Помощь в учёбе, очень быстро...
Работаем вместе до победы

Использование клеточных культур при изучении действия Т-2 токсина

Диссертация: Использование клеточных культур при изучении действия Т-2 токсина
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Апробация работы. Материалы, представленные в диссертации, доложены и обсуждены на научно-практической конференции, посвященной 70-летию Казанского медико-инструментального завода (Казань, 2001) — Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», посвященной 60-летию факультета ветеринарной медицины Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2003), Всероссийской… Читать ещё >

Содержание

  • Список сокращений

1. Обзор литературы 10 1.1. Общая характеристика микотоксинов 10 1.1.1 Механизм действия микотоксинов на животный организм 1.1.2 Т-2 токсин и его метаболиты

1.2 Использование клеточных культур в токсикологии

1.2.1 Культуры клеток как альтернативные модели в токсикологических исследованиях

1.2.2 Методы оценки цитотоксичности 22 1.3. Исследования токсичности микотоксинов на культурах клеток

2. Собственные исследования

2.1 Материалы и методы

2.1.1 Материалы исследований

2.1.2 Методы исследований

2.2 Результаты собственных исследований

2.2.1 Исследование цитотоксичности Т-2 токсина in vitro

2.2.2 Изучение видовых особенностей токсичности Т-2 токсина in vivo и in vitro

2.2.3 Исследование цитотоксичности НТ-2 токсина in vitro

2.2.4 Исследование динамики пролиферативной активности в культуре клеток при внесении Т-2 токсина

2.2.5 Цитотоксичность Т-2 токсина in vitro на фоне воздействия различных фармакологических средств

2.2.6 Определение перекисного окисления липидов

2.2.7 Изучение эффективности натрия селенита в качестве потенциального антидота Т-2 токсина

2.2.8 Изучение профилактической эффективности ксимедона в экспериментальном Т-2 токсикозе

2.2.9 Токсичность Т-2 токсина при постановке кожной пробы на кроликах

3. Обсуждение результатов собственных исследований

3.1 Цитотоксичность Т-2 и НТ-2 токсинов и роль при этом перекисного окисления липидов в механизме гибели клеток

3.2 Возможность использования культур клеток в качестве биопробы при Т-2 токсикозе

3.3 Возможность применения культур клеток для предварительного скрининга потенциальных антидотов при

Т-2 токсикозе

Выводы

Практические предложения

Использование клеточных культур при изучении действия Т-2 токсина (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность темы

Вопросы этического, разумного и экономного использования животных в современных биологических исследованиях привлекают все большее внимание специалистов и общественности. На сегодня они вполне решаемы, поскольку существуют достаточные возможности не только для сведения количества подопытных животных к минимуму, но и к полной или частичной их замене (Червонская Г. П. и др., 1998; Дядищев Н. Р. и др., 1998; Еропкин М. Ю., 1999; Botham P., Lewis R., 1996; Hurna Е., 1997; Combes R., Balls M., 2001 и др.).

На практике подобное можно осуществить благодаря широкому внедрению в эксперимент альтернативных биологических моделей, в том числе культуральных. Последние высокочувствительны к воздействию малых количеств испытуемых веществ, эффект которых на организменном уровне может проявиться лишь при больших дозировках и спустя значительное время (Червонская Г. П. и др., 1998; Афиногенова А. Г. и др., 1999; Еськов А. П. и др., 2003; Flint О., 1996; Louekari К., 1996 и др.).

Культуры клеток занимают все более заметное и важное место в токсикологических, фармакологических и других исследованиях. При этом сфера применения расширяется, а техника культивирования in vitro совершенствуется и автоматизируется. Использование культуральных тестов является свидетельством высокого уровня эксперимента в любой сфере как фундаментальных, так и прикладных народно-хозяйственных отраслях (Червонская Г. П. и др., 1998).

Между тем, дороговизна общепринятых химических методов анализа микотоксинов и изучения их токсических свойств на животных вынуждает к поиску и разработке новых более чувствительных и быстрых тестов. Биологические методы в этом плане перспективны и, несмотря на неспецифичность при идентификации микотоксинов, позволяют выявлять их присутствие в исследуемом субстрате (Watson D., Lindsay D., 1982; Buckle A., Sanders M., 1990; Babich H., Borenfreund E., 1991 и др.).

Цель и задачи исследования

Целью работы явилось изучение возможности использования клеточных культур (КК) как альтернативы традиционной методике кожной пробы при экспериментальном Т-2 токсикозе и для предварительного скрининга антидотов. В соответствии с целью исследования поставлены следующие задачи:

1. Сравнить различные методы оценки цитотоксичности in vitro;

2. Определить токсические дозы Т-2 и НТ-2 токсинов на перевиваемых культурах клеток почек различных видов животных: крупного рогатого скота (MDBK), свиньи (СПЭВ), овцы (ППЭО) и собаки (MDCK);

3. Изучить коррелятивные отношения токсических доз исследуемых микотоксинов in vivo и in vitro;

4. Провести сравнительную оценку определения токсического действия Т-2 токсина биологической пробой на кроликах и культуральным методом;

5. Охарактеризовать in vivo и in vitro эффективность препаратов с потенциально антидотными свойствами при Т-2 токсикозе.

