Помощь в учёбе, очень быстро...
Работаем вместе до победы

Кинетика биолюминесцентной реакции в нетрадиционных средах

Диссертация: Кинетика биолюминесцентной реакции в нетрадиционных средах
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Органических растворителей в реакционную среду в небольших концентрациях (0,5−18об.%) вызывает активацию начальной скорости биолюминесцентной реакции, которая выражается в возрастании начальной скорости и квантового выхода реакции. Увеличение интенсивности свечения с альдегидами разной длины цепи составляет от 110 до 170% для люциферазы P. leiognathi и от 110 до 370% для люциферазы V.harveyi. При… Читать ещё >

Содержание

  • ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Структура и каталитические свойства бактериальных люцифераз РЛе^паМ и К/шгуеу/
    • 1. 2. Ферментативный катализ в водно-органических средах
      • 1. 2. 1. Роль различных взаимодействий в поддержании нативной конформации белков
      • 1. 2. 2. Классификация органических растворителей
      • 1. 2. 3. Эффекты воздействия среды на конформацию различных белков
      • 1. 2. 4. Роль воды в ферментативном катализе, проводимом в водно-органических средах
      • 1. 2. 5. Влияние микроокружения на каталитические свойства ферментов
      • 1. 2. 6. Модели действия органических растворителей на белковые макромолекулы
    • 1. 3. Постановка задач исследования
  • ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
  • ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
    • 3. 1. Влияние органических растворителей на кинетические параметры реакций, катализируемых люциферазами из РЛе’ю^шйЫ и V. кагуеу'г
      • 3. 1. 1. Интенсивность свечения люцифераз в водно-органических средах
      • 3. 1. 2. Влияние органических растворителей на константу спада биолюминесценции бактериальных люцифераз

Кинетика биолюминесцентной реакции в нетрадиционных средах (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Люциферазы, флавинсодержащие монооксигеназы, из разных видов светящихся бактерий трансформируют энергию химических связей в световую. Это свойство и определяет пристальный интерес исследователей к этому ферменту. На основе бактериальных люцифераз разрабатываются методы биолюминесцентного анализа, которые характеризуются экспрессивностью и высокой чувствительностью. Ферментативные диагностикумы используются для мониторинга окружающей среды, контроля чистоты воздуха, качества природных и сточных вод, в медицине и гигиене, в сельском хозяйстве и пищевой промышленности [1, 2, 3]. Этим определяется и практический интерес к результатам фундаментальных исследований в области структурно-функциональной организации люциферазы.

Структурно-динамическая организация белков, представляющая собой фундаментальную проблему современной биофизики, включает в себя как баланс межмолекулярных взаимодействий, который приводит к установлению строго определенной структуры белка, так и физические механизмы вариации структуры биополимера, зависящие от биохимической (или функциональной) активности и от заданных внешних воздействий. Для направленного изменения структуры белков наряду с генной инженерией и белковым дизайном одним из перспективных подходов считается «дизайн среды», который предполагает многообразие методов в использовании неводных реакционных сред: мицелл, микроэмульсий, индивидуальных органических растворителей и их смесей, или водно-органических растворов. Моделирование физико-химических свойств среды для ферментативного катализа путем введения органических растворителей в последнее время получило широкое распространение. Помимо практического применения в биотехнологии и медицине методы «неводной» энзимологии позволяют смоделировать многие биохимические процессы 5 функционирование биомембранных белков, окружение ферментов in vivo, сдвиг равновесия каталитических реакций и т. д.) и вызывать при этом неожиданные эффекты: увеличение скорости ферментативного катализа, изменение рН-памяти, субстратной специфичности, термостабильности, количества продукта реакции и каталитических констант, катализ в практически безводных органических растворителях.

Введение

органических растворителей в реакционные смеси ферментов влияет на микроокружение белка. Активность ферментов в смесях с органическими растворителями определяется их различными физико-химическими характеристиками, такими как гидрофобность, сольва-тирующая способность, геометрия молекулы, диэлектрическая проницаемость, поверхностное натяжение, способность образовывать водородные связи, вязкость, рН-раствора, химическая природа используемого буферного иона [4, 5].

Сравнительное изучение кинетического поведения люцифераз при заданном изменении микроокружения в системах с органическими растворителями представляется одним из перспективных подходов к изучению структуры и свойств фермента. Сопоставление динамики кинетических параметров биолюминесценции с физико-химическими характеристиками среды, окружающей фермент, позволит получить информацию о том, за счет каких взаимодействий происходит образование и распад фермент-субстратного комплекса люцифераз с альдегидами, и расширить представления о самом ферменте и механизмах биолюминесценции.

