Эймериоз кроликов в Республике Татарстан: Эпизоотология, меры борьбы

Актуальность проблемы. Важное значение для успешного развития кролиководства в России, помимо обеспечения хороших условий содержания, кормления и улучшения породности, приобретают ветеринарно-санитарные мероприятия по охране поголовья кроликов от различных болезней, в том числе и от такого опасного инвазионного заболевания как эймериоз.

Эймериоз животных является самой распространённой болезнью и причиняет огромный экономический ущерб хозяйствам. i.

Заражённость кроликов эймериозом может варьировать от 30 до 100% (Н.М. Лапшин, 1968; И. Ц. Дондуков, 1970; Н. А. Колабский, П. И. Пашкин, 1974; С. В. Леонтюк, 1974; С. А. Плешаков, 1999 и др.), падёж от числа заболевших достигает 85%. Однако, ущерб от данного заболевания не ограничивается падежом, больные животные отстают в росте и теряют от 12 до 30% своей живой массы. Кроме того, большое количество печени кроликов выбраковывается при ветеринарно-санитарной экспертизе, снижается питательная ценность мяса переболевших животных и большие расходы несут хозяйства на проведение лечебно-профилактических мероприятий.

Эпизоотологию эймериоза кроликов в зверохозяйствах Республики Татарстан и других регионов изучали многие исследователи (С.К. Мосина, Н. И. Григорьева, 1981; Д. В. Васильева, Г. М. Гадеева, 1992; В. А. Стрельчик, Е. А. Ушакова, 1998; Ж. Ф. Дзаумаммелуна, 2001 и др.). Однако, многие вопросы, связанные с региональными особенностями распространения, а также диагностикой этого заболевания требуют дальнейшего изучения.

Известно, что химиотерапия в настоящее время является самой эффективной и экономически результативной мерой борьбы с эймериозом кроликов. Разработкой методов химиотерапии и химиопрофилактики при эймериозе занимались многие исследователи (В. П. Рютова, 1985; К. И. Абуладзе, Н. В. Демидов, 1990; А. И. Ятусевич, Т. В. Медведская, 1998; A.M.

Ермаков, 2000; М. Ш. Акбаев и др., 2000; К. Б. Эсубалеу, 2001; Huang Luyi, Chen Hua, 1990; S.K. Katiyar, 1994 и другие).

В настоящее время известно много химических веществ, действующих губительно на эймерий. Однако большинство из них обладают недостаточной эффективностью, высокой себестоимостью, большой токсичностью, способностью накапливаться в тканях или оказывают иммунодепрессивное действие. Поэтому проблема изыскания новых препаратов и схем их применения остаётся актуальной.

Цель и задачи исследований. Цель исследований — изучить эпизоотологическую ситуацию по эймериозу в зверохозяйствах Республики Татарстан, а также усовершенствовать диагностику и лечение этого заболевания.

Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

Изучить распространение, возрастную и сезонную динамику, а также видовой состав эймерий в зверохозяйствах Республики Татарстан;

Усовершенствовать копрологическую диагностику эймериоза кроликов;

Провести сравнительную терапевтическую оценку эффективности некоторых препаратов при эймериозе кроликов;

— Изучить влияние йодхлорина, фуразолидона и вермитана 20%-ного гранулята на иммунологическую реактивность организма экспериментально зараженных эймериозом и здоровых кроликов.

Научная новизна. В специализированных звероводческих хозяйствах РТ изучено эпизоотическое проявление эймериоза кроликов, территориальные, временные и популяционные границы его эпизоотического процесса.

Усовершенствован копрологический метод исследований в 2,4−2,7 раза повышающий разрешающую способность существующих методов диагностики эймериоза кроликов.

Впервые установлена высокая лечебно-реабилитационная эффективность йодхлорина при эймериозе кроликов, разработана региональная научно обоснованная система противоэймериозных мероприятий.

Практическая ценность. Доказано, что экологическая паразитарная система эймериозной инвазии в популяции кроликов — система управляемая. Разработан и рекомендован более эффективный метод диагностики эймериоза.

Для лечения кокцидиоза кроликов предложен препарат йодхлорин, обеспечивающий полное освобождение организма кроликов от ооцист эймерий, нормализующий кроветворную функцию организма и положительно влияющий на клеточные и гуморальные факторы иммунитета. Полученные новые данные имеют ценное научно-практическое значение для более детального выяснения некоторых вопросов патогенеза при экспериментальном эймериозе кроликов, а также в процессе лечения их различными кокцидиостатиками.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Эймериоз широко распространен в популяции кроликов на территории с выраженной возрастной и сезонной неравномерностью эпизоотического проявления и преобладанием Е. stiedae в этиологической структуре инвазии;

2. Усовершенствованный метод копро логической диагностики эймериоза кроликов является востребованным и наиболее эффективным;

3. Йодхлорин — высокоэффективный препарат, обладающий кокцидиостатическим действием при эймериозе кроликов;

4. Применение йодхлорина при экспериментальном эймериозе кроликов активизирует эритропоэз, восстанавливает показатели гомеостаза и неспецифической резистентности организма.

Внедрение результатов исследований. В 2000;2004 годах результаты исследований под авторским надзором с положительным эффектом внедрены в зверохозяйствах Республики Татарстан. Основные положения диссертационной работы вошли в «Методические рекомендации по диагностике и профилактике эймериоза кроликов», одобренные методической комиссией и Ученым Советом ФГОУВПОКГАВМ.