Научная новизна работы. Впервые проведено сравнительное исследование цитотоксичности Т-2 токсина и его метаболита — НТ-2 токсина in vitro на перевиваемых культурах клеток различных видов животных. Определены цитотоксические дозы Т-2 и НТ-2 токсинов для клеточных линий MDBK, СПЭВ, ППЭО и MDCK. Показана дозозависимость цитотоксического эффекта данных микотоксинов, выражаемого изменением ростовых и пролиферативных характеристик клеточных культур, снижением жизнеспособности клеток in vitro. Изучены коррелятивные отношения между тестами in vivo и in vitro. Оценена возможность применения клеточных линий в качестве биологической пробы, а также для скрининга потенциальных антидотов при экспериментальном Т-2 токсикозе. Установлено значительное увеличение Т-2 токсином в дозе IC50 содержания малонового диальдегида (МДА) в культуре клеток MDBK, свидетельствующее о роли перекисного окисления липидов (ПОЛ) в механизме гибели клеток in vitro при данном воздействии.

Практическая ценность работы. Результаты проведенных экспериментов расширяют сферу использования культур клеток в токсикологии. Полученные данные свидетельствуют о возможности применения их в качестве биологического теста при выявлении микотоксинов. Клеточная модель — линия MDBK — проявила высокую чувствительность к исследованным лекарственным средствам (натрия селениту и ксимедону) при одновременном внесении с Т-2 токсином и может быть использована в дальнейшем поиске потенциальных антидотов.

Результаты исследования использованы при разработке «Методики по определению цитотоксичности медицинских металлических изделий», утвержденную директором ФГНУ ВНИВИ и генеральным директором ГУП ВНИПИМИ, 21.03.2002; «Методических указаний по санитарно-микологической оценке и улучшению качества кормов», утвержденных директором ФГНУ ВНИВИ, 19.11.2003; «Методических рекомендаций по диагностике отравлений животных микотоксинами», утвержденных директором ФГНУ ВНИВИ, 20.12.2004.

Апробация работы. Материалы, представленные в диссертации, доложены и обсуждены на научно-практической конференции, посвященной 70-летию Казанского медико-инструментального завода (Казань, 2001) — Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», посвященной 60-летию факультета ветеринарной медицины Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2003), Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы агропромышленного комплекса» (Казань, 2004), Международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию ФГУП «Щелковский биокомбинат» «Ветеринарная биотехнология: настоящее и будущее» (Щелково, 2004),.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.

Основные научные положения диссертации, выносимые на защиту: метод расчета цитотоксичности in vitroиспользование клеточных культур для оценки токсического действия Т-2 и НТ-2 токсиноввозможность использования КК для предварительного скрининга препаратов с потенциально антидотными свойствами при Т-2 токсикозе.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 110 стр, содержит 23 таблицы, проиллюстрирована 5 рисунками, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, список литературы, приложения.

Список литературы

включает 180 библиографических источников, в т. ч. 119 на иностранном языке.

ВЫВОДЫ.

1. Предложен метод расчета цитотоксичности через отношение живых клеток, оставшихся после экспозиции с препаратом к числу живых клеток в контроле.

2. Установлена меньшая токсичность НТ-2 токсина, по сравнению с Т-2 токсином для перевиваемых культур клеток MDBK, MDCK, СПЭВ и ППЭО, а именно 1С5о для Т-2 токсина составляла в среднем 10″ 9 М, тогда как для НТ-2 — 10″ 6 М.

3. Выявлена слабая видовая зависимость токсичности Т-2 и НТ-2 токсинов in vitro и in vivo. Корреляция показателей LDioo, LD50, ПДК в кормах для различных видов животных и 1Сюо> IC50, МПД для культур клеток этих же видов существенно не различалась. Коэффициент корреляции для крупного рогатого скота, свиней и овец составил 0,63 (р<0,01), а для овец — 0,59 (р<0,01).

4. Показано увеличение содержания МДА в культуре клеток MDBK Т-2 токсином, что свидетельствует о значительной роли индукции ПОЛ в механизме гибели клеток in vitro при воздействии данного токсина.

5. Биоиндикация Т-2 токсина с использованием клеточных культур обладает рядом преимуществ перед кожной пробой на кроликах: минимальная цитотоксическая концентрация токсина для культуры клеток на порядок нижев 2−3 раза сокращаются сроки исследованияперевиваемые культуры клеток относительно дешевы, доступны и т. д.

6. Выявлено снижение токсического действия Т-2 токсина ксимедоном и натрия селенитом на животных (белые крысы) и клеточной модели (MDBK). Данные препараты в дозах эквивалентных терапевтическим, повышали выживаемость клеток in vitro при воздействии Т-2 токсина на 15 и 20%, а также снижали содержание.

МДА на 33 и 57%, соответственно. В экспериментах in vivo выживаемость увеличивалась, соответственно, на 30 и 20%.

Экспериментально показана возможность использования клеточных культур для первичного скрининга препаратов с потенциальным лечебно-профилактическим действием при Т-2 токсикозе.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Показана принципиальная возможность скрининга препаратовпотенциальных антидотов Т-2 токсина с помощью клеточных культур, а также использование их для диагностики микотоксикозов.

Результаты исследований вошли в следующие разработанные и утвержденные нормативные документы:

1. Методика по определению цитотоксичности медицинских металлических изделий, утвержденная' директором ФГНУ ВНИВИ и генеральным директором ГУП ВНИПИМИ, 21.03.2002.

2. «Методические указания по санитарно-микологической оценке и улучшению качества кормов», утвержденные директором ФГНУ ВНИВИ 19.11.2003 г.;

3. Методические рекомендации по диагностике отравлений животных микотоксинами, утвержденные директором ФГНУ ВНИВИ, .

20.12.2004.

