Помощь в учёбе, очень быстро...
Работаем вместе до победы

Структурные исследования новых секреторных белков из обоятельного эпителия крысы

Диссертация: Структурные исследования новых секреторных белков из обоятельного эпителия крысы
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Гидролиз очищенного и модифицированного 45-кДа белка проводили в обычно принятых условиях. Разделение продуктов протеолиза 45-кДа белка проводили обратно фазовой ВЭЖХ на колонке 0,46×25 см Ultrasphere С18 (Beckman, USA) в градиенте ацетонитрила в водном растворе 0,1% ТФУ (рис.9). Анализ N-концевых аминокислотных остатков показал, что фракции L1-L5 являются гомогенными и не требуют дальнейшей… Читать ещё >

Содержание

  • 1. БЕЛКИ ОБОНЯТЕЛЬНОГО ЭПИТЕЛИЯ НАЗЕМНЫХ ПОЗВОНОЧНЫХ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
    • 1. 1. Введение
    • 1. 2. Строение органа обоняния наземных позвоночных 11 1.2.1. Структура и функции слизи обонятельного эпителия
    • 1. 3. Белки, участвующие в перирецепторных процессах
      • 1. 3. 1. Одорант-связывающие белки 17 1.3.1.1. Запах-связывающие свойства ОСБ in vitro и их физиологическая роль in vivo
      • 1. 3. 2. Ферменты биотрансформации
    • 1. 4. Белки, принимающие участие в рецепции обонятельного сигнала
      • 1. 4. 1. Белки, специфичные для ресничек обонятельных рецепторных клеток
      • 1. 4. 2. Мембранные белки обонятельного эпителия, способные эффективно связывать молекулы одорантов
      • 1. 4. 3. Семейство генов, кодирующих белки, принадлежащие к классу рецепторов, сопряженных с G-белками
      • 1. 4. 4. Рекомбинантные белки, продукты экспрессии генов, кодирующих обонятельные рецепторы позвоночных

Структурные исследования новых секреторных белков из обоятельного эпителия крысы (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

2.2. Определение полной аминокислотной последовательности 45-кДа белка 46.

2.3. Анализ аминокислотной последовательности 45-кДа белка 58.

2.4. Определение полной аминокислотной последовательности 28-кДа белка 63.

2.5. Анализ аминокислотной последовательности 28-кДа белка 67.

3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ (МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ) 71 3.1. Материалы 72.

3.1.1. Реактивы 72.

3.1.2. Ферменты 73.

3.1.3. Штаммы Е. coli и плазмидные векторы 73.

3.1.4. Микробиологические среды и буферные растворы 73 3.1.4.1. Микробиологические среды 73 л J.

3.1.4.2. Буферные растворы для денатурации и иммобилизации ДНК на нитроцеллюлозных фильтрах 74.

3.1.4.3. Растворы для гибридизации нуклеиновых кислот 74.

3.1.4.4. Растворы для in situ гибридизации на тканевых срезах 74.

3.1.4.5. Растворы для выделения плазмидной ДНК 75.

3.1.4.6. Буферные растворы для ферментов модификации ДНК и РНК 75.

3.1.4.7. Буферные растворы для приготовления компетентных клеток Е. coli 76.

3.1.4.8. Фотографические растворы 76.

3.1.4.9. Другие растворы 77 3.2. Методы 77 ~.

3.2.1. Протеолиз 45-кДа белка 77.

3.2.2. Обратно фазовая ВЭЖХ 77.

3.2.3. Определение N-концевой аминокислотной последовательности 78.

3.2.4. Масс-спектрометрический анализ 78.

3.2.5. Приготовление агарозного геля 78.

3.2.6. Выделение ДНК фага А. 78.

3.2.7. Выделение плазмидной ДНК из клеток E. coli 80.

3.2.8. Рестрикция и картирование фрагментов ДНК 81.

3.2.9. Перенос ДНК на мембрану по методу Саузерна 82.

3.2.10. Перенос и иммобилизация ДНК фага Я. на фильтрах 82.

3.2.11. Перенос и иммобилизация ДНК из Е. coli на нитроцеллюлозных фильтрах 83.

3.2.12. Ник-трансляция ДНК 83.

3.2.13. Радиоактивное мечение олигодезоксирибонуклеотидных зондов 84.

3.2.14. Блот-гибридизация по Саузерну. Гибридизация in situ бактериальных колоний и фаговых бляшек 84.

3.2.15. Извлечение ДНК из агарозных гелей 85.

3.2.16. Получение компетентных клеток E. coli 86.

3.2.17. Трансформация компетентных клеток E. coli 86.

3.2.18. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 87.

3.2.19. Клонирование продуктов ПЦР 87.

3.2.20. Определение нуклеотидных последовательностей по методу Сенгера 88.

3.2.21. In situ гибридизация на тканевых срезах 89.

4. ВЫВОДЫ 92.

5. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 93.

6.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

94.

Эпителиальные ткани млекопитающих имеют непосредственный контакт с окружающей средой и больше, чем другие ткани, подвержены ее деструктивному воздействию. Некоторые из этих тканей, в т. ч. и обонятельный эпителий, покрыты слизью, являющейся первым защитным барьером, обеспечивающим нормальное функционирование клеток эпителия. В слизи находится множество белков, определяющих ее защитные свойства, это антибактериальные белки, иммуноглобулины, ферменты биотрансформации, включая некоторые ферменты-антиоксиданты, защищающие клетки эпителия от повреждений, вызываемых действием активных форм кислорода.

