Помощь в учёбе, очень быстро...
Работаем вместе до победы

Дизайн системы векторов для экспрессии каталитических антител

Диссертация: Дизайн системы векторов для экспрессии каталитических антител
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Сконструирована система экспрессии Fab — фрагментов каталитических антител, эффективно сопряженная с системой клонирования методом фагового дисплея. Отработаны условия экспрессии и очистки протеолитической легкой цепи антитела с23.5. Определены кинетические параметры этого абзима. Разработана эффективная стратегия экспрессии и очистки Fab — фрагментов и цепей каталитических антител. Осуществлена… Читать ещё >

Содержание

  • ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Экспрессия антител
      • 1. 1. 1. Рекомбинантные антитела
      • 1. 1. 2. Экспрессия антител в Escherichia col
      • 1. 1. 3. Экспрессия атител в дрожжах
      • 1. 1. 4. Экспрессия антител в клетках насекомых
      • 1. 1. 5. Экспрессия антител в клетках млекопитающих
    • 1. 2. Каталитические антитела
      • 1. 2. 1. Гидролитические антитела, полученные иммунизацией аналогами переходных состояний
      • 1. 2. 2. Природные каталитические антитела
  • ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТ
    • 2. 1. Материалы
    • 2. 2. Методы
      • 2. 2. 1. Конструирование векторов
      • 2. 2. 2. Экспрессия фрагментов антител
      • 2. 2. 3. Получение периплазматического экстракта
      • 2. 2. 4. Очистка экспрессированного продукта
      • 2. 2. 5. Денатурирующий электрофорез в полиакриламидном геле и окрашивание полиакриламидных гелей
      • 2. 2. 6. Иммуноблот
      • 2. 2. 7. Реакция релаксации суперскрученной плазмидной ДНК
      • 2. 2. 8. Выделение плазмидной ДНК
      • 2. 2. 9. Электрофорез в агарозном геле
      • 2. 2. 10. Анализ ассоциированности ДНК-гидролизующей активности с антителами методом аффинной сорбции
      • 2. 2. 11. Определение активности Fab фрагмента антитела 1F
  • ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
    • 3. 1. Разработка системы экспрессии для протеолитической легкой цепи
    • 3. 2. Клонирование эстеролитического антитела 1F
    • 3. 3. Экспрессия Fab-фрагмента эстеролитического антитела 1F
    • 3. 4. Моделирование Fab-фрагмента и анализ вероятного активного центра эстеролитического антитела 1F
    • 3. 5. Моделирование Fab-фрагмента и анализ вероятного активного центра ДНК-связывающего антитела MRL4. Экспрессия Fab-фрагмента ДНК-связывающего антитела MRL
  • ГЛАВА 4. ВЫВОДЫ

Дизайн системы векторов для экспрессии каталитических антител (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

За последнее десятилетие представления об антителах претерпели значительные изменения. Обнаружены новые свойства этих белков: способность катализировать химические превращения, цитотоксичность, способность проникать в клетку. Особое внимание уделяется исследованиям каталитических свойств антител, изучение которых интересно как с точки зрения решения фундаментальных проблем биокатализа — детализации механизмов катализа самых разнообразных реакций, так и для прикладных разработок, направленных на создание новых устойчивых биокатализаторов.

Естественно, что детальное изучение действия каталитического антитела, как и любого фермента, невозможно без клонирования его гена, мутагенеза и анализа мутантных форм. Самым распространенным на сегодняшний день методом получения продуцентов антител является гибридомная техника. Но давая возможность получать каталитические антитела, она не позволяет производить направленный мутагенез абзимов. Поэтому естественным продолжением развития этой области стало получение рекомбинантных антител в бактериальных и эукариотических культурах клеток.

Самой распространенной и развитой на сегодняшний день системой экспрессии антител является система клонирования и экспрессии одноцепочечных антител на основе вектора рСАМТАВ. Но применение одноцепочечных антител имеет много недостатков, одним из которых является возможность потери каталитической активности при переходе от интактного антитела к одноцепочечному. По этой причине актуальным является сохранение нативной структуры антиген-связывающего фрагмента при любых операциях с каталитическими антителами. Еще одним необходимым свойством векторов, используемых для работы с антителами, является их универсальность, обусловленная огромным разнообразием генов антител.

Так как на сегодняшний день абзимология предъявляет свои собственные требования к геноинженерным работам весьма актуальной задачей является создание системы клонирования и экспрессии, ориентированной на использование в исследованиях каталитических антител.