Пути реализации. Результаты исследований, а также положения, сформулированные в диссертации используются при разработке противоэймериозных мероприятий в других регионах и в учебном процессе на кафедре паразитологии Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана».

Апробация работы. Основные результаты исследований доложены и обсуждены на республиканской научно-производственной конференции по актуальным проблемам животноводства и ветеринарии (Казань, 1999) — Международной научной конференции, посвященной 70-летию образования зооинженерного факультета (Казань, 2000) — Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2002) — Международной научной конференции, посвященной 130-летию академии (Казань, 2003) — на расширенном заседании профессорско-преподавательского состава кафедр паразитологии и инвазионных болезней, эпизоотологии, патологической анатомии, анатомии, гистологии, акушерства и патофизиологии (Казань, 2004).

Публикация. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ и получено удостоверение на рационализаторское предложение (№ 426−02 от 13 марта 2002 г.).

ВЫВОДЫ.

1. Эймериоз кроликов широкораспространен в зверохозяйствах РТ, с выраженной ЭИ от 36,7 до 100% (М=68,3±-3,4%) и ИИ от 2,5 до 218,0.

М=110,3±-5,5) ооцист в 5 полях зрения микроскопа. Протекает круглогодично, с выраженными сезонными эпизоотическими надбавками (август-сентябрь). В эпизоотическое проявление эймериоза вовлекаются все возрастные группы популяции, с преимущественным поражением крольчат до 3-х месячного возраста независимо от их породы.

2. В формировании этиологической структуры эймериоза кроликов в РТ в различной степени участвуют 8 видов эймерий: Eimeria stiedae (20,3%), Е. perforans (18,4%), Е. magna (12,8%), Е. piriformis (12,4%), Е. intestinalis (12,0%), Е. irresidua (11,7%), Е. media (6,8%), Е. coecicola (5,6%).

3. Манифистация экспериментального эймериоза у кроликов при презентации им по 50 тыс. ооцист на одну особь проявляется постепенным нарастанием до 10 дня показателей гомеостаза и снижением неспецифической резистентности их организма.

4. В контролируемых опытах по сравнительной оценке с использованием принципа «Placebo», метод Сафиуллина оказался наиболее эффективным с высокой разрешающей диагностической способностью, позволяющей выявлять в среднем 81,1±3,8 из 100 ооцист кокцидий в исследуемом материале.

5. Разрешающая способность предложенного нами флотационного метода копрологических исследований, основанного на использовании трех-компонентной смеси насыщенных растворов цинка хлорида, натрия хлорида и сахара в соотношении 1:2,5:0,5, превосходит в 2,4 раза метод Фюллеборна и в 2,7 — метод Дарлинга при диагностике эймериоза кроликов.

6. Из 13 химиопрепаратов, испытанных при спонтанном эймериозе кроликов кокцидиостатическим свойством обладает йодхлорин, при 5-ти дневном пероральном применении которого в дозе 6 мл на животное (0,039 г/кг живой массы по ДВ), достигается 100% интенси экстенсэффективностью через 14 дней после начала применения, с восстановлением уровня гомеостаза и неспецифической резистентности.

7. Региональная научно-обоснованная система противоэймериозных мероприятий для звероводческих хозяйств РТ с применением усовершенствованного метода диагностики и йодхлорина с лечебно-реабилитационной целью, оказалась высокоэффективной и востребованной. Внедрение. системы в зверосовхозах «Кощаковский», «Бирюлинский» и «Берсутский» РТ позволила оздоровить их от эймериоза кроликов и поддерживать эпизоотическое благополучие.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Разработанный нами копрологический метод рекомендуется использовать в республиканских, межрайонных и районных лабораториях при диагностике эймериоза кроликов.

Для профилактически и лечения эймериоза кроликов предлагается новый препарат йодхлорин в дозе 6 мл на голову, перорально в течение 5 дней.

Материалы диссертации вошли в «Методические рекомендации по * диагностике и профилактике эймериоза кроликов», одобренные методической комиссией, а также Ученым Советом ФГОУ ВПО КГАВМ.

Глава III.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Имеющиеся литературные данные и результаты собственных исследований свидетельствуют о широком распространении эймериоза в кролиководческих хозяйствах Республики Татарстан.

Наблюдения, проведенные в хозяйствах показывают, что у кроликов кокцидиоз протекает в виде смешанной формы. У инвазированных кокцидиозом животных клинические признаки характеризовались общим угнетением, понижением аппетита или его отсутствием, бледностью или желтушностью слизистых оболочек, жидкими испражнениями со слизью и нередко с кровью, полиурией, наблюдались параличи конечностей и шейных мышц, а также судороги.

При наружном осмотре трупов павших животных отмечали выраженное истощение организма, бледность и желтушность слизистых оболочек, при вскрытии в желудочно-кишечном тракте обнаруживали набухание и покраснение, а также отслоение слизистых оболочек, покрытие их творожистыми наслоениями с примесями крови и присутствием сероватых точечных и очаговых пятен. Печень была увеличена, на поверхности и в паренхиме органа имелись округлые белого цвета очажки, заполненные сметанообразным содержимым.