Показать весь текст

Список литературы

  1. .И., Яковлева Т. Ф., Дерябина В. И. и др. Лабораторные исследования в ветеринарии: биохимические и микологические: Справочник. / Под ред. Антонова Б. И. М.: Агропромиздат, 1991. -287 с.
  2. А.А., Шибаева З. В. Реакция иммуноприлипания стафилококков и ее использование в токсикологическом эксперименте. // Гигиена труда и проф. заболевания, 1984. № 12. — С. 47 — 48.
  3. В.И., Брехман И. И., Глотин В. Г. Кудряшов Ю.Б. Перекисное Ф окисление и стресс. СПб., 1992. 160 с.
  4. М.С. Действие афлатоксинов на животные клетки в культуре тканей. // Фармакология и токсикология, 1973. № 4. — С. 497 -501.
  5. И.В., Иванова В. М., Спасский Ю. А. Альтернативные методы в лекарственной токсикологии в настоящем и будущем. // Тезисы докладов 1 съезда токсикологов России. М., 1998. —С.269.
  6. О.В., Салько В. Н., Бойко А. В. и др. Влияние токсических веществ на условно-патогенные микроорганизмы. // Гигиена и санитария, 2002. № 1. — С. 54 — 56.
  7. Т.В. Использование культуры тканей в токсикологической оценке гербицида Хармони. // Ветеринария, 1999. № 7. — С. 48 — 49.
  8. И.Х. Фармакологическая коррекция нарушений перекисного окисления липидов, вызываемых ксенобиотиками. Автореф. дис.. докт. биол. наук. Казань, 2004. 36 с.
  9. А.Ф., Шройт И. Г., Дмитриенко В. Д., Тодорова Е. А. Действие пестицидов на эксплактированные клетки. // Гигиена труда и профессиональные заболевания, 1982. № 6. — С.21−24.
  10. Ю.А., Арчаков А. И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М., 1972. — С.127 138.
  11. Гончаренко М. С, Латинова A.M. Метод оценки перекисного окисления липидов. // Лабораторное дело, 1985. № 1. — С. 60.
  12. ГОСТ Р ИСО 10 993.5 99. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 5. Исследование на цитотоксичность: методы in vitro. М., ИПК Издательство стандартов, 2000.
  13. Н.Р., Рыбалкин С. П., Марченко А. И. Биологические модели in vitro в токсикологии. // Тезисы докладов 1 съезда токсикологов России. М., 1998.-С.276.
  14. М.Ю. Модели, альтернативные использованию лабораторных животных в токсикологии. Достижения и проблемы. // Токсикологический вестник, 1999. № 5 — С.7−13.
  15. М.Ю., Афиногенов Г. Е., Еропкина Е. М. Некоторые биохимические показатели цитотоксического ответа фибробластов человека в культуре под действием природных и синтетических поликатионов. // Вопр. мед. химии, 1995. — т. 41, № 2. С. 36 — 39.
  16. А.П., Каюмов Р. И. Соколов А.Е. Токсикологические испытания. Альтернативные методы. // Токсикологический вестник, 2003. -№ 5. -С. 25−29.
  17. Н.В., Червонская Г. П., Панкратова Г. П. и др. Ускоренное изучение цитотоксического действия в экспресс-тестах in vitro. // Тезисы докладов 1 съезда токсикологов России. М., 1998. 0,2.19.
  18. Информационный бюллетень ассоциации клеточных культур, С-Пб., 1997. -№ 12
  19. В.Е., Савов В. М., Диденко В. В. и др. Кальций и перекисное окисление липидов в мембранах митохондрий и микросом сердца. // Бюлл. эксперим. биол. и медицины, 1983. № 4. — С. 46 — 48.
  20. Ю.Н. О перекисном окислении липидов в норме и патологии (обзор). // Вопр. мед. химии, 1985. т.35., № 5. — С. 2 — 7.
  21. А. В. Изучение механизмов активации перекисного окисления липидов при патологических процессах. Роль эндогенного железа: Автореф. дис.. канд. мед. наук. М., 1985.
  22. Г. Г., Слободенюк А. В., Глинских Н. П. Клеточные культуры как тест-система оценки качества новых фитопрепаратов. // Цитология, 1994. т. 36, № 6. — С. 555.
  23. С.В., Стволинский C.JL, Бейм A.M. Эколого-токсикологический анализ на основе биологических мембран. М., 1986.
  24. А.Н., Труфанова В. А. Микотоксины (продуценты, химия, биосинтез, определение, действие на организм). Оренбург: Оренбургский медицинский институт, 1977. С. 89 — 90.
  25. JI.B., Авреньева Л. И. Ферментная характеристика алиментарного токсикоза, вызванного зерном, зараженным Fusarium sporotrichiella. // Вопросы питания, 1984. № 1. — С. 61 — 64.
  26. Л.В., Авреньева Л. И., Тутельян В. А. Действие Т-2 токсина на активность органеллоспецифических ферментов различных органов крыс. // Вопр. мед. химии, 1983 а. № 4. — С. 113 — 117.
  27. JI.B., Авреньева Л. И., Тутельян В. А. Уменьшение содержания SH-глутатиона и активности глутатионтрансферазы в печени как фактор, усиливающий токсичность Т-2 токсина. // Вопр. мед. химии, 1983 б. № 5. — С. 135 — 137.
  28. Л.В., Кузьмина Э. И., Авреньева Л. И. и др. Защитное действие селена при остром Т-2 токсикозе. // Вопр. мед. химии, 1990. -т. 36, № 5. -С. 36−38.
  29. Г. Н., Егорова Н. А., Антонова М. Г. Обоснования использования альтернативных биологических моделей в гигиенической токсикологии. // Тезисы докладов 1 съезда токсикологов России. М., 1998.-С.8.
