Выявление болезнетворных агентов

Развитие многих возбудителей в организме хозяина может вызывать сходные клинические проявления. Так, подъем температуры, увеличение лимфатических узлов, кашель, слабость характерны для целого ряда заболеваний. Для эффективного противодействия инфекции необходимо прежде всего выявить возбудитель. Эта задача решается комплексно с помощью микроскопирования, культивирования и выделения инфекционного агента, а также с использованием биохимических, иммунологических и молекулярно-биологических тестов. Обнаружение возбудителя начинается со взятия проб биологического материала, в котором на данной стадии заболевания его пребывание наиболее вероятно. Например, при респираторных заболеваниях берут материал из горла или полости носа. При этом руководствуются общими правилами забора и доставки проб для микробиологического анализа. Одновременно исследуют на наличие возбудителя жидкости тела (кровь, спинномозговую жидкость и т. д.), которые у здорового человека не содержат микроорганизмы и вирусы. Лабораторная диагностика с использованием методов классической микробиологии проводится, как правило, по стандартной схеме с использованием дифференциально-диагностических сред и биохимических тестов. На первой стадии готовят препараты живых клеток или фиксированные окрашенные препараты для микроскопии, а также проводят посев материала на селективные питательные среды для накопления и выделения возбудителя. Затем изучают физиологические и биохимические свойства полученной культуры и определяют ее систематическое положение. Иногда для воспроизведения картины заболевания используют лабораторных животных.

Следование требованиям триады Коха не всегда возможно, так как некоторые возбудители не удается выделить в чистой культуре и ко многим болезням человека подопытные животные не восприимчивы. Несмотря на упрощение классической микробиологической диагностики с проявлением готовых индикаторных сред и тест-наборов для экспресс-методов, это исследование длится от трех дней до нескольких недель. Определить инфекционный агент непосредственно в материале больного, без выделения чистой культуры, можно молекулярно-биологическими методами. Эти методы позволяют быстро обнаружить в пробе нуклеотидные последовательности ДНК возбудителя.

Сократить время лабораторного определения причины заболевания позволяет также применение методов иммунодиагностики. С помощью этих методов можно выявить антиген (сам возбудитель или его компоненты) или продукты его взаимодействия с макроорганизмом (антитела). В первом случае применяют антитела, полученные на этот антиген путем введения небольших его доз в кровь животного (лошади, кролика и др.). У животного вырабатываются соответствующие антитела, которые затем выделяют и используют для постановки реакций. Первая фаза серологических реакций заключается в образовании комплекса «антиген-антитело». Во второй фазе возникают видимые изменения реакционной смеси (образование хлопьев, осадка или растворение клеток). Результат реакции зависит от физико-химических условий ее проведения, состояния антигена (взвесь или раствор) и наличия дополнительных участников (чаще всего, комплемента). Для ускоренного обнаружения комплекса «антиген — антитело» используют антитела, к которым химическим путем присоединены радиоактивные, окрашенные или светящиеся компоненты. Чтобы определить продукты взаимодействия возбудителя с организмом человека (антитела), необходимо располагать набором известных антигенов. Такие препараты антигенов (диагностикумы) представляют собой либо взвесь микробов или вирусов, либо их компоненты, адсорбированные на различных носителях (частицах латекса, эритроцитах и т. д.). Эта группа методов служит не только для уточнения диагноза заболевания, но и для оценки иммунного статуса организма, т. е. его способности активно отвечать на агрессию возбудителя. При этом определяют количественный и качественный состав всех антител в крови и нарастание количества антител к данному возбудителю по мере развития болезни.

Ряд заболеваний (туберкулез, сифилис, сибирская язва, свинка, простой герпес и др.) характеризуется состоянием повышенной чувствительности к повторному введению возбудителя. Это свойство используется при постановке аллергической пробы с внутрикожным введением возбудителя или его продуктов. Положительным результатом реакции считают припухлость и покраснение места укола, говорящее о наличии неинфекционной аллергии. Так, известная реакция Манту позволяет определить наличие в прошлом контакта человека с микобактериями туберкулеза. Поскольку результат реакции будет положительным у инфицированных, переболевших и привитых лиц, а также у здоровых носителей, то его следует считать ориентировочным и подкреплять более детальным исследованием.