Целью настоящей работы является создание системы экспрессии и клонирования каталитических антител и ее использование на примере экспрессии трех гидролитических абзимов: протеолитической легкой цепи антитела с23.5, эстеролитического антитела 1F5 и ДНК-гидролизующего антитела MRL4, а также клонирование эстеролитического антитела 1F5 и структурный анализ активных центров антител 1F5 и MRL4.

ГЛАВА 4. ВЫВОДЫ.

1. Разработана эффективная стратегия экспрессии и очистки Fab — фрагментов и цепей каталитических антител.

2. Отработаны условия экспрессии и очистки протеолитической легкой цепи антитела с23.5. Определены кинетические параметры этого абзима.

3. Проклонированы гены легкой и тяжелой цепей эстеролитического антитела 1F5, первого полученного на основе теории идиотипических сетей абзима. Осуществлена экспрессия Fab-фрагмента 1F5 и показана активность продукта экспрессии.

4. На основе первичной последовательности и известных рентгеноструктурных данных для антител предложена модель Fab — фрагмента антитела 1F5 и высказано предположение о возможном участии в катализе диады Ser Н99 и His Н35.

5. Сконструирована система экспрессии Fab — фрагментов каталитических антител, эффективно сопряженная с системой клонирования методом фагового дисплея.

