Выделение частиц ФС-2 из тилакоидов по методу schiller и dau (2005 г)

Осаждают тилакоиды из раствора на центрифуге (6000g, 20 мин) и ресуспендируют в среде с бетаином (25 мМ HEPES (pH 6,0), 15 мМ NaCl, 10 мМ MgCl₂, 1 М глицин-бетаина) до концентрации ~ 2,2 мг/мл. Оставляют раствор тилакоидов в холодильнике в темноте на 1 ч.

Добавляют к суспензии тилакоидов (2 мг хл/мл) Тритон Х-100 к хлорофиллу 20:1(20мг Тритон Х-100/1 мг хлорофилла). Для того, чтобы не происходило образование локально высокой концентрации тритона, добавление раствора Тритона Х-100 производят по капле по стенке сосуда при перемешивании суспензии на магнитной мешалке.

Инкубируют раствор при 0 С в темноте на мешалке в течении 20 мин. Центрифугируют раствор на высокоскоростной центрифуге при 47 900 g в течении 22 мин. Супернатант, содержащий ФС-1 отбрасывают, а осадок ресуспендируют в среде с бетаином и повторяем центрифугирование при 47 900 g в течении 15 мин. Такой цикл проводят 4 раза. На этом этапе происходит отмывание препаратов ФС-2 от Тритона Х-100.

Измерениеконцентрациихлорофилла

Общее содержание хлорофиллов «a» и «b» определяли по методу (Arnon, 1949). К 0,05 мл исходной суспензии добавляли 0,95 мл воды и 4 мл 80%-ного ацетона, измеряли оптическую плотность вытяжки при 652 нм и рассчитывали содержание хлорофилла в исходном образце по формуле С_хл(мг/мл) = (28,9 ^. А₆₅₂^. L ^. K)/1000, где, А — оптическая плотность образца при 652 нм, L — длина оптического пути, K — коэффициент разбавления суспензии.