Ранее при исследовании белкового состава слизи обонятельного эпителия крысы методом SDS-электрофореза было выявлено два новых водорастворимых белковых компонента, имеющих молекулярную массу 28 и 45 кДа соответственно, каждый из которых составлял порядка 2% всех белков обонятельного эпителия. Столь значительное содержание этих белков в слизи предполагало их важную роль в обеспечении нормального функционирования клеток обонятельного эпителия, что послужило основанием для последующего изучения их структуры и свойств. Цель работы состояла в определении и анализе полной первичной структуры 28- и 45-кДа белков.

Автор выражает признательность своему научному руководителю, доктору химических наук, профессору В. М. Липкину за внимание к данной работе и помощь в ее проведении, кандидату химических наук Т. М. Шуваевой за внимание к данной работе, помощь в оформлении диссертации и проведение экспериментов по определению частичной аминокислотной последовательности 45-кДа белка, C.B. Новоселову за помощь в проведении in situ гибридизации, лабораторию биофизики рецепции Института биофизики клетки РАН за плодотворное сотрудничество, кандидату химических наук Н. С. Быстрову за синтез олигонуклеотидных зондов, кандидату химических наук Т.А.

Мурановой, Ю. Ф. Леоновой и Н. И. Хорошиловой за определение М-концевых аминокислотных последовательностей пептидов и белков, кандидату химических наук О. В. Соловьевой, кандидату химических наук И. А. Костанян и кандидату химических наук Т. В. Ракитиной за ценные советы в работе.

4. ВЫВОДЫ.

1. Установлена нуклеотидная последовательность кДНК 45-кДа белка длиной 1586 п.о. Кодирующая область кДНК 45-кДа белка содержит 1200 п.о. и соответствует белку с вычисленной молекулярной массой 46 026 Да. Реконструирована полная аминокислотная последовательность 45-кДа белка, включающая в себя 400 а.о. •.

2. Установлена нуклеотидная последовательность кДНК 28-кДа белка длиной 1414 п.о. Кодирующая область кДНК 28-кДа белка содержит 672 п.о. и соответствует белку с вычисленной молекулярной массой 24 630 Да. Реконструирована полная аминокислотная последовательность 28-кДа белка, включающая в себя 223 а.о.

3. Сравнение полной аминокислотной последовательности 28-кДа белка со структурами других белков показало, что 28-кДа белок принадлежит к недавно обнаруженному новому классу тиол-специфических антиоксидантов или пероксиредоксиновна основании чего было сделано предположение, что его основной функцией является защита клеток эпителия от повреждений, вызываемых действием активных форм кислорода.

4. Выявлена гомология между аминокислотными последовательностями 45-кДа белка и белков-переносчиков гидрофобных соединений. Показано, что наибольшая концентрация 45-кДа белка обнаруживается в эпителиальных тканях, имеющих непрерывный контакт с окружающей средой. Предположено, что 45-кДа белок выполняет функцию транспортировки гидрофобных молекул и наряду с 28-кДа белком входит в состав одной из антиоксидантных защитных систем клетки.

5. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1,8-АНС — 1-анилинонафталин-8-сульфоновая кислота а. о. — аминокислотный остаток а.п. — аминокислотная последовательность.

БСА — бычий сывороточный альбумин.

ВЭЖХ — высокоэффективная жидкостная хроматография.

ДТТ — дитиотреитол е.а. — единица активности.

Ко — константа диссоциации.

М — моль мкм — микрометр

2-МЭ — 2-меркаптоэтанол.

ОМБ — обонятельный маркерный белок.

ОСБ — одорант-связывающий белок.

ПААГ — полиакриламидный гель п. о. — пара оснований.

ПЦР — полимеразная цепная реакция.

ПЭГ — полиэтиленгликоль.

РСБ — ретинол-связывающий белок.

ТЕМЕД — N, N, N', N' - тетраметилэтилендиамин.

Трис — трис (гидроксиметил)аминометан.

ТФУ — трифторуксусная кислота.

ЦНС — центральная нервная система.

ЭДТА — этилендиаминтетрауксусная кислота.

ЭОГ — электроольфактограмма.

A2U — ссги-глобулин.

CHAPS — 3-[(3-холамидопропил)-диметиламмоний]-1-пропилсульфонат dATP — 2'-дезоксиаденозин-5'-трифосфат dCTP — 2'-дезоксицитидин-5'-трифосфат dGTP — 2'-дезоксигуанозин-5'-трифосфат dITP — 2'-дезоксиинозин-5'-трифосфат dTTP — 2'-дезокситимидин-5'-трифосфат.

FAD — флавинадениндинуклеотид.

MALDI — масс-спектрометрия с ионизацией лазерной десорбцией MOPS — морфолинпропансульфоновая кислота MUP — основной белок мочи.

PBS — изотонический фосфатный буферный раствор SDS — додеци л сульфат натрия UTP — уридин-5'-трифосфат.

1.5.

Заключение

.

Применение современных методов молекулярной биологии, биохимии и нейрофизиологии позволило достичь большого прогресса в изучении молекулярных механизмов, лежащих в основе хеморецепции запахов у наземных позвоночных. Необходимость различения обонятельной системой огромного количества летучих веществ обуславливает участие в хеморецепции запахов множества различных рецепторов, каждый из которых способен взаимодействовать с несколькими веществами. Это одна из особенностей хеморецепции запахов наземными позвоночными. Другой важной особенностью является то, что in vivo рецепция запахов происходит в определенном микроокружении, в слизи обонятельного эпителия — высокоорганизованном и многокомпонентным внеклеточном матриксе. Кроме того, рецепции предшествуют так называемые перирецепторные процессы — взаимодействие молекул одорантов с компонентами слизи. Насколько эти процессы могут влиять на рецепцию и трансдукцию обонятельного сигнала неизвестно. Но вполне возможно, что данные, полученные при изучении лиганд-связывающих свойств экспрессированных в различных системах обонятельных рецепторов, и не отражают того, что реально происходит in vivo, поскольку рецепция лигандов происходит не в естественных условиях. Таким образом, несмотря на значительные успехи в изучении хеморецепции запахов, еще очень многое в этой проблеме остается неясным и требует дальнейших экспериментальных исследований.

2. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

2.1.

Введение

.

Одной из особенностей восприятия обонятельных стимулов позвоночных является то, что начальным этапом этого процесса является не прямая рецепция пахучего стимула (т.е., непосредственное взаимодействие стимула с рецепторным белком), а так называемые перирецепторные процессы — биохимические взаимодействия между компонентами слизи и молекулами одорантов. Наиболее изученными из компонентов слизи, участвующих в перирецепторных процессах являются одорант-связывающие белки (ОСБ) и ферменты биотрансформации. Достаточно хорошо изучены также структурные (муцины, ольфактомедин) и защитные (лактоферрин, лизоцим, иммуноглобулины, А и М) белки слизи. Но в целом, в настоящее время белковые компоненты периферического отдела обонятельной системы еще недостаточно хорошо охарактеризованы, хотя, именно они определяют защитную функцию слизи, обеспечивают нормальное функционирование обонятельного эпителия и участвуют в первичных процессах восприятия запаха. В связи с этим структурно-функциональные исследования белков слизи обонятельного эпителияткани, непрерывно контактирующей с окружающей средой, и больше, чем другие, подверженной деструктивному воздействию активных форм кислорода, представляются интересными и перспективными. В лаборатории белков гормональной регуляции Института биоорганической химии им. М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН и лаборатории биофизики рецепции Института биофизики клетки РАН проводятся исследования белков, участвующих в перирецепторных процессах.

Ранее в лаборатории биофизики рецепции Института биофизики клетки РАН при исследовании белкового состава слизи обонятельного эпителия крысы методом БОБ-электрофореза было выявлено два новых водорастворимых белковых компонента, имеющих молекулярную массу ~28 и -45 кДа соответственно, каждый из которых составлял порядка 2% всех белков обонятельного эпителия (рис.8) [102−105]. Столь значительное содержание этих белков в слизи предполагало их важную роль в обеспечении нормального функционирования клеток обонятельного эпителия, что послужило основанием для последующего изучения их структуры и свойств. Кроме того, 45-кДа белок вызывал интерес еще и потому, что специфически взаимодействовал с антителами, выработанными против синтетического пептида, имеющего аминокислотную последовательность, общую для ОТР-связывающего домена а-субъединиц известных белков (ОАОЕЗОКБИУКдМК [106]) [102,105]. I 3 45 к Да.

28 кДа.

Рисунок 8. Обнаружение водорастворимых 28-кДа и 45-кДа белков методом БОБ-электрофореза в ПААГ в слизи (1), изотоническом (2) и гипотоническом (3) гомогенате клеток обонятельного эпителия крысы.

В дальнейшем 28- и 45-кДа белки были выделены в индивидуальном состоянии и частично охарактеризованы [102−105], однако их физиологическая роль и место в перирецепторных процессах выяснены не были. Для проведения дальнейших функциональных исследований этих белков было необходимо определить их первичную структуру и на основе полученных данных выявить возможные функции, выполняемые этими белками. Настоящая работа и посвящена определению и анализу полной первичной структуры 28- и 45-кДа белков.

2.2. Определение полной аминокислотной последовательности 45-кДа белка.

45-кДа белок был выделен, как описано в [102]. Для структурных исследований нами использовался препарат, дополнительно очищенный обратно фазовой ВЭЖХ и модифицированный как описано в [103].

Поскольку N-концевой аминокислотный остаток 45-кДа белка оказался модифицированным и закрытым для анализа по методу Эдмана, было проведено его ферментативное расщепление лизинспецифичной протеиназой (endoproteinase Lys-C из Lysobacter enzymogenes, Boeringer-Manheim, Germany) [107]. Этот коммерчески доступный фермент давно и широко используется в работах по определению первичной структуры белков. Это высокоспецифичная протеиназа, гидролиз угощая связи, образованные а-карбоксильными группами остатков лизина. Этот фермент способен осуществлять гидролиз при очень низкой нагрузке (весовое соотношение фермент: субстрат до 1:200) и в присутствии высоких концентраций детергента (например, 2 М хлоргидрат гуанидина- 0,5% SDS).

Гидролиз очищенного и модифицированного 45-кДа белка проводили в обычно принятых условиях. Разделение продуктов протеолиза 45-кДа белка проводили обратно фазовой ВЭЖХ на колонке 0,46×25 см Ultrasphere С18 (Beckman, USA) в градиенте ацетонитрила в водном растворе 0,1% ТФУ (рис.9). Анализ N-концевых аминокислотных остатков показал, что фракции L1-L5 являются гомогенными и не требуют дальнейшей очистки. С помощью автоматической деградации по методу Эдмана была определена полная аминокислотная последовательность лизинспецифичных пептидов L1 и L2 и частичная — пептидов L3 — L5. Данные о структуре лизинспецифичных пептидов 45-кДа белка, приведены в таблице 2.

Г I.

Г (я а.

40 =.

Время (мип).

Рисунок 9, Хромато графический анализ пептидов, полученных при гидролизе 45-кДа белка лизннспецифичной протеиназой. на колонке 0,46×25 см иНга$рЬеге С18. Здесь, а также на рис. 10 олюированис градиентом аистоннт рила в 0,1% ТФУ.