6. Осуществлена экспрессия ДНК-гидролизующего антитела MRL4 и показана активность продукта экспрессии.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Boulianne G.L., Hozumi N., Shulman M.J. Production of functional chimeric mouse/human antibody. 1984. Nature 312: 643 -646.
  2. Morrison, S.L. Johnson M.J., Herzenberg L.A., Oi V.T. Chimeric human antibody molecules: mouse antigen binding domains with human constant region domains. 1984. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 81: 6851−6855.
  3. Neuberger, M.S., Williams G.T., Mitchell E.B., Jouhal S.S., Flanagan J.G., Rabbits T.H. A hapten-specific chimeric IgE antibody with human physiological effector function. 1985. Nature 314: 268−270.
  4. Better M., Chang C.P., Robinson R.R., Horwitz A.H. Escherichia coli secretion of an active chimeric antibody fragment. 1988. Science 240: 1041−1043.
  5. P.T., Deur P.H., Foote J., Neuberger M.S., Winter G. 1986. Replacing the complementarity-determining regions in an human antibody with those from a mouse. 1986. Nature 321: 522−525.
  6. Riechmann L., Clark M., Waldmann H., Winter G. Reshaping human antibodies for therapy. 1988. Nature 322: 323−327.
  7. Bird R.E., Hardman K.D., Jacobson J.W., et al. Single-chain antigen-binding protein. 1988. Science 242: 423−426.
  8. Huston J.S., Levinson D., Mudgett-Hunter M., et al. Protein engineering of antibody binding sites: recovery of specific activity in an anti-digoxin single-chain Fvanalogue produced in Escherichia coli. 1988. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 58 795 883.
  9. Glockshuber R., Malin M., Pfitzinger I., Pliickthun A. A comparison of strategies to stabilize immunoglobulin Fv fragments. 1990. Biochemistry 29: 1362−1367.
  10. Huston J.S., McCartney J., Tai M.-S. Medical application of single-chain antibodies. 1993.Int. Rev. Immunol. 10: 195−217.
  11. Huston J.S., George A.J.T., Adams G.P., et al. Single-chain Fv radioimmunotargeting. 1996. Q. J. Nucl. Med. 40: 320−327.
  12. McCafferty J., Griffits A.D., Winter G., Chiswell D.J. Phage antibodies: filamentous phage displaying antibody variable domains. 1990. Nature 348: 552−554.
  13. Boleti E., Deonarain M., Spooner R.A., Smith A.J., Epenetors A.A., George A.J.T. Construction, expression and characterisation of single-chain anti-tumor antibody-IL-2 fusion protein. 1995. Ann. Oncol. 6: 945−950.
  14. Begent R.H.J., Verhaar M.J., Chester K.A. et al. Clinical evidence of efficient tumor targeting based on single-chain Fv antibody selected from a combinatorial library. 1996. Nat. Med. 2: 979−984.
  15. F., Prospero T., Winter G. 'Diabodies': small bivalent and bispecific antibody fragment. 1993. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444−6448.
  16. Skerra A., Pliickthun A. Assembly of a functional immunoglobulin Fv fragment in Escherichia coli 1988. Science 240: 1038−1041.
  17. Jost C.R., Kurucz I., Jacobus C.M., Titus J.A., George A.J.T., Segal D.M. Mammalian expression and secretion of functional single-chain Fv molecules. 1994. J. Biol. Chem. 269: 26 267−26 273.
  18. Dorai H., McCartney J.E., Hudziak R.M. et al. Mammalian cell expression of single-chain Fv (sFv) antibody protein and their C-terminal fusions with interleukin-2 and other effector domains. 1994. BioTechnology 12: 890−896.
  19. Bei R., Schlom J., Kashmiri S.V. Baculovirus expression of a functional single-chain immunoglobulin and its IL-2 fusion protein. J. Immunol. Methods 186: 245−255.
  20. Davis G.T., Bedzyk W.D., Voss E.W., Jacobs T.W. Single chain antibody (SCA) encoding genes: One-step construction and expression in eukaryotic cells. 1991. BioTechnology 9: 165−169.
  21. Ridder R., Schmitz R., Legay F., Gram H. Generation of rabbit monoclonal antibody fragments from a combinatorial phage display library and their production in the yeast Pichiapastoris. 1995. BioTechnology 13: 255−260.
  22. Whitelam G.C., Cockburn W., Owen M.R. Antibody production in transgenic plants. 1994.Biochem. Soc. Trans. 22: 940−948.
  23. Nicholis P.J., Johnson V.G., Andrew S.M., Hoogenboom H.R., Raus J.C., Youle R.J. Characterization of single chain antibody (scFv)-toxin fusion proteins produced in vitro in rabbit reticulocyte lysate. 1993. J. Biol. Chem. 268: 5302−5308.
  24. Amann E.J., Brosius J., Ptashne M. Vectors bearing a hybrid trp-lac promoter useful for regulated expression of cloned genes in Escherichia coli. 1983. Gene 25: 167−178.