Целью данной работы является сравнительное изучение кинетики биолюминесцентной реакции, катализируемой люциферазами из двух видов светящихся бактерий Photobacterium leiognathi и Vibrio harveyi при направленном изменении свойств реакционной среды посредством введения органических растворителей. 6.

В задачи исследования входило:

1. Исследовать динамику кинетических параметров биолюминесценции люцифераз из двух видов светящихся бактерий РЛею^аШ и У. кап?еу1 при введении органических растворителей в реакционную среду.

2. Оценить применимость термодинамической модели влияния органических растворителей на белки для прогноза денатурирующего действия растворителей на люциферазы.

3. Сопоставить кинетические параметры биолюминесценции, характеризующие различные стадии реакции, со следующими параметрами органических растворителей: параметром гидрофобности (-1о§ Р), способностью образовывать водородные связи, донорно-акцепторными свойствами растворителей и диэлектрической проницаемостью.

4. Определить типы взаимодействия органических растворителей с люциферазами по отношению к флавинмононуклеотиду и альдегидам разной длины цепи. 7.

ВЫВОДЫ.

1.

Введение

органических растворителей в реакционную среду в небольших концентрациях (0,5−18об.%) вызывает активацию начальной скорости биолюминесцентной реакции, которая выражается в возрастании начальной скорости и квантового выхода реакции. Увеличение интенсивности свечения с альдегидами разной длины цепи составляет от 110 до 170% для люциферазы P. leiognathi и от 110 до 370% для люциферазы V.harveyi. При более высоких концентрациях органические растворители ингибируют биолюминесцентную реакцию, катализируемую люциферазами Photobacterium leiognathi и Vibrio harveyi.

2. Люцифераза V. harveyi более стабильна к действию органических растворителей: для ее инактивации, также как и для активации требуется большая концентрация органического растворителя, чем для люциферазы P.leiognathi.

3. Изменения кинетических параметров реакции как интенсивности свечения, так и константы спада светоизлучения биолюминесцентной реакции при добавлении органических растворителей для люциферазы P. leiognathi в большей мере связаны с длиной цепи используемого альдегида, тогда как для люциферазы V. harveyi зависят от природы и свойств используемого растворителя.

4. Ингибирующий эффект органических растворителей на лю-циферазы коррелирует с константой их гидрофобности (-^Р) и денатурирующей силой (ДС) с низкими коэффициентами линейной корреляции (50−80%), но эти параметры могут быть использованы для прогноза ингибирующего действия органических растворителей на люциферазы.

5. С увеличением концентрации органических растворителей возрастает Км по Си для обеих люцифераз и по Сю для люциферазы У. кап>еу1, и уменьшается Км по С12 и Сю для люциферазы РЛе^пшЫ, то есть, при связывании люцифераз с альдегидами в первом случае преобладают гидрофобные, а во втором — электростатические взаимодействия.

6. Эффект введения органических растворителей характеризуется различными типами взаимодействий этих эффекторов с люци-феразами, и зависит от концентрации растворителя и используемого субстрата. Общей чертой взаимодействия растворителей с лю-циферазами является конкурентный тип ингибирования реакции только с тетрадеканалем, что позволяет сделать предположение о специфическом связывании этих растворителей в области дисталь-ной метальной группы тетрадеканаля.

7. При введении в реакционную смесь органических растворителей с диэлектрической проницаемостью меньшей, чем у воды, происходит уменьшение константы спада светоизлучения или стабилизация возбужденного интермедиата, которая зависит от донорно-акцепторных свойств растворителя и типов взаимодействий люцифераз с субстратами. То есть, уменьшение константы спада светоизлучения наблюдается в полярных апротонных растворителях (ДМСО, ацетон) и в присутствии спиртов для реакции люцифераз с теми альдегидами, которые взаимодействуют с ними гидрофобно {У.кап?еу1 с деканалем и тет-радеканалем, РЛею^аШ с терадеканалем). При введении в реакционную смесь органических растворителей с диэлектрической проницаемостью большей, чем у воды (формамид), происходит возрастание константы спада светоизлучения или дестабилизация возбужденного интермедиата для обеих люцифераз с тетрадеканалем, вероятно, за счет ослабления электростатических взаимодействий при повышения диэлектрической проницаемости среды. iis.

