Микроклональное размножение пробирочных растений осуществляют с помощью черенкования. Такое размножение основано на подавлении апикального доминирования и активации пазушных меристем при удалении верхушки побега. Из пазушных почек на питательных средах образуются побеги.
Растения, сформировавшие пять-шесть листочков, в стерильных условиях извлекают из пробирок и делят на сегменты (отрезок стебля с листом и пазушной почкой). Черенки высаживают на глубину междоузлия в питательные среды либо без гормонов, либо с добавлением ауксинов. Черенки культивируют в тех же условиях, что и меристемы. Рост стебля и корней начинается на третий-четвертый день после посадки на питательную среду, а полностью растения формируются через 12—15 дней. Каждое последующее черенкование проводят через 2А—28 дней. Из одного растения можно получить пять — восемь черенков, а через два-три месяца — 3—5 тыс. черенков.
Если почки или черенки высадить на питательные среды с высоким содержанием цитокининов, то образуется конгломерат почек и побегов. Полученные побеги легко отделяются друг от друга, их можно либо укоренить, либо использовать для дальнейшего микрочеренкования.
Цель работы: провести микроразмножение картофеля путем черенкования побегов.
Оборудование и материалы: ламинар-бокс; пробирки с проростками; пробирки с питательной средой МС; стерильные препаровальные иглы, скальпели; флакон с 96%-м спиртом; спиртовка.
Объект исследования: стерильные проростки картофеля в пробирках.
Таблица 4
Модифицированная питательная среда Мурасиге — Скуга (МС) для микроразмножения картофеля черенкованием побегов.
Компоненты питательной среды |
Маточный раствор макросолей. | 50 мл/л. |
Маточный раствор микросолей. | 1 мл/л. |
Fe-хелат. | 5 мл/л. |
СаС12 | 5 мл/л. |
Тиамин-СН1. | 1 мг/л. |
Пиридоксин-НС1. | 1 мг/л. |
Никотиновая кислота. | 2 мг/л. |
Аденин. | 40 мг/л. |
Кинетин. | 0,5 мг/л. |
Гибберелловая кислота. | 2 мг/л. |
Пантотенат Са. | 10 мг/л. |
Активированный уголь. | 10 мг/л. |
Сахароза. | 30 г/л. |
Агар-агар | 7 г/л. |
pH 5,8. |
Ход работы.
Подготовить ламинар-бокс и инструменты к работе. В ламинаре извлечь стерильные проростки картофеля из пробирок. Побеги разрезать на сегменты (отрезок стебля с листом и пазушной почкой). Часть стебля над листом должна быть в два-три раза меньше, чем часть ниже листа. Микрочеренки помещают в питательную среду на глубину междоузлия. Пробирку закрыть пробкой, поместить в штатив и перенести в культуральную комнату. Необходимо соблюдать стерильность.
Задание. Пробирку с черенком зарисовать. Через одну, две и три недели провести наблюдение за развитием побега и зарисовывать этапы развития растения из черенка.