  25. De Boer H.A., Comstock L.J., Vasser M. The tac promoter: A functional hybrid derived from the trp and lac promoters. 1983. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: 21−26.
  26. Tabor S., Richardson C.C. A bacteriophage T7 RNA polymerase/ promoter system for controlled exclusive expression of specific genes. 1985. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 1074−1081.
  27. Studier F.W., Moffatt B.A. Use of bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expression of cloned genes. 1986. J. Mol. Biol. 189: 113−120.
  28. Gold L., Pribnow D., Schneider T., Shinedling D., Singer B.S., Stormo G. Translational initiation in procaryotes. 1981. Annu. Rev. Microbiol. 35: 365−382.
  29. Shine J., Dalgarno L. Determinant of cistron specificity in bacterial ribosome. 1975. Nature 254: 34−36.
  30. Steitz J.A. Genetic signals and nucleotide sequences in messenger RNA. 1979. Biological Regulation and Development: Gene Expression. Plenum Publishing, New York, p. 349−363.
  31. Huston J.S., George A.J.T., Tai M.-S., McCartney J.E., Jin D., Segal, D.M., Keck, P., Opperman, H. Single-chain Fv design and production by preparative folding. Antibody Engineering, 2nd ed. 1995. Oxford University Press, Oxford, p. 185−198.
  32. Tanford C. Protein denaturation. 1968. Adv. Protein Chem. 23, 121−130.
  33. Lacks, S.A., Springborn, S.S. Renaturation of enzymes after polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulphate. 1980. J. Biol. Chem. 255: 7467−7475.
  34. Kurucz, I., Titus, J.A., Jost, C., Segal, D. Correct disulphide pairing and efficient refolding of detergent -solubilized single-chain Fv proteins from bacterial inclusion bodies. 1995. Mol. Immunol. 32: 1443−1448.
  35. Anfinsen, C.B., Haber, E., Sela M., White, F.H. The kinetics of formation of native ribonuclease during oxidation of the redused polypeptide chain. 1961. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 47: 1309−1314.
  36. Saxena, V.P., Wetlaufer, D.B. Formation of three-dimensional structure in proteins. I. Rapid nonenzyme reactivation of reduced lysozyme. 1970. Biochemistry 9: 5015−5021.
  37. Carmichael, D.F., Morin, J.E., Dixon, J.E. Purification and characterization of thiol: protein disulphide oxidoreductase from bovine liver. 1977. J. Biol. Chem. 252: 7163−7171.
  38. Timasheff, S.N., Arakawa, T. Stabilization of protein structure by solvents. Protein Structure: A Practical Approach, 2nd ed.1997. IRL Press, Oxford, p349−364.
  39. Lei, S.P., Lin, H.C., Wang, S.S., Callaway, L., Wilcox, G. Characterization of the Erwinia carotovora pelB gene and its product pectate lyase. 1987. J. Bacteriol. 169: 4379−4383.
  40. Ferenci, T., Silhavy, T.J. Sequence information required for protein translocation from the cytoplasm. 1987. J. Bacteriol. 169: 5339−5343.
  41. Ward, E.S., Gussow, D., Griffiths, A.D., Jones, P.T., Winter, G. Binding activities of a repertoire of single immunoglobulin variable domains secreted from Escherichia coli. 1989. Nature 341: 544−547.
  42. Knappik, A., Pliickthun, A. Engineered turns of a recombinant antibody improve its in vivo folding. 1995. Protein Eng. 8: 81−88.
  43. Suominen, I., Karp, M., Lahde, M., Koplo, A., Glumoff, T., Meyer, P., Mantsala, P. Extracellular production of cloned alpha-amylase by Escherichia coli. 1987. Gene 61: 165−172.
  44. Skerra, A. A general vector, pASK84, for cloning, bacterial production, and single-step purification of antibody Fab fragments. 1994. Gene 141: 79−86.
  45. George, A.J.T., Titus, J.A., Jost, C.R., et al. Redirection of T cell-mediated cytotoxicity by a recombinant single-chain Fv molecule. 1994. J. Immunol. 152: 18 021 809.
  46. Rodrigues, M.-L., Shalaby, M.R., Werther, W., Presta, L., Carter, P. Engineering a humanized bispecific (Fab')2 fragment for improved binding to T cells. 1992. Int. J. Canser Suppl. 7: 45−49.
  47. Carter, P., Kelley, R.F., Roudrigues, M.L., et al. High level Escherichia coli expression and production of bivalent humanized antibody fragment. 1992. BioTechnology 10: 163−168.
  48. Kipriyanov, S.M., Moldenhauer, G., Little, M. High level of production of soluble single chain antibodies in small-scale Escherichia coli cultures. 1997. J. Immunol. Methods 200: 69−75.
  49. Turner, D.J., Ritter, M.A., George, A.J.T. Importance of the linker in expression of single-chain Fv antibody fragments: optimization of peptide sequence using phage display technology. 1997. J. Immunol. Methods 205: 43−50.