Показать весь текст

Список литературы

  1. И.И., Рыгов С. А. и др. Биолюминесцентный способ определения активности антипротеаз.// Бил. эксп. биол. и мед., 1989, т. 100, N 11, с. 629−630.
  2. Т.В., Нифантьева О. Е. и др. Изучение степени интоксикации больных при перитонитах.// Лабораторное дело, 1990, N 9, стр. 23−25.
  3. В.А., Гительзон И. И. Бактериальная биолюминесценция и биолюминесцентный анализ.// Биофизика, 1982, т.27, вып. 6, с. 937−953.
  4. А.К., Левашов А. В. Стабильность ферментов в системах с органическими растворителями.//Биохимия, 1998, т. 63, вып. 3, с. 408−421.
  5. Gupta, M.N. Enzyme function in organic solvents.// Eur. J. Biochem., 1992, vol. 203, p. 25−32.
  6. И.И., Родичева Э. К. и др. Светящиеся бактерии.-Новосибирск: Наука, 1984.
  7. Huang S., Tu S-C. Identification of a catalytic base in bacterial luciferase by chemical rescue of a dark mutant. //Biochem., 1997, vol. 36, N 48, p. 1 460 914 615.
  8. А., О Kane D.J., Szalay A.A. The (3-subunit polypeptide of V. harveyi luciferase determines light emission at 42 °C. //Mol.Gen.Genet., 1991, vol.230, p.385−393.
  9. Fisher AJ, Raushel F.M., Baldwin T. O, Rayment I. Three-dimensional structure of bacterial luciferase from Vibrio harveyi at 2.4 A resolution. //J.Biol.Chem., 1995, vol. 34, N 20, p.6581−6586.
  10. Fisher A.J., Thompson T.B., Thoden J.B., Baldwin Т.О., Rayment I. The 1.5 A resolution crystal structure of bacterial luciferase in low salt conditions.// J. Biol. Chem., 1996, vol. 271, N 34, p.21 956−21 968.119
  11. Moore S.A., James M.N.G., О Kane D.J., Lee J. Crystal structure of a flavoprotein related to the submits of bacterial luciferase. //The EMBO Journal, 1993, vol.12, N5, p.1767−1774.
  12. Sandalova Т., Lindqvist Y. Three-dimensional model of the a-subunit of bacterial luciferase. //Proteins: structure, function, genetics, 1995, vol.23, p.241−255.
  13. А.И., Сандалова Т. П. Структурно-филогинетический анализ бактериальных люцифераз.// Препринт N73B СО АН СССР, Институт физики им. Л. В. Киренского, Красноярск, 1987.
  14. Waddle J.J., Johnston T.C., Baldwin Т.О. Polypeptide folding and dimerization in bacterial luciferase occur by a concerted mechanism in vivo. //Biochemistry, 1987, vol.26, p.4917−4921.
  15. Kuwabara S., Cjrmier M.J., Dure L.S. at all. Crystalline bacterial luciferase from Photobacterium fisheri. H Biochemistry, 1965, vol.53, p. 822−828.
  16. Baldwin Т.О., Nicoli M., Becvar J.E., and Hastings J.W. Bacterial luciferase: binding of oxidized flavin mononucleotide. //J.Biol.Chem., 1975, vol.250, N8, p. 2763−2768.
  17. Baldwin Т.О., Chen L.H. at all. Site-directed mutagenesis of bacterial luciferase: Analysis of the «essential» thiol. //Biolum. Chemilum., 1989, vol.4, p.40−48.
  18. Meighen E.A., Hastings J.W. Binding site determination from kinetic data. //J.Biol.Chem., 1971, v.246, p.7666−7674.
  19. Lee J. The mechanism of bacterial bioluminescence. //Chemi- and Bioluminescence, Marcel Dekker, New York, 1985.120
  20. Mitchel G., Hastings J.W. The effect of flavin isomers and analogues upon color of bacterial bioluminescence. //J.Biol.Chem., 1969, vol.244, N10, p.2572−2576.
  21. Ghisla S., Massey V., Yagi K. Preparation and some properties of 6-substituted flavins as active site probes for flavin enzymes. //Biochemistry, 1996, vol. 25, p. 3282−3289.
  22. B.B., Заворуев B.B., Высоцкий E.C., Получение и некоторые свойства «альдегидного фактора» из светящихся бактерий. //Изв. СО АН СССР, 1981, № 15, Сер. биол. наук, вып. З, с.49−53.