  30. А.Ф. Ветеринарная микология. СПб.: Лань, 2001.-416 с.
  31. К.С. // Тезисы докладов 2 научной конференции МНИИВП, М., 1960.-С.57.
  32. В.Г., Тимохина В. И., Яценко В. П. и др. Некоторые результаты и перспективы использования метода тканевых культур в токсикологии медицинских полимеров. // Гигиена и санитария, 1981. № 6. — С. 54 -56.
  33. Г. Ф., Кашников Е. Ю. Оценка качества воды с помощью биотестирования индикаторными штаммами бактерий. // Гигиена и санитария, 2002. № 4. — С. 68−70.
  34. А.С., Лукьянова Л. Л., Чернавская Н. М., Гилязов С. Ф. Биоэтика. Альтернативы экспериментам на животных. М.: Изд-во МГУ, 1996.-253 с.
  35. Ю.А., Саватеев А. В., Комяк К. И. Автоматизированный цитотоксический тест для изучения материалов медицинского назначения. // Тезисы докладов 1 съезда токсикологов России. М., 1998. С. 294.
  36. М.В., Рязанова Р. А. Клеточные культуры — модельная тест-система в токсикологических исследованиях. // Тезисы докладов 1 съезда токсикологов России. М., 1998. С. 297.
  37. А.И. Модифицированный метод определения активности изоферментов лактатдегидрогеназы в сыворотке крови. // Лабораторное дело, 1984. № 12. — С. 766 -767.
  38. Н.М., Жигачева И. В., Чаморовская Л. Т. Активация перекисного окисления липидов в митохондриях печени и острая токсичность химических соединений. // Гигиена и санитария, 1991. -№ 1.-С. 49−51.
  39. П.С., Парзян М. С. Некоторые аспекты влияния факторов питания на метаболизм и механизмы биологического действия афлатоксина Bj в печени крыс. // Вопр. мед. химии, 1985. т. 31, № 4. -С.94−99.
  40. С.В. Микотоксикозы животных. М.: Росагропромиздат,. 1991. С.105−117.
  41. А.А., Безпрозванный Б. К. Афлатоксикозы. // Советская медицина, 1972. № 2. — С. 79 — 88.
  42. А.А., Мешков Н. В., Кравченко Л. В. Ранние изменения печени при воздействии афлатоксина. // Архив патологии, 1973. — т. 35, вып. 8.-С. 57−60.
  43. Пол Д. Культура клеток и ткани. М.: Медгиз, 1963. — 347 с.
  44. А.В., Конюхов В. А., Лымарь В. Т. Ингибирующее влияние противовирусных химиопрепаратов на суспензионную культуру клеток. // Вопросы вирусологии, 1989. т. 34, № 3. — С. 330 -333
  45. А.Х. Микотоксикозы. М.: Сельхозиздат, 1954. 216 с.
  46. Г. И., Фролова А. Д., Луковникова Л. В. Об «альтернативных» методах исследования в токсикологии. // Тезисы докладов 1 съезда токсикологов России. М., 1998.-С.317.
  47. Н.А., Архипов В. В. Цитотоксическое и цитостатическое действие лекарственных растений и растительных препаратов на культуру лимфобластоидных клеток. // Цитология, 1994. т. 36, № 6. -С.536 — 537.
  48. М.Я., Беляева Л. Л., Птицина О. В. Влияние микотоксинов на иммунитет.// Матер, научно произв. конф. по актуальным проблемам ветеринарии и животноводства. Казань, 1996.- С. 145.
  49. В.А., Кравченко JI.B. Микотоксикозы (медицинские и биологические аспекты). / АМН СССР, М.: Медицина, 1985. 320 с.
  50. В.Н., Пилипец З. И., Малиновская JI.C. и др. Профилактика микотоксикозов животных. М.: Агропромиздат, 1985. С.114−135.
  51. JI.B. Определение свободнорадикальных методов для оценки влияния полихлорированных диоксинов и фуранов на состояние здоровья населения. // Гигиена и санитария, 2002. № 2. — С. 72 — 76.
  52. Г. П. Культура клеток биологическая модель в токсикологических исследованиях. // Тезисы докладов 1 съезда токсикологов России. М., 1998. — С.328.
  53. Г. П., Кравченко JI.T., Рунова В. Ф. и др. Цитотоксическое действие химических веществ, содержащихся в виде примесей в некоторых медицинских иммунобиологических препаратах // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунол., 1988. № 12. — С. 85 — 90.
  54. Г. П., Миронова JLJI. Этика медицинского эксперимента в доклинических исследованиях. // Тезисы докладов 4 Рос. нац. конгресса «Человек и лекарство». М., 1997. — С. 139.
  55. Л.М., Колесниченко Т. С., Никонова Т. В. Исследование действия афлатоксина Bi in vitro и in vivo. // Бюлл. эксперим. биол. и медицины, 1976.-№ 11.-С. 1349−1352.
  56. Ames В., McCann J., Jamasaki Е. // Mutat. Res., 1975. V. 31, № 3. — P. 347−364.
  57. Annett В. The fund for the replasement of animals in medical experiments (FRAME): the first 25 years. // ATLA, 1995. V.23. — P. 19−32.
  58. Babich H., Borenfreund E. Cytotoxicity of T-2 toxin and its metabolites determined with the neutral red cell viability assay. // Appl. and Environ. Microbiol., 1991. 57, № 1. — P. 2101 — 2103.
  59. Balls M. Why modification of the LD50 test will not elong? // Lab. Anim., 1991.-V. 25,№ 3.-P. 11−23.
  60. Balls M., Clothier R. Comments on the scientific validation and regulatory acceptance о in vitro toxicity test. // Toxicol, in vitro., 1991. V. 5, № 5−6. -P. 535−538.
