡ Stellate, ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΡ ΠΈΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΡ ΠΈ Π·Π°ΡΠΈΡΠ°Ρ ΠΎΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ, Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠΎΠΌ Aub/piRNA Su (Ste) (3).
ΠΠ°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΡ Su (Ste) piRNA-ΠΈΠ½ΠΈΡΠΈΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ ΠΈ Stellate ΠΎΡ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΡΡ
(Π² Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈΡΡΡΡΠΈΡ
) Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ², ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½Π½ΡΡ
Ρ ΡΡΠΈΠΌΠΈ ΠΌΠ ΠΠ, Ρ
ΠΎΡΠΎΡΠΎ ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΡΠ΅ΡΡΡ Ρ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΠΌΠΈ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡΠΌΠΈ ΠΎ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ°Ρ
ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ siRNA ΠΈ miRNA. Π ΡΠΈΡΠ½ΠΈΠΊΠ°Ρ
Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎ Π½Π΅Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠ΅ ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΌΠ ΠΠ Π½Π΅ ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°ΡΡΡΡ siRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠΉ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ, Π° ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΡΠ½ΡΡΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π±Π»ΠΎΠΊΠ° Π½Π°ΡΠΈΠ½Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ (Kennerdell et al., 2002). Π ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΡ
ΡΠΊΠ°Π½ΡΡ
D. reriu Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ Dndl ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Ρ ΠΌΠ ΠΠ Π³Π΅Π½Π° nanosJ Π²Π±Π»ΠΈΠ·ΠΈ ΡΠ°ΠΉΡΠΎΠ² ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π° miR-430, ΡΡΠΎ Π½Π΅ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΡΡΠΎΠΉ miRNA ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΈΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ (Kedde et al., 2007; Mishima et al. 2006). ΠΠΎ-Π²ΠΈΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΌΡ, ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³Π° Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ
Π ΠΠ, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠ΅ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΡΠ΅ ΠΏΡΡΠΈ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ, ΡΠ°ΠΌΠΈ ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°ΡΡΡΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ ΠΈ, ΡΠ°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, Π²ΡΡΡΠ°ΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ Π² ΡΠΎΡΡΠ°Π² Π΅Π΄ΠΈΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΡΠΈ, ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΡΡΠ΅ΠΉ ΠΆΠΈΠ·Π½Π΅Π΄Π΅ΡΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ.
5.5. ΠΡΠ΅Π½ΠΊΠ° Π²ΠΊΠ»Π°Π΄ΠΎΠ² Su (Ste) piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠΉ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π² ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate.
ΠΠ»Ρ ΡΠΎΠ·Π΄Π°Π½ΠΈΡ ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠ°ΡΡΠΈΠ½Ρ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate Π²Π°ΠΆΠ½ΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΡΡ Π²ΠΊΠ»Π°Π΄Ρ Su (Ste) piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠΉ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ ΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π² ΠΎΠ±ΡΠΈΠΉ ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³. ΠΠ±ΠΎΠ·Π½Π°ΡΠΈΠΌ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ Stellate Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
ΠΌΡΡ
Π΄ΠΈΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΏΠ° Π·Π° X, Π° ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π½Π΅ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ Π ΠΠ Π·Π° Y. ΠΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Stellate ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΠ»ΠΎΡΡ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠ΅ΠΌ Π² 200 ΡΠ°Π· (Kotelnikov et al., 2009) ΠΈ, Π΅ΡΠ»ΠΈ ΡΡΠΈΡΠ°ΡΡ, ΡΡΠΎ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ Π½Π΅ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½ΠΈΠ»Π°ΡΡ, ΡΠΎ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ Stellate Π±ΡΠ΄Π΅Ρ 200Π₯. ΠΡΠΈΠΌΠ΅ΠΌ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π΄ΠΎΠΏΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅, ΡΡΠΎ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π½Π΅ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ Stellate Π½Π΅ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½ΠΈΠ»ΠΎΡΡ ΠΈ ΠΎΡΡΠ°Π»ΠΎΡΡ Y. ΠΠ±ΡΠ΅Π΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΌΠ ΠΠ Stellate ΠΏΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΠ»ΠΎΡΡ Π² 42 ΡΠ°Π·Π° (Π² ΡΡΠ΅Π΄Π½Π΅ΠΌ Π΄Π»Ρ ΡΡΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ). Π ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΠΌ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅:
(X+Y)*42=200X+Y.