  23. В.Н., Кратасюк Г. А., Родионова Н. С., Фиш A.M., Белобров П. И. Биферментная система NAJDHiFMN-оксидоредуктаза-люцифераза из светящихся бактерий. //Биохимия, 1984, т.49, вып.4, с.692−702.
  24. В.Н., Родионова Н. С., Белобров П. И. Изучение эффективности работы биферментной системы NADHiFMN-оксидоредуктаза-люцифераза из светящихся бактерий. //Биохимия, 1985, т.50, вып. З, стр.401−405.
  25. Н.С., Петушков В. Н., Белобров П. И. Кинетические особенности переключения бактериальной люциферазы с одного альдегидного субстрата на другой. //Биофизика, т. ХХХШ, вып. З, с.396−400.
  26. JI.A. Проблемы биологической физики. М: Наука, 1977, 336с.
  27. Holzman T.L., Baldwin Т.О. Isolation of bacterial luciferases by affinity chromatography on 2,2-diphenylpropylamine-sepharose: phosphate-mediated binding to an immobilized substrate analogue. // Biochemistry, 1982, vol.21, p.6194−6201.
  28. B.C., Егоров H.C. Мультиферментная модель бактериальной люциферазы. //Боорг.химия, 1981, т.7, N11, с. 1605−1626.
  29. Balny С., Hastings J.W. Fluorescence and bioluminescence of bacterial luciferase intermediates. // Biochemistry, 1975, vol. 14, N21, p.4719−4722.121
  30. Hastings J.W., Balny С. The oxygenated bacterial luciferaseflavinintermediate. Reaction products via the light and dark pathways. // J.Biol.Chem., 1975, vol.250, N18, p.7288−7293.
  31. Xi.L., Tu S-C. Construction and characterization of hybrid luciferases coded by lux genes from X. Luminescens and V. Fisheri. //Photochem. Photobiol., 1993, vol.57, N4, p.714−719.
  32. H.A., Сандалова Т. П. Сравнительное изучение температурных эффектов на бактериальные люциферазы. //Биохимия, 1996, т. 61, N2, с.205−214.
  33. Francisco W. A., Abu-Soud Н. М., Topgi R., Baldwin Т. О., Raushel F. М. Interaction of bacterial luciferase with 8-substituted flavin mononucleotide derivatives. // J.Biol.Chem., vol. 271, N 1, 1996 p. 104−110.
  34. F. Mc Capra F. Mechanisms in chemiluminescence and bioluminescence -unfinished business. //Biolum. Chemilum., 1992, p.7−15.
  35. Raushel F.M. and Baldwin Т.О. Proposed mechanism for the bacterial bioluminescence reaction involving a dioxirane intermediate. //Biochem. and Biophys. Reseach Communication, 1989, vol.164, N 3, p.1137−1142.
  36. Baldwin Т.О. Deuterium Kinetic Isotope Effects and the Mechanism of the Bacterial Luciferase Reaction. // Biochemistry, 1998, vol. 37, p.2596−2606.
  37. Tu, S-C. Isolation and properties of bacterial luciferase-oxygenated flavin intermediate complexed with long-chain alcohols. //Biochemistry, 1979, vol.18, N26, p.5940−5945.
  38. Francisco, W.F., Abu-Soud, H.M., Baldwin Т.О., Raushel F.M. Interaction of bacterial luciferases with aldehyde substrates and inhibitors. //The Journal of Biologicol Chemistry, 1993, vol.268, N33, p. 24 734−24 741.
  39. Curry S, Lieb W.R., and Franks N.P. Effects of general anesthetics on bacterial luciferases enzyme from Vibrio harveyi: An anesthetic target site with differential sensitive. // Biochemistry, 1990, vol. 29, p.46 441−4652.
  40. M., Уэбб Э., Ферменты, — Москва: Издатинлит, 1961.12 242: Шульц, Г., Ширмер, Р., Принципы структурной организации белков.-Москва: Мир, 1982.
  41. Рубин А. Б, Биофизика, кн.1.- Москва: Высшая школа, 1987.
  42. Волькенштейн М. В, Биофизика.- Москва: Высшая школа, 1989.
  43. Цоу Чун-Лу Роль гибкости активного центра в ферментативном катализе. //Биохимия, 1998, том 63, вып. 3, с. 300−307.
  44. Ю.А., Потапенко А. Я. Физико-химические основы фотобиологических процессов. Москва: Высшая школа, 1989, с. 38−41.