—о.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Pelosi P. Odorant-binding proteins. Crit Rev Biochem Mol Biol. 1994−29(3): 199−228
  2. Amoore JE., Specific anosmia and the concept of primary odors. Chem. Senses 1977, 2:267−281
  3. Getchell TV, Getchell ML. Regulatory factors in the vertebrate olfactory mucosa. Chem Senses, 1990- 15(2): 223−231
  4. T.V., Margolis F.L., Getchell M.L. (1984) Perireceptor and receptor events in vertebrate olfaction. Progress in Neurobiology, v.23, pp.317−345
  5. А. Хэм, Д. Кормак «Гистология» т.4, Москва, «Мир» стр. 206−210
  6. Reese TS. Olfactory cilia in the frog. J. Cell Biol. 1965, 25:209−230
  7. Bronshtein AA, Minor AV Significance of flagellae and their mobility for olfactory receptor function Dokl Akad Nauk SSSR 1973 Dec l-213(4):987−9
  8. Graziadei PP, Graziadei GA Neurogenesis and neuron regeneration in the olfactory system of mammals. I. Morphological aspects of differentiation and structural organization of the olfactory sensory neurons. J Neurocytol. 1979 Feb-8(l):l-18.
  9. Margolis FL, A brain protein unique to the olfactory bulb. Proc Natl Acad Sci USA. 1972 May-69(5): 1221−4
  10. Farbman AI, Margolis FL Olfactory marker protein during ontogeny: immunohistochemical localization. Dev Biol. 1980 Jan-74(l):205−15
  11. Rogers KE, Dasgupta P, Gubler U, Grillo M, Khew-Goodall YS, Margolis FL. Molecular cloning and sequencing of a cDNA for olfactory marker protein. Proc Natl Acad Sci USA. 1987 Mar-84(6) — 1704−8
  12. Menco BP. Ultrastructural aspects of olfactory transduction and perireceptor events. Semin Cell Biol. 1994 Feb-5(l):l 1−24
  13. Kream RM, Margolis FL. Olfactory marker protein: turnover and transport in normal and regenerating neurons. JNeurosci. 1984 Mar-4(3):868−79
  14. Okano, М. and Tagaki, S.F., Secretion and electrogenesis of the supporting cell in the olfactory epithelium, J. Physiol. (London), 242, 353,1974
  15. Rafols, J.A. and Getchell, T.V. Morphological relations between the receptor neurons, sustentacular cells and Schwann cells in the olfactory mucosa of the salamander. Anat.Rec. 206, 87−101
  16. Menco BP. Freeze-fracture, deep-etch, and freeze-substitution studies of olfactory epithelia, with special emphasis on immunocytochemical variables. Microsc Res Tech. 1995 Nov l-32(4):337−56
  17. Schwartz Levey M, Chikaraishi DM, Kauer JS Characterization of potential precursor populations in the mouse olfactory epithelium using immunocytochemistry and autoradiography JNeurosci 1991 Nov-l 1(11):3556−64
  18. Menco BP. Qualitative and quantitative freeze-fracture studies on olfactory and nasal respiratory structures of frog, ox, rat, and dog. I. A general survey. Cell Tissue Res. 1980−207(2): 183−209
  19. Meyer FA, Silberberg A. The rheology and molecular organization of epithelial mucus. Biorheology. 1980−17(l-2):163−8 (227)
  20. Winet H, Yates GT, Wu TY, Head J. On the mechanics of mucociliary flows. III. Flow-velocity profiles in frog palate mucus. J Appl Physiol. 1984 Mar-56(3)-.785−94 (228)
  21. Pelosi P. Perireceptor events in olfaction. J Neurobiol. 1996 May-30(l):3−19
  22. Bai RS, Anholt RR. Formation of the extracellular mucous matrix of olfactory neuroepithelium: identification of partially glycosylated and nonglycosylated precursors of olfactomedin. Biochemistry. 1993 Feb 2−32(4): 1047−53
  23. Snyder DA, Rivers AM, Yokoe H, Menco BP, Anholt RR. Olfactomedin: purification, characterization, and localization of a novel olfactory glycoprotein. Biochemistry. 1991 Sep 24−30(38):9143−9153
  24. Zielinski BS, Getchell ML, Wenokur RL, Getchell TV Ultrastructural localization and identification of adrenergic and cholinergic nerve terminals in the olfactory mucosa. Anat Ree. 1989 Nov-225(3):232−45
  25. Getchell ML, Getchell TV. Immunohistochemical localization of components of the immune barrier in the olfactory mucosae of salamanders and rats. Anat Ree. 1991 Nov-231(3):358−74
  26. Meliert TK, Getchell ML, Sparks L, Getchell TV. Characterization of the immune barrier in human olfactory mucosa. Otolaryngol Head Neck Surg. 1992 Feb-106(2):181−8
  27. Dear TN, Boehm T, Keverne EB, Rabbitts TH. Novel genes for potential ligand-binding proteins in subregions of the olfactory mucosa. EMBO J. 1991 Oct- 10(10):2813−9
  28. Breer H, Raming K, Krieger J. Signal recognition and transduction in olfactory neurons. Biochim Biophys Acta. 1994 Nov 10−1224(2):277−87
  29. Pelosi P, Baldaccini NE, Pisanelli AM Identification of a specific olfactory receptor for 2-isobutyl-3-methoxypyrazine. Biochem J. 1982 Jan l-201(l):245−8