  61. Bassi A., Piana S., Penco S. et al. Use of an established cell line in the evaluation of the cytotoxic effect of various chemicals. // Boll. Soc. ital. biol. sper., 1991. V. 67, № 8. — P. 809 — 816.
  62. Berlament V., Paillard F., Prenner A. Can in vitro models predict acute and subchronic toxicity in early phase compounds development. // ATLA, 1999. -V. 27, Spec. iss. — P.415.
  63. Bertolotti L., Ferrari L., Barnaby R., Pellegatti M. Application of the MDCK cell line as an in vitro model for intestinal absorption. // ATLA, 1999. -V. 27, Spec. Iss. P. 307.
  64. Blaauboer B. Recent development in in vitro toxicology. // Hum. and Exp. Toxicol., 1996.-V. 15,'№ 11. P. 928.
  65. Blein O., Adolf M., Lakhdar B. et al. Correlation and validation of alternative methods to the draise eye irritation test (OPA1 project). // Toxicol, in vitro, 1991. V. 5, № 5−6. — P. 555 — 557.
  66. Bonsi P., Palmery M., Augusti-Tocco G. Aflatoxin Bi cytotoxicity in neurons in culture. // ATLA, 1996. V. 24, № 4. — P. 533 — 540.
  67. Botham P., Lewis R. Development of in vitro techniques for irritancy testing. // Hum. and Exp. Toxicol., 1996. V.15, № 2. — P. 141.
  68. Brogaard В., Clausen J. An in vitro system for evaluation of oxidative stress and the effects of antioxidants. // ATLA, 1996. V.24., Suppl. 1. — P. 251 -311.
  69. Buckle A., Sanders M. An appraisal of bioassay methods for the detection of mycotoxins a review. // Lett. Appl. Microbiol., 1990. — V.10, № 4. — P. 155−160.
  70. Cairns J., Pratt J., Niederlehner В., McCormick P. A simple? Cost-effective multispecies toxicity test using organisms with a cosmopolitan distribution. // Environ. Monit. and Assesment, 1986. V. 6, № 3. — P. 207 — 220.
  71. M., Jimenez A., Vazques D. // Biochem. J., 1976. V. 160. — P. 137.
  72. Charlton J., Simmons N. A human renal cultured cell line whuch may be useful for predictive toxicology. // Clin. Sci., 1992. V. 82, № 3. — P. 14.
  73. Chen Yang S., Yin — Chin H., Choon — Nam O. Inhibition of aflatoxin Bj-induced cell injury by selenium: An in vitro study. // Hum. and Exp. Toxicol., 1995.-V. 14, № 1.-P. 55−60.
  74. Chen Y. Effect of thyrotoxine on the immune response of mice in vivo and in vitro. // Immunol. Commun, 1980. V. 9. — p. 260−276.
  75. Chunh C. et al. Rabbit skin test for estimation of T-2 toxin and other skin irritating toxins in contaminated corn. // J. Assoc. of Anal. Chem., 1974. -V. 57, № 5.-P. 1121−1127.
  76. Cigliano S., Remondelli P., Minichiello L. et al. Analysis of metal-regulated metallothionein and hat shock gene expression in Hela derived cadmium-resistant cells. // Exp. Cell. Res., 1996. — V. 228, № 2. — P. 173 — 178.
  77. Clothier R., Orme A., Walker T. et al. A comparison of three cytotoxicity endpoints in the corneal HCE-T model. // ATLA, 2000. V. 28, № 2. — P. 293−302.
  78. Clothier R., Sansom R. Effects of surfactant retreatment in vitro: A method to evaluate changes in cell functions and in cell viability. // ATLA, 1996. -V. 24, № 5.-P. 859−865.
  79. Combes R. FRAME and the pharmaceutical industry. // ATLA, 1997. V. 25, № 1. —P. 61 -66.
  80. Combes R., Balls M. Ethical investment what is it, and what are the implications for industry funding of research into alternatives? // ATLA, 2001.-V. 29, № 1.-P. 55−62.
  81. Cronin M., Clothier R., Dearden S. et al. Correlation of mammalian toxicity with in vitro toxicity. // J. Pharm. and Pharmacol., 1994. V. 46, Suppl. № 2. -P. 1079.
  82. Daston G. The theoretical and empirical case for in vitro developmental toxicity screens, and potential application. // Teratology, 1996. V. 53, № 6. -P.'339−344.
  83. De Nicola D., Rebor A., Carlton W. T-2 toxin mycotoxicosis in the guinea pig. // Food Cosmet. Toxicol., 1978.- P. 601−609.
  84. Descampiaux В., Cotelle N., Caeteau J. et al. Cytotoxicity of lindane and paraquat to human hepatoma cell lines. // Bull. Environ. Contam. and Toxicol., 1999. V. 62, № 1. — P. 16 — 24.
  85. Dimitrijevic D., Lamandin C., Uchegbu I. et al. The effect of monomers and mecellar and vesicular forms of non-ionic surfactants (Solutan C24 and Solutan 16) on CaCo-2 cell monolayers. // J. Pharm. and Pharmacol., 1997. -V. 49, № 6.-P. 611−616.
  86. Dininno V., Penman D., Bhatti A. et al. In vitro toxicity of T-2 mycotoxin in mouse lymphoid cells. // J. Gen. Microbiol., 1985. V. 131, № 7. — P. 1833 — 1835.
  87. Fautrel A., Chesne C., Guillouzo A. et al. A multicentre study of acute in vitro cytotoxicity in rat liver cells. // Toxicol, in vitro., 1991. V. 5, № 5−6. -P. 543 — 547.