  45. Heris P.L., Severean F. FTIR spectroscopic characterization of protein structure in aqueous and nonaqueous media. // J.Mol.Catalysis B: Enzymatic, 1999, vol.7, N 1−4, p. 201−221.
  46. X. Растворители и эффекты среды в органической химии. -Москва: Мир, 1991.
  47. Ю.А. Растворитель как средство управления химическим процессом. Ленинград: Химия, 1990.
  48. Ю.А. Не только в воде.- Ленинград: Химия, 1989.
  49. Klibanov, A.M. Enzymatic catalysis in anhydrous organic solvents. // TIBS, 1989, vol.14, p.141−149.
  50. Zaks A., Klibanov A.M. Enzyme-catalyzed processes in organic solvents. //Proc. Natl. Acad. Sci., 1985, vol. 82, N 10, p. 410−415.
  51. , Ю.И., Азизов Ю. М., Абатуров Л. В., Коган, Г.А., Росляков В. Я. Влияние /JMSO на вторичную структуру некоторых глобулярных белков. //Биофизика, 1972, XVII, с. 390−395.
  52. Arnold, F.H. Protein design for non-aqueous solvents.// Protein Engineering, 1988, N2, p.21−25.
  53. Zaks, A., Klibanov, A.M. Enzymatic catalysis in organic media at 100 °C. // Science, 1984, vol. 224, p. 1249−1251.
  54. A.A., Березин И. В. Ферментативный катализ.- Из-во МГУ, 1980, стр. 144.123
  55. Schmitke J.L., Stern L. J., and Klibanov A. M. The crystal structure of subtilisin Carlsberg in anhydrous dioxane and its comparison with those in water and acetonitrile. // Proc. Natl. Acad. Sci., 1997, vol. 94, p. 4250−4255.
  56. Э.В., Зенченко T.A. Упругие свойства триклинных кристаллов лизоцима в безводном растворителе. // Биофизика, 1998, т.43, вып. 1, с.31−34.
  57. Serralheiro M.L.M. Irreversible thermoinactivation of a-chymotrypsin in buffer and water miscible organic solvent. Comparison with a reverse micellar system. //Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 1999, vol.7, N1−4, p.191−205.
  58. P., Гупта M.H. Использование химической модификации и химического сшивания для стабилизации белков (ферментов). //Биохимия, 1998, том 63, вып. 3, с. 395−407.
  59. Ке Т., Klibanov, A.M. On enzymatic activity in organic solvents as a enzyme history. //Biotech.Bioeng., 1998, vol.57, N 6, p. 746−750.
  60. Khmelnitsky Yu.l., Mozhaev V.V., Belova A.B., Sergeeva M.V., Martinek K. Denaturation capacity: a new quantitative criterion for selection of organic solvents as reaction media in biocatalysis. //Eur. J. Biochem., 1991, vol. 198, p.31−41.
  61. Mozhaev V.V., Khmelnitsky Y.L. at all. Catalytic activity and denaturation of enzymes in water/organic cosolvent mixtures. //Eur. J. Biochem., 1989, vol.184, p. 597−602.
  62. A.M., Семенов А. Ферментативные реакции в водноIорганических смесях: критерий для выбора оптимального органического растворителя. //Биоорганическая химия, 1978, т. 4, N1, с. 82−88.124
  63. В.В. Стабильность белков. Рациональные подходы к повышению стабильности ферментов.//Новости науки и техники, 1990, N. 7, с. 20−47.
  64. Herskovits Т.Т., Gadegbecu В., Jaillet H. On the structural stability and solvent denaturation of proteins. //J.Biol.Chem., 1970, v.245, N 10, p. 25 882 589.
  65. Faller L., Sturtevant J.M., The kinetics of the a-chymotrypsin catalyzed hydrolysis of p-nitrophenyl acetate in organic solvent-water mixtures. //J. Biol.Chem., 1966, vol.241, N21, p. 4825−48−34.
  66. Maurel P. Relevance of dielectric constant and hydrophobicity to the organic solvent effect in enzymology. // J. Biol.Chem., 1978, vol.253, N 5, p. 1677−1683.
  67. H.B., Уверский B.H. Понижение диэлектрической проницаемости среды трансформирует белковую молекулу в состояние расплавленной глобулы. //Биохимия, 1998, том 63, вып. 4, с. 532−540.
  68. Peters, G.H., van Aalten, D.M.V., Edholm, О., and Bywater, R. Dinamics of proteins in different solvent systems: analysis of essential mation in lipase. // Biophys. J., 1996, vol.71, N 5, p. 2245−2255.