Изучение эпизоотологической ситуации в зверохозяйствах РТ показало, что экстенсивность эймериозной инвазии колеблется от 36,7% (зимний период) до 100% (в другие сезоны года). В процессе обследования зверохозяйств и проведения экспериментальных работ мы выявляли нарушение технологии содержания кроликов (содержание в одной клетке кроликов разных возрастных групп), несвоевременное и некачественное проведение очистки и дезинвазии клеток, кормушек, поилок, недостаточно высокий уровень ведения кролиководства и несоблюдение ветеринарно-санитарных требований. Интенсивность эймериозной инвазии во многом зависела от возраста кроликов и времени года. Наиболее высокая зараженность отмечалась у крольчат с 1 до.

3-х месячного возраста, независимо от времени года. Например, в зверосовхозе «Бирюлинский» среднее количество ооцист у крольчат 1−3 месячного возраста в летне-осенний период составило 218±3,4, в осенне-зимний период 56±2,01 и весенний период 109±2,31, в то время как у крольчат 3−6месячного возраста было обнаружено 63±2,02, 18±1,62 и 35±0,84 ооцист соответственно. Степень инвазии у взрослых кроликов при эймериозе была намного меньше, чем у крольчат. При этом ИИ в летне-осенний период составила 32±1,4, осенне-зимний — 5±0,4, в зимний период отмечались лишь единичные ооцисты * эймерии во всей капле пробы, а в весенний период ИИ составила 12±1,02 ооцист в 5 полях зрения микроскопа.

Изменение ИИ в зависимости от времени года объясняется тем, что при температуре ниже 0 °C и в анаэробных условиях споруляция ооцист не происходит, при минусе 15 °C часть их погибает, попеременное замораживание и оттаивание губительно действует на них.

Таким образом, интенсивность эймериозной инвазии зависит в одинаковой степени как от возраста животных, так и от времени года. Ш Полученные нами данные в отношении возрастной динамики согласуются с данными других исследователей (С.А. Плешаков, 1997; В. А. Стрельчик, Е. А. Ушакова, 1998).

При изучении эпизоотологии эймериоза кроликов мы проводили также определение видового состава этих простейших.

При рассмотрении каждого вида эймерий обращали внимание на форму и цвет микропиле, полярную шапочку, строение оболочек, наличие в ооцисте и споре остаточных тел, вели наблюдение над процессом спорогонии.

Исследования показали, что в обследованных зверохозяйствах были выявлены 8 видов возбудителей эймериоза из рода Eimeria: Е. intestinalis, Е. magna, Е. perforans, Е. coecicola, E. stiedae, Е. piriformis, Е. irresidua и Е. media, ф Наиболее широко распространенным видом оказался Eimeria stiedae.

20,3%). Все эти виды подробно изучены многими исследователями (И.Ц.

Дондуков, 1969; С. К. Сванбаев, 1977; И. И. Вершинин, 2001) и наши данные в основном согласуются с данными других исследователей за исключением некоторых. Например, по данным Н. П. Орлова (1956) размер ооцист E. stiedae составляет 37,5×21,5 мкм, по Е. М. Хейсину (1967) — 30−40×16−25 мкм, по Н. Ф. Колабскому и П. И. Пашкину (1974) величина ооцисты составляет 30−48×16−25 мкм.

Наши данные, касающиеся величины ооцист E. stiedae, наиболее близки к данным Н. П. Орлова (1956). Имеющиеся в литературе сообщения о длительности споруляции E. stiedae немного противоречивы. По Н. П. Орлову (1956) она протекает за 60−70 часов. По Е. М. Хейсину (1967) в ооцисте споруляция протекает 3−4 дня, имеется остаточное тело, состоящее из нескольких светопреломляющих гранул, расположенных между спорами. По Н. Ф. Колабскому и П. И. Пашкину (1974) после спорогонии в ооцисте и спорах образуются остаточные тела. Спорогония длится максимально 3−4 дня. Наши данные согласуются с исследованиями Н. П. Орлова (1956), который указывает на короткие сроки споруляции ооцист.

Выше мы уже отмечали, что ИИ у взрослых кроликов независимо от сезона года бывает ниже, чем у взрослых, что было установлено во всех 3-х исследованных хозяйствах. Поэтому в таких случаях возникает необходимость использования более чувствительных копроовоскопических методов прижизненной диагностики эймериоза.

По литературным данным (А.Н. Пономаренко, 1980; Б. А. Тимофеев и др., 1982; В. А. Герасимчик, 2003) для копрологической диагностики кокцидиоза, в основном, используются 2 метода — Фюллеборна и Дарлинга, а данных по эффективности других методов отсутствуют. Поэтому, перед нами была поставлена задача — изучить диагностическую эффективность следующих 15 овоскопических методов: Фюллеборна, Дарлинга, Котельникова-Хренова с аммиачной селитрой и азотнокислым свинцом, Щербовича с азотнокислым натрием, сернокислым магнием и сернистым натрием, Веретты, Вольфа,.

Маллори, Котельникова-Вареничева, Демидова, Вишняускаса, Бреза, Сафиуллина.

Исследовали пробы фекалий от кроликов с заведомо известным количеством ооцист кокцидий (100 экз.).

Результаты проведенных исследований показали, что комбинированными методами Котельникова-Хренова с нитратом свинца и Вишняускаса с сернокислым цинком ни в одном случае ооцист кокцидий не обнаружили.