  50. Wood, C., Boss, M.A., Kenten, J.H., Calvert, J.E., Roberts, N.A., Emtage, J.S. The synthesis and in vivo assembly of functional antibodies in yeast. 1985. Nature 314: 446−449.
  51. Horwitz, A.H., Chang, C.P., Better, M., Hellstrom, K.E., Robinson, R.R. Secretion of functional antibody and Fab fragment from yeast cells. 1988. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 8678−8682.
  52. Kukuruzinska, M.A., Bergh, M.L.E., Kackson, B.J. Protein glycosylation in yeast. 1987. Annu. Rev. Biochem. 56: 915−944.
  53. Eldin, P., Pauza, M.E., Hieda, Y., et al. High-level secretion of two antibody single-chain Fv fragments by Pichia pastoris. 1997. J. Immunol. Metnods 201: 67−73.
  54. Hasemann, C.A., Capra, J.D. High-level production of a functional immunoglobulin heterodimer in a baculovirus expression system. 1990. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 3942−3946.
  55. Zu Putlitz, J., Kubasek, W.L., Duchene, M., Marget, M., Von Speclit, B.-U., Domdey, H. Antibody production in baculovirus infected insect cells. 1990. BioTechnology 8: 651−655.
  56. Kang, C.Y. Baculovirus for expression of foreign genes. 1988. Adv. Virus Res. 35: 177−182.
  57. Luckow, V.A., Summers, M.D. Trends in the development of baculovirus expression system. 1988. BioTecnology 6: 47−51.
  58. Maeda, S. Expression of foreign genes in insects using baculovirus vectors. 1989. Annu. Rev. Enthomol. 34: 351−372.
  59. Miller, L.K. Baculoviruses as gene expression vectors. 1988. Annu. Rev. Microbiol. 42: 177−199.
  60. Groner, A. Specificity and safety of baculoviruses. The Biology of Baculoviruses. 1986. CRC Press, Boca Raton, Florida, p. 177−190.
  61. Granados, R.R., Federici, B.A., (Eds.) The Biology of Baculoviruses. 1986. CRC Press, Boca Raton, Florida.
  62. Friesen, P.D., Miller, L.K. The regulation of baculovirus gene expression. 1986. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 131: 31−35.
  63. Guarino, L.A. Enhancers of early gene expression. Invertebrate Cell System Applications. 1989. CRC Press, Boca Raton, Florida, p. 211−238.
  64. Adams, J.R., McClintock, J.T. Nuclear polyhedrosis viruses of insects. Atlas of Invertebrate Viruses. 1991. CRC Press, Boca Raton, Florida, p. 87−102.
  65. Bilimoria, S. The biology of nuclear polyhedrosis viruses. Viruses of Invertebrates. 1991. Marcel Dekker, New York, p. 1−24.
  66. Kool, M., Vlak, J.M. The structural and functional organization of the Autographa californica nuclear polyhedrosis virus genome. 1993. Arch. Virol. 130: 111.
  67. Summers, M.D., Smith, G.E. A Manual of Methods for Baculovirus Vectors and Insect Cell Culture Procedures. 1987. Tex. Agric. Exp. Station Bull., p.56−60.
  68. Matsuura, Y., Possee, R.D., Bishop, D.H.L. Baculovirus expression vectors: The requirements for high level expressionof proteins, including glycoproteins. 1987. J. Gen. Virol. 68: 1233−1238.
  69. Possee, R.D., Howard, S.C. Analysis of the polyhedrin gene promoter of the Autographa ealifornica nuclear polyhedrosis virus. 1987. Nucleic Acids Res. 15: 10 233−10 248.
  70. Luckow, V.A., Summers, M.D. High level expression of non-fused foreign genes with Autographa californica nuclear polyhedrosis virus expression vectors. 1989. Virology 170: 31−40.
  71. Hseih, P., Robbins, P.W. Regulation of asparagine-linked oligosaccharide processing: Oligosaccharide processing in Aedes albopictus moskito cells. 1984. J. Biol. Chem. 259: 2375−2382.
  72. Oker-Blom, C., Peterson, R.F., Summers, M.D. Baculovirus polyhedrion promoter directed expression of rubella virus envelope glycoproteins, El and E2, in Spodoptera frugiperda cells. 1989. Virology 172: 82−87.
  73. Kuroda, K., Hauser, C., Rott, R., Klank, H.-D., Doerfler, W. Expression of the influenza virus haemagglutonin in insect cells by a baculovirus vector. 1986. EMBO J. 5: 1359−1365.
  74. Miyamato, C., Smith, G.E., Farrell-Towt, J., Chizzonite, R., Summers, M.D., Ju, G. Production of human c-myc protein in insect cells infected with a baculovirus expression vector. 1985. Mol. Cell. Biol. 5: 2860−2866.
  75. Jeang, K.-T., Giam, C.-Z., Nerenberg, M., Khoury, G. Abundant synthesis of functional human T-cell leukemia virus type I p40x protein in eukaryotic cells by using a baculovirus expression vector. 1987./. Virol. 61: 708−713.
  76. Nyunoya, H., Akagi, T., Ogura, T., Maeda, S., Shimotohno, K. Evidence for phosphorylation of iram-activator p40x of human T-cell leukemia virus type I produced in insect cells with a baculovirus expression vector. 1988. Virology 167: 538 543.