  69. Forsythe K.H., Hopfinger A.J. The influence of solvent on the secondary structures of poly (L-alanine) and poly (L-proline). //Macromolecules, 1973, vol.6, N3, p.423−438.125
  70. А.В., Метелица Д. И. Каталитическая активность глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы в водно-органических средах. //Прикладная биохимия и микробиология, 1992, т.28, с. 27−32.
  71. И.Б., Лапшина Е. А. Влияние диэлектрических свойств среды на стабильность глобулярных белков и мембран. // Биофизика, 1997, т.42, р.1035−1039.
  72. И.И., Донцова Е. Г. О фотохемилюминесценции растворов глицин-триптофана. Влияние органических растворителей на хемелюминесценцию. // Биофизика, 1972, t. XVII, стр. 406−411.
  73. Fink A.L. Effect of dimethyl sulfoxide on the interaction of proflavine with a-chymotrypsin. // Biochemistry, 1974, vol.13, N 2, p. 277−280.
  74. Affleck R., Naynes C.A., Clark D.S. Solvent dielectric effects on protein dynamics. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, vol.89, p. 5167−5170.
  75. С.П., Борисова, А.Г. Фазовый переход критического типа в водно-белковой матрице молекул сывороточного альбумина, индуцируемый солью. //Биофизика, 1993, т.38,вып.4, стр. 590−595.
  76. Leikin S., Parsegian V. A., Yang W.-H., and Walrafen G. E. Raman spectral evidence for hydration forces between collagen triple helices. //Proc. Natl. Acad. Sci., 1997, vol. 94, p. 11 312−11 317.
  77. Shan S. and Herschlag D. The change in hydrogen bond strength accompanying charge rearrangement: Implications for enzymatic catalysis. //Proc. Natl. Acad. Sci., 1996, vol. 93, p. 14 474−14 479.
  78. Cleland W. W., Frey P. A., and Gerlt J. A. The Low Barrier Hydrogen Bond in Enzymatic Catalysis. //J.Biol.Chem., 1998, vol. 273, N 40, p. 25 529−25 532.
  79. Kuznetsova N, et al. Solvent hydrogen-bond network in protein self-assembly: solvation of collagen triple helices in nonaqueous solvents. // Biophys. J., 1997, vol.72 N1, p.353−62.
  80. Д.Э. Зависимость константы скорости реакции от вязкости среды и энергетические параметры элементарного биохимического акта. //Биофизика, 1986, том XXXI, вып. 3, с. 391−394.126
  81. Ступишина Е. А, Вершинина В. И, Влияние вязкости среды на кинетику ферментативной реакции, катализируемой бактериальной рибонуклеазой. //Биохимия, 1998, том 83, вып. 11, с. 1503−1508.
  82. Stigter D., Alonso D.O.V., Dill К.А. Protein stability: electrostatics and compact denatured states. //Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1991, vol.88, p. 41 764 180.
  83. Inouye K., Lee S-B., Nambu K., Tonomura B. Effects of pH, temperature, and alcohol on the remarkable activation of thermolysin by salts. // J. Biochem. (Tokyo), 1997, vol.122 (2), p. 58−64.
  84. Inouye K., Lee S-B., Tonomura B. Effects of nitration and amination of tirosyl residues in thermolysin on its hydrolytic activity and its remarkable activation by salts. // J. Biochem. (Tokyo), 1998, vol.124, p. 72−78.
  85. .А., Тюлькова H.A., патент N2073714 на изобретение Штамм бактерий Escherichia coli продуцент бактериальной люциферазы., 1997.
  86. Tjulkova N.A., Purification of bacterial luciferase from Photobacterium leiognathi with use FPLS-system. //Biological luminescence/ B. Jezowska-Trzebiatowska, B. Kochel et al., W. S, Singapore. 1989, p.369−374.
  87. Келети T, Основы ферментативной кинетики., — Москва: Мир, 1990.
  88. Эме Ф, Диэлектрические измерения, Москва: Химия, 1967, стр. 123.
Заполнить форму текущей работой

Пора сдавать?