  30. Tirindelli R, Keen JN, Cavaggioni A, Eliopoulos EE, Findlay JB Complete amino acid sequence of pyrazine-binding protein from cow nasal mucosa. Eur J Biochem. 1989 Nov 20−185(3):569−72
  31. Bianchet MA, Bains G, Pelosi P, Pevsner J, Snyder SH, Monaco HL, Amzel LM The three-dimensional structure of bovine odorant binding protein and its mechanism of odor recognition. Nat Struct Biol. 1996 Nov-3(l l):934−9
  32. Pevsner J, Hou V, Snowman AM, Snyder SH Odorant-binding protein. Characterization ofligand binding. J Biol Chem. 1990 Apr 15−265(11):6118−25
  33. Pelosi P. Odorant-binding proteins: structural aspects. Ann N Y Acad Sci. 1998 Nov 30−855:281−93
  34. Avanzini F, Bignetti E, Bordi C, Carfagna G, Cavaggioni A, Ferrari G, Sorbi RT, Tirindelli R Immunocytochemical localization of pyrazine-binding protein in bovine nasal mucosa. Cell Tissue Res. 1987 Feb-247(2):461−4
  35. Pevsner J, Hwang PM, Sklar PB, Venable JC, Snyder SH Odorant-binding protein and its mRNA are localized to lateral nasal gland implying a carrier function. Proc Natl Acad Sci USA. 1988 Apr-85(7):2383−7
  36. Lee KH, Wells RG, Reed RR Isolation of an olfactory cDNA: similarity to retinol-binding protein suggests a role in olfaction. Science. 1987 Feb 27−235(4792):1053−6
  37. Pevsner J, Reed RR, Feinstein PG, Snyder SH. Molecular cloning of odorant-binding protein: member of a ligand carrier family. Science. 1988- Jul 15−241(4863): 336−339
  38. Dear TN, Campbell K, Rabbitts TH Molecular cloning of putative odorant-binding and odorant-metabolizing proteins. Biochemistry. 1991 Oct 29−30(43): 10 376−82
  39. Flower DR The lipocalin protein family: structure and function. Biochem J. 1996 Aug 15−318 (Pt 1):1−14
  40. Sansom CE, North AC, Sawyer L Structural analysis and classification of lipocalins and related proteins using a profile-search method. Biochim Biophys Acta. 1994 Oct 19−1208(2):247−55
  41. Cavaggioni A, Findlay JB, Tirindelli R Ligand binding characteristics of homologous rat and mouse urinary proteins and pyrazine-binding protein of calf. Comp Biochem Physiol B. 1990−96(3):513−20
  42. Snyder SH, Sklar PB, Hwang PM, Pevsner J. Molecular mechanisms of olfaction. Trends Neurosci. 1989 Jan-12(l):35−38
  43. Pevsner J., Snyder SH. Odorant-binding protein: odorant transport function in the vertebrate nasal epithelium. Chem Senses, 1990- 15(2): 217−222
  44. Mowbray SL, Cole LB 1.7 A X-ray structure of the periplasmic ribose receptor from Escherichia coli. J Mol Biol. 1992 May 5−225(1): 155−75
  45. Koshland DE Jr Biochemistry of sensing and adaptation in a simple bacterial system. Annu Rev Biochem. 1981−50:765−82
  46. Lobel D, Marchese S, Krieger J, Pelosi P, Breer H Subtypes of odorant-binding proteins-heterologous expression and ligand binding. Eur J Biochem. 1998 Jun 1−254(2):318−24
  47. Carr W.E., Trapido-Rosenthal H.G., Gleeson R.A., The role of degradative enzymes in chemosensory processes, Chem. Senses 1990,15(2):181−190
  48. Nef P., Heldman J., Lazard D., Margalit T., Jaye M., Hanukoglu I., Lancet D" 1989, Olfactory-specific cytochrome P-450: cDNA cloning of a novel neuroepithelial enzyme possibly involved in chemoreception, J. Biol. Chem., 264, 6780−6785
  49. Lazard D., Zupko K., Poria Y., Nef P., Lazarovits J., Horn S., Khen M. and Lancet D. Odorant signal termination by olfactory UDP glucuronosyl transferase. 1991, Nature, v.349, 790 793
  50. Ben-Arie N, Khen M, Lancet D Glutathione S-transferases in rat olfactory epithelium: purification, molecular properties and odorant biotransformation. Biochem J. 1993 Jun 1 -292 (Pt 2):379−384
  51. Lefkowitz RJ, Hausdorff WP, Caron MG Role of phosphorylation in desensitization of the beta-adrenoceptor. Trends Pharmacol Sci. 1990 May- 11(5): 190−4
  52. Pelosi P, Maida R. Odorant-binding proteins in vertebrates and insects: similarities and possible common function. Chem Senses, 1990- 15(2): 205−215
  53. Dahl AR, Hadley WM, Hahn FF, Benson JM and McClellan RO. Cytochrome P-450-dependent monooxygenases in olfactory epithelium of dogs: Possible role in tumorigenicity. Science 1982,216,57−59
  54. Lancet D Vertebrate olfactory reception. Annu Rev Neurosci. 1986−9:329−55
  55. Pace U, Lancet D Olfactory GTP-binding protein: signal-transducing polypeptide of vertebrate chemosensory neurons. Proc Natl Acad Sci USA. 1986 Jul-83(13):4947−51
  56. Banger KK, Lock EA, Reed CJ, The characterization of glutathione S-transferases from rat olfactory epithelium. Biochem. J, 1993, 290, 199−204
  57. Reed RR How does the nose know? Cell. 1990 Jan 12−60(l):l-2
  58. Breer H, Raining K, Krieger J, Boekhoff I, Strotmann J. Towards an identification of odorant receptors. J Recept Res. 1993−13(l-4):527−40