  77. Lanford, R.E. Expression of Simian virus 40 T antigen in insect cells using a baculovirus vector. 1988. Virology 167: 72−77.
  78. Lanford, R.E., Luckow, V., Kennedy, R.C., Dreesman, G.R., Notvall, L., Summers, M.D. Expression and characterization of hepatitis B virus surface antigen polypeptide in insect cells with a baculovirus expression system. 1989. J. Virol. 63: 1549−1554.
  79. Weiss, S.A., Orr, T., Smith, G.C., Katler, S.S., Vaughn, J.L., Dougherty, E.M. Quantitative measurement of oxygen consumption in insect cell culture infected with polyhedrosis virus. 1982. BioTechno. Bioeng. 24: 1145−1151.
  80. Ellis, L., Levitan, A., Cobb, M.H., Ramos, P. Efficient expression in insect cells of a soluble, active human insulin receptor protein-tyrosine kinase domain by use of a baculovirus vector. 1988./. Virol. 62: 1634−1640.
  81. Greenfield, C., Patel, G., Clark, S., Jones, N., Waterfield, M.D. Expression of human EGF receptor with lig-and-stimulatable kinase activity in insect cells using a baculovirus vector. 1988.EMBOJ. 7: 139−144.
  82. Schneider, I. Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster. 1972. J. Embryol. Exp. Morphol. 27: 353−359.
  83. Sang, J.H. Drosophila cells and cell lines. 1981 .Adv. Cell Culture 1: 125−129.
  84. Echalier, G., Ohanessian, A. In vitro culture of Drosophila melanogaster cells. 1970. In vitro. 6: 162−168.
  85. Sarver, N., Stollar, V. Sindbis virus-induced cytopathic effect in clones of Aedes albopictus (Singh) cells. 1977. Virology 80: 390−398.
  86. Maroni, G., Otto, E., Latowski-Perry, D. Molecular and cytogenetic characterization of a metallothionin gene of Drosophila. 1986. Genetics 112: 493−502.
  87. Otto, E., Allen, J.M., Young, J.E., Palmiter, R.D., Maroni, G. A DNA segment controlling metal-regulated expression of Drosophila melanogaster metallothionin gene Mm. 1987. Mol. Cell. Biol. 7: 1710−1715.
  88. Bunch, T.A., Grinblat, Y., Goldstein, L.S. Characterization and use of the Drosophila metallotheonin promoter in cultured Drosophila melanogaster cells. 1988. Nucleic Acids Res. 16: 1043−1061.
  89. Nordberg, M., Nordberg, G.F. On the role of metallotheionin and cadmium induced renal toxicity. 1987. EXS 52: 669−674.
  90. Nordberg, M., Jin, T., Nordberg, G.F. Cadmium, metallotheionin and tubular renal toxicity. 1992. IARC Set Publ. 118: 293−299.
  91. Mahiouz, D.L., Aichinger, G., Haskard, D.O., George, A.J.T. Expression of recombinant anti-E-selectin single-chain Fv antibody fragment in stably transfected insect cell lines. 1998. J. Immunol. Methods 212: 149−160.
  92. Borrebaeck, C.A.K., Malmborg, A.C., Ohlin, M. Does endogenous glycosylation prevent the use of mouse monoclonal antibodies as cancer therapeutics? 1993. Immunol. Today 14: 477−481.
  93. Kozak, M. At least six nucleotide preceding the AUG initiator codon enhance translation in mammalian cells. 1987. J. Mol. Biol. 196: 947−953.
  94. Kozak, M. The scanning model for translation: an update. 1989. J. Cell. Biol. 108: 220−228.
  95. Voss, S.D., Schlokat, U., Grass, P. 1986. The role of enhancers in the regulation of cell-type-specific transcription control. 1986. Trend Biochem. Sci. 11, 287−293.
  96. Maniatis, T., Goodbourn, S., Fischer, J.A. Regulation of inducible and tissue-specific gene expression. 1987. Science 236: 1237−1242.
  97. Boshart, M., Weber, F., Jahn, G., Dorsch-Hasler, K., Fleckenstein, B., Schaffner, W. A very strong enhancer is located upstream of an immediate early gene of human cytomegalovirus. 1985. Cell 41: 521−530.
  98. Mason, P.J., Elkington, J.A., Lloyd, M.M., Jones, M.B., Williams, J.G. Mutations downstream of the polyadenylation site of a Xenopus beta-globin mRNA affect the position but not the efficiency of 3' processing. 1986. Cell 46: 263−270.
  99. Proudfoot, N.J. How RNA polymerase II terminates transcription in higher eukaryotes. 1989. Trends Biochem. Sei. 14: 105−111.
  100. Whiltle, N., Adair, J., Lloyd, C. et al. Expression in COS cells of a mouse/human chimeric R72.3 antibody. 1987. Protein Eng. 1: 499−506.
  101. Kettleborough, C.A., Saldanha, J., Heath, V.J., Morrison, C.J., Bendig, M.M. Humanisation of a mouse monoclonal antibody by CDR grafting: the importance of framework residues on loop confirmation. 1991. Protein Eng. 4: 773−779.