Методом Фюллеборна и Дарлинга было выявлено соответственно 20,0±0,4 и 25,6±1,1% ооцист кокцидий. С помощью метода Щербовича с сернокислым магнием обнаружено 20,5±1,4%, с амиачной селитрой 22,8±1,2 и тиосульфатом натрия — 28,8±2,2%. Диагностическая эффективность таких методов как Котельникова-Хренова с амиачной селитрой, Вольфа и Демидова также была не высокая и составила 28,3±0,9, 28,4±1,3 и 22,0±0,5% соответственно.

Несколько выше была диагностическая эффективность методов Котельникова-Вареничева, Верреты, Маллори и Бреза с помощью которых было выявлено 48,2±1,2, 64,4±3,1, 59,6±0,5 и 70,0±3,3% ооцист кокцидий соответственно.

Высокую диагностическую эффективность проявил флотационный метод Сафиуллина с комбинацией солей хлористого цинка и хлористого натрия. Этим методом было обнаружено 81,1±3,8% ооцист кокцидий.

Следующим этапом наших исследований являлось усовершенствование метода Сафиуллина, целью которого являлось повышение чувствительности метода.

При методе Сафиуллина соотношение раствора хлористого цинка и хлористого натрия составляет 1:2. Мы изменяли соотношения этих растворов как в сторону увеличения, так и в сторону уменьшения компонентов флотационной жидкости. Исследования показали, что при всех использованных комбинациях количество выявляемых ооцист кокцидий колебалось от 33,3±1,5 до 62,6±4,1%. Методом Сафиуллина в этом опыте было обнаружено 79,1±0,8% ооцист.

Следовательно, путем изменения соотношения хлористого цинка и хлористого натрия не удалось повысить чувствительность метода Сафиуллина. Поэтому мы использовали флотационную жидкость, состоящую из трех компонентов (насыщенных растворов хлорида цинка, хлорида натрия и сахара). Диагностическая эффективность комбинированного метода с использованием трехкомпонентного ингредиента зависела также от соотношения входящих компонентов. Так, например, с помощью раствора, приготовленного из насыщенных растворов хлорида цинка, хлорида натрия и сахара в соотношении 1:1:1 было выявлено 34,1 ±2,8% заложенных ооцист, в соотношении 0,3:1:2 -54,2±3,2% ооцист кокцидий, в соотношении 0,5:3:2 — 63,55±4,1% ооцист. Комбинация этих же растворов в соотношениях 0,7:2:0,5, 0,9:1:0,5, 1:2:0,5 и 1:1:1 дало возможность выявить соответственно 65,6±4,3, 70,8±5,2, 68,3±4,7 и 34,1±2,8% ооцист кокцидий, в то время как при соотношении этих же компонентов 1:2,5:0,5 было выявлено 95,1±5,8%.

Таким образом, разработанный нами метод выявления ооцист кокцидий, основанный на использовании трехкомпонентного ингредиента, состоящего из насыщенного раствора хлорида цинка, хлорида натрия и сахара оказался наиболее чувствительным, с помощью которого было обнаружено ооцист на 16% больше, чем методом Сафиуллина и соответственно на 50,7 и 56,1% больше, чем методом Фюллеборна и Дарлинга.

Высокую степень заражения кроликов эймериозом в обследованных хозяйствах мы также объясняем отсутствием надежных химиопрофилактических средств при кокцидиозе. Известно, что химиотерапия в настоящее время является самой действенной и результативной мерой борьбы с эймериозом кроликов. Разработкой методов химиотерапии и химиопрофилактики при эймериозе кроликов занимались многие исследователи (В.Ф. Новинская и др., 1988; В. Ф. Абрамова, П. П. Райлян, 1991; С. А. Плешаков, 1997; В. А. Стрельчик, Е. А. Ушакова, 1998 и др.- Ж. Ф. Дзаумаммелуна, 2000, 2001). Однако у эймерий при длительном применении одних и тех же препаратов сравнительно быстро может выработаться адаптация к ним, в результате чего они становятся не эффективными. Поэтому одной из задач наших исследований было изыскание новых противоэймериозных препаратов.

Изучали сравнительную эффективность 13 препаратов (норсульфазол, фуразолидон, метронидазол, вермитан 20%-ный гранулят, ветакокс, ампролиум, йодхлорин, кокцидиовит, клинакокс, кокцидин, фармкокцид-10, сульфадимезин, норсульфазол с фталазолом) при лечении спонтанно-инвазироваанных крольчат двухмесячного возраста в период когда отмечалось максимальное выделение ооцист эймерий.

В результате проведенных исследований было установлено, что через 7 дней после последнего применения использованных препаратов ИИ снижалась во всех опытных группах, а ИЭ колебалась от 44,6 до 97,5%. Наиболее высокой противоэймериозной эффективностью в этот период обладал йодхлорин (97,5%), далее ветакокс, кокцидиовит и норсульфазол с фталазолом, ИЭ которых составляла 89,1 88,1 и 87,1% соответственно.

При исследовании через 14 дней после введения препаратов в некоторых группах отмечали повышение ИИ, а в некоторых, наоборот, снижение.