42X+42Y=200X+Y.
ΠΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ, ΡΡΠΎ Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
Π΄ΠΈΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΏΠ° Π½Π΅ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ Stellate Π² 3,9 ΡΠ°Π·Π° Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅, ΡΠ΅ΠΌ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ. ΠΡΠΈ ΠΎΡΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ Su (Ste) piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π½Π΅ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΌΠ ΠΠ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅, ΡΠ΅ΠΌ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ Π² 51 ΡΠ°Π· (200/3,9). Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ Π½Π΅ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ΅Π½ΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Su (Ste) piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ. ΠΡΠ»ΠΈ Π½Π°ΡΡΡΠΈΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ, ΡΠΎ, ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΠ½ΠΎ ΡΠ°ΡΡΡΡΠ°ΠΌ, Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Stellate Π½Π΅ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·ΠΎΠΉΠ΄ΡΡ. Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, Su (Ste) piRNA Π²Π½ΠΎΡΡΡ Π³ΠΎΡΠ°Π·Π΄ΠΎ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΉ Π²ΠΊΠ»Π°Π΄ Π² ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate, ΡΠ΅ΠΌ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»Π°Π³Π°Π΅ΠΌΡΠΉ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ.
ΠΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΡΠΉ ΡΠ°ΡΡΡΡ Π±ΡΠ» ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄ΡΠ½ ΠΈ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΡ
ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΉ Ste-lacZ (ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΡΡΠ΅Π΄Π½ΠΈΠ΅ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎ ΠΌΠ ΠΠ ΠΈ ß—Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Π΅ Π΄Π»Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΉ Ste703-lacZ ΠΈ Stel34-lacZ).
(X+Y)*1,24=5,57X+Y 1,24X+1,24 Y=5,57X+Y 0,24Y=4,33X Y=18X.
ΠΠΊΠ»Π°Π΄ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π² ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠ½ΡΡ
ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΉ Ste-lacZ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅, ΡΠ΅ΠΌ Π²ΠΊΠ»Π°Π΄ Su (Ste) piRNA-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ, ΡΡΠΎ, ΠΏΠΎ-Π²ΠΈΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΌΡ, ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅ΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Stellate Π² ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ.
ΠΡΠΈΠ²Π΅Π΄ΡΠ½Π½ΡΠ΅ ΡΠ°ΡΡΡΡΡ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π±ΡΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ Π»ΠΈΡΡ Π΄Π»Ρ Π³ΡΡΠ±ΠΎΠΉ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΊΠΈ, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²ΡΠ²Π°ΡΡΡΡ Π½Π° ΡΡΠ΄Π΅ Π΄ΠΎΠΏΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΉ, ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΎΠ½ΠΈ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΡ ΡΡΠ°ΠΏΡ Π²ΠΎΠ·Π½ΠΈΠΊΠ½ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate Π² ΡΠ²ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΈ D.melanogaster. ΠΠ΅ΡΠΎΡΡΠ½ΠΎ, Π½Π° ΠΏΠ΅ΡΠ²ΠΎΠΌ ΡΡΠ°ΠΏΠ΅ ΡΡΠΈΠ»ΠΈΠ²Π°ΡΡΠ°ΡΡΡ Π² Ρ
ΠΎΠ΄Π΅ ΡΠ²ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΈ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΠ»Π°ΡΡ Π·Π° ΡΡΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ. ΠΡΠ» ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ ΠΏΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΡΡΠ½ΠΎ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡΡΡΡΠΈΠΉΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΎΡΠ½ΡΠΉ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ (ΠΊΠΈ), ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste-lacZ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΈ Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ S2, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ ΡΠΌΠ±ΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΡ
ΡΡΠ²ΠΎΠ»ΠΎΠ²ΡΡ
ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ. ΠΠ°. Π²ΡΠΎΡΠΎΠΌ ΡΡΠ°ΠΏΠ΅, ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate Π²ΠΎΠ·ΡΠΎΡΠ»Π° ΡΠ°ΠΊ ΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎ, ΡΡΠΎ Π½Π΅ ΠΌΠΎΠ³Π»Π° Π±ΡΡΡ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½Π° Π·Π° ΡΡΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ, Π΄Π»Ρ ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³Π° Π±ΡΠ»Π° ΠΏΡΠΈΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π»Π΅Π½Π° ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½Π°Ρ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ° Π ΠΠΠΈ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ ΠΈΠ·Π½Π°ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ * ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»Π°ΡΡ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ
ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ². ΠΠ»ΡΡΠ΅Π²ΡΠΌ ΡΠΎΠ±ΡΡΠΈΠ΅ΠΌ ΡΡΠ°Π»Π° ΠΏΠΎΡΠ²ΠΈΠ²ΡΠ°ΡΡΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠΉ Π ΠΠ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) Π½Π°ΡΠ΅Π·Π°ΡΡΡΡ Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΠΏΠ΅ΡΠ²ΠΈΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΈΠ½Π³Π° Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ piRNA. ΠΠ΅ΡΠΎΡΡΠ½ΠΎ, ΡΡΠΎΠΌΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±ΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°Π»ΠΎ ΡΠΎ, ΡΡΠΎ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΡ Π°Π½ΡΠΈΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠΉ Π ΠΠ Su (Ste) ΠΈΠ½ΠΈΡΠΈΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ Ρ ΠΏΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΡΠ° ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΠ·ΠΎΠ½Π° hoppel, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ piRNA Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
(Aravin et al., 2003). Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΡΠ΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ Π½Π΅ ΠΈΠ³ΡΠ°Π΅Ρ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΎΠ»ΠΈ Π² ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³Π΅ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate, ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΎΠ½Π° ΠΌΠΎΠ³Π»Π° Π²Π½ΠΎΡΠΈΡΡ Π²Π°ΠΆΠ½ΡΠΉ Π²ΠΊΠ»Π°Π΄ Π² ΡΠ°ΠΉΠ»Π΅Π½ΡΠΈΠ½Π³ Stellate Π½Π° Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠ°Π½Π½ΠΈΡ
ΡΡΠ°ΠΏΠ°Ρ
ΡΠ²ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΈ D. melanogaster.
6. Π²ΡΠ²ΠΎΠ΄Ρ.
ΠΠ·ΡΡΠ΅Π½Ρ ΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΌΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ° ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ piRNA Su (Ste) Ρ Drosophila melanogaster.
1) ΠΠ΅Π»Π΅ΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste) ΠΈΠ»ΠΈ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΡ Π² Π³Π΅Π½Π΅ Π°ΡΠ¬ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΊ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΌΡ Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
, Π½ΠΎ Π½Π΅ Π½Π΅ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² ΡΡΠΈ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Stellate Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
. ΠΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°ΡΡ, ΡΡΠΎ piRNA Su (Ste) ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ Stellate.
2) ΠΠ°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΏΠ»Π°ΠΉΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Stellate, Π²ΡΠ·Π²Π°Π½Π½ΠΎΠ΅ Π΄Π΅Π»Π΅ΡΠΈΠ΅ΠΉ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² Su (Ste), ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π½Π΅ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ, Π½ΠΎ ΠΈ Π² ΡΠ΄Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΡ
, Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ
ΠΈΠ· ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ². Π‘Π»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Stellate ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ Π² ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ΅, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π² ΡΠ΄ΡΠ°Ρ
ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠΎΠ² Drosophila melanogaster.
3) ΠΠΎΠ΄Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΡΡΠΈΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ Ste-lacZ ΠΊΠ°ΠΊ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ piRNA Π² ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΈΠΊΠ°Ρ
, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ siRNA Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΡΠΎΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠΆΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ Π½Π΅ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠΈΠ»ΡΠ½ΡΠΌ ΡΠ½ΠΈΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ (3-Π³Π°Π»Π°ΠΊΡΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ, Π½ΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΎ ΡΠ½ΠΈΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ.
4) Π ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ siRNA Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΠΏΠ°Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠ ΠΠ lacZ ΠΈ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅Π΅ ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΌΠ ΠΠ Ste-lacZ, ΡΡΠΎ ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π° ΡΠΎΠ»Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Stellate Π² Π·Π°ΡΠΈΡΠ΅ ΠΌΠ ΠΠ ΠΎΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ, Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ siRNA. ΠΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»Π°Π³Π°Π΅ΡΡΡ, ΡΡΠΎ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠ» Π½Π΅ΡΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΈΡΡΡΡΠΈΡ
ΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΎΠ² Ste-lacZ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π·Π°ΡΠΈΡΠ΅Π½Π½ΡΠΌ ΠΎΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΠΈ, Π²ΡΠ·Π²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΊΠ°ΠΊ piRNA, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ siRNA.