  102. Bebbington, C.R., Renner, G., Thompson, S., King, D., Abrams, D., Yarranton, G.T. High level expression of a recombinant antibody from myeloma cells using a Glutamine Synsetise gene as an amplifiable selectable marker. 1992. BioTechnology 10:169−177.
  103. Cockett, M.I., Bebbington, C.R., Yarranton, G.T. The use of engineered E1A genes to transactivate the hCMV-MIE promoter in permanent CHO cell lines. 1991. Nucleic Acids Res. 19:319−327.
  104. Colcher, D., Milenic, D., Roselli, M., et al. Characterization and biodistribution of recombinant/chimeric construct of the monoclonal antibody B72.3. 1989. Cancer Res. 49: 1738−1746.
  105. King, D.J., Adair, J.R., Angal, S., et al. Expression, purification and characterization of a mouse: human chimeric antibody and chimeric Fab' fragment. 1992. Biochem. J. 281: 317−325.
  106. Peakman, T.C., Worden, J., Harris, R.H., et al. Comparison of expression of a humanized monoclonal antibody in mouse NSO myeloma cells Chinese hamster ovary cells. 1994. Human Antibodies Hybridomas 5: 65−70.
  107. Owen, R.J., King, D.J., Howat, D., et al. Tumour binding properties of R72.3 Fv fragments. 1991. Antibody Immunoconjugates Radiopharm. 4: 459−468.
  108. Riechmann, L., Foote, J., Winter, G. Expression of an antibody Fv fragment in myeloma cells. 1988. J. Mol. Biol. 203: 825−833.
  109. Marasco, W.A., Haseltine, W.A., Chen, S. Design, intracellular expression and activity of a human anti-human immunodeficiency virus type 1 gpl20 single-chain antibody. 1993. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:7889−7895.
  110. Hwu, P., Shafer, G.E., Treisman, J., et al. Lysis of ovarian canser cells by human lymphocytes redirected with a chimeric gene composed of an antibody variable region and the Fc receptor y chain. 1993. J. Exp. Med. 178: 361−370.
  111. Stancovski, I., Schindler, D.G., Waks, T., Yarden, Y" Sela, M., Eshhar, Z. Targeting of T lymphocytes to Nuc/HER2-expressing cells using chimeric single chain Fv receptors. 1993 .J. Immunol. 151:6577−6583.
  112. Greenman, J., Jones, E., Wright, M.D., Barclay, A.N. The use of intracellular single-chain antibody fragments to inhibit specifically the expression of cell surface molecules. 1996. J. Immunol. Methods 194: 169−174.
  113. Ridder, R., Geisse, S., Kleuser, H., Kawalleck, P., Gram, H. A COS-cell-based system for rapid production and quantification of ScFv: IgCk antibody fragment. 1995. Gene 166: 273−280.
  114. King, D.J., Byron, O.D., Mountain, et al. Expression, purification and characterization of B72.3 Fv fragments. 1993. Biochem. J. 290: 723−728.
  115. Tramontano A., Janda K.D., Lerner R.A. Catalytic antibodies. 1986. Science 234: 1566−1570.
  116. Pollack S.J., Jacobs J.W., Schultz P.G. Selective chemical catalysis by an antibody. 1986. Science 234: 1570−1573.
  117. Lerner R.A., Benkovic S.J., Schultz R.G. At the crossroads of chemistry and immunology: catalytic antibodies. 1991. Science 252: 659−667.
  118. S.J. 1992. Annu. Rev. Biochem. 61: 29−54.
  119. Wirsching P., Ashley J.A., Benkovic S.J., Janda K.D., Lerner R.A. An unexpectedly efficient catalytic antibody operating by ping-pong and induced fit mechanisms. 1991. Science 252: 680−685.
  120. Gun J.C., Huang W., Scanlan. Kinetic and mechanistic characterisation of an efficient hydrolytic antibody evidence for the formation of an acyl intermediate. 1994. J. Am. Chem. Soc. 116: 6062−6069.
  121. Zhou G.W., Guo J., Huang W., Fletterick R.J., Scanlan T.S. Crystal structure of a catalytic antibody with a serine protease active site. 1994. Science 265: 1059−1064.
  122. Golinelli-Pimpaneau B., Gigant B., Bizebard T., Navaza J., Saludjian P., Zemel R., Tawfik D.S., Eshhar Z., Green D.S., Knossow M. Crystal structure of a catalytic antibody Fab with esterase-like activity. 1994. Structure 2: 175−183.
  123. Stewart J.D., Krebs J.F., Siuzdak G., Berdis A.J., Smithrud D.B., Benkovic S.J. Dissection of an antibody-catalyzed reaction. 1994. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 91: 7404−7409.
  124. Jackson D.Y., Jacobs J.W., Sugasawara R., Reich S.H., Bartlett P.A., Schultz P.G. An antibody-catalyzed Ciaisen rearrangement. 1988. J. Am. Chem. Soc. 110: 4941−4942.
  125. Hilvert D., Carpenter S.H., Nared K.D., Auditor M.M. Catalysis of concerted reactions by antibodies: the Claisen rearragement. 1988. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85: 4953−4955.
  126. Haynes M.R., Stura E.A., Hilvert D., Wilson I.A. Routes to catalysis: structure of a catalytic antibody and comparison with its natural counterpart. 1994. Science 263: 646−652.