Например, после применения норсульфазола ИЭ составила 74,4% (против 65,6% через 7 дней), клинакокса — 82,1% (против 70,2%), кокцидина -68,3% (против 47,7%), сульфадимезина — 66,7% (против 61,5% через 7 дней). ИЭ фуразолидона, метронидазола, вермитана 20%-ного, ветакокса, ампролиума, клинакокса, фармкокцида, норсульфазола с фталазолом снизилась. Наиболее низкие показатели ИЭ были у ампролиума (25%), фармкокцида-10 (21,1%) и метронидазола (19,7%).

Через 30 дней после лечения норсульфазолом, фуразолидоном, ветакоксом, ампролиумом, кокцидиовитом и кокцидином произошло увеличение количества ооцист по сравнению с 14 днем, следовательно, ИЭ имела отрицательное значение. В группах, где использовали метронидазол, вермитан и норсульфазол с фталазолом отмечали дальнейшее снижение количества ооцист и ИЭ в этих группах составила соответственно 43,9, 25,0 и 66,7%. ИЭ йодхлорина составила 100%, причем все 8 кроликов как на 14-ый, так и на 30 день полностью освободились от ооцист и ЭЭ также составила 100%.

В контрольной группе, где лечение животных не проводили, ИИ через 7 дней составила 226±3,9, через 14 дней — 230±3,9 и через 30 дней — 252±4,0 (против 201±2,7, фоновые исследования).

Следовательно, йодхлорин в дозе 6 мл/гол при применении в течение 5 дней обладает выраженным кокцидиостатическим действием.

Эффективность любых противопаразитарных препаратов, в том числе и кокцидиостатиков нельзя оценивать только на основании изучения экстенси интенсэффективности. При этом важно знать патогенное влияние препаратов после введения их в организм как здоровых, так и больных животных.

Поэтому одной из задач наших исследований являлось изучение гематологических, биохимических, иммунобиологических показателей у кроликов, экспериментально зараженных эймериозом кроликов после введения им химиотерапевтических препаратов. Одновременно с этим мы проводили исследования проб фекалий от этих животных.

С этой целью провели опыт на 25 кроликах 1−3-месячного возраста, которых разделили на 5 групп. Четыре группы животных заразили ооцистами эймерий в количестве 50 000 ооцист/гол, одну группу оставили в качестве незараженного контроля. Первой группе вводили йодхлорин, второй-фуразолидон, третьей — вермитан 20%-ный гранулят. Одновременно вели наблюдение за клиническими признаками. Пробы фекалий брали до заражения, до лечения (спустя 7 дней после заражения) и через 3, 6, 10, 15и30 дней после введения препаратов.

Результаты копрологических исследований показали, что ИИ у экспериментально зараженных животных до лечения находилась в пределах 2201± 124,8 — 2253±50,1 ооцист в 5 полях зрения микроскопа. В этот же период у кроликов всех четырех групп были выявлены и клинические признаки острого эймериоза, характерными для которых являлось частое мочеиспускание и понос. Аналогичные клинические признаки при экспериментальном кокцидиозе отмечали А. Ф. Манжос (1975), В. П. Рютова (1985), М. Ш. Акбаев (2000). В группе, где применяли йодхлорин на 15 день после введения препарата ИЭ и ЭЭ составляла 100%. После применения фуразолидона и вермитана ИЭ в этот период составила 47,5 и 37,5% соответственно. Улучшение общего состояния у кроликов отмечалось на 10 день в группах, леченных йодхлорином и фуразолидоном, на 12 сутки в группе, где применяли вермитан и на 20 сутки в группе зараженного контроля. По данным И. И. Вершинина (2001) эймериозная инвазия является самоограниченной, поскольку бесполое размножение (мерогония) определяется количеством генераций меронтов, поэтому, если исключить супери реинвазии, возможен лишь один цикл развития паразита и организм хозяина сам освобождается от инвазии. Наши результаты согласуются с данными автора, т.к. в группе зараженного контроля отмечалось снижение ИИ по дням и к 30 дню оно составило 1071±58,4 ооцист, против 2253±50,1 (фоновые данные).

В дни взятия проб фекалий одновременно брали кровь и проводили гематологические, биохимические и иммунобиологические исследования животных.

Первичное инвазирование кроликов эймериями вызвало уменьшение количества эритроцитов. После введения животным йодхлорина, фуразолидона, вермитана, а также в группе зараженного контроля наиболее выраженные изменения отмечали на 3 день терапии, связанные с понижением эритроцитов в.

I группе в 1,25, II — 1,43, в III — 1,35 и IV — 1,48 раза по сравнению с фоновыми показателями, а уровня гемоглобина соответственно в 1,37- 1,32- 1,28 и 1,29 раза.

Следовательно, в этот период у кроликов отмечали сильную степень анемии, которая наиболее была выражена в IV группе (зараженный контроль).

К концу опыта, в группе, леченной йодхлорином количество эритроцитов и гемоглобина повысилось на 28 и 27,8% соответственно, что связано с позитивным влиянием препарата на эритропоэз, а также уничтожением негативных факторов, влияющих на кроветворную функцию организма (токсины ооцист эймерий), тогда как в группе, где задавали вермитан они до конца опыта оставалось ниже уровня таковых у здоровых кроликов (слабая степень анемии). В группе, получавшей фуразолидон, эти показатели восстанавливались до физиологической нормы на 30 день опыта.