  88. Ferraris M., Marafante E., Dosanih M. In vitro studies on the metabolism and toxicity of aflatoxin Bi in primary cultures of black catfish (Ictalurus melas). // ATLA, 1998. V. 26, № 2. — P. 225 — 239.
  89. Ferro M., Bassi A., Adamo D et al. Studies on a-hexachlorocyclohexane cytotoxocoty, genotoxicity and cytochrome P450 induction in primary hepatocytes and hepatoma cell lines from rodents and humans. // ATLA, 1997.-V. 25,№ 2.-P. 139- 152.
  90. Flint O. Toxicity at the cellular level. //ATLA., 1996. V. 24, Spes.iss. — P. 103.
  91. Gagne F., Blaise C. Differencec in the measurement of cytotoxicity of complex mixtures with rainbow trout hepatocytes and fibroblasts. // Chemosphere, 1998. V. 37, № 4. — P. 753 — 769.
  92. George E., Murdock J., Westmoreland C. Toxicity of 5 standart hepatotoxin in rat and dog hepatocyte cultures. // Hum. and Exp. Toxicol., 1994. V. 13, № 9.-P. 641.
  93. Greenman S., Rutten M., Fowler W. et al. Herbicide / pesticide effects on intestinal epithelial growth. // Environ. Res., 1997. V. 75, № 1. — P. 85 -93.
  94. Grillo С., Seoane A., Dulout F. Protective affect of butylated hydroxytoluene (BHT) against the clastogenic activity of cadmium chloride and potassium dichromate in Chinese hamster ovary cells. // Genet, and Mol. Biol., 1999. V. 22, № 1. — P. 59 — 64.
  95. Grosse Y., Baudrimont I., Castegnaro M. et al. Formation of ochratoxin A metabolites and DNA-adducts in monkey kidney cells. // Chem.-Biol. Interact., 1995. V.95, № 1−2. — P. 175- 187.
  96. Guyomard C., Frifayre P., Hooyenboom L., Polman T. Aflatoxin B. effects on trout hepatocytes comparison with rat hepatocytes, result from an EU-project. //Rev. med. vet., 1998. № 6. — P.644.
  97. M., Schiefer H. // J. Appl. Toxicol., 1982. V. 2. — P. 44
  98. Heil J., Reifferscheid G., Waldmann P. et al. Genotoxicity of dental materials. // Mutat. Res. Genet. Toxicol., 1996. V. 368, № 3 — 4. — P. 181 -194.
  99. Holt P., Buckley S., Norman J., Deloach J. Cytotoxic effect of T-2 mycotoxin on cells in culture as determined by a rapid colorimetric bioassay. // Toxicon, 1988. V.26, № 6. — P. 549 — 558.
  100. Hughes J., Lindsay C., Griffits G. Morphology of ricin and abrin exposed endothelial cells in consistent with apoptotic cell death. // Hum. and Exp. Toxicol, 1996.-V. 15, № 5. P. 443−451.
  101. Hurna E. In vitro metody a ich vyuzitie v toxikologii. // Vet.med., 1997. V. 42, № 7. — P. 213 — 215.
  102. In vitro toxicology industrial platform (IVTIP) position paper, 9 February 2001: The role of an industrial platform in the area of in vitro testing. // ATLA, 2001. V. 29, № 4. — P. 487 — 492.
  103. Juranic Z., Stojiljkovic M., Bocarov-Stancic A. et al. T-2 toxin affects proliferation of three different neoplastic cell lines. // J. Exp. and Clin. Cancer Res., 1998.-V. 17, № 1.-P. 33−40.
  104. Khachatourians G. Metabolic effects of trichothecene T-2 toxin // Can. J. Physiol, and Pharmacol., 1990. V.68, N 7. — P. 1004 — 1008.
  105. Khan Q., Agarwal R., Seidel A. et al. DNA adduct levels associated with p53 induction and delay of MCF-7 cells in S phase after exposure tobenzoG. chrysene dihydrodiol epoxide enantiomers. // Mol. Carcinogenes, 1998.-V. 23,№ 2.-P. 115−120.
  106. Klein P., Buckner R., Kelly J., Coulombe R. Biochemical basis for the extreme sensivity of turkeys to aflatoxcin Bj. // Toxicol, and Appl. Pharmacol., 2000. № 1. — P. 45−52.
  107. Kuchowicz E., Rydzynski K. Can cytotoxic effects induced by industrial chemicals be time-dependent? // ATLA, 1999. V. 27. № 3. — P. 367−377.
  108. Lafarge -Frayssinet C., Decloitre F., Mousset S. et al. // Mut. Res., 1981.-V. 88.-P. 115−123.
  109. Laufraite S., Parent-Massin D., Rio В., Hoellinger H. Comparison of toxicity induced by T-2 toxin on human and rat granulo-monoctic progenitors with an in vitro model. // Hum. and Exp. Toxicol., 1995. V. 14,№ 8.-P. 672−678.
  110. Lawrence J., Dally J., Starkey S., Benford D. An evaluation of the skin irritation potential of four naturally occurring chemicals utilizing rat keratinocyte cultures. // Hum. and Exp. Toxicol., 1996. V. 15, № 2. — P.159.
  111. Leighton J., Nassaueur J., Tchao R. The chick embrio in toxicology: an alternative to the rabbit eye. // Food and Chem. Toxicol., 1985. V. 23, № 2. -P. 293 -298.
  112. Lopez de Cerain A., Gonzales C., Bello J. Intralaboratory variability in the assessment of the cytotoxic ranking of different surfactants. // J. Vet. Pharmacol, and Ther., 1997. V. 20, Suppl. № 1. — P.288.
  113. Louekari K. In vitro toxicology and the test guidelines. // ATLA., 1996. V. 24, № 3. — P. 435 — 438.
  114. Lutsky I., MorN. //Lab. Anim. Sci., 1981. V. 31. — P. 361 — 367.