  59. Ottoson D Analysis of the electrical activity of the olfactory epithelium. Acta Physiol. Scand. 1956, v.35:1−83
  60. Bronshtein AA, Minor AV Regeneration of olfactory flagella and restoration of the electroolfactogram following application of triton X-100 to the olfactory mucosa of frogs Tsitologiia 1977−19(l):33−9
  61. Rhein LD, Cagan RH Biochemical studies of olfaction: isolation, characterization, and odorant binding activity of cilia from rainbow trout olfactory rosettes. Proc Natl Acad Sci U S A 1980 Aug-77(8):4412−4416
  62. Shirley SG, Polak EH, Mather RA, Dodd GH. The effect of concanavalin A on the rat electro-olfactogram. Differential inhibition of odorant response. Biochem J. 1987 Jul I-245(I): 175−84
  63. Allen WK, Akeson R Identification of a cell surface glycoprotein family of olfactory receptor neurons with a monoclonal antibody. J Neurosci 1985 Feb-5(2):284−96
  64. Anholt RR, Petro AE, Rivers AM Identification of a group of novel membrane proteins unique to chemosensory cilia of olfactory receptor cells. Biochemistry 1990 Apr 3−29(13):3366−73
  65. Hempstead JL, Morgan JI A panel of monoclonal antibodies to the rat olfactory epithelium. J Neurosci 1985 Feb-5(2):438−49
  66. Strotmann J., Breer H Generation of monoclonal antibodies detecting specific epitopes in olfactory and respiratory epithelia. Cell Tissue Res. 1991 Nov-266(2):247−258
  67. Menco BP Qualitative and quantitative freeze-fracture studies on olfactory and nasal respiratory epithelial surfaces of frog, ox, rat, and dog. II. Cell apices, cilia, and microvilli. Cell Tissue Res. 1980−211(l):5−29
  68. Chen Z, Lancet D. Membrane proteins unique to vertebrate olfactory cilia: candidates for sensory receptor molecules. Proc Natl Acad Sci U S A 1984 Mar-81(6):1859−1863
  69. Chen Z, Pace U, Ronen D, Lancet D Polypeptide gp95. A unique glycoprotein of olfactory cilia with transmembrane receptor properties. J Biol Chem 1986 Jan 25−261(3):1299−1305
  70. Chen Z, Ophir D, Lancet D Monoclonal antibodies to ciliary glycoproteins of frog olfactory neurons. Brain Res. 1986 Mar 19−368(2):329−38
  71. Menco BP, Farbman AI Ultrastructural evidence for multiple mucous domains in frog olfactory epithelium. Cell Tissue Res. 1992 C) ct-270(l):47−56
  72. В.И. Новоселов, М. Ф. Быстрова, E.E. Фесенко. Свойства рецепторных элементов из обонятельного эпителия крысы. Сенсорные системы 1987, 1(1):7−13
  73. Fesenko ЕЕ, Novoselov VI, Novikov JV Molecular mechanisms of olfactory reception. VI. Kinetic characteristics of camphor interaction with binding sites of rat olfactory epithelium. Biochim Biophys Acta 1985 May 8−839(3):268−75
  74. В.И. 1991 Обонятельные рецепторные элементы позвоночных. Докторская диссертация
  75. Buck L, Axel R A novel multigene family may encode odorant receptors: a molecular basis for odor recognition. Cell 1991 Apr 5−65(1): 175−87
  76. Snyder SH. The molecular basis of communication between cells. Sci Am. 1985 Oct-253(4): 132−41
  77. Kurihara K, Koyama N High activity of adenyl cyclase in olfactory and gustatory organs. Biochem Biophys Res Commun. 1972 Jul 1 l-48(l):30−4
  78. Firestein S, Werblin F Odor-induced membrane currents in vertebrate-olfactory receptor neurons. Science 1989 Apr 7−244(4900):79−82
  79. Kobilka B. Adrenergic receptors as models for G protein-coupled receptors. Annu Rev Neurosci. 1992−15:87−114
  80. O’Dowd BF, Lefkowitz RJ, Caron MG Structure of the adrenergic and related receptors. Annu Rev Neurosci. 1989−12:67−83
  81. Bouvier M, Hausdorff WP, De Blasi A, O’Dowd BF, Kobilka BK, Caron MG, Lefkowitz RJ Removal of phosphorylation sites from the beta 2-adrenergic receptor delays onset of agonist-promoted desensitization. Nature. 1988 May 26−333(6171):370−3
  82. Strader CD, Sigal IS, Dixon RA Structural basis of beta-adrenergic receptor function. FASEB J 1989 May-3(7): 1825−1832
  83. Kobilka BK, Kobilka TS, Daniel K, Regan JW, Caron MG, Lefkowitz RJ Chimeric alpha 2-, beta 2-adrenergic receptors: delineation of domains involved in effector coupling and ligand binding specificity. Science. 1988 Jun 3−240(4857):1310−6.
  84. Mombaerts P. Molecular biology of odorant receptors in vertebrates. Annu Rev Neurosci. 1999−22:487−509
  85. Sullivan SL, Adamson MC, Ressler KJ, Kozak CA, Buck LB The chromosomal distribution of mouse odorant receptor genes. Proc Natl Acad Sci USA. 1996 Jan 23−93(2):884−8
  86. Lancet D, Sadovsky E, Seidemann E Probability model for molecular recognition in biological receptor repertoires: significance to the olfactory system. Proc Natl Acad Sci USA. 1993 Apr 15−90(8):3715−9