Ответная реакция организма на патогенное действие эймерий сопровождалась увеличением числа лейкоцитов у всех зараженных животных в пределах 1,5−2 раза на 3 день введения препаратов и нормализацией их на 15 день лечения йодхлорином и на 30 сутки лечения фуразолидоном и вермитаном. В группе зараженного контроля отмечалась лейкопения, связанная с функциональным истощением защитных сил организма.

На 3-ий день лечения было отмечено повышение уровня СОЭ, которое в группах, леченных йодхлорином, фуразолидоном, вермитаном и группе зараженного контроля составило 6,38±0,96- 7,41±0,83- 6,82±0,95 и 10,1±0,72 мм/час, против 2,4±0,09 мм/час в контроле. Уровень СОЭ в группе, леченной йодхлорином, нормализовался на 15 сутки, в группах, леченных фуразолидоном и вермитаном — на 30 сутки. В группе зараженного контроля показатель СОЭ к концу опыта был выше уроня СОЭ здоровых животных в 2,5 раза, что говорит о сохраняющемся воспалительном процессе в кишечнике, сопровождающимся выпотом экссудата в просвет и затруднением всасывания жидкости в организм кролика, что приводит к вязкости крови. Эти данные согласуются с результатами исследований К. И. Абуладзе и др. (1982), О. Е. Яблоновской и др. (2001).

О подавлении иммунобиологической реакции организма кроликов в ответ на патогенное действие простейших в шизогональный период развития свидетельствовало уменьшение лимфоцитов в 1,2−1,5 раза в группах зараженных животных, которые в последующем повысились до нормативных показателей у животных, которым применяли йодхлорин.

Также в этот период во всех четырех группах зараженных животных произошел выброс в кровеносное русло эозинофилов, которые превышали показатели таковых здоровых животных на 4,7- 7,3- 5,9 и 6,8%. Следует отметить, что эозинофилия имела кратковременный характер и уже на 6 день лечения уровень их нормализовался. Как считает О. Е. Мазур (2001), данное явление вполне объяснимо, т.к. эозинофилия является показателем и аллергии и защитной реакциии организма, в силу того, что у всех клеток — эффекторов эозинофилы обладают наиболее мощной цитотоксичностью по отношению к кокцидиям.

Отмеченная динамика форменных элементов крови в начальный период инвазии несет защитный характер и объясняется стимулирующим воздействием антигенов паразитов и развитием воспалительного процесса, тогда как характер выявленных сдвигов показателей крови в последующем отражает частичную иммунодепрессию и угнетение естественной резистентности организма.

Как полагают М. А. Мусаев и др. (1996) каждая стадия развития паразита (ооцисты хозяина) со своим специфическим антигенным набором вызывает образование соответствующих Т-лимфоцитов, выполняющих как функцию разрушения паразитов (киллерная активность, так и вспомогательную функцию (хелперная активность). Последняя функция, в свою очередь, способствует клонированию антителообразующих В-клеток. С этой целью мы решили Ц провести исследования Ти В-лимфоцитов при эймериозной инвазии кроликов.

У зараженных эймериозом кроликов количество Т-лимфоцитов было незначительно ниже и колебалось от 35,1±0,21 до 36,2±0,22%, против 40,0±0,4% в контроле. Через 3 дня после введения препаратов содержание этих клеток в группе леченной йодхлорином равнялось 35,9±0,44%, фуразолидоном — 33,8±0,24%, вермитаном — 31,2±0,42% и в группе зараженного контроля -33,1 ±0,2%, против 41,3±0,1% в контроле, т. е. произошло дальнейшее снижение. Однако на 15 сутки после введения йодхлорина содержание Т-клеток нормализовалось. У животных, получавших вермитан, а также группы зараженного контроля уровень этих клеток был ниже, чем у здоровых в течение всего опыта и находился в пределах 22,1±0,12 — 39,1±0,21% и 30,1±0,64 -38,1±0,26%, которые к концу опыта так и не нормализовались.

Результаты идентификации В-лимфоцитов показали, что у кроликов группы зараженного контроля в течение 3−30 суток происходило снижение этого показателя по сравнению с исходными данными и к концу опыта уровень их был ниже фоновых показателей на 5,1%.

Введение

йодхлорина, наоборот, способствовало повышению ЕАС-лимфоцитов, которые нормализовались на 15 сутки, тогда как в других группах, В-лимфоциты в течение всего периода были ниже уровня таковых здоровых кроликов.

Таким образом, результаты изучения содержания Ти В-лимфоцитов в крови зараженных кокцидиозом кроликов показали, что в разгар инвазионного процесса дефицит Т-системы отражается и на В-системе лимфоцитов, возможно в результате нарушения дифференцировки лимфоидных стволовых клеток или это может быть связано с циркуляцией растворимых антигенов, иммунных комплексов и лимфоцитотоксинов. Наши данные совпадают с результатами исследований Е. Ф. Чернушенко, Л. С. Когосовой (1981), Э. Х. Даугалиевой, К. Г. Курочкиной (1996), A. Dasgurta, В. Shikol, A. Bandopadhyaya (1978). Однако Л. И. Иргашева (1985) при малой дозе заражения кроликов ¦ф ооцистами кокцидий отмечала увеличение Ти В-лимфоцитов в период обострения болезни и нормализацию их на 30 день опыта, что не согласуется с нашими данными.