  115. S., Darby N. // Proc. Soc. ExP. Boil. Med., 1958. V.98. — P. 574
  116. Malich G., Markovich В., Winder C. Human cell line toxicity of binary and ternary chemical mixtures in comparison to individual toxic effects of their components. // Arch. Environ. Contam. and Toxicol., 1998. V. 35, № 9.-P. 588−596.
  117. Mann D., Buenind G. Effect of T-2 toxin on the bovine immune system humoral factors. // Infection and immunity., 1982. V. 36.
  118. Matsumoto H., Ito Т., Ueno Y. // Japan. J. Exp. Med., 1978. V. 48. — P. 393−399.
  119. Mayek J., Talapkova D., Repka V. et al. The possibility of the evaluation of toxic and mutagenic effects of combustion products with the aid Drosophilae melanogaster flies. // Fire and Mater., 1985. V. 9, № 4. — P. 157−158.
  120. Mazumder P., Reddy B. Alternative methodologies to animal testing. // Everyman’s Sci., 2000. V.34, № 1. — P. 30 — 32.
  121. Mcintosh J., Heffron J. In vitro toxicological assessment of mixtures of organic solvents of industrial importance. // Biochem. Soc. Trans., 1998. -V.26,№L-P. 859.
  122. Mead C., Pentreath V. Comparison of rat primary astrocytes, C6 glioma and human 1321N1 astrocytoma cells for in vitro indicators of gliotoxicity. // Hum. and Exp. Toxicol, 1996. V. 15, № 8. — P. 663.
  123. Middlebrook J., Leatherman D. Differential association of T-2 and T-2 tetraol with mammalian cells. // J. Pharmacol, and Exp. Ther., 1989 (a). -V.250, № 3. P. 810−816.
  124. Middlebrook J., Leatherman D. Specific association of T-2 toxin with mammalian cells. // Biochem. Pharmacol., 1989 (6). V. '38, № 18. — P. 3093−3102.
  125. Mirocha C. In: Conference on mycotoxins in animal feeds and grains related to animal health. FDA / BVM, 1979. P. 289 — 373.
  126. Miyagawa C., Wu C., Kennedy D. et al. Protective effect of green tea extract and tea polyphenols against the cytotoxicity of 1,4-naphthoquinone in isolated rat hepatocytes. // Biosci., Biotechnol. and Biochem., 1997. V. 61, № 11.-P. 1901 — 1905.
  127. Neldon-Ortiz D., Qureshi M. Direct and microsomal activated aflatoxin Bj exposure and its effect on turkey peritoneal macrophage function in vitro. // Toxicol, and Appl. Pharmacol., 1991. V. 109, № 3. — P. 432−442.
  128. Ohno T. Validation study on five different cytotoxicity assays in Japan. // ATLA, 1996. V. 24, Spec. iss. — P. 142.
  129. Orlans F. the three R in research and education: A long road ahead in the Unated State. //ATLA, 1996. -V. 24, № 2. P. 151−158.
  130. Oswald I.P. Immunotoxicity of mycotoxins. // Rev. med. vet., 1998. -V.149, № 6. -P. 585.
  131. Pang V. et al. The toxicity of T-2 toxin in swine following topical application.//Fund and Appl. Toxicol., 1987.-V. 91.-P. 50−59.
  132. Pelagalli A., Belisario M., Squillacioti C. et al. The mycotoxin fumonisin B. inhibits integrin-mediated cell-matrix adhesion. // Biochimie, 1999. V. 81, № 10. — P. 1003 — 1008.
  133. Pelagalli A., Squllacioti C., Amorena M. et al. Inhibition of cell-matrix adhesion by fumonisin Bb // Rev. med. vet, 1998. V. 149, № 6. — P. 648.
  134. Pieckova E., Jesenska Z. Ciliostatic activity in day old chicks indicated microscopic fungi toxicity in vitro. //Ann Agr. and Environ. Med., 1997.- V. 4, № 1.-P. 35−36.
  135. Pier A.C., Richard J.L., Thurston J.R. Effects of mycotoxins onthimmunity and resistance of animals. // Natur. Toxins. Proc. 6. Int. Symp. Anim., Plant and Microbiol. Toxins. Uppsala — 1979. Oxford e.a. — 1980. -P. 691−699.
  136. Ponsoda X., Gomes Lechon M., Castell J. Toxicity and cell density monitoring in monolayer and three-dimensional cultures with the XTT assay. // ATLA, 1998. — V. 26, № 3. — P. 331 — 342.
  137. Ranjan Kumar S., Sinha Ashok K. Effect of aflatoxin Bi on meiotic index in quinea pigs. //Microbios Left., 1989.- V.41, № 162. P. 83 — 85.
  138. Rizzo A., Atroshi F., Ahotupa M. et al. Protective effect of antioxidants against free radicals mediated lipid peroxidation induced by DON and T-2 toxin. //J. Vet. Med. A. 1994. — V. 41, № 2. — P. 81 — 90.
  139. Robb J., Norval M. The use of a cytotoxicity test as a screening test for mycotoxis. // «Trichothecenes and other mycotoxins». Proc. Int. mycotoxin Symp., Sydney, Aug., 1984. Chuchester e.a., 1985. P. 375 -380.
  140. Roberfroid M., Goethals F. In vitro toxicology: A challenge for the 21st century.//ATLA, 1990.-V.18,№ 11.-P. 19−22.
  141. Rodiella V., Miles A., Jenner W., Hawks Worth G. Bismuth -induced metallothionein in cultured human proximal tubular cells failed to protect against metal-induced toxicity. // Hum. and Exp. Toxicol, 1997. — V. 16, № 7.-P. 413.
  142. Rosenstein Y., Lafarge -Frayssinet C. // Toxicol. Appl. Pharmacol., 1983.-V. 70.-P. 283 -288.
