Материалы и методы

Исследование проведено на 120 нелинейных крысах-самцах Rattus norvegicus Albinus с массой тела 200−250 г. Животные содержались в виварии Амурской государственной медицинской академии при соблюдении 12-ти часового светового режима, на стандартном пищевом рационе, при свободном доступе к пище и воде. Структурно-функциональные изменения в семенниках моделировали путем общего охлаждения животных в климатокамере «ILKA» (Feutron, ГДР). Охлаждение животных проводили при температуре -15С по 3 часа ежедневно с соблюдением адекватных условий влажности и вентиляции. Экспериментальные животные были рандомизированы на три группы (табл. 1), интактные крысы, содержавшиеся в стандартных температурных условиях вивария, составили группу контроля.

Таблица 1 — Краткая характеристика экспериментального материала.

Животные выводились из эксперимента на следующий день после завершения путем декапитации под тиопенталовым наркозом. Все манипуляции c животными проводились на основании разрешения Этического комитета Амурской государственной медицинской академии (протокол № 1 от 23 декабря 2005 г.), протокол эксперимента исследования на этапах содержания, моделирования и выведения животных из эксперимента соответствовал принципам биологической этики, изложенным в «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (ЕЭС, Страсбург, 1985), «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» (ЕЭС, Страсбург, 1986), приказу Министерства здравоохранения РФ № 267 от 19.06.2003 «Об утверждении правил лабораторной практики».

Для количественного морфологического анализа использовали парафиновые срезы семенников толщиной 5 мкм, для окраски которых ставили ШИК-реакцию с последующим докрашиванием ядер клеток гематоксилином, что позволило идентифицировать стадии сперматогенного цикла в соответствии c рекомендациями С. Leblond (1952).

Морфометрическое исследование семенников проводили при помощи аппаратно-программного комплекса, состоящего из программного обеспечения для количественного анализа ВидеоТесТ — Морфология 5.0, цифровой камеры DCM 130, адаптированной к световому микроскопу «Микромед-1», и персонального компьютера. Количественный анализ инкреторной активности семенников включал подсчет относительного количества клеток Лейдига (КЛ), приходящегося на срез извитого канальца, измерение диаметра цитоплазмы и ядра КЛ, по результатам планиметрических измерений определяли процентное соотношение различных морфофункциональных типов интерстициальных эндокриноцитов [9], рассчитывали индекс активности КЛ. Для установления корреляции между морфологическими и физиологическими критериями активности КЛ определяли концентрацию тестостерона в сыворотке крови крыс методом иммуноферментного анализа с использованием стандартного набора (Вектор-Бест, Россия).

Для количественной оценки генеративной активности семенников измеряли диаметр извитых семенных канальцев, вычисляли индекс сперматогенеза [9], цитологический профиль сперматогенеза изучали у каждого животного в 30 извитых семенных канальцах на VII-VIII стадиях сперматогенного цикла [9], в 100 случайно выбранных канальцах подсчитывали число конгломератов из отслоившихся сперматогенных клеток. семенник крыса температура тестостерон Для статистической обработки количественных данных использовалось программное обеспечение Statistica 6.0 (StatSoft, США), все данные представлены как M±m. Гипотезу нормальности распределения значений в выборках проверяли при помощи теста Колмогорова-Смирнова, после чего для сравнения выборок применялся параметрический t-критерий Стьюдента. Различия между выборками считались статистически значимыми при р < 0,05.