  127. Gouverner V.E., Houk K.N., de Pascual-Teresa B., Beno B., Janda K.D., Lerne R.A. Control of the exo and endo pathways of the Diels-Alder reaction by antibody catalysis. 1993. Science 262: 204−208.
  128. Braisted A.C., Schultz P.G. An antibody-catalyzed oxy-Cope rearrangement. 1994. J. Am. Chem Soc. 116:2211−2212.
  129. Hsieh L.C., Stephans J.C., Schultz P.G. An efficient antibody- catalysed oxygenation reaction. 1994. J. Am. Chem. Soc. 116: 2167- 2168.
  130. Hsieh L.C., Yonkovich S., Kochersperger L., Schultz P.G. Controlling chemical reactivity with antibodies. 1993. Science 260: 337−339.
  131. Iverson B.L., Lerner R.A. Sequence-specific peptide cleavage catalyzed by an antibody. 1989. Science 243: 1184−1188.
  132. Janda K.D., Shevlin C.G., Lerner R.A. Antibody catalysis of a disfavored chemical transformation. 1993. Science 259: 490−493.
  133. Shabat D., Itzhaky H., Reymond J.-L., Keinan E. Antibody catalysis of a reaction otherwise strongly disfavored in water. 1995. Nature 374: 143−146.
  134. Sinha S.C., Keinan E. Catalytic antibodies in organic synthesis. Asymmetric synthesis of (-)-a-multistriatin. 1995. J. Am. Chem. Soc. 117: 3653−3654.
  135. Miyashita H., Karaki Y., Kikuchi M., Fujii I. Prodrug activation via catalytic antibodies. 1993. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 90: 5337−5340.
  136. Landry D.W., Zhao K., Yang G.X., Glickman M., Georgiadis T.M. Antibody-catalyzed degradation of cocaine. 1993. Science 259: 1899−1901.
  137. Stephens D.B., Iverson B.L. Catalytic polyclonal antibodies. 1993. Biochem. Biophys. Res. Com. 192: 1439−1444.
  138. Srewart J.D., Benkovich S.J. Transition-state stabilization as a measure of the efficiency of antibody catalysis. 1995. Nature 375: 388−391.
  139. Thorn S.N., Daniels R.G., Auditor M.-T.M., Hilvert D. Large rate accelerations in antibody catalysis by strategic use of haptenic charge. 1995. Nature 373: 228−230.
  140. Schultz P.G., Lerner R.A. From molecular diversity to catalysis: lessons from the immune system. 1995. Science 269: 1835−1842.
  141. Tawfik D.S., Green B.S., Chap R., Sela M., Eshhar Z. catELISA: a facile general route to catalytic antibodies. 1993. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 373−377.
  142. Paul S., Heinz-Arian P., Said S.I. Autoantibody to YIP in human circulation. 1985.Biochem. Biophys. Res. Com. 130: 479−485.
  143. Paul S., Voile D.J., Beach C.M., Johnson D.R., Powell M.J., Massey R.J. Catalytic hydrolysis of vasoactive intestinal peptide by human autoantibody. 1989. Science 244: 1158−1162.
  144. Paul S., Voile D.J., Mei S. Affinity chromatography of catalytic autoantibody to vasoactive intestinal peptide. 1990. J. Immunol. 145: 1196−1199.
  145. Mei S., Mody B., Eklund S.H., Paul S. VIP hydrolisis by antibody light chains. 1991 .J.Biol. Chem. 266: 15 571−15 574.
  146. Sun M., Gao Q.S., Li L., Paul S. Proteolytic activity of an antibody light chain. 1994. J. Immunol. 153: 5121−5126.
  147. A.M., Гололобов Г. В., Квашук O.A., Габибов А. Г. Анти-идиотипические и природные каталитические антитела. 1991. Молекуляр. Биология. 25: 593−602.
  148. Gao Q.S., Sun М., Tyutyulkova S., Webster D., Rees A., Tramontano A., Massey R.J., Paul S. Molecular cloning of a proteolytic antibody light chain. 1994. J. Biol. Chem. 269: 32 389−32 393.
  149. Gao Q.S., Sun M., Rees A.R., Paul S. Site-directed mutagenesis of proteolytic antibody light chain. 1995. J. Mol. Biol. 253: 658−664.
  150. Shuster A.M., Gololobov G.Y., Kvashuk O.A., Bogomolova A.E., Smirnov I.V., Gabibov A.G. DNA hydrolyzing autoantibodies. 1992. Science 256: 665−667.
  151. Gololobov G.V., Chernova E.A., Schourov D.V., Kudelina I.A., Smirnov I.V., Gabibov A.G. Cleavage of supercoiled plasmid DNA by autoantibody Fab fragment: Application of the flow linear dichroism technique. 1995. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 92: 254−257.
  152. Gololobov G.V., Rumbley K., Rumbley J., Schourov D.V., Makarevich O.I., Gabibov A.G., Voss E., Rodkey S. DNA hydrolysis by monoclonal anti-ssDNA autoantibody BV 04−01: origins of catalytic activity 1997. Mol. Immunol., 34 (5), 1083−1093.
  153. Ulrich H.D., Patten P.A., Yang P.L., Romesberg F.E., Schultz P.G. Expression studies of catalytic antibodies. 1995. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 92: 11 907−11 911.
Заполнить форму текущей работой

Пора сдавать?