  143. Russel W., Birch R. The principles of humane experimental technique. Methuen, London, 1959. 253 P.
  144. M., Ecomoto M., Tatsuno T. // Microbial. Toxins, 1971. V. 6. -P. 299−380.
  145. Santa M., Pozuelo J., Lopez A., Sanz F. Toxicity of potential irritants in mammalian cells in vitro. // Ecotoxicol. and Environ Safety, 1996. — V. 34, № 1.-P. 56−58.
  146. Shanin M. Mutagenicity evaluation of nitroanilines and nitroaminophenols in Salmonella typhimurium. // Int. J. Cosmet. Sci., 1985. V.7, № 6. — P. 277−289.
  147. Shrivastava R., John G., Rispat G., Chevalier A., Massingham R. Can the in vivo maximum tolerated dose be predicted using in vitro techniques? // ATLA, 1991. V. 19, № 4. — P. 393 — 401.
  148. Smalley E., Strong F. In: Mycotoxin, Amsterdam, Elsevier, 1974. -P. 200−228.
  149. Sorenson W., Gerberick G., Lewis D., Castranova V. Toxicity of mycotoxins for the rat pulmonary macrophage in vitro. // Environ. Health Respect., 1986. V. 42, № 4. — P. 949 — 951.
  150. Spielman H., Genschow E., Liebsch M., Hall W. Determination of the starting dose for acute oral toxicity (LD50) testing in the up and downprocedura (UDP) from cytotoxicity data. // ATLA, 1999. № 6. — P. 957 966.
  151. Stammati A., Zampaglioni F., Zanetti C. The neutral red uptake assay: Comments on the results of the Instituto Superiore di Sanita in the EC/HO validation study.// ATLA, 1998. V. 26, № 1. — P. 61−68.
  152. Steyn P. S. The biosynthesis of mycotoxins. // Rev. med. vet., 1998. -V. 149, № 6.- P.469−478.
  153. Suzuki Т., Komatsu M., Isono H. Cytotoxocoty of paraquat and phospholipid peroxidation in rat hepatocytes. // Jap. J. Toxicol, and Environ Health, 1996. V. 42, № 1. — P. 10.
  154. Tajima O., Verhagen F., Groten J. Application of in vitro bioassays for the screening of mixtures of trichothecenes. // Rev.med.vet. 1998. — V. 149, № 6. — P.513.
  155. Tanimura Т., Sakamoto M. Alternatives to animal experiments in developmental toxicity studies. // Acta med. / Kiki Univ., 1995. V. 20, № 3. — P. 135−148.
  156. К., Kera K., Yazima T. // Virchows Arch. B. Cell. Path., 1978. -V. 27.-P. 359−370.
  157. Trusal L. Metabolism of T-2 mykotoxin by cultured cells. // Toxicon, 1986. V.24, № 6. — P. 597 — 603.
  158. Y. // Ann. Nutr. Alim., 1977. V. 31. — P. 885 — 890.
  159. Ueno Y. In: Trichothecenes — chemical, biological and toxicological aspects. Amsterdsam, Elsevier, 1983. P. 125 — 146.
  160. Ueno Y., Sato N., Ishii K. et al. Biological and chemical detection of trichotecene mycotoxins of Fusarium species. // Appl. Microbiol., 1973. -V. 25.-P. 699−704.
  161. Verma R., Raval P., Dube H. Effect of aflatoxin on liver and blood cells of rats. // Indian J. Microbiol., 1991. V. 31, № 1. — P. 87 — 89.
  162. Waterfleld C., Westmoreland C., Asker D. et al. Ethionine toxicity in vitro: The correlation of data from rat hepatocyte suspensions and monolayers with in vitro observation. // Arch. Toxicol., 1998. V. 72, № 9. — P. 588 -596.
  163. Watson D., Lindsay D. A critical review of biological methods for the detection of fungal toxins in foods and foodstuffs. // Science of Food and Agriculture, 1982. V.33. — P. 59 — 67.
  164. Wei R. et al. Improved skin test for detection on of T-2 toxin // Apll. Microbiol., 1972.-V. 23.-P. 1029−1030.
  165. Worth A., Balls M. The importance of the prediction model in the validation of alternative tests. // ATLA., 2001. V. 29, № 2. — P. l 35 — 143.
  166. Yagen В., Bergmann F., Barel S., Sintov A. Metabolism of T-2 toxin by rat brain homogenate. // Biochem. Pharmacol., 1991. V. 42, № 4. — P. 949−951.
  167. Yang J., Yeh S., Chang C. Lead acetate mytegenicity and mutation spectrum in the hypoxanthine guanine phosphoribosyltransferase gene of Chinese hamster ovary K1 cells. // Mol. Carcinogeneses, 1996. V. 17, № 4. -P. 181−191.
  168. H., Kubo R., Ueno Y. // J. Pharm. Dyn., 1981. V.4. -P.44
  169. Younis S., Al Hakkak Z., Yousit H. Cytotoxicity and mytagenicity of two ice-cream colorants in Allium сера. // J. Biol. Sci. Res., 1986. — V. 17, № 1.- P. 241−252.
  170. Yu Z., Cheng Т., Igisu H. Effects of hupoxia? Soman and their combination on PC12 cells. // J. Med. Coll. PLA, 1997. V. 12, № 3. — P. 173−176.
  171. Zbinden G. Aussagemoglichkeit des Tierexperiments in der Risikobeurteilung beim Menschen. // Off. Gesundheitsw., 1990. V. 52, № 1. — P. 16−18.
  172. Zbinden G. Les methods alternatives, present et avenir. // Sci. et Techn. anim. Lab., 1991.-V. 16, № 2.-P. 113 116.
  173. Zucco F. Cell death in vitro acute toxicity testing. // ATLA, 1996. -V. 24, Spec. iss.-P. 90.
Заполнить форму текущей работой

Пора сдавать?