Об активной гуморальной реакции в организме зараженных эймериями кроликов говорят значительные сдвиги в распределении белковых фракций. Достоверное увеличение содержания общего белка в сыворотке крови отмечалось на 3 день введения препаратов на 30−35% во всех группах зараженных животных, более выраженное в группе зараженного контроля (12,1±0,38, против 6,47±0,54 г% в контроле). Во фракциях белка у животных всех четырех зараженных групп зафиксирована диспротеинемия, характеризующаяся снижением как количества альбуминов, так и а-глобулинов и повышением (3- и у-глобулинов, сохраняющаяся до конца опыта во всех группах зараженных животных, кроме той, где применяли йодхлорин. В этой группе показатели белка восстановились до физиологической нормы, что статистически достоверно. В группе зараженного контроля (3- и у-глобулины превышали фракции таковых в группах, получавших йодхлорин, фуразолидон и вермитан соответственно на 24 и 9%, 32 и 14%, 25 и 13%. Очевидно, положительная динамика у-глобулинов доказывает развитие выраженных иммунобиологических реакций организма в ответ на антигенное воздействие эймерий, что согласуется с данными О. Е. Мазур и др. (2003).

Ведущая роль при инвазионных заболеваниях принадлежит полиморфно-нуклеарным нейтрофилам (Э.Х. Даугалиева, В. В. Филиппов, 1991), обладающих фагоцитарными и цитотоксическими свойствами. ФАН у контрольных животных на протяжении всего периода опыта находилась в пределах 64,6−68,3%. Однако, у зараженных животных отмечалось снижение этого показателя на 3-ий день после введения препаратов в пределах 1,6−2 раза от исходного, после чего в группе, получавшей йодхлорин ФАН нормализовался на 15 сутки, тогда как в группах, леченных фуразолидоном и вермитаном он так и не восстановился до физиологической нормы. В группе зараженного контроля ФАН к концу опыта не нормализовался и составлял 38,9±0,12%, против 68,3±1,9% в контроле (р<0,05).

Характер изменений ФА лейкоцитов в начале инвазии, по-видимому, говорит о супрессии неспецифических факторов клеточной защиты организма. Снижение ее на 3 день лечения, возможно связано с уменьшением количества нейтрофилов, способных к фагоцитозу в результате интоксикации метаболитами эймерий, и, по-видимому, инокулируемой микрофлоры.

В первые дни инвазии в результате активной циркуляции токсинов эймерий снижались БАСК у всех зараженных животных. Показатель БАСК в течение 6−15 суток прогрессирующе возрастал и нормализовался в I группе на 15 день лечения, тогда как во II и III группах так и не восстановился до физиологической нормы. В IV группе наблюдалось прогрессирующее снижение этого показателя, которое к 30-му дню было ниже исходного на 9% по сравнению с контролем.

В результате патогенного действия эймерий в первые дни инвазии, значительно угнеталась активность лизоцима сыворотки крови во всех опытных группах, которая на 3 день лечения снизилась на 21%. Затем к 15-му дню отмечалось достоверное ее увеличение, которое в I группе составило 17,2±0,62 мкг/мл, против 17,3±0,8 мкг/мл в контроле, а на 30 сутки — снижение до 16,1 ±0,62 мкг/мл, против 17,5± 0,9 мкг/мл в контроле, а во II, III и IV группах на 30-й день опыта уровень лизоцима также прогрессирующе возрастал и составил 15,9±0,81, 15,0±0,73, 9±0,07 мкг/мл, против 17,5±0,9 мкг/мл в контроле (р<0,05), то есть был ниже уровня здоровых животных.

Уровень комплемента резко понизился до лечения во всех 4-х группах зараженных животных и был в пределах 9,6±12,3 — 12,4±0,73, против 15,1±0,73−16,0±0,63 С’Н50/мл исходного уровня. На 3 день эти показатели были еще ниже и равнялись в первой группе 10,5±0,39- во второй — 11,6±0,56- в третьей -11,4±0,5- в четвертой — 10,9±0,41 С’Н50/мл, против 16,0±0,63- 15,1±0,73- 15,6±0,92- 15,3±0,64 С’Н50/мл фоновых показателей, что статистически достоверно. К концу опыта показатели комплемента в I группе нормализовались, а во II, III и IV группах они так и не восстановились до исходного уровня.

По-видимому, это происходит вследствии антигенного раздражения макрофагальной системы, в результате которого повышается количество клеток-продуцентов фермента.

Таким образом, можно констатировать, что у экспериментально инвазированных кокцидиозом кроликов наблюдается нестабильность в гуморальных и клеточных специфических и неспецифических факторах иммунологической защиты. Это происходит, по всей вероятности, в результате как иммунодепрессивного действия паразитарных антигенов, обычно в начальный период инвазии, так и иммуностимулирующего их воздействия в последующем. Однако, в группах, где применяли фуразолидон и вермитан, а также в группе зараженного контроля показатели неспецифической резистентности так и не пришли к таковым у здоровых, что свидетельствует о возможном развитии вторичного иммунодефицитного состояния, а также о негативном влиянии самих препаратов на иммунную систему организма кроликов. Следует отметить, что в группе, где применяли йодхлорин, большинство изученных показателей нормализовалось на 15 сутки после введения препарата.

С целью изучения влияния испытуемых препаратов на гематологические, биохимические и иммунобиологические показатели организма здоровых животных нами был проведен опыт на 20 кроликах, 15 из которых получали йодхлорин, фуразолидон и вермитан (по 5 кроликов на препарат). При применении йодхлорина и фуразолидона у здоровых кроликов отмечалось повышение эритроцитов и гемоглобина в течение всего опыта, в пределах 1,1−1,4 раза в сравнении с исходными данными. Это говорит о том, что препараты оказывают положительное влияние на эритропоэз. Наоборот, применение вермитана подавляло кроветворную функцию организма кроликов, о чем свидетельствовало снижение эритроцитов и гемоглобина в этих группах в 1,4−1,5 раза, что статистически достоверно.

Отмечающийся на 15 день после введения йодхлорина слабый лейкоцитоз (7,2±0,3, против 6,48±0,52×109/л в сравнении с фоном), говорит об активации клеточного фактора защиты. В группах, где использовали фуразолидон и вермитан, этот показатель прогрессивно снижался, и составлял в этот же срок 5,6±0,28 и 5,5±0,12×109/л, против 6,28±0,39 и 6,14±0,24×109/л (фоновые данные), на 30 сутки эти показатели повысились на 6 и 5% соответственно.

На 10 день после введения йодхлорина отмечался лимфоцитоз, а при введении фуразолидона и вермитана установили достоверное угнетение лимфоцитопоэза, который восстановился до физиологической нормы к концу опыта в группе, где применяли фуразолидон.

Иммуннодепрессивная реакция на введение фуразолидона и вермитана подтверждалась также снижением Ти В-лимфоцитов, которое наиболее характерно было выражено на 10 день введения препаратов. Йодхлорин у здоровых кроликов наряду с лимфоцитозом повышал уровень Т-лимфоцитов, достигающий наивысшего пика на 10 сутки (45,2±0,1, против 38,7±0,3% исходных данных) и Влимфоцитов на 15 день (31,0±0,8, против 25,4±1,24% в фоновом показателе). К концу опыта в группах, получавших йодхлорин и фуразолидон, содержание этих клеток находилось на уровне таковых у контрольных кроликов. Несмотря на незначительное повышение, количество Т-клеток в группах у кроликов, получавших вермитан на 30 день опыта было ниже контрольной группы на 15,8%, а В-клеток — на 14,6%.

После применения йодхлорина и фуразолидона на 10 день была отмечена слабая гиперпротеинемия, за счет снижения уровней альбумина и а-глобулинов и повышения (3-й у-глобулиновых фракций и восстановление всех фракций до физиологической нормы к концу опыта в обоих группах. Применение вермитана вызвало, наоборот, гипопротеинемию, связанную с понижением (3- и у-глобулиновых фракций к 10 дню опыта, сохраняющуюся так до конца опыта. Кроме того, было установлено, что показатели БАСК и ФАН у животных этой группы незначительно превышали таковые в контрольной группе и составляли 60,3±2,01 и 69,3±0,9 г%, против 64,6±1,4 и 64,6±1,4 г% в контроле. Однако в группе, где применяли фуразолидон показатели БАСК и ФАН уступали таковым контрольной группы на 15 день введения препарата и составляли 51,4±1,4 и 62,1±1,62 г% соответственно, против 57,9±2,3 и 63,8±2,34 г% в исходных данных. После использования вермитана показатели БАСК и ФАН в этот срок также были ниже исходных данных и составляли 49,8±1,34 и 58,4±1,74%, против 56,1±2,1 и 66,1 ±2,51 г%. На 30 день опыта эти показатели в группе, где применяли фуразолидон нормализовались.

Введение

йодхлорина способствовало незначительному подъему уровня лизоцима на 10 день введения препарата, который составил 17,9±0,91, против 15,9=1=0,61 мкг/мл (фоновый показатель). Уровень комплемента при этом в течение всего опыта оставался в пределах нормы и составлял 15,7±0,84−17,1 ±0,1 мкг/мл. После введения кроликам фуразолидона и вермитана уровни лизоцима и комплемента снизились в пределах 7−10%, при чем они были более выраженными в группе, в которой применяли вермитан, где уровени лизоцима и комплемента составляли в этот день 14,2±0,31 мкг/мл и 14,8±0,52 СН50/мл, против 15,9±0,73 мкг/мл и 16,1 ±0,92 СН50/мл соответственно по сравнению с фоном. Уровни этих показателей в последующем нормализовались в группе, где применяли фуразолидон и не восстановились до физиологической нормы при применении вермитана.

В конце опыта (через 30 дней) животных с каждой группы убивали и подвергали неполному гельминтологическому вскрытию. Исследования показали, что применение йодхлорина, фуразолидона и вермитана не вызывают на слизистой желудка и кишечника видимых паталогоанатомических изменений.

Таким образом, введение кроликам йодхлорина позитивно сказывается на эритропоэзе, активизирует клеточные и гуморальные, а также неспецифические факторы иммунитета, повышает иммунобиологическую реакцию организма. Фуразолидон активизирует кроветворную функцию организма, увеличивает уровень общего белка сыворотки крови и незначительно снижает защитные факторы иммунитета, которые к концу опыта восстанавливаются до физиологической нормы. Однако, применение вермитана негативно сказывается на кроветворной функции и угнетает защитную функцию организма.