  87. Koshimoto H, Katoh K, Yoshihara Y, Mori K Distribution of putative odour receptor proteins in olfactory epithelium. Neuroreport. 1992 Jun-3(6):521−3
  88. Menco BP, Cunningham AM, Qasba P, Levy N, Reed RR Putative odour receptors localize in cilia of olfactory receptor cells in rat and mouse: a freeze-substitution ultrastructural study. J Neurocytol. 1997 0ct-26(10):691−706
  89. Nekrasova E, Sosinskaya A, Natochin M, Lancet D, Gat U Overexpression, solubilization and purification of rat and human olfactory receptors. Eur J Biochem. 1996 May 15−238(l):28−37
  90. Krieger J, Schleicher S, Strotmann J, Wanner I, Boekhoff I, Raming K, De Geus P, Breer H Probing olfactory receptors with sequence-specific antibodies. Eur J Biochem. 1994 Feb l-219(3):829−35
  91. Nef P, Hermans-Borgmeyer I, Artieres-Pin H, Beasley L, Dionne VE, Heinemann SF Spatial pattern of receptor expression in the olfactory epithelium. Proc Natl Acad Sci USA.1992 Oct l-89(19):8948−52
  92. Ngai J, Chess A, Dowling MM, Necles N, Macagno ER, Axel R Coding of olfactory information: topography of odorant receptor expression in the catfish olfactory epithelium. Cell.1993 Mar 12−72(5):667−80
  93. Raming K, Krieger J, Strotmann J, Boekhoff I, Kubick S, Baumstark C, Breer H Cloning and expression of odorant receptors. Nature. 1993 Jan 28−361(6410):353−6
  94. Ressler KJ, Sullivan SL, Buck LB A zonal organization of odorant receptor gene expression in the olfactoiy epithelium. Cell. 1993 May 7−73(3):597−609
  95. Kudrycki K, Stein-Izsak C, Behn C, Grillo M, Akeson R, Margolis FL Olf-l-binding site: characterization of an olfactory neuron-specific promoter motif. Mol Cell Biol. 1993 May-13(5):3002−14
  96. Strotmann J, Wanner I, Krieger J, Raming K, Breer H Expression of odorant receptors in spatially restricted subsets of chemosensory neurones. Neuroreport. 1992 Dec-3(12):1053−6
  97. McClintock TS Functional expression of olfactory-adrenergic receptor chimeras and intracellular retention of heterologously expressed olfactory receptors. Brain Res Mol Brain Res. 1997 Sep-48(2):270−8
  98. Zhao H, Ivic L, Otaki JM, Hashimoto M, Mikoshiba K, Firestein S Functional expression of a mammalian odorant receptor. Science. 1998 Jan 9−279(5348):237−42
  99. Novoselov VI, Peshenko IV, Evdokimov VJ, Nikolaev JV, Matveeva EA, Fesenko EE Water-soluble GTP-binding protein from rat olfactory epithelium. FEBS Lett. 1994 Oct 24−353(3):286−8
  100. И.В., Новоселов В. И., Евдокимов B.A., Попов В. И., Николаев Ю. В., Шуваева Т. М., Липкин В. М., Фесенко Е. Е. Выделение и биохимический анализ нового секреторного 28-кДа белка из обонятельного эпителия крысы. Сенсорные системы 1996- 10(3):97−109
  101. Peshenko IV, Novoselov VI, Evdokimov VA, Nikolaev YuV, Shuvaeva TM, Lipkin VM, Fesenko EE Novel 28-kDa secretory protein from rat olfactory epithelium. FEBS Lett. 1996 Feb 26−381(1−2):12−14
  102. Novoselov VI, Peshenko IV, Evdokimov VA, Nikolaev JV, Matveeva EA, Fesenko EE 45-kDa GTP-binding protein from rat olfactory epithelium: purification, characterization and localization. Chem Senses. 1996 Apr-21(2):181−8
  103. Mumby SM, Kahn RA, Manning DR, Gilman AG Antisera of designed specificity for subunits of guanine nucleotide-binding regulatory proteins. Proc Natl Acad Sci USA. 1986 Jan-83(2):265−9
  104. Jekel PA, Weijer WJ, Beintema JJ Use of endoproteinase Lys-C from Lysobacter enzymogenes in protein sequence analysis. Anal Biochem. 1983 Oct 15−134(2):347−54
  105. Leshchinskaya IB, Shakirov EV, Itskovitch EL, Balaban NP, Mardanova AM, Sharipova MR, Viryasov MB, Rudenskaya GN, Stepanov VM Glutamyl endopeptidase of Bacillus intermedius, strain 3−19. FEBS Lett. 1997 Mar 10−404(2−3):241−4
  106. Lathe R Synthetic oligonucleotide probes deduced from amino acid sequence data. Theoretical and practical considerations. J Mol Biol. 1985 May 5−183(1):1−12
  107. Takahashi Y, Kato K, Hayashizaki Y, Wakabayashi T, Ohtsuka E, Matsuki S, Ikehara M, Matsubara К Molecular cloning of the human cholecystokinin gene by use of a synthetic probe containing deoxyinosine. Proc Natl Acad Sci USA. 1985 Apr-82(7):1931−5
  108. Ohtsuka E, Matsuki S, Ikehara M, Takahashi Y, Matsubara К An alternative approach to deoxyoligonucleotides as hybridization probes by insertion of deoxyinosine at ambiguous codon positions. J Biol Chem. 1985 Mar 10−260(5):2605−8
  109. Sanger F, Nicklen S, Coulson AR DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proc Natl Acad Sci USA. 1977 Dec-74(12):5463−7
  110. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual /ed. Nolan C./ Second edition.-Cold Spring Harbor, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989
  111. Woo S.L.C. A sensetive and rapid method for recombinant phage screening.- Methods enzymol., 1979, v.68, p.389−395
  112. Е.П., Турина O.B. Быстрое выделение фага X. Мол. биология 1988, 22:1451−1455
  113. Kozak М Structural features in eukaryotic mRNAs that modulate the initiation of translation. J Biol Chem. 1991 Oct 25−266(30): 19 867−70
  114. Cavener DR, Ray SC Eukaryotic start and stop translation sites. Nucleic Acids Res. 1991 Jun 25−19(12):3185−92
  115. Kim J, Martignetti JA, Shen MR, Brosius J, Deininger P Rodent BC1 RNA gene as a master gene for ID element amplification. Proc Natl Acad Sci USA. 1994 Apr 26−91(9):3607−11
  116. Weiner AM, Deininger PL, Efstratiadis A Nonviral retroposons: genes, pseudogenes, and transposable elements generated by the reverse flow of genetic information. Annu Rev Biochem. 1986−55:631−61
  117. McKinnon RD, Shinnick TM, Sutcliffe JG The neuronal identifier element is a cis-acting positive regulator of gene expression. Proc Natl Acad Sci USA. 1986 Jun-83(l l):3751−5
  118. Sha B, Phillips SE, Bankaitis VA, Luo M Crystal structure of the Saccharomyces cerevisiae phosphatidylinositol-transfer protein. Nature. 1998 Jan 29−391(6666):506−10
  119. Crabb JW, Goldflam S, Harris SE, Saari JC Cloning of the cDNAs encoding the cellular retinaldehyde-binding protein from bovine and human retina and comparison of the protein structures. J Biol Chem. 1988 Dec 15−263(35):18 688−92
  120. Kennedy BN, Huang J, Saari JC, Crabb JW Molecular characterization of the mouse gene encoding cellular retinaldehyde-binding protein. Mol Vis. 1998 Sep 4−4:14
  121. Sato Y, Arai H, Miyata A, Tokita S, Yamamoto K, Tanabe T, Inoue К Primary structure of alpha-tocopherol transfer protein from rat liver. Homology with cellular retinaldehyde-binding protein. J Biol Chem. 1993 Aug 25−268(24):17 705−10
  122. Gu M, Warshawsky I, Majerus PW Cloning and expression of a cytosolic megakaryocyte protein-tyrosine-phosphatase with sequence homology to retinaldehyde-binding protein and yeast SEC14p. Proc Natl Acad Sci USA. 1992 Apr l-89(7):2980−4
  123. М.И., Новоселов C.B., Камзалов C.C. Первичная структура секреторного 45-кДа белка из обонятельного эпителия крысы. Материалы IV Пущинской конференции молодых ученых: Молекулярная биология и биохимия, биотехнология, Пущино, 1999, стр.13
  124. Munz В, Frank S, Hubner G, Olsen E, Werner S A novel type of glutathione peroxidase: expression and regulation during wound repair. Biochem J. 1997 Sep 1−326 (Pt 2):579−85
  125. Iakoubova OA, Pacella LA, Her H, Beier DR LTW4 protein on mouse chromosome 1 is a member of a family of antioxidant proteins. Genomics. 1997 Jun 15−42(3):474−8
  126. Benton WD, Davis RW Screening lambda gt recombinant clones by hybridization to single plaques in situ. Science. 1977 Apr 8- 196(4286): 180−2
  127. Chae, H.Z. and S.G. Rhee. A thiol-specific antioxidant and sequence homology to various proteins of unknown function. Biofactors 1994- 4:177−180
  128. Chae HZ, Uhm ТВ, Rhee SG Dimerization of thiol-specific antioxidant and the essential role of cysteine 47. Proc Natl Acad Sci USA. 1994 Jul 19−91(15):7022−6
  129. Jin DY, Chae HZ, Rhee SG, Jeang KT Regulatory role for a novel human thioredoxin peroxidase inNF-kappaB activation. J Biol Chem. 1997 Dec 5−272(49):30 952−61
  130. Peshenko I.V., Novoselov V.I., Evdokimov V.A., Kamzalov S.S., Shuvaeva T.M., Lipkin V.M., Fesenko E.E. Identification of 28 kDa secretory protein from rat olfactory epithelium as tiol-specific antioxidant. Free Rad.Biol.& Med. 1998, 25, 654−659
  131. В.И., Пешенко И. В., Новоселов С. В., Камзалов С. С., Быстрова М. Ф., Евдокимов В. А., Николаев Ю. В., Фесенко Е. Е. Протекторные свойства 28-кДа пероксиредоксина определяются его пероксидазной активностью. Биофизика 1999, 44, 568−570
  132. О.В., Елецкий Ю. К. Основы гистологии с гистологической техникой., 1982, Медицина, Москва
  133. Gordon, R.Y., L.S. Bocharova, I.I. Kruman, V.I. Popov, A.P. Kazantsev, S.S. Khutzian, and V.N. Karnaukhov. Acridine orange as an indicator of the cytoplasmic ribosome state. Cytometry 1997, 29:215−221
  134. Hayashi, S., I.C. Gillam, A.D. Delaney, and G.M. Tener. Acetylation of chromosome squashes of Drosophila melanogaster decreases the background in autoradiographs from hybridization with 1251.- labeled RNA. J Histochem. Cytochem 1978, 26:677−679
  135. Singh, L. and K.W. Jones. The use of heparin as a simple cost-effective means of controlling background in nucleic acid hybridization procedures. Nucleic.Acids.Res 1984, 12:5627−5638o i 5 lit-00
Заполнить форму текущей работой

